WWW.DISS.SELUK.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА
(Авторефераты, диссертации, методички, учебные программы, монографии)

 

Pages:   || 2 | 3 | 4 |

«РУКОВОДСТВО ПО ЛАБОРАТОРНЫМ ИССЛЕДОВАНИЯМ ПОЛИОМИЕЛИТА 4-е издание Всемирная Организация Здравоохранения Женева 2005 2 Департамент иммунизации, вакцин и биологических ...»

-- [ Страница 1 ] --

WHO/IVB/04.10

Оригинал английский

РУКОВОДСТВО

ПО ЛАБОРАТОРНЫМ ИССЛЕДОВАНИЯМ

ПОЛИОМИЕЛИТА

4-е издание

Всемирная Организация Здравоохранения

Женева

2005

2

Департамент иммунизации, вакцин и биологических препаратов благодарит спонсоров, чья финансовая поддержка сделала возможным выпуск этого документа Код для заказа WHO/IVB/04.10 Английский оригинал отпечатан в сентябре 2004 г.

и его экземпляры можно запросить во Всемирной Организации Здравоохранения (Департамент иммунизации, вакцин и биологических препаратов) СН 1211 Geneve 27, Switzerland.

Fax : 41 22 791 4224; E-mail: vaccines@who.int Этот документ является пересмотром “Руководства по вирусологическим исследованиям полиомиелита” (Manual for the virologacal investigation of polio, WHO/EPI/GEN/97/01) и замещает его.

СОДЕРЖАНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

1. ВВЕДЕНИЕ

1.1.Программа ликвидации полиомиелита

1.2. История полиомиелита и полиомиелитных вакцин

1.3. Характеристика полиовируса

1.4. Передача полиовируса

2. РОЛЬ И ФУНКЦИИ ЛАБОРАТОРИИ В ПРОГРАММЕ ЛИКВИДАЦИИ ПОЛИОМИЕЛИТА

2.1. Исследования

2.2. Структура и деятельность сети полиовирусных лабораторий ВОЗ

2.3. Координация деятельности лабораторной сети

2.4. Аккредитация лабораторий, входящих в сеть

3. ОБЕСПЕЧЕНИЕ КАЧЕСТВА РАБОТЫ ЛАБОРАТОРИИ

3.1. Основы обеспечения качества работы лаборатории

3.2. Стандартные оперативные процессы (СОП)

3.3. Документация

3.4. Оборудование и инструменты

3.5. Снабжение

3.6. Лабораторная безопасность

3.7. Ревизорские проверки

4. ТЕХНИКА РАБОТЫ С КУЛЬТУРАМИ КЛЕТОК





4.1. Работа в лаборатории клеточных культур

4.2. Методы работы с культурами клеток

4.3. Приготовление сред и других реагентов, используемых при культивировании клеток и вирусов

4.4. Осложнения в работе с культурами клеток: выявление и устранение

4.5. Прямая окраска ДНК микоплазм

4.6. Иммунопроба MYCO-ТEST для выявления микоплазм

4.7. ПЦР для выявления микоплазм

5. ОЦЕНКА ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ КЛЕТОЧНЫХ ЛИНИЙ

5.1. Выбор референс-стандарта для контроля качества клеточных линий

5.2. Приготовление лабораторных стандартов контроля качества

5.3. Титрование лабораторного стандарта контроля качества

5.4. Расчёт титра вируса по формуле Кербера

5.5. Интерпретация данных о чувствительности клеточных линий и выявление ошибок

5.6. Получение референс-штаммов полиовируса

6. ПОЛУЧЕНИЕ ПРОБ И РАБОТА С НИМИ

6.1. Получение проб

6.2. Обработка проб

6.3. Реагенты, используемые в работе с пробами

7. ВЫДЕЛЕНИЕ И ИДЕНТИФИКАЦИЯ ПОЛИОВИРУСОВ

7.1. Клеточные линии, рекомендуемые для выделения полиовирусов

7.2. Выделение полиовируса и других энтеровирусов

7.3. Идентификация выделенных полиовирусов

7.4. Идентификация неполиомиелитных энтеровирусов

8. ВНУТРИТИПОВАЯ ДИФФЕРЕНЦИАЦИЯ ПОЛИОВИРУСОВ

8.1. Метод ИФА (иммуноферментного анализа)

8.2. Метод молекулярной гибридизации

8.3. Метод ПЦР

8.4. Протокол использования двух методов внутритиповой дифференциации полиовирусов

9. ВЫЯВЛЕНИЕ КОНТАМИНАЦИИ КЛЕТОЧНЫХ КУЛЬТУР ДИКИМ ПОЛИОВИРУСОМ

9.1. В каких случаях следует подозревать контаминацию полиовирусом

9.2. Выявление потенциальных источников контаминации

9.3. Выявление возможных нарушений качественной лабораторной практики

9.4. Проверки возможности прослеживания лабораторной работы с пробами

9.5. Взаимодействие с программой ликвидации полиомиелита в процессе вирусологических исследований

10.ТРАНСПОРТИРОВКА ПРОБ И ВЫДЕЛЕННЫХ ШТАММОВ ПОЛИОВИРУСОВ

10.1. Планирование транспортировки

10.2. Упаковка материалов для транспортировки

10.3. Генетически модифицированные микроорганизмы и макроорганизмы

10.4. Подготовка документации и отправка упакованных материалов

11. УПРАВЛЕНИЕ ДАННЫМИ

11.1. Регистрация получения проб

11.2. Регистрация результатов лабораторных исследований

11.3. Отчётная документация о работе лаборатории и результатах исследований





11.4. Показатели работы лаборатории, необходимые для сертификации

ЛИТЕРАТУРА

БЗУ - биологическое защитное укрытие БХИФ - 5-бром –4-хлор - 3-индоил-фосфат ВАЗ - Всемирная Ассамблея Здравоохранения ВАПП - вакциноассоциированный паралитический полиомиелит ВОЗ - Всемирная Организация Здравоохранения ВТД - внутритиповая дифференциация ГПД - глобальный план действий по безопасному хранению диких полиовирусов ГСЛ - глобальная специализированная лаборатория ДМСО - диметилсульфоксид ДМФ - диметилформамид ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота ДСН - додецилсульфат натрия ИАТА - интернациональная авиатранспортная ассоциация (IATA) ИПВ - инактивированная полиовирусная вакцина (вакцина Солка) ИФА - иммуноферментный анализ (ELISA – enzyme linked immunosorbent assay) кДНК - комплементарная ДНК МЕ - международная единица МС - минимальная среда Игла (MEM – minimal essential midium) НГТ - нитроголубой тетразолин НДИ - национальные дни иммунизации НИБСК - Национальный институт биологических стандартов и контроля, Англия НЛ - национальная лаборатория НПЭВ - неполиомиелитный энтеровирус НСС - полиовирус, не сходный с вирусами Сэбина ОБК - основной банк клеток (master cell bank – MCB) ОВП - острый вялый паралич ОП - оптическая плотность ОПВ - оральная полиовирусная вакцина ( из штаммов Сэбина) ОТ - обратная транскрипция ПВВП - полиовирус вакцинного происхождения ПС - поддерживающая среда ПТ - профессиональное тестирование ПЦР - полимерназная цепная реакция РБК - рабочий банк клеток (working cell bank – WCB) РНК - рибонуклеиновая кислота РПИ - расширенная программа иммунизации РРЛ - региональная референс-лаборатория СОП - стандартный оперативный процесс (метод) СС - полиовирус, сходный с вирусом Сэбина УИПВ - усовершенствованная инактивированная полиовирусная вакцина ФИТЦ - изотиоцианат флюоресцеина ФСБ - фосфатно-солевой буферный раствор ХЕПА - HEPA-фильтр – высокоэффективный бактериологический воздушный фильтр ЦПЭ - цитопатический эффект ЭПИДномер - номер, присваиваемый каждому случаю ОВП 1.1.Программа ликвидации полиомиелита В мае 1988 г. на 41-й ВАЗ государства – члены ВОЗ приняли решение о глобальной ликвидации полиомиелита к 2000 г. Резолюция ВАЗ 41.28 отметила, что программа ликвидации полиомиелита должна проводиться так, чтобы усилить РПИ. В 1989 г. ВАЗ одобрила Генеральный план действий по глобальной ликвидации полиомиелита. Глобальный масштаб усилий по искоренению полиомиелита – самая крупная в истории инициатива в области здравоохранения. С начала работ по программе (1988 г.) были достигнуты чрезвычайно большие успехи в прекращении циркуляции дикого полиовируса и подготовке к глобальной сертификации ликвидации полиомиелита в 2005 г. В 1988 г. полиомиелит регистрировался в 125 странах пяти континентов и более 350000 детей в том году заболели паралитической формой полиомиелита. К концу 2002 г. полиовирусная инфекция сохранялась всего в 7 странах (рис. 1.1.), три региона мира были полностью свободны от полиовируса, а число зарегистрированных случаев полиомиелита составило около 1900.

Циркуляция диких полиовирусов была полностью прекращена в Американском, Европейском и Западном Тихоокеанском регионах, а к концу 2002 г. более 180 стран и территорий декларировали отсутствие полиовируса. После искоренения полиомиелита и последующего прекращения иммунизации в мире будет экономиться 1,5 миллиарда долларов США в год.

Современная стратегия ликвидации полиомиелита, рекомендованная ВОЗ и признанная успешной, включает следующие четыре основных элемента:

- высокий охват детей плановыми прививками, включающими не менее 3 доз ОПВ, а в странах, эндемичных по полиомиелиту, добавляют ещё одну дозу, которую вводят при рождении ребёнка;

- проведение НДИ с охватом всех детей младше 5 лет;

- эпидемиологический надзор за ОВП и лабораторные исследования;

- кампании подчищающей иммунизации для прерывания остающихся цепей передачи полиовируса.

Рис.1.1. Успехи в ликвидации полиомиелита (1988-2002 гг.) В подтверждении того, что программа ликвидации полиомиелита достигла цели, решающая роль принадлежит лаборатории. Поскольку ОВП может быть вызван неполиовирусным агентом, все подозрительные случаи должны быть обследованы вирусологически. Большинство случаев полиовирусного инфицирования человека протекает бессимптомно (клинические симптомы наблюдаются в 0,1-1,0% случаев полиовирусной инфекции). Поэтому необходимо, чтобы пробы фекалий от каждого выявленного случая ОВП были подвергнуты тщательному и полному исследованию на присутствие дикого полиовируса; невыявленный в одном случае полиовирус может означать, что невыявленными остались тысячи случаев инфицирования.

Для того, чтобы программа ликвидации полиомиелита оказалась эффективной, необходимо добиться тесного взаимодействия эпиднадзора и работы лабораторий и обеспечить использование данных, полученных в процессе эпидемиологических и вирусологических исследований, в качестве основы действий руководителей иммунизационных программ и других специалистов, ответственных за осуществление стратегии ликвидации. Руководители РПИ, клиницисты, вирусологи должны работать вместе, единой командой. Создание и бесперебойная работа таких команд составляют неотъемлемую часть усилий для всеобщей ликвидации полиомиелита и служат основой для укрепления РПИ и сходных программ здравоохранения, относящихся к другим болезням и требующих участия лабораторий.

В 1989 г. в упомянутом выше плане действий были детально изложены задачи лабораторной поддержки глобальной ликвидации полиомиелита. В частности, описана работа, необходимая для создания трёхкомпонентной глобальной сети лабораторий, каждый компонент которой имеет чётко сформулированные обязанности. В дальнейшем в этом направлении был достигнут значительный прогресс. На всех трёх уровнях лабораторной сети и во всех шести регионах ВОЗ глобальные специализированные лаборатории, региональные референс-лаборатории и национальные лаборатории работают вместе в большой хорошо координируемой рабочей сети.

На начальных стадиях организации этой сети стандартные методы были изложены в «Руководстве по вирусологическим исследованиям полиомиелита», опубликованном ВОЗ в 1990 г. Оно было разослано в лаборатории, рассматривавшиеся как потенциальные члены лабораторной сети, и легло в основу организованных ВОЗ учебных курсов и индивидуального обучения при референс-лабораториях. С учётом меняющихся требований и опыта, полученного в процессе создания и развития глобальной сети полиовирусных лабораторий, руководство пересматривалось в 1997 г. и в 2001 г.

В мае 1999 г. ВАЗ подтвердила обязательства ВОЗ по ликвидации полиомиелита и обратилась к странам-членам ВОЗ с предложением начать реализацию программы по безопасному хранению диких полиовирусов. Целью программы явилось предупреждение переноса дикого полиовируса из лабораторий в людское сообщество, в котором возрастает пропорция лиц, не обладающих иммунитетом к полиовирусам. В декабре 1999 г. ВОЗ опубликовала «Глобальный план действий для обеспечения безопасного лабораторного хранения диких полиовирусов» (ГПД), как один из элементов подготовки к глобальной сертификации ликвидации полиомиелита в 2005 г. и к последующему снижению уровня или прекращению глобальной иммунизации против полиомиелита через 5-10 лет. В настоящее время документ этот пересматривается и предстоящее издание будет включать опыт обследования биомедицинских лабораторий и их инвентаризации, которые проводятся более чем в 100 странах в 5 из 6 регионов ВОЗ. Пересмотренный ГПД (ГПД II) описывает две фазы проведения мероприятий, связанных с основными задачами ликвидации полиомиелита.

Фаза обследования и инвентаризации лабораторий охватывает период, в котором ещё продолжается циркуляция дикого полиовируса. В этой фазе страны проводят обследование и инвентаризацию биомедицинских лабораторий, чтобы выявить те, которые располагают материалами, инфицированными или потенциально инфицированными диким полиовирусом, и стимулировать уничтожение всех таких материалов, не используемых в работе. Страны ведут инвентаризацию лабораторий, которые сохранят материалы, инфицированные или потенциально инфицированные диким полиовирусом, и предлагают таким лабораториям обеспечить соблюдение требований усиленной биологической безопасности уровня 2 (BSL-2/polio) для безопасного обращения с соответствующими материалами. Страны начинают планирование мер для фазы глобальной сертификации ликвидации полиомиелита.

Фаза глобальной сертификации начинается через год после того, как где-либо в мире выделен «последний» дикий полиовирус и очень велика вероятность полного прекращения циркуляции диких полиовирусов. В этой фазе страны извещают национальные биомедицинские лаборатории о глобальном прекращении циркуляции диких полиовирусов.

Всем лабораториям, включенным в национальный инвентарный реестр, предлагается выбрать какой-либо (или какие-либо) из трёх способов обеспечения безопасного хранения дикого полиовируса: 1) превратить материалы, содержащие полиовирус, в неинфекционные или уничтожить их с соблюдением необходимых условий; 2) обеспечить выполнение требований биологической безопасности, соответствующих проводимой в лаборатории работе – BSL-2/polio или BSL-3/polio в зависимости от того, включает ли эта работа размножение полиовируса; 3) передать материалы, инфицированные или потенциально инфицированные диким полиовирусом, в лабораторию, где соблюдены все требования биологической безопасности и необходимая работа может проводиться. Страны должны завершить работу по обеспечению безопасного хранения диких полиовирусов в течение одного года после объявления сертификации ликвидации полиомиелита и документировать выполнение всех требований безопасного хранения для глобальной сертификации.

В ГПД II отмечено, что постсертификационные требования биологической безопасности будут зависеть от решения о прекращении всеобщей иммунизации против полиомиелита. Если она будет прекращена, требования по безопасному хранению диких полиовирусов, а также вакцинных полиовирусов (ОПВ) вероятно будут более строгими, чем описанные выше.

1.2. История полиомиелита и полиомиелитных вакцин Полиомиелит – болезнь, известная с глубокой древности. Вероятно самое раннее её изображение можно видеть на древнем египетском барельефе (1350 г. до н.э.), изображающем молодого человека с типичным асимметричным вялым параличом и атрофией ноги. В литературе ХVII и XVIII вв. также имеются отдельные описания болезни.

В середине XIX в. промышленная революция обусловила интенсивную урбанизацию в Европе и Северной Америке и вместе с тем значительные изменения и улучшения условий жизни. С этими изменениями совпало и появление более крупных и более частых вспышек полиомиелита. Начиная с конца 1800-х гг. такие вспышки регистрировались в ряде европейских стран и в США, а в первой половине ХХ в. стали доминирующей проблемой здравоохранения в развитых странах.

Огромное значение в изучении полиомиелита имело успешное инфицирование вирусом-возбудителем болезни низших обезьян, осуществленное Ландштейнером и Поппером в 1908 г. Наличие такой экспериментальной модели предоставило первые возможности изучения полиомиелита вне организма человека и принесло важную информацию об инфекционном процессе и патофизиологии болезни. Дальнейшие исследования инфекционного агента стали возможны после того, как Эндерс, Уэллер и Роббинс в 1949 г. показали способность полиовируса размножаться в культуре ткани и разработали методы его культивирования. Этот успех и выявление трёх различных серотипов полиовируса открыли пути для дальнейших работ над вакцинами и изучения биохимических и биофизических свойств полиовирусов.

В 1950-х гг. были разработаны два различных подхода к предупреждению полиомиелита при помощи вакцинации. Солк и Янгнер в 1959 г. создали первую удовлетворительную вакцину путём химической инактивации выращенного в тканевой культуре полиовируса формалином. Вакцина была полностью неинфекционной, но после инъекции вызывала иммунный ответ, достаточный для защиты от паралитического заболевания. В этот же период в ряде лабораторий велись исследования с целью создания живой вакцины из аттенуированных штаммов полиовируса. Такие штаммы были созданы Сэбином и в 1961 г. лицензированы после основательных полевых испытаний в Советском Союзе, а также в Восточной Европе и Латинской Америке. В 1962 и 1963 гг. во многих странах развернулись кампании массовых прививок ОПВ1.

Оба вида вакцин (ИПВ и ОПВ) включают три антигенных компонента – три типа полиовируса (1, 2 и 3). В некоторых странах используют усовершенствованную ИПВ (УИПВ), с большим содержанием D-антигена типов 2 и 3. Массовые прививки ИПВ, а затем ОПВ фактически прекратили заболеваемость полиомиелитом в большинстве развитых стран.

1.3. Характеристика полиовируса Полиовирусы относятся к роду Enterovirus семейства Picornaviridae. Вирусные частицы круглой формы диаметром около 30 нм с икосаэдрической симметрией не имеют липидной оболочки. По биохимическим и биофизическим свойствам полиовирусы сходны с энтеровирусами, но отличаются от некоторых других пикорнавирусов. Частицы полиовируса имеют плавучую плотность 1,34 г/мл и коэффициент седиментации – 156S. Они относительно устойчивы к нагреванию (в присуствии катионов магния), к действию кислого рН (рН 3-5 в течение 1-3 часов) и многих обычных детергентов и дезинфектантов, включая мыло, неионные детергенты, эфир, хлороформ и другие растворители жиров. Вирус сохраняет жизнеспособность в течение нескольких недель при 4оС и нескольких дней при комнатной температуре, но быстро инактивируется под действием высушивания, ультрафиолетового света, высокой температуры, формалина и свободного хлора.

Полиовирусы и энтеровирусы отличаются от других пикорнавирусов по физическим свойствам – плавучей плотности и устойчивости к слабым кислотам. Три типа полиовирусов кроме антигенной специфичности отличаются от других энтеровирусов выраженной способностью вызывать у человека паралитические заболевания. Штамм Mahoney полиовируса типа 1 служит прототипом полиовирусов, рода Enterovirus и семейства Picornaviridae и принадлежит к группе наиболее изученных возбудителей болезней человека.

Высокоструктурированная белковая оболочка полиовируса состоит из 60 субъединиц, каждая из которых формируется из 4 различных полипептидных цепей. Расположенный внутри неё вирусный геном – одна молекула РНК, длиной около 7500 нуклеотидов. Четыре капсидных полипептида являются продуктами протеолитического расщепления полипротеина - предшественника и обозначаются VP1-VP4. С амино-концом VP4 связана одна молекула миристилата, а с 5’-концом РНК – белок VPg. Согласно трёхмерной структуре Массовое применение вакцины из штаммов Сэбина началось в 1959 г. в СССР после того как эти штаммы были детально исследованы в Институте по изучению полиомиелита АМН СССР (М.П. Чумаков) и в Институте экспериментальной медицины АМН СССР (А.А. Смородинцев), разработана технология серийного производства ОПВ и проведены весьма масштабные полевые испытания, впервые обоснованно показавшие безопасность вакцины и её иммунологическую и эпидемиологическую эффективность. Уже в 1959 г. в СССР было привито ОПВ более 15 миллионов детей, а в дальнейшем всё детское население СССР прививалось ежегодно(в 1960 г. - 77,5 миллионов детей, в 1961- 77,2 миллиона). Результаты этих работ представлялись на крупных международных совещаниях (Live poliovirus vaccines, Washington, 1959; Live poliovirus vaccines, Washington, 1960; Живая вакцина против полиомиелита, Ленинград, 1960; Полиомиелитная пероральная живая вакцина, Москва, 1961). За разработку технологии производства ОПВ и внедрение её в массовую практику М.П. Чумакову и А.А. Смородинцеву в 1963 г. присуждена Ленинская премия. (Примечание редактора русского издания «Руководства»).

полиовируса большинство аминокислот, расположенных на поверхности частицы, принадлежат VP1, белки VP2 и VP3 частично экспонированы, а VP4 является полностью внутренним белком.

Данные о поверхностной структуре полиовируса оказались особенно полезными для понимания его нейтрализации антителами. Исследования с применением моноклональных нейтрализующих антител и вирусов-мутантов, резистентных к ним, позволили выявить четыре основных антигенных сайта полиовируса. Относительная важность разных участков различна для каждого из трёх серотипов полиовируса. Рентгеноструктурные исследования вирусных частиц подтвердили, что антигенные участки состоят из аминокислотных остатков, расположенных на поверхности частиц в экспонированных петлях капсидных белков. Прилежащие участки тех же или других капсидных белков влияют на структуру петель. Это объясняет, почему нарушается антигенность вируса при разрушении вирусной частицы. Полиовирус обладает также другими антигенными участками, вызывающими иммунный ответ, однако эти антитела не являются нейтрализующими.

Антитела, нейтрализующие полиовирус, типоспецифичны, исключение составляют минимальные перекрестные реакции между полиовирусами типов 1 и 2. Разрушенные нагреванием (особенно в присутствии детергента) полиовирусные частицы, вызывают выработку антител, реагирующих со многими типами энтеровирусов. Эти антитела обычно не являются нейтрализующими. Иммунные сыворотки, которые получают на животных к каждому типу вируса, обычно высоко типоспецифичны и используются для определения серотипа вируса в реакции нейтрализации.

Роль клеточного иммунитета при полиовирусной инфекции человека выяснена недостаточно.

Полиовирусы принадлежат к наиболее простым вирусам по размерам и генетической структуре. РНК-геном всех трёх типов полиовируса клонирован и секвенирован. Геномная РНК инфекционна и служит матричной РНК для синтеза вирусных белков. РНК транслируется в один большой полипротеин, из которого затем в результате протеолитического расщеплениея двумя различными вирус-кодируемыми протеазами образуются все функционально-активные вирусные белки (рис. 1.2).

Несмотря на масштабные исследования и относительную простоту вирусной частицы, несколько этапов размножения вируса остаются неясными, включая место и механизм проникновения вируса в цитоплазму, а также освобождение там вирусного генома. Сначала полиовирус связывается со специфическим белком плазматической мембраны – рецептором полиовируса (PVR; CD 155), относящимся к белковому суперсемейству иммуноглобулинов.

Прикрепление к рецептору обусловливает изменения в структуре капсида, необходимые для попадания генома в цитоплазму. Ни один другой пикорнавирус не способен использовать этот белок как клеточный рецептор. Эта особенность была использована в программе ликвидации полиомиелита. Для селективного выделения вирусов полиомиелита была получена рекомбинантная линия мышиных клеток, экспрессирующих человеческий полиовирусный рецептор.

После проникновения вирусного генома в клетку цикл репликации начинается с транскрипции РНК вирусной полимеразой с 3’-конца для образования комплементарной РНК (кРНК). На следующем этапе, зависящем от белковых факторов клетки-хозяина, на кРНК синтезируется потомство вирусной РНК. Синтезированная РНК ковалентно связана с белком VPg на 5’-конце. Только положительная нить РНК инкапсидируется, в результате чего формируется инфекционная вирусная частица. Интенсивные исследования репликации и сборки вирусных частиц позволили осуществить полный цикл репродукции полиовируса в бесклеточной системе, начиная с вирусной РНК.

1.4. Передача полиовируса Существует несколько путей передачи полиовируса. В большинстве развитых стран наиболее важной является фекально-оральная передача. Вирус интенсивно размножается в кишечнике и обычно в течение 2-4 недель (иногда дольше) переходит в фекалии. Выход вируса в просвет кишечника может быть прерывистым и связан с состоянием иммунитета инфицированного человека. Предшествующая естественная инфекция диким полиовирусом или прививка ОПВ существенно снижают интенсивность и продолжительность экскреции полиовируса. Прививики УИПВ или одновременная кишечная инфекция также могут способствовать уменьшению экскреции.

Факторы, влияющие на распространение полиовируса, включают скученность населения, гигиенический уровень, качество воды, способы удаления и очистки сточных вод.

В районах с хорошими санитарными условиями и чистой питьевой водой большее значение могут иметь другие пути передачи вируса. Поскольку полиовирус размножается и в верхних дыхательных путях, он может распространяться с отделяемым слизистых оболочек. При обследованиях в раннем периоде инфекции вирус можно выделить из глоточных тампонов и носоглоточных смывов. Исследования с помощью неполиомиелитных энтеровирусов показали, что секреторное отделяемое дыхательных путей в этом периоде инфекционно и может стать источником вируса для близко контактирующих лиц при прямом контакте, вдыхании аэрозоля или через инфицированную одежду.

Дикие полиовирусы (в отличие от вакциноподобных, происходящих от ОПВ) характерны определённой сезонностью циркуляции, вариирующей в зависимости от географического положения региона. В тропических и субтропических регионах циркуляция носит круглогодичный характер или приурочена к сезонам дождей. До введения в практику иммунизации в регионах с умеренным климатом циркуляция полиовирусов преобладала в летние и осенние сезоны, хотя вспышки полиомиелита иногда продолжались и в зимнее время. Вакциноподобные полиовирусы в странах, где постоянно применяют ОПВ, могут быть обнаружены во все времена года, но преимущественно после проведения НДИ.

Исключительно эффективным средством слежения за циркуляцией дикого полиовируса является молекулярная характеристика вирусного генома штаммов, выделенных из клинических проб. В процессе репликации в кишечнике человека происходят мутации полиовируса. Полиовирусная репликаза не обладает корректирующей активностью, что определяет относительно постоянный уровень ошибок при репликации, ведущий к быстрой эволюции генома полиовируса (1-2 % замен нуклеотидов в течение года). Поэтому в результате сравнения различий, в геномах полиовирусных штаммов, можно определить географическое происхождение и длительность циркуляции. Создание всемирной базы данных о последовательностях нуклеиновых кислот различных полиовирусных штаммов сделает возможным быстрое определение происхождения вновь выделенных штаммов.

Полиовирусы вакцинного происхождения (ПВВП). Вирусы ОПВ обладают определёнными генетическими отличиями от своих “родительских” штаммов, и их характерные мутации связаны с уменьшением нейровирулентности. Штаммы ОПВ во время репликации в кишечнике человека подвергаются мутациям. Некоторые из этих мутаций могут обусловить повышение нейровирулентности штамма, что приводит к появлению случаев ВАПП. Они появляются редко – примерно 1 случай на 2,5 миллиона привитых ОПВ.

От привитых ОПВ и контактирующих с ними лиц можно выделить разнообразные вирусы вакцинного происхождения, обычно без появления паралитических заболеваний.

Масштаб отличий в последовательностях гена капсида VP1 от соответствующего штамма Сэбина можно использовать как «молекулярные часы» и вычислить продолжительность циркуляции полиовируса. Практически все штаммы полиовируса, выделенные из клинических проб и проб из окружающей среды, близкие соответствующим штаммам ОПВ, являются полиовирусами вакцинного происхождения (ПВВП). В свою очередь штаммы полиовирусов, происходящие от ОПВ Сэбина разделяются на две крупных категории.

Вирусы, сходные с ОПВ. К этой категории относится большинство выделенных штаммов полиовирусов, имеющих большое сходство с вакцинными штаммами в последовательностях (99% идентичности в последовательностях VP1). Иммунологически нормальный реципиент ОПВ выделяет вакцинный полиовирус в течение 3-4 недель.

Относительно короткий период выделения вируса и высокий уровень иммунитета населения обычно ограничивают передачу сходных с ОПВ вирусов от человека к человеку.

Полиовирусы вакцинного происхождения. К ним относят редко выделяющиеся штаммы полиовируса, у которых выявляют 99% и меньше идентичности в последовательностях белка VP1 с оригинальными штаммами Сэбина. Масштаб генетических изменений соответствует длительности репликации вируса. Выделенные штаммы ПВВП относят к двум различным группам: ПВВП, связанные с иммунодефицитом вирусоносителя (иПВВП), и ПВВП, длительно циркулирующие среди населения (цПВВП).

Группа иПВВП. Предрасположенность лиц с В-клеточным иммунодефицитом к длительному носительству и выделению вакцинных полиовирусов выявлена много лет назад.

Первые штаммы иПВВП, изученные новыми молекулярными методами, были выделены от лиц с различными формами иммунодефицита и с агаммаглобулинемией. Некоторые штаммы иПВВП обладали 90 % идентичности последовательностей белка VP1 с оригинальными штаммами Сэбина, что позволило предполагать хроническую полиовирусную инфекцию на протяжении 10 или более лет. К концу 2002 г. в мире было выявлено 18 лиц с хронической инфекцией иПВВП, выделявших полиовирус. Это число может быть неполным, так как за лицами с иммунодефицитом не ведётся систематических наблюдений. Распространение иПВВП от людей с хронической полиовирусной инфекцией в более широком круге лиц не выявлено.

Группа цПВВП. Первым свидетельством важного значения цПВВП для здравоохранения стала вспышка полиолмиелита (21 случай, включая 2 летальных), вызванная цПВВП типа 1, на о. Эспаньола (о. Гаити) в Карибском море в 2000-2001 гг.

Первые 2 штамма полиовируса, выделенные от больных, оказались родственными оригинальному штамму Сэбина типа 1, но отличались от него по последовательностям белка VP1 на 2-3 %, что позволило предположить последовательную передачу вируса от человека к человеку в процессе вспышки. Небольшие вспышки, связанные с цПВВП, были зарегистрированы в 2001 г. на Филиппинских островах (тип 1 цПВВП) и в 2002 г. на о.

Мадагаскар (тип 2 цПВВП). Ещё одна вспышка была выявлена в Египте ретроспективно, благодаря обнаружению длительной и широко распространенной циркуляции типа 2 цПВВП (1980-е гг. – начало 1990-х гг.).

Общим фактором всех вспышек, вызванных цПВВП, был низкий уровень иммунитета населения, соответствующий низкому уровню иммунизации ОПВ, а также очевидное отсутствие циркулирующего местного дикого полиовируса соответствующего типа. Другими факторами риска были те же, что и при циркуляции диких полиовирусов – скученность населения, высокий уровень рождаемости, неудовлетворительные санитарные условия и тропический климат. Все штаммы цПВВП, связанные с упомянутыми вспышками и описанные к настоящему времени, оказались рекомбинантами с другими видами энтеровирусов группы С. Это наблюдение не указывает, что рекомбинация играет обязательную роль в фенотипической реверсии ОПВ. Рекомбинация полиовируса с другими энтеровирусами является результатом смешанной инфекции, а частота рекомбинации функцией от уровня носительства энтеровирусов и общего числа случаев смешанных инфекций. Становится всё более ясно, что любой полиовирус, циркулирующий в людской популяции, в конце концов рекомбинируется с другим энтеровирусом и что рекомбинация скорее всего является индикатором циркуляции а не ступенькой в возрастающей способности вируса передаваться от человека к человеку. Поэтому, учитывая эти соображения и сомнения, если выделенный штамм полиовируса, сходный с ОПВ, имеет значительные отличия в нуклеотидных последовательностях капсидных белков от оригинального штамма Сэбина (1 %) и обладает признаками рекомбинации с энтеровирусом группы С, этот штамм вероятно является цПВВП, и связанные с ним случаи заболевания подлежат дальнейшему изучению.

2. Роль и функции лаборатории в программе ликвидации Ключевая роль сети полиовирусных лабораторий – предоставлять вирусологическую информацию, которую используют для планирования и направления ресурсов на искоренение дикого полиовируса, а в случае его заноса – на прекращение циркуляции.

В странах, эндемичных по полиомиелиту, основная роль лаборатории – предоставлять своевременную и точную информацию о циркуляции диких полиовирусов, которую используют для планирования и корректировки работы по иммунизации и искоренению полиовируса.

В странах, где циркуляция полиовируса прекращена, основная роль лаборатории – предоставлять своевременную и точную информацию о диких полиовирусах, занесённых из остающихся эндемичными стран, а также готовить документы с вирусологическими данными, позволяющими провести сертификацию ликвидации полиомиелита. Во всех странах полиовирусные лаборатории должны работать в полном взаимодействии с национальной группой по ликвидации полиомиелита и предоставлять этой группе быстрые и точные диагностические данные о случаях заболеваний с подозрением на полиомиелит.

2.1. Исследования План действий по глобальной ликвидации полиомиелита был принят ВАЗ в 1990 г. и пересмотрен в 1996 г. Он описывает приоритетные действия по иммунизации, эпидемиологическому надзору и лабораторным исследованиям для стран с разными уровнями готовности к ликвидации полиомиелита.

Главной задачей лаборатории является выделение вируса из проб фекалий, соответствующим образом собранных от возможно большего количества случаев ОВП и доставленных в лабораторию. Все выделенные штаммы полиовируса должны быть серологически типированы в НЛ и направлены как можно быстрее в РРЛ для проведения ВТД. Чтобы получить вирусологическую информацию, необходимую для корректировки работ по иммунизации и распределения ресурсов, все выделенные штаммы дикого полиовируса должны сразу после идентификации направляться на анализ геномных последовательностей.

В тех странах, где по меньшей мере в течение года не выявлено ни одного случая полиомиелита, появление такого случая следует рассматривать как чрезвычайную ситуацию в здравоохранении и немедленно провести качественные детальные исследования.

Необходимо быстро провести ВТД всех выделенных штаммов полиовируса и сообщить результаты в национальную программу ликвидации полиомиелита. О выделении дикого полиовируса следует немедленно сообщать в эту программу и в Региональное бюро ВОЗ, а также организовать пересылку выделенного штамма (штаммов) в ГСЛ для анализа геномных последовательностей.

Для сертификации страны, как искоренившей дикий полиовирус, необходимо строгое соответствие определённым критериям. Следует показать, что в течение трёх лет дикий полиовирус не был выделен ни от детей с паралитическими заболеваниями, ни от здоровых детей, ни из объектов окружающей среды. Лаборатории должны представить детальные протоколы проведенных исследований и документальные подтверждения соответствия применяемых методов работы установленным стандартам, что отражается и на результатах ежегодной аккредитации. Все выделенные штаммы полиовирусов независимо от их происхождения должны быть исследованы рекомендованными ВОЗ методами ВТД в аккредитованной ВОЗ лаборатории и получено подтверждение, что они не относятся к диким полиовирусам.

Исследование нейтрализующих полиовирус антител не рекомендуется как обязательное при лабораторной диагностике полиомиелита. Результаты его не всегда помогают уточнению диагноза, а для сбора необходимых проб и их лабораторного исследования требуется дополнительное время. Интерпретация уровней сывороточных антител затруднена в условиях массовой иммунизации, а применяемые методы исследования не выявляют разницы между антителами к дикому и вакцинному полиовирусам.

2.2. Структура и деятельность сети полиовирусных лабораторий ВОЗ План деятельности лабораторий ВОЗ излагает элементы стратегии и работы, которые обеспечивают для всех стран компетентную лабораторную службу, и описывает структуру и функции учреждений трёх уровней, входящих в лабораторную сеть – национальных лабораторий (НЛ), региональных референс-лабораторий (РРЛ) и глобальных специализированных лабораторий (ГСЛ) (рис.2.1.). В некоторых странах созданы также субнациональные лаборатории. Эти лаборатории проводят часть работы НЛ и должны соответствовать тем же стандартам, что и НЛ.

Все лаборатории проходят ежегодную аккредитацию, подтверждающую документально, что они обладают необходимой квалификацией и возможностями для выполнения своей роли в ликвидации полиомиелита.

2.2.1.Обязанности национальных лабораторий В основные обязанности НЛ входят:

- выделение полиовируса из проб фекалий и его серологическая идентификация с использованием стандартных методов и реагентов;

- направление выделенных штаммов полиовируса в РРЛ;

- отчёт о результатах исследований;

- координация работы с сотрудниками РПИ, обследующими случаи заболеваний;

координация работы по программе обеспечения безопасного хранения диких полиовирусов и реализации этой программы.

2.2.2. Обязанности региональных референс-лабораторий В основные обязанности РРЛ входят:

- работа в качестве НЛ в своих странах и в других странах, где нет НЛ (по специальным согласованиям);

проведение ВТД штаммов полиовируса, выделенных в регионе;

распределение в регионе референс-материалов – клеточных линий, иммунных сывороток и др.;

работа в качестве базы для проведения учебных курсов и для индивидуального обучения сотрудников лабораторий из стран региона;

- координация работы по контролю качества и аттестации НЛ в регионе, руководство программой профессионального тестирования и выезды в НЛ, если возникают сложности в их деятельности;

- направление отдельных штаммов полиовируса в ГСЛ для секвенирования;

- своевременная отчётность о результатах работы;

- координация работы по программе обеспечения безопасного хранения диких полиовирусов;

координация работы с сотрудниками РПИ, обследующими случаи заболеваний.

Рис. 2.1. Структура глобальной сети полиовирусных лабораторий 2.2.3. Обязанности глобальных специализированных лабораторий В лабораторной сети ВОЗ функционирует ограниченное число ГСЛ. В их основные обязанности входят:

- окончательная идентификация выделенных штаммов полиовируса с использованием всех доступных методов, включая генетическую характеристику для выяснения происхождения штаммов;

- приготовление и распределение соответствующих стандартов, референс-реагентов и учебных материалов;

- приготовление и распределение планшетов для профессионального тестирования;

- направление консультантов по вопросам лабораторной работы, организация целевого - участие в коллаборативных исследованиях по оценке предлагаемых стандартов и референс-материалов;

- исследовательская работа, имеющая целью усовершенствование методов диагностики полиовирусной инфекции и обнаружения диких полиовирусов в клинических пробах и объектах внешней среды;

- своевременная отчётность о результатах работы;

- координация работы по программе обеспечения безопасного хранения диких полиовирусов;

- координация работы с сотрудниками РПИ, обследующими случаи заболеваний.

2.3. Координация деятельности лабораторной сети Координацию работы сети полиовирусных лабораторий проводит ВОЗ. Каждый регион имеет регионального координатора, ответственного за работу лабораторий на территории региона. Каждый регион направляет отчёты об этой работе координатору в штабквартиру ВОЗ. Координация необходима для регулярного представления результатов, запросов, обратной связи по анализам, комментариев и рекомендаций. Приобретение и распределение необходимого лабораторного оборудования и реагентов также осуществляется через ВОЗ. Связанная таким образом сеть полиовирусных лабораторий является самой крупной сетью лабораторий, когда-либо создававшейся в системе здравоохранения.

2.3.1. Сбор проб и доставка их в лабораторию Эффективность вирусологической диагностики зависит от соблюдения рекомендованного времени сбора клинических проб и оптимальных условий пересылки их в лабораторию. Это требует тесного взаимодействия вирусологов, эпидемиологов и клиницистов. Также необходимы детальное планирование работы, определение обязанностей и соответствующее обучение. Типичный процесс сбора проб и их прохождение от места сбора через лабораторную систему иллюстрирует рис. 2.2.

2.4. Аккредитация лабораторий, входящих в сеть Аккредитация документально удостоверяет, что лаборатория подготовлена и обладает возможностями выделять и идентифицировать дикий полиовирус, который может содержаться в клинических пробах или в материалах из окружающей среды, и быстро сообщать о результатах. Кроме того, аккредитация даёт возможности пройти дополнительное обучение, увеличить ресурсы, получать квалифицированную оценку качества работы и входить в состав глобальной сети лабораторий ВОЗ.

Аккредитация НЛ ежегодно проводится Региональным бюро ВОЗ и основывается на работе лаборатории в течение предшествующего года. Анализируются данные за 13 месяцев, собранные за 1 месяц до аккредитации. Документ об аккредитации действует один год.

2.4.1.Критерии аккредитации национальных и субнациональных лабораторий Для аккредитации НЛ и СНЛ используют 7 критериев.

1) В течение 28 дней после получения проб от случаев ОВП лаборатория представляет результаты исследования не менее 80% этих проб. Этому критерию соответствуют результаты исследования всех вирус-отрицательных проб после двух последовательных инокуляций культур клеток в течение 14 дней. Сходным образом, если содержащийся в пробе вирус вызывает ЦПЭ в первую неделю после инокуляции в культуру клеток, он может быть идентифицирован в течение 28 дней. Вирусы, выявляющиеся через более длительное время, смеси разных вирусов или вирусы, типирование которых затруднено, могут потребовать для идентификации больше 28 дней.

2) В течение года вирусологически исследуется не менее 150 проб фекалий. Активные вирусологические лаборатории, постоянно поддерживающие культуры клеток, исследуют в год 150 проб фекалий разного происхождения на содержание энтеровирусов и соответствуют указанному критерию. Лаборатории, ожидающие, что подлежащих исследованию проб будет меньше, могут сотрудничать со специалистами из РПИ и исследовать пробы фекалий от детей с асептическим менингитом или от детей из районов, где ведутся программы эпиднадзора, связанные с эпидемиологически значимыми вирусами.

3) Точность выделения полиовируса и его идентификации составляет не менее 90%.

Точность определяют по совпадению результатов исследования всех штаммов полиовируса, представленных из НЛ в РРЛ в течение 12 месяцев.

4) Не менее 80% штаммов полиовируса, выделенных от случаев ОВП, направлены в РРЛ для проведения ВТД в течение 7 дней после получения результатов типирования.

Местные органы здравоохранения - распознают подозрительный случай ОВП;

- извещают национальный центр Региональная референс-лаборатория национальную лабораторию при пробы и подтверждает их получение;

- подтверждает выделение вируса и результат идентификации;

- проводит внутритиповую дифференциацию;

- направляет все штаммы дикого полиовируса в глобальную специализированНациональная лаборатория ную лабораторию для секвенирования;

- сообщает результаты ВТД национальной лаборатории и Региональному бюро - еженедельно (или ежемесячно) сообщает о результатах работы Региональному - получает пробы, регистрирует их и подтверо результатах работы в Региональное - подтверждает результаты выделения и типирования вируса;

- проводит секвенирование генома;

- сообщает результаты в референс-лабораторию, Региональное бюро ВОЗ и в Штабквартиру ВОЗ.

Рис. 2.2. Блок-схема сбора и транспортировки проб Крайне важно, чтобы программа ликвидации полиомиелита получала сведения обо всех штаммах дикого полиовируса и предполагаемого ПВВП как можно раньше. Все штаммы полиовируса, выделенные от заболевших ОВП, контактировавших с ними лиц и от случаев, подозрительных на полиомиелит, должны без задержки направляться в РРЛ для проведения ВТД. Штаммы полиовируса, выделенные не от случаев ОВП или в дополнительных программах эпиднадзора (например, из материалов окружающей среды) также должны исследоваться методами ВТД и направляться в РРЛ как можно раньше (желательно в первые 7 дней после выделения).

5) Внутренний контроль качества, включая чувствительность культур клеток, проводится не реже чем ежеквартально в соответствии с рекомендациями ВОЗ.

Лучше всего располагать данными о чувствительности клеточных линий для всех запасов клеток, имеющихся в лаборатории и содержащихся в замороженном состоянии.

Чувствительность должна проверяться при каждом восстановлении культуры из запаса или при получении клеток в лаборатории. Рекомендуется, чтобы эта проверка проводилась по крайней мере в середине предполагаемого интервала использования клеток (15 пассажей).

Дополнительная оценка чувствительности клеток перед истечением 15 пассажей и прекращением их использования может подтвердить для лаборатории, что чувствительность сохранялась, однако такая оценка не является обязательной для аккредитации.

Оригинальные протоколы с данными контроля качества и резюме о реализации корректирующих рекомендаций сохраняются в документации и обсуждаются с проверяющим лицом.

6) Оценка по очкам последнего профессионального тестирования, проверенного ВОЗ, составляет не менее 80%. Результаты ПТ должны быть сообщены в течение 28 дней после получения планшета для тестирования.

7) Оценка по очкам методов и практики работы лаборатории по результатам ежегодной инспекционной проверки составляет не менее 80%.

Для лабораторий с постоянно высокими ежегодными оценками региональный координатор работы лабораторий может ограничиться проверкой данных, представляемых лабораторией, и не проводить инспектирования на месте.

Показатель годового выделения неполиомиелитных энтеровирусов из всех обследованных проб фекалий не служит критерием для аккредитации из-за большой его вариабельности, определяемой многими факторами. Однако он может быть полезным для оценки работы лаборатории и должен приниматься во внимание проверяющим лицом.

2.4.2. Критерии аккредитации региональных референс-лабораторий Для аккредитации РРЛ используют 5 критериев.

1) Результаты ВТД представляются руководителю программы ликвидации полиомиелита и региональному координатору работы лабораторий не менее чем для 80% всех штаммов полиовирусов, выделенных от случаев ОВП, в течение 14 дней после их получения или завершения типирования, если пробы исследовались в РРЛ.

Этот критерий используют для штаммов полиовируса от случаев ОВП и от контактировавших с ними лиц. Методом ВТД исследуют все выделенные штаммы полиовируса независимо от их источника, однако вирусы от случаев ОВП и контактировавших лиц проверяют в первую очередь.

2) штаммы дикого полиовируса и штаммы полиовируса, где предполагается вакцинное происхождение, выделенные при обследовании не менее 80% случаев ОВП и контактировавших с ними лиц, в течение 7 дней после выделения направляются для секвенирования.

Этот критерий относится к штаммам, выделенным от случаев ОВП и контактировавших с ними лиц. Необходимо, чтобы программа ликвидации полиомиелита получала информацию о характеристике выделенных штаммов дикого полиовируса или ПВВП как можно раньше. Вирусы этих обеих групп должны отправляться без задержки в ГСЛ для проведения секвенирования.

3) Оценка по очкам не менее 90% при проведении последнего ПТ по внутритиповой дифференциации. Результаты ПТ должны быть представлены в течение 14 дней после получения планшета для тестирования 4) Оценка по очкам не менее 90% при проведении последнего ПТ по выделению и идентификации полиовируса. Результаты ПТ должны быть представлены в течение 28 дней после получения планшета для тестирования.

5) Оценка методов и практики работы лаборатории по результатам ежегодной инспекционной проверки составляет не менее 90%.

Для лабораторий, одновременно выполняющих функции НЛ, добавляются следующие критерии.

6) Результаты исследования проб не менее чем от 80% случаев ОВП представляются в течение 28 дней после получения проб.

Вирусы, выявляющиеся через более длительное время, смеси разных вирусов или вирусы, типирование которых затруднено, могут потребовать для исследования больше дней.

7) Внутренний контроль качества по чувствительности культур клеток L20B и RD проводится не реже чем ежеквартально в соответствии с рекомендациями ВОЗ.

Лучше всего располагать данными о чувствительности клеточных линий для всех запасов клеток, имеющихся в лаборатории и содержащихся в замороженном состоянии.

Чувствительность проверяется при каждом восстановлении культуры из запаса или при получении клеток в лаборатории. Рекомендуется, чтобы эта проверка проводилась по крайней мере в середине предполагаемого интервала использования клеток (15 пассажей).

Дополнительная оценка чувствительности клеток перед истечением 15 пассажей и прекращением их использования может подтвердить для лаборатории, что чувствительность сохранилась, однако такая оценка не является обязательной для аккредитации.

Оригинальные протоколы с данными контроля качества и резюме о реализации корректирующих рекомендаций сохраняются в документации и обсуждаются с проверяющим лицом.

2.4.3. Аккредитация отдельных национальных лабораторий для проведения ВТД Некоторые НЛ, исследующие много фекальных проб от случаев ОВП из эндемичных или недавно бывших эндемичными районов, были привлечены ВОЗ к исследованиям выделенных в лаборатории штаммов полиовируса при помощи ВТД. Выделение и идентификация полиовирусных штаммов и проведение ВТД в одной лаборатории сокращает время представления данных о диких полиовирусах и ПВВП на несколько недель.

Дополнительная аккредитация документально подтверждает, что национальная полиовирусная лаборатория, проводящая ВТД, обладает надлежащим опытом и возможностями выявлять и идентифицировать дикие полиовирусы, присутствующие в лабораторных пробах, и немедленно докладывать о результатах. Полная аккредитация лаборатории в качестве НЛ является необходимым предварительным условием для аккредитации по проведению ВТД. Эта аккредитация также даёт возможность пройти дополнительное обучение, увеличить ресурсы, получать квалифицированную оценку качества работы и входить в состав глобальной сети лабораторий ВОЗ.

2.4.4. Критерии для дополнительной аккредитации 1) Результаты ВТД представляются в программу ликвидации полиомиелита и координатору региональной сети лабораторий не менее чем для 80% всех штаммов полиовирусов, выделенных от случаев ОВП, в течение 14 дней после типирования их в лаборатории. Этот критерий используют для штаммов полиовируса от случаев ОВП и от контактировавших с ними лиц. Методом ВТД исследуют все выделенные штаммы полиовируса независимо от их источника, однако вирусы от случаев ОВП и контактировавших с ними лиц проверяют в первую очередь.

2) Оценка по очкам не менее 90% при проведении последнего ПТ по внутритиповой дифференциации. Результаты ПТ должны быть представлены в течение 14 дней после получения планшета для тестирования.

3) Штаммы дикого полиовируса и штаммы ПВВП, выделенные при обследовании не менее 80% случаев ОВП и контактировавших с ними лиц, в течение 7 дней после выделения направляются для секвенирования. Этот критерий относится к штаммам, выделенным от случаев ОВП и контактировавших с ними лиц. Необходимо, чтобы программа ликвидации полиомиелита получала информацию о характеристике выделенных штаммов дикого полиовируса и ПВВП как можно раньше. Вирусы этих обеих групп должны отправляться без задержки в ГСЛ для проведения секвенирования.

4) Оценка методов и практики работы лаборатории по результатам ежегодной инспекционной проверки составляет не менее 90%.

2.4.5. Аккредитация глобальных специализированных лабораторий Специализированные функции, выполняемые ГСЛ, распределяются между ними неравномерно, а некоторые ГСЛ являются единственными с соответствующей специализацией. Все ГСЛ одновременно функционируют как РРЛ, а некоторые и как НЛ.

Поэтому целесообразно проводить аккредитацию ГСЛ, используя критерии РРЛ и дополнительные требования, соответствующие уровню работы, поскольку эти лаборатории рассматриваются как центры высокого профессионализма.

2.4.6. Категория предварительной аккредитации Дополнительную категорию «предварительно аккредитованной» используют для лабораторий, получивших проходные очки по планшету ПТ, но не соответствующих одному из остальных критериев. Она присваивается лаборатории по усмотрению координатора региональной сети лабораторий. Такая лаборатория вместе с проверяющим специалистом и Региональным бюро ВОЗ должна подготовить детальный план работы по устранению недочётов и через год снова пройти аккредитацию. Если лаборатория снова не будет соответствовать всем критериям, она не получит аккредитации и на следующий год. Такая лаборатория получает статус «неаккредитованной», а все результаты проводимых в ней исследований проб от случаев ОВП должны подтверждаться аккредитованной лабораторией.

2.4.7. Лаборатории, не прошедшие аккредитации Лаборатория, не получившая нужного количества очков по каким-либо из критериев, должна вместе с координатором региональной сети лабораторий определить разделы работы, требующие улучшения, составить и ввести в действие рабочий план, контролировать его выполнение, проводить, где необходимо, проверочное тестирование и продолжать попытки получения аккредитации.

Задачей каждой такой лаборатории должно быть получение аккредитации. Если эта лаборатория прошла ПТ, но не достигла соответствия одному из других критериев (время представления результатов, число исследованных проб, подтверждение характеристики штаммов, внутренний КК, оценка методов и процесса работы), она может по решению координатора региональной сети лабораторий получить статус предварительно аккредитованной.

Лаборатория, не прошедшая по очкам ПТ в течение 6 месяцев после ежегодной проверки, считается неаккредитованной, и необходимо поручить одной из аккредитованных лабораторий проводить дублирующие исследования всех проб.

Лаборатории, повторно не получающие аккредитации, представляют проблему для программы ликвидации полиомиелита. В некоторых случаях по соглашению между национальными учреждениями и директором Регионального бюро ВОЗ такая лаборатория может быть исключена из Глобальной сети полиовирусных лабораторий. В других случаях это оказывается сложным, и необходимо продолжать попытки улучшения работы лаборатории направлением туда консультантов и обучением персонала. Одной из аккредитованных лабораторий поручают проводить подтверждение всех результатов по пробам от случаев ОВП, представляемых неаккредитованной лабораторией. Такую схему следует считать долговременной и предусматривать определенною поддержку проводимой работы.

2.4.8. Обязанности аккредитованных лабораторий Национальные и субнациональные лаборатории. Аккредитация НЛ и СНЛ – обязанность Региональных бюро ВОЗ. Желательно, чтобы координатор региональной сети полиовирусных лабораторий посещал все НЛ и СНЛ региона по крайней мере один раз в год.

Когда это невозможно, лаборатории по поручению ВОЗ должны посещать консультанты.

Целесообразно совмещать эти посещения с проведением в лаборатории ежегодной аккредитации.

По завершении аккредитации Региональное бюро ВОЗ получает информацию о её результатах. Обязанностью Регионального бюро ВОЗ является официальное извещение о результатах аккредитации перечисленных ниже учреждений и лиц:

- соответствующих национальных учреждений;

- руководителя национальной программы эпидемиологического надзора или РПИ;

- директора учреждения, где располагается лаборатория;

- руководителя лаборатории;

- координатора глобальной сети лабораторий ВОЗ.

Региональные референс-лаборатории. Аккредитация РРЛ – обязанность штабквартиры ВОЗ. Желательно, чтобы координатор глобальной сети лабораторий вместе с координатором региональной сети лабораторий посещали все РРЛ при проведении их аккредитации. Если это невозможно, посещение проводит координатор региональной сети лабораторий вместе с представителем штаб-квартиры ВОЗ.

По завершении аккредитации штаб-квартира ВОЗ получает информацию о её результатах. В обязанности штаб-квартиры ВОЗ входит официальное извещение о результатах аккредитации перечисленных ниже учреждений и лиц:

- Регионального бюро ВОЗ;

- директора учреждения, где располагается лаборатория;

- руководителя лаборатории.

Глобальные специализированные лаборатории. Аккредитация ГСЛ – обязанность штаб-квартиры ВОЗ.

По завершении аккредитации штаб-квартира ВОЗ направляет официальные извещения о её результатах следующим учреждениям и лицам:

- Региональному бюро ВОЗ;

- директору учреждения, где располагается лаборатория:

- руководителю лаборатории.

2.4.9. Требования к инспекционному посещению лаборатории для проведения аккредитации НЛ и СНЛ, которые были полностью аккредитованы и продолжают соответствовать критериям ВОЗ по лабораторной работе, не должны инспектироваться каждый год. Такие лаборатории могут быть аккредитованы координатором региональной лабораторной сети на основе следующих показателей:

- не менее 80% результатов исследований сообщается в течение 28 дней;

- не менее 150 проб исследуется ежегодно;

- не менее 90% выделений полиовируса подтверждается РРЛ;

- не менее 80% штаммов полиовируса, выделенных от случаев ОВП, в течение 7 дней направляется для исследования в ВТД;

- не менее 80% очков получено при последнем ПТ, проводившемся по согласованию с - внутренний контроль качества проводится не реже одного раза в квартал.

В таких случаях Региональное бюро ВОЗ сообщает перечисленным ниже учреждениям и лицам, что лаборатория аккредитована на следующий год и с учётом высокого качества работы нет необходимости в её инспектировании:

- соответствующим национальным учреждениям;

- руководителю национальной программы эпидемиологического надзора или РПИ;

- директору учреждения, где располагается лаборатория;

- руководителю лаборатории;

- координатору глобальной сети лабораторий ВОЗ.

Решение об отказе от инспекционного посещения лаборатории для проведения аккредитации принимается координатором региональной сети лабораторий. В то же время признано, что даже при высоком качестве работы НЛ и СНЛ их инспекционные посещения для аккредитации должны проводиться не реже одного раза в три года.

3. Обеспечение качества работы лаборатории 3.1. Основы обеспечения качества работы лаборатории Обеспечение качества работы лабораторий связано с организационными процессами и с условиями, в которых деятельность лаборатории планируется, осуществляется, контролируется, регистрируется и представляется ( в соответствующих докладах и отчётах).

Деятельность лаборатории в соответствии с принципами обеспечения качества обусловливает надлежащее планирование работы и предоставление соответствующих средств для её проведения. Это способствует полной и точной отчётности и подтверждению правильности проведения работы. Введение в лаборатории системы обеспечения качества работы означает установление организационной структуры, обязанностей, методов, рабочих процессов и ресурсов, необходимых для достижения следующих целей:

- предупредить риск;

- выявить отклонения;

- исправить ошибки;

- повысить эффективность;

- обеспечить качество и правильность результатов.

Разработка и введение в действие системы обеспечения качества работы и её реализация входят в обязанности директора или руководителя лаборатории, но также и в обязанности всего лабораторного персонала. Этот процесс включает много элементов, описываемых ниже.

3.1.1. Штат Полиовирусная лаборатория должна иметь штат, обладающий соответствующей квалификацией и опытом, необходимым для безопасного и точного выполнения всех функций и обязанностей такой лаборатории. Должна быть разработана схема организации лаборатории, отражающая её иерархическую структуру и линии управления, а также функции и обязанности каждого сотрудника.

В штатное расписание должны быть включены:

- директор или руководитель лаборатории;

- руководители всех подразделений (например, лаборатории клеточных культур, лаборатории внутритиповой дифференциации и т.д.);

- научные сотрудники, лаборанты, вспомогательный персонал;

- административный штат, сотрудники, обеспечивающие эксплуатацию зданий, оборудования, уборку помещений.

Для каждой штатной позиции должно иметься «описание работы», включающее перечень функций и обязанностей, необходимое образование и практический опыт.

3.1.2. Уровень штатной обеспеченности Штатный состав полиовирусной лаборатории, предусмотренный штатным расписанием, должен обеспечивать выполнение всех функций такой лаборатории без ущерба для безопасности работы и правильности её проведения. В работе лабораторий существуют специализированные разделы, требующие значительного опыта – приготовление культур клеток, оценка цитопатического эффекта в инфицированных вирусом культурах, проведение ВТД и секвенирования. Для выполнения таких работ лаборатория должна располагать специалистами (по крайней мере одним по каждому виду работ), имеющими не менее чем годовой практический опыт. Рекомендуется, чтобы такой специалист работал вместе с другим штатным сотрудником для передачи ему опыта и возможности использовать его в будущем для самостоятельной специализированной работы.

3.1.3. Людские ресурсы Основная задача политики людских ресурсов – располагать надёжным штатом сотрудников, имеющих научную или техническую подготовку, чтобы правильно выполнять необходимую лабораторную работу, и оплачиваемых соответственно рынку труда.

Лаборатория должна регулярно организовывать и координировать проведение курсов повышения и модернизации квалификации научных сотрудников и лаборантов в соответствии с выявленной необходимостью и рекомендациями руководителей подразделений. Это обучение должно содействовать эффективности процесса обеспечения качества работы. Целесообразно разработать длительную программу обучения, включающую как курсы в лаборатории, так и обучение в других учреждениях. Характер программ обучения и детали их реализации должны отражаться в соответствующей документации.

Программа штатных ресурсов должна включать профессиональную оценку сотрудников и качества выполняемой каждым из них работы. Такой подход позволяет исправлять ошибки и недочёты и содействовать поощрению сотрудников.

3.1.4. Распределение площадей Полиовирусная лаборатория должна располагать соответствующими помещениями для безопасного проведения всех работ и размещения необходимого оборудования. Эти помещения должны легко обслуживаться и убираться. Необходимо достаточное количество комнат для разделения инфекционных и неинфекционных работ. Помещения для культур клеток и питательных сред как можно основательнее отделяются от всех других процессов.

Лучше всего эти помещения полностью отделить от подразделений, где проводится работа с вирусами или с другими микроорганизмами. Следует чётко разграничить различные рабочие зоны, чтобы свести к минимуму возможности случайной контаминации чистых зон. Если возможно, рекомендуется разработать логическую схему лабораторных работ, которая предельно уменьшила бы расстояния передвижения инфекционных материалов и исключила их транспортировку через чистые помещения. Если позволяют условия, целесообразно предоставить отдельные комнаты для следующих целей:

- хранение реагентов и расходных материалов;

- хранение инструментов и оборудования;

- мойка, заготовка и стерилизация;

- клеточные культуры;

- приём и регистрация проб;

- обработка проб;

- инокуляция культур, сбор вируссодержащей культуральной среды, типирование выделенных штаммов вируса;

- специализированные работы;

- документация, архив, контроль;

- административные помещения;

- уничтожение (обеззараживание) инфицированных отходов.

Лабораторные помещения должны соответствовать следующим общим требованиям и рекомендациям.

- Освещание и вентиляция должны соответствовать потребности каждого рабочего места (помещения), определяемой характером проводимой работы. Поверхности рабочих столов должны быть гладкими, удобными для уборки и устойчивыми к химическим воздействиям.

- Системы безопасности должны включать пожарную безопасность, защиту от электрического тока, наличие душа и оборудования для промывки глаз на случай аварии с инфицированным материалом.

- Подводки горячей и холодной воды, вакуума, газа, пара и электрического тока должны обеспечивать их надлежащее использование во время работы, а также облегчать их обслуживание и ремонт. Электрическое оборудование не должно создавать какого-либо риска для работающих лиц, а электропровода не должны пересекать места прохода персонала. Желательно наличие резервного электрогенератора для обеспечения работы самого необходимого оборудования (термостаты, защитные укрытия, холодильники) в случаях перерыва электроснабжения.

- Необходимы достаточные помещения для хранения расходных материалов, что предупреждает загромождения ими рабочих поверхностей и проходов. Нужны также помещения для более длительного хранения этих материалов; их удобнее располагать вне рабочей зоны.

- Каждую рабочую комнату рекомендуется оборудовать раковиной для мытья рук, расположенной вблизи двери.

- Автоклав следует поместить в том же здании, где расположены лабораторные помещения.

- Помещения для хранения верхней одежды и личных вещей, принятия пищи и питья следует располагать вне рабочих зон.

- При установке оборудования и организации работы лаборатории необходимо обеспечивать соответствие стандартам безопасности (биологической, химической и 3.2. Стандартные оперативные процессы (СОП) СОП детально описывают рабочие процессы, осуществляемые в лаборатории, что способствует достижению следующих целей:

- стандартизация, повышение стабильности и надёжности в каждом разделе работы, проводимой в лаборатории;

- снижение уровня ошибок;

- обучение новых штатных сотрудников и руководство ими.

СОП должны быть составлены профессиональными сотрудниками лаборатории, рассмотрены в учреждении, руководящем работой лаборатории, и утверждены её директором.

СОП готовятся для процессов общего характера, как в приводимом ниже примере.

- Общие положения: подготовка СОП, рассмотрение замечаний, корректировка документов, подготовка протоколов и отчётов.

- Тест-системы: подготовка рабочих зон, их техническое обслуживание.

- Лабораторные работы: получение, регистрация и этикетировка проб, помывка и подготовка предметов многоразового использования, стерилизация материалов, хранение проб, этикетировка материалов и реагентов, приготовление сред и растворов.

- Вопросы, относящиеся к компетенции сотрудников лаборатории: обучение, обращение с опасными материалами, лабораторная безопасность, штатная комплектация лабораторных подразделений.

- Референс-материалы: их идентификация, характеристика, обращение, приёмка, хранение, использование - Архивы: обслуживание, распространение, пополнение.

- Методы: методы обработки и исследования проб, присланных в лабораторию, должны точно следовать рекомендуемым ВОЗ методам и описываться в соответствии с формой, приведенной на рис. 3.1.

Пример СОП представлен на рис. 3.2., а пример блок-схемы процесса – на рис. 3.3.

На каждой странице описания СОП должны быть следующие данные:

- название организации (и лого–фирменный знак);

- подразделение, выпускающее СОП;

- название СОП;

- подпись лица, составившего СОП, и дата (день, месяц, год);

- подпись лица, рецензировавшего СОП, и дата;

- подпись лица, утвердившего СОП, и дата;

- срок действия СОП;

- дата пересмотра документа;

- номер страницы и общее число страниц в документе.

Заголовок – описательный.

Код – должен определять:

- номер каждого процесса (метода);

- номер пересмотра СОП (номер 00 используют для первоначального варианта СОП).

Задача – назначение описываемого процесса (метода) должно быть выражено ясно и кратко.

Сфера применения – название рабочего подразделения, которое будет применять метод, и Определения – следует пояснить значение основных терминов, используемых в ходе процесса Общее описание – каждый СОП должен быть описан ясно и точно, чтобы быть понятным каждому начинающему с ним работать (с опытом или без опыта подобной работы).

Каждый этап выполнения процесса, предусматриваемый схемой работы, должен быть детально описан. В дополнение к тексту могут быть использованы поясняющие Требования безопасности – меры и условия безопасности, подлежащие соблюдению для правильного выполнения СОП. Опасные химические реагенты должны быть снабжены рекомендациями по обеспечению безопасности работы.

Документация – форма протокола, в который вносят все данные и результаты измерений, Справочная литература и документы – источники, использованные при составлении СОП.

Рис. 3.1. План-схема описания стандартного оперативного процесса (метода) – СОП Изменения в СОП вырабатываются подготовленными сотрудниками лаборатории, рассматриваются в учреждении, руководящем работой лаборатории, и утверждаются её директором. Любой метод, включающий отличия от стандартного официально принятого метода, должен быть до введения в практику, аттестован на основании сравнения со стандартным методом по следующим характеристикам:

- правильность: степень корреляции со значениями, полученными предшествующим методом;

- точность: вариабельность результатов, представленная значением стандартной девиации или коэффициентом корреляции;

- чувствительность: способность метода регистрировать небольшие вариации;

- воспроизводимость: сохранение точности метода при его использовании в разных условиях;

- специфичность: степень однотипности реакции на исследуемую субстанцию;

- надёжность: способность показывать правильные и точные результаты в различных условиях.

3.3. Документация Документация включает комплект руководств по качеству работы, СОП, инструкции, формы, отчёты, аналитические протоколы и регистрацию данных, подтверждающих качество. Обязанности подготовки и ревизии документов возлагаются на специально назначенную группу или сотрудника в зависимости от сложности структуры лаборатории.

Заголовок: Приготовление сред для культивирования клеток Код:

- лаборатория – название лаборатории;

- номер пересмотра СОП. 3.00 – оригинальный документ, 3.01 – номер первого пересмотра, - дата - дата выпуска данного варианта документа;

Задача: описание сред для культивирования клеток и приготовления среды для каждой из двух клеточных линий, используемых в полиовирусной лаборатории.

Сфера применения: документ описывает методы, применяемые в работе с культурами клеток в полиовирусной лаборатории ….

Определения:

- RD –линия клеток рабдомиосаркомы человека, чувствительных к полиовирусу и многим - L20B – линия мышиных L-клеток, обладающих рецепторами к полиовирусу и селективно поддерживающих размножение полиовируса и очень немногих других - МЕМ – минимальная среда Игла (в растворе Эрла);

- ФСБ – фосфатно-солевой буферный раствор.

Общее описание:

- детальное описание операций СОП.

Требования безопасности: все рекомендации по обеспечению безопасности, включая биологическую и химическую безопасность, и инструкции по уничтожению отходов должны выполняться.

Документация:

- дата приготовления;

- изготовленный объём;

- результат контроля качества;

- дата истечения срока годности;

- дата использования;

Справочная литература, использованная при составлении СОП – Руководство по лабораторным исследованиям полиомиелита ВОЗ.

Рис. 3.2. Пример описания стандартного оперативного процесса 3.4. Оборудование и инструменты Лаборатория должна иметь необходимое оборудование и инструменты для правильного проведения всех исследований. Стандартный список оборудования для полиовирусных лабораторий ВОЗ приводится в табл. 3.1. Новые инструменты и оборудование должны устанавливаться и регулироваться представителем поставщика или квалифицированным специалистом. Все руководства и инструкции следует хранить в местах, доступных для всех пользователей, а для систематического обслуживания и регулировки оборудования составляется специальное расписание.

Все пользователи должны хорошо освоить приёмы работы с оборудованием, его техническое обслуживание и аттестацию, чтобы обеспечить его правильное использование.

Сведения обо всех нарушениях в работе оборудования, а также о его обслуживании и аттестации вносятся в центральный регистр.

фильтрации с мембранным фильтром, задерживающим В лаборатории должен вестись список оборудования и инструментов, включающий следующие сведения:

- название;

- марка;

- поставщик (или даритель);

- обслуживающая организация;

- схема обслуживания;

- инвентарный номер;

- серийный номер;

- модель, год выпуска;

- расположение;

- дата приобретения;

- дата первого использования;

- экземпляр руководства, приложенного производителем.

лабораторий) фильтрами испарения перегонки) 3.5. Снабжение 3.5.1. Референс-материалы К ним относятся материалы, применяемые для выверки методов и обеспечения определенной стандартности таких работ, как, например, использование референс-штаммов Сэбина для проверки чувствительности клеточных линий или для аттестации типоспецифических иммунных сывороток.

Необходимо вести специальный регистр или формуляр, куда вносят следующие сведения:

- название референс-материала;

- поставщик;

- производитель;

- номер серии;

- дата анализа для проверки соответствия принятым требованиям;

- место и условия хранения;

- срок годности;

- хранение в соответствующей форме (согласно СОП).

Этот регистр должен содержать всю информацию о свойствах референс-материалов.

Качество референс-материала проверяют один раз в год, а также после изменений условий хранения.

3.5.2. Реагенты Реагентами обычно называют химические или биологические материалы, используемые в лабораторных реакциях. Стандартный список реагентов и расходных материалов (для исследования 100 проб), рекомендуемый для полиовирусных лабораторий ВОЗ, приведен в табл. 3.2. В лаборатории постоянно должен находиться по крайней мере шестимесячный резервный запас реагентов. Учитываая время доставки и её трудности в некоторых регионах, реагенты (включая культуральные среды) рекомендуется заказывать заранее – за 6-12 месяцев до предполагаемого использования.

Должен вестись специальный регистр или формуляр реагентов куда вносят те же сведения, которые предусмотрены для референс-материалов (см. выше).

Требования к реагентам:

- они должны быть соответствующего качества;

- их следует получать от рекомендованного поставщика в оригинальной упаковке;

- необходимо вести регистрацию приобретения, получения и использования реагентов, чтобы избежать перерывов в работе, особенно для реагентов, которые приобретаются - при получении реагента нужно проверить целость упаковки и регистрировать проверку на этикетке инициалами проверяющего и датой проверки;

- для перевозки, хранения реагентов, обращения с ними и их уничтожения необходим соответствующий СОП.

Все изменения в составе реагентов или сред, а также смена партии биологических продуктов (иммунные сыворотки, конъюгаты и т.д.) документируются в соответствующем регистре.

Вода относится к реагентам и должна соответствовать требованиям по чистоте и другим спецификациям. Реагенты, приготавливаемые в лаборатории, готовят по документированной технологии в соответствии с требованиями ВОЗ (если имеются), аттестуют и этикетируют с указанием следующих сведений: название, концентрация, даты приготовления и окончания срока годности, условия хранения, инициалы лица, ответственного за изготовление.

3.5.3. Культуры клеток Клеточные линии должны соответствовать спецификациям, указывающим число субкультивирований, температуру культивирования, рекомендуемые среды и схему рассева клеток при субкультивировании. Клетки не должны быть контаминированы. Культуры клеток в лаборатории готовят по документированной технологии и регистрируют следующие данные: название культуры (линии клеток), источник и дата получения клеток, номер пассажа, ростовая среда, поддерживающая среда, посевная концентрация клеток, хранение.

Расходные материалы и реагенты для выделения полиовируса из 100 проб по 5 мл Перчатки резиновые одноразовые среднего размера Глутамин Хэнкса раствор Минимальная среда (МС) с буфером ХЕПЕС Планшеты для микротитрования Клейкие пластины для запечатывания планшетов ФСБ Пенициллин и стрептомицин Феноловый красный Наконечники для микродозаторов Микродозаторы одноканальные переменного Микродозаторы многоканальные переменного Сыворотка крови телячья плодная Двууглекислый натрий Трипановый синий Трипсин сухой Пробирки для культур клеток 16 х 125 мм Крышки для пробирок диаметром 16 мм Пробирки 15 х 85 мм стерильные с крышками Пробирки центрифужные ёмкостью 15 мл (устойчивые к хлороформу) Версен Лопаточки деревянные 3.5.4. Вирусные штаммы Стандартные штаммы вирусов для оценки вирусологических методов получают из источника, указанного ВОЗ. Ответственность за работу с ними следует возложить на опытных сотрудников лаборатории. Эта работа требует особого внимания, чтобы гарантировать сохранение жизнеспособности вирусов, чистоты штамма и генетической стабильности, а также соблюдение температурного режима. Штаммы дикого полиовируса для целей контроля использовать нельзя.

3.6. Лабораторная безопасность Каждая лаборатория должна иметь Руководство по лабораторной безопасности ВОЗ (WHO, 2003 г.). Это руководство описывает основные требования биологической, химической, пожарной и электрической безопасности с целью защиты сотрудников лабораторий, общества и окружающей среды. Все сотрудники обязаны хорошо знать и выполнять эти требования. Новые сотрудники до начала работы в полиовирусной лаборатории должны быть информированы о риске этой работы и детально ознакомиться с указанным руководством. Ответственность за выполнение перечисленных в нём требований несёт руководитель лаборатории.

После завершения ликвидации полиомиелита лаборатории останутся единственным источником полиовируса. Поэтому в лабораториях необходимо обеспечить безопасность работы и хранения полиовируса и потенциально инфицированных им материалов. Наличие дикого полиовируса в лаборатории представляет особую категорию риска – он невелик для иммунизированных сотрудников, но является огромной потенциальной угрозой судьбе ликвидации полиомиелита, если дикий полиовирус вернётся в человеческое сообщество.

Для обеспечения безопасного обращения с диким полиовирусом и потенциально инфицированными им материалами в условиях близкой ликвидации полиомиелита полиовирусные лаборатории должны следовать рекомендациям «Глобального плана действий для обеспечения безопасного лабораторного хранения диких полиовирусов» (ВОЗ, Женева, 2000 г.) и вести работу с соблюдением требований уровня безопасности BSL-2/polio.

Этот уровень включает следующие элементы.

Выполняются требования качественной микробиологической техники (см. Рис. 3.4.).

Запрещена работа с пипеткой ртом.

Рассеивание инфекционных материалов не допускается.

Контакт инфекционных материалов с кожей и глазами не допускается.

Проглатывание инфекционных материалов не допускается.

Соблюдаются меры предосторожности при работе с кровью и другими жидкостями от больных.

Осуществляется необходимая дезинфекция и стерилизация.

Работы, в которых возможен прямой контакт с кровью или инфекционными материалами, проводятся в резиновых перчатках.

Руки моются в процессе работы (в промежутках между отдельными её этапами) и перед уходом из лаборатории.

Работа в лаборатории проводится в лабораторных халатах и лабораторной обуви с закрытыми носками.

В лабораторных помещениях и в каких-либо хранилищах, где могут находиться инфекционные материалы, запрещается хранение пищи и питья.

В лаборатории запрещается приём пищи и питья и курение.

Все перечисленные далее работы проводятся с полным соблюдением мер безопасности:

обработка проб, работа с пипетками, отделение сыворотки крови от сгустка, использование центрифуг, гомогенизаторов, встряхивателей, ультразвуковых и механических измельчителей ткани, холодильников, хранение инфекционных материалов, вскрытие ампул с инфекционным материалом, пересылка и транспортировка клинических проб и инфекционных материалов.

Помещения соответствуют стандартам базовой лаборатории BSL-2 (см. Рис. 3.5.).

Доступ в лабораторию ограничен. Лица, допускающиеся в лабораторию, полностью иммунизированы против полиомиелита. Потенциальные источники дикого полиовируса для снижения риска случайного инфицирования сведены к минимуму следующим образом:

- использование дикого полоиовируса прекращено во всех случаях, где ту же задачу инактивированных антигенов или неполиомиелитных энтеровирусов, например, в реакции нейтрализации вируса;

- во всех случаях, когда нет программной или научной необходимости хранения полиовирусов, все запасы таких вирусов и потенциально инфицированных ими материалов уничтожены;

- в лабораториях, не планирующих хранение полиовирусов, уничтожены все автоклавированием или сжиганием.

Для лабораторий, сохраняющих дикие полиовирусы, необходимо выполнение следующих дополнительных требований и рекомендаций:

- вводятся в действие требования, соответствующие характеру проводимой работы (BSLpolio или BSL-3/polio) или характеристике материалов, присылаемых в лабораторию;

- если в работе необходим дикий полиовирус, используют только те штаммы, которые могут быть быстро идентифицированы молекулярными методами;

- все открытые работы с материалами, инфицированными или потенциально инфицированными диким полиовирусом, проводят в БЗУ классов 1 или 2;

- хранят дикие полиовирусы в отдельных помещениях, куда ограничен доступ людей;

- обычные и низкотемпературные холодильники, где хранятся дикие полиовирусы, запираются (доступ к ключам ограничен) и чётко маркируются, как хранящие такие - инвентарные списки материалов, сохраняющихся в низкотемпературных холодильниках, должны быть полными и включать сведения о происхождении каждого материала, его количестве и расположении в холодильнике;

- документация по всем хранящимся материалам должна быть пополняемой и включать географические сведения о их источнике и даты сбора;

- все материалы переносят в холодильник и из холодильника в непротекающих прочных вторичных контейнерах;

- разрабатываются СОП и проводится регулярное обучение действиям в случае разбрызгивания материала, разрушения ёмкости с вирусом и аварий, в которых можно предполагать выброс инфекционного вируса.

3.7. Ревизорские проверки Целью проверок является проведение систематических независимых освидетельствований, чтобы определить, насколько работа по обеспечению качества и её результаты соответствуют принятой документации, и подтвердить, что объём работы и её эффективность достаточны для решения поставленных задач. Проверки могут быть внутренними и проводиться сотрудниками отдела обеспечения качества лабораторной работы, а при его отсутствии – сотрудниками лаборатории, не связанными с деятельностью проверяемых участков. Внешние проверки проводит ВОЗ при ежегодной аккредитации полиовирусных лабораторий.

Проверка может включать всю систему обеспечения качества работы, отдельные элементы системы (методы работы, персонал, оборудование, рабочие помещения), рабочие процессы, результаты работы, вспомогательные службы.

Ревизорские проверки не следует смешивать с работой по контролю качества.

Лаборатории должны иметь и проводить обычную программу внутренних ревизий.

Схема ревизии включает: 1) проверку документов; 2) составление плана ревизии;

3) ознакомление ревизора с объектом ревизии;4) осмотр сооружений и оборудования;

5) проведение ревизии - опросы, контрольные списки, осмотры; 6) завершающие встречи;

7) отчёт о ревизии.

Для безопасного проведения лабораторной работы, уборки и обслуживания предоставляется достаточное помещение.

Стены, потолки и полы легко убираются.

Освещение достаточно для любой работы.

Помещение-хранилище достаточно для хранения материалов текущего использования.

Раковина для мытья рук с водопроводной водой по возможности в каждой лабораторной комнате желательно вблизи двери.



Pages:   || 2 | 3 | 4 |
Похожие работы:

«МИНИСТЕРСТВО ОБРАЗОВАНИЯ И НАУКИ РФ Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования Тверской государственный университет Биологический факультет Кафедра ботаники УТВЕРЖДАЮ Декан факультета _ 2013 г. Рабочая программа дисциплины ПОЧВОВЕДЕНИЕ Для студентов I курса Направление подготовки 250100.62 ЛЕСНОЕ ДЕЛО Профиль подготовки – общий Квалификация (степень) Бакалавр Форма обучения Очная Обсуждено на заседании кафедры Составитель: _ 2013 г....»

«Муниципальное казенное образовательное учреждениеФедяшевская средняя общеобразовательная школа Ясногорского района Тульской области УТВЕРЖДЕНО ПРИНЯТО Приказом МКОУ Федяшевская СОШ на заседании педагогического Совета № 70 от 30 мая 2012г. Протокол № 4 от 28 мая 2012г. РАБОЧАЯ ПРОГРАММА по БИОЛОГИИ классы 7- кружка, курса) (наименование Уровень (ступень) образовательной программы: основное общее образование Срок реализации программы: 3 года Программа составлена на основе программы для...»

«Министерство сельского хозяйства РФ ФГОУ ВПО Ульяновская ГСХА Кафедра биологии, ветеринарной генетики, паразитологии и экологии РАБОЧАЯ ПРОГРАММА УЧЕБНОЙ ПРАКТИКИ по дисциплине: ОБЩАЯ БИОЛОГИЯ специальность 020209.65 - Микробиология квалификация - микробиолог Ульяновск 2008 Пояснительная записка Учебно-полевая практика – одно из важнейших звеньев в системе подготовки грамотного специалиста. Она является логическим завершением курсов зоологии беспозвоночных и зоологии позвоночных, в составе...»

«МИНИСТЕРСТВО ОБРАЗОВАНИЯ И НАУКИ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ ТОМСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ Утверждаю: Ректор ТГУ проф. Г.В. Майер _ _ 2011 г. № ОСНОВНАЯ ОБРАЗОВАТЕЛЬНАЯ ПРОГРАММА ВЫСШЕГО ПРОФЕССИОНАЛЬНОГО ОБРАЗОВАНИЯ по направлению подготовки 020400 Биология Магистерская программа Зоология беспозвоночных Квалификация (степень) выпускника Магистр Нормативный срок освоения программы – 2 года Форма обучения очная Томск СОДЕРЖАНИЕ 1. Общие положения 1.1. Основная образовательная программа (ООП)...»

«Лист согласования рабочей программы Рабочая программа составлена на основании: ФГОС ВПО по направлению подготовки бакалавров - 111300 САДОВОДСТВО, утвержденного заместителем Министра образования и науки Российской Федерации И.И.Калина 26 ноября 2007 г. Номер государственной регистрации 783 с/бак; примерной программы по дисциплине ДЕКОРАТИВНАЯ ДЕНДРОЛОГИЯ С ОСНОВАМИ ДРЕВОВОДСТВА, утвержднной Ученым Советом факультета Плодоовощеводства и виноградарства КубГАУ, протокол от № - рабочего учебного...»

«ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ВЫСШЕГО ПРОФЕССИОНАЛЬНОГО ОБРАЗОВАНИЯ Тверской государственный университет Биологический факультет Кафедра ботаники УТВЕРЖДАЮ Декан биологического факультета С.М. Дементьева _ 2013 г. РАБОЧАЯ ПРОГРАММА по дисциплине СТРУКТУРНО-ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ БИОЛОГИЧЕСКИХ ОБЪЕКТОВ для студентов 3 курса очной формы обучения специальность 250100.62 ЛЕСНОЕ ДЕЛО Квалификация - Бакалавр Обсуждено на заседании кафедры Составитель: Звание,...»

«МИНИСТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ ФГБОУ ВПО Кубанский государственный аграрный университет Факультет перерабатывающих технологий УТВЕРЖДАЮ Декан факультета перерабатывающих технологий доцент_ Решетняк А.И. _201 г. Рабочая программа дисциплины ОСНОВЫ ПРОЕКТИРОВАНИЯ ПРОДУКЦИИ Направление подготовки: 221700.62 Стандартизация и метрология Профиль подготовки: Квалификация (степень) выпускника Бакалавр Форма обучения: очная г. Краснодар 2011 г. 1. Цели освоения дисциплины Целями...»

«УДК 001.894:612 РЕАЛЬНОСТЬ ЭНЕРГОИНФОРМАЦИОННОЙ (АКУПУНКТУРНОЙ) СИСТЕМЫ. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ БАЗА ОТКРЫТИЯ (ИНФОРМАЦИЯ-25). В.Г. Макац, Д.В. Макац, Е.Ф. Макац, Д.В. Макац Украинский НИИ медицины транспорта МЗ Украины (сотрудничающий центр ВОЗ) Современным потребностям практической медицины сегодня соответствует методология вегетативной биодиагностики (ВБД). Она официально поддержана решениями Ученого совета МЗ Украины (протокол №1.08-01 от 11.01.1994 г.) и РПК МЗ Украины “Новая медицинская...»

«Белорусский государственный университет УТВЕРЖДАЮ Проректор по учебной работе А.Л. Толстик 2013 г. Регистрационный № УД-/р. История биологии Учебная программа учреждения высшего образования по учебной дисциплине для специальностей: 1-31 01 01 Биология (по направлениям) Факультет биологический (название факультета) Кафедра генетики (название кафедры) Курс (курсы) 4/ Семестр (семестры) 7 / 7- Лекции 20 / 4 Экзамен (количество часов) (семестр) Практические (семинарские) Зачет 7/ занятия (семестр)...»

«МИНИСТЕРСТВО ОБРАЗОВАНИЯ И НАУКИ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ ТОМСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ Утверждаю: Ректор ТГУ, проф. Г.В. Майер _ _ 2011 г. № Основная образовательная программа высшего профессионального образования по направлению подготовки 020400.68 Биология Магистерская программа Ихтиология и гидробиология Квалификация (степень) выпускника Магистр Нормативный срок освоения программы – 2 года Форма обучения очная Томск СОДЕРЖАНИЕ 1. Общие положения.. 1.1. Основная образовательная программа...»

«ПОЯСНИТЕЛЬНАЯ ЗАПИСКА Рабочая программа по биологии 8 класса составлена на основе Программы основного общего образования по биологии 6-9 классы авторы Н.И. Сонин, В.Б. Захаров, Е.Т.Захарова - М.: Дрофа, 2009. Цели и задачи изучаемого раздела: 1. Обеспечить усвоение учащимися основных положений биологической науки о строении, жизнедеятельности организма человека; об его индивидуальном и историческом развитии; о системе органического мира, структуре и функционировании человеческого общества. 2....»

«Министерство образования и науки Российской Федерации Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования Пермский государственный национальный исследовательский университет Утверждено на заседании Ученого совета университета от 26.01.2011 №5 Основная образовательная программа высшего профессионального образования Направление подготовки 06.04.01 Биология Магистерская программа Ихтиология и рыбоводство Квалификация (степень) магистр Учтены...»

«Пояснительная записка Рабочая программа составлена на основе Федерального Государственного стандарта, Примерной программы основного общего образования по биологии и Программы основного общего образования по биологии для 6 класса Живой организм автора Н.И. Сонина //Программы для общеобразовательных учреждений. Природоведение. 5 класс. Биология. 6-11 классы. - М.: Дрофа, 2009. -254c.ll, полностью отражающей содержание Примерной программы, с дополнениями, не превышающими требования к уровню...»

«МИНИСТЕРСТВО ОБРАЗОВАНИЯ И НАУКИ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ ТОМСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ Утверждаю: Ректор ТГУ проф. Г.В. Майер _ _ 2011 г. № Основная образовательная программа высшего профессионального образования по направлению подготовки 020400.68 Биология Магистерская программа Нейробиология Квалификация (степень) выпускника Магистр Нормативный срок освоения программы - 2 года Форма обучения очная Томск СОДЕРЖАНИЕ 1. Общие положения.. 1.1. Основная образовательная программа (ООП). 1.2....»

«ФГОУ ВПО АЛТАЙСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ БИОЛОГИЧЕСКИЙ ФАКУЛЬТЕТ Кафедра экологии ПРОГРАММЫ специальных дисциплин по направлению 020200 – Биология магистерская программа Экология Барнаул – 2005 ОГЛАВЛЕНИЕ 2 Экология растений.......................................... 3 Экология животных.......................................... 6 Экология человека..................................»

«Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования Ставропольский государственный медицинский университет Министерства здравоохранения Российской Федерации ГБОУ ВПО СтГМУ Минздрава России КАФЕДРА БИОЛОГИИ УТВЕРЖДАЮ Проректор по учебной работе, профессор А.Б. Ходжаян __ 2013 г. РАБОЧАЯ УЧЕБНАЯ ПРОГРАММА ДИСЦИПЛИНЫ НАУКИ О ЗЕМЛЕ для направления 020400.62 Биология Квалификация выпускника: бакалавр биологии Профиль: экология Форма обучения: очная Нормативный...»

«МИНИСТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ ФГОУ ВПО Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия Агрономический факультет Кафедра земледелия и мелиорации РАБОЧАЯ ПРОГРАММА по дисциплине Агробиологические основы использования сельскохозяйственной техники Ульяновск – 2009 2 3 Содержание 1. Цель и задачи дисциплины... 4 2. Содержание дисциплины... 5 3. Содержание дисциплины (заочное обучение).. 4. Лекции... 5. Лабораторно-практические занятия... 6. Самостоятельная работа...»

«Пояснительная записка Роль и цель биологии в системе школьного образования обусловлена ее значением в формировании общей культуры подрастающего поколения, воспитания творческой личности, осознание своей ответственности перед обществом за сохранение жизни на Земле. Программы по биологии построены на принципиально новой содержательно основе – биоцентризме и полицентризме в раскрытии свойств живой природы, ее закономерностей и многомерности разнообразия уровней организации жизни, особенностей...»

«Министерство образования и науки Российской Федерации Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования Пермский государственный национальный исследовательский университет Утверждено на заседании Ученого совета университета от 26.01.2011 №5 Основная образовательная программа высшего профессионального образования Направление подготовки 05.04.06 Экология и природопользование Магистерская программа Биоразнообразие и охрана природы Квалификация...»

«МИНИСТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ УЛЬЯНОВСКАЯ ГОСУДАРСТВЕННАЯ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННАЯ АКАДЕМИЯ ФАКУЛЬТЕТ ВЕТЕРИНАРНОЙ МЕДИЦИНЫ Кафедра микробиологии, вирусологии, эпизоотологии и ветеринарно-санитарной экспертизы УТВЕРЖДАЮ Проректор по учебной работе, доцент Декан факультета, профессор М.В. Постнова С.Н. Золотухин 15 сентября 2009 г. 15 сентября 2009 г. РАБОЧАЯ ПРОГРАММА ПО ДИСЦИПЛИНЕ ИММУНОХИМИЯ И МЕДИЦИНСКАЯ МИКРОБИОЛОГИЯ ДЛЯ СТУДЕНТОВ ФАКУЛЬТЕТА ВЕТЕРИНАРНОЙ МЕДИЦИНЫ ПО...»






 
© 2013 www.diss.seluk.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Авторефераты, Диссертации, Монографии, Методички, учебные программы»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.