WWW.DISS.SELUK.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА
(Авторефераты, диссертации, методички, учебные программы, монографии)

 

ФЕДЕРАЛЬНОЕ АГЕНТСТВО ПО ОБРАЗОВАНИЮ

РФ

Государственное образовательное учреждение высшего

профессионального образования

ВОСТОЧНО-СИБИРСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ

ТЕХНОЛОГИЧЕСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ

(ГОУ ВПО ВСГТУ)

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ К ВЫПОЛНЕНИЮ

ЛАБОРАТОРНОГО ПРАКТИКУМА

ПО ДИСЦИПЛИНЕ «ОБЩАЯ БИОТЕХНОЛОГИЯ»

ДЛЯ СТУДЕНТОВ СПЕЦИАЛЬНОСТИ 240901 (Часть 1) Составители:

Данилова Т.Е.

Тарнуева Н.М.

Улан-Удэ, 0 Рецензент: кандидат технических наук, доцент кафедры Ключевые слова: фермент, поверхностное и глубинное «Биотехнология» Н.С. Балдаев. культивирование, продуцент, микроорганизм, посевной материал, биосинтез, первичный метаболит.

Методические указания предназначены пояснить, закрепить и развить теоретический материал по теме «Микробиологический синтез ферментов» через выполнение лабораторных работ. Данный практикум отрабатывается студентами четвертого курса специальности «Биотехнология» и состоит из 3-х частей:

1 – краткая теоретическая часть технологии, касающаяся характеристики ферментных препаратов;

2 – описание хода проведения лабораторных работ;

3 – приложения, включающие в себе справочные материалы по ферментам, химическому составу сырья для питательных сред и процессам культивирования.

Методические указания построены по управляющему принципу.

Для каждого лабораторного занятия установлен план, сводные таблицы контролируемых показателей для формирования отчета и выводов, приведены примеры расчетов, зачетные вопросы для контроля усвоения темы, указана литература для самоподготовки по теме «Ферменты».

При выполнении лабораторного практикума с помощью данных методических указаний студенты получают возможность приобрести практические навыки культивирования микроорганизмов-продуцентов ферментов – поверхностным и глубинным способами, что, несомненно, определяет качество профессиональной подготовки студентов специальности «Биотехнология».

Подписано в печать 18.10.06. Формат 60х84 1/ Усл.п.л. 2,79. Тираж 65 экз. Заказ № Издательство ВСГТУ, г.Улан-Удэ, ул.Ключевская 40в © ВСГТУ, 2006 г.

2 Однако применение ферментов в промышленных

ФЕРМЕНТЫ

Любая клетка – это целостная система, составные части масштабах тормозится из-за их неустойчивости при которой структурно и функционально взаимосвязаны. Эта хранении, температурных воздействиях, однократности зависимость выражается, прежде всего, в генетически использования.

обусловленном синтезе белковых молекул – Успехи современной белковой инженерии позволяют преимущественно ферментов. рассчитывать на то, что в ближайшем будущем Мельчайшая клетка, например диаметром 0,1 мкм стандартным подходом станет конструирование ферментов (Mollicutes), для самостоятельного функционирования с направленно модифицированными свойствами. С этой должна иметь в своем арсенале более 100 ферментов. целью проводится скрининг коллекций различных Ферменты – это специфические белки выполняющие микроорганизмов, добытых из необычных природных и роль биологических катализаторов. промышленных источников на предмет их способности С технологической точки зрения применение ферментов продуцировать перспективные для практического является перспективным в связи с тем, что они имеют ряд использования ферменты. Гены данных ферментов преимуществ перед химическими катализаторами: клонируются и экспрессируются в клетках наиболее - избирательность; изученных микроорганизмов.

- стереоспецифичность; Технология рекомбинантных ферментов открывает - действие в «мягких условиях» (t=20-70оС; рН=4-9; широкие возможности для промышленного получения, а нормальное давление); также применения ферментов с заданной специфичностью - эффективность (высокая скорость протекания реакций и конкретными характеристиками.

при незначительных количествах катализатора); В настоящее время общее число обнаруженных видов - нетоксичность; ферментов уже приближается к 10000. Из них только около - отсутствие побочных реакций. 30 внедрено в производство. Следовательно, освоение Каталитические, физико-химические и экологические биотехнологии подавляющего большинства ферментов – свойства ферментов предопределили индустрию дело будущего.

ферментов, зарождение которой можно отнести к началу Пока что, основная масса выпускаемых ХХ века. Ферменты уже в течение многих лет промышленностью ферментов относится к классу гидролаз применяются в различных областях практической и наибольшее число реализованных масштабных деятельности человека: в сельском хозяйстве, медицине, производств имеет место в микробной биотехнологии.

фармации, пищевой, легкой промышленности, тонких Ферментные препараты (ФП) микробного синтеза химических технологиях, генной инженерии и т.п. В отличаются от чистых ферментов тем, что кроме приложении приведены сведения о применении энзимов в основного, содержат целый комплекс других ферментов. В ряде промышленных отраслей и выборка из полного связи с этим общий эффект действия ферментных перечня ферментов, в которой представлены шифры и препаратов на субстрат обусловлен комбинированным рекомендованные названия упомянутых ферментов {1,2}. воздействием всех входящих в состав препарата ферментов. Например, для повышения продуктивности Например: амилоризин – ферментный препарат содержит в животных их рационы обеспечиваются комплексом своем составе в основном амилазы расщепляющие ферментных препаратов определенного действия. гликозидные связи полисахарида – крахмала (амилазы и Целлюлазный комплекс целловиридина состоит из амилопектина), продуцируется грибами рода Aspergillus ферментов трех типов: эндо- 1,4--D-глюканазы; экзо-1,4- вида oryzae (источник получения). Далее обычно -глюканазы; экзо-1,4--D-глюкозидазы. Схема указывается способ культивирования, т.е. основная стадия ферментного гидролиза целлюлозы представлена на рис.1 технологического процесса, определяющая во многом катализируемая химическая реакция является тем Вообще культивирование – это развитие популяции признаком, по которому можно отличить один фермент от микроорганизмов в специальном аппарате (ферментере).

другого. Этот принцип положен в основу классификации и Если культивирование осуществляется с использованием номенклатуры ферментов. Поскольку ферментный жидких питательных сред – это так называемое глубинное препарат содержит комплекс ферментов пользуются или суспензионное культивирование (Г). Если же упрощенным названием, которое отражает основное используются твердые питательные среды – это ферментативное действие, источник получения и степень поверхностное культивирование (П).

- экзоглюканаза (-1-4-глюканне практикуется, т.к. это уже высокоочищенные, можно - экзогюкозидаза (-1-4-глюканНа стадии культивирования идет накопление как самой Рис.1 Схема ферментного гидролиза целлюлозы.

сверхсинтеза добиваются методами индукции биосинтеза, ферментных препаратов микробного происхождения этапы культивирования микроорганизмов. Однако, Стерилизаци очевидное преимущество заключается в неограниченных яи ФП определенной степени очистки отходов, сточных вод, приведенных процессов данной блок-схемы (рис.2). Выбор Кормопроизв ТО Фракционирование рациональных методов выделения диктуется способом затратами, требованиями предъявляемыми к ФП.

по переработке отходов (ПО).

Подготовительные, вспомогательные и завершающие технологические операции (выделение ферментов) окаймляют основную часть технологии – биосинтез ферментов – получение посевного материала (ПС), ТО.6 Консервирование ТО.8 Консервирование Рис.2. Процессуально-технологическая схема Для выделения, концентрирования, очистки производства микробных ферментных препаратов. ферментных препаратов используют различные (Обозначения: ВО-вспомогательные операции; ТО- гидромеханические, тепловые и массообменные процессы.

технологические операции; ПО-операции по переработке отходов; П- процесс; ФП- ферментный препарат; ПМ – посевной материал; П – поверхностный способ культивирования; Г – глубинный способ культивирования).

производственной культуры, продуцента. Однако, отмечая первостепенную важность процесса культивирования, нужно ясно представлять, что все остальные элементы технологической системы, например, сохранение биологической активности в процессе выделения и очистки фермента, являются также ее неотъемлемой частью.

Представленная технологическая схема производства может быть укорочена или продлена в зависимости от требуемой степени очистки ферментного препарата.

промывки кристаллической фазы (льда) и ее плавления. В гранулированием высушиваемого материала. При этом результате кристаллизации образуется кристаллическая дробление может предшествовать процессу сушки или же фаза и маточник (концентрированный раствор ферментов). происходить в процессе ее (вихревые сушилки).[15,16,17].

Для данной стадии используют кристаллизаторы При изготовлении ферментных препаратов пищевого, различного типа – емкостные, шнековые, скребковые, медицинского назначения широко практикуется контактные и др. [ 8,9,10]. Для сепарации используют сублимационная сушка. При сублимационной сушке различные фильтры, фильтрующие центрифуги и прессы. [ можно достичь конечной влажности продукта порядка 11,12,10]. Промывку проводят непосредственно на 0,5% и менее. Сублимационная сушка осуществляется в фильтрах и центрифугах или используют специальные два этапа: первоначально исходный материал охлаждают промывные колонны [ 9,10]. Расплавленный лед до полного замораживания жидкости, далее под вакуумом используют на разные технологические нужды (например, производят ее испарение из льда (минуя жидкую фазу) Процесс сушки, как правило, применяется на конечных Процесс концентрирования водных растворов стадиях производства. Конечные продукты имеют ферментов можно осуществлять с помощью влажность 3-10% [6,7]. Для обеспечения стерильности ультрафильтрации. При этом используются мембраны с высушиваемых продуктов сушильный агент (обычно размером от 4 до 100 нм, которые, пропуская воду и воздух) перед подачей в сушильную камеру подвергают низкомолекулярные вещества, задерживают ферменты. Так очистке (например, стерилизующей фильтрацией). как растворы ферментов обладают низким осмотическим Сушильные установки выпускают в герметичном виде. давлением, то ультрафильтрацию обычно проводят при Конструкция сушилок должны предусматривать давлении Р=0,3-0,8 МПа [19,20,21] В технологии ферментных препаратов сушку проводят осуществляется многоступенчато. На каждой ступени при температуре 40-50оС. Для повышения интенсивности разделения должна получаться фракция более богатая испарения влаги процесс сушки проводят под вакуумом. выделяемым ферментом, чем на предыдущей ступени и Часто используют распылительную сушку. Конструкции содержащая меньшее число побочных компонентов. Такие сушилок подробно описаны в литературе [ 1,6,7,13,14]. технологические операции называют фракционированием.

Время пребывания материала в такой сушилке составляет Используют и комбинируют различные методы 20-15 сек. При этом материал, несмотря на контакт с фракционирования и очистки – осаждение солями, достаточно нагретым сушильным агентом (100-150оС) органическими растворителями, фильтрация на нагревается до температуры 40-60оС. Порядка 70-80% молекулярных ситах, ионообменная хроматография, высушенных частиц оседает на днище аппарата. Более электрофорез.

мелкие частицы выносятся из аппарата сушильным Наиболее часто практикуется процесс высаливания, агентом и улавливается с помощью циклонов и фильтров. механизм которого связан со способностью Иногда процесс сушки совмещают с дроблением или высаливающего агента разрушать гидратную оболочку растворенных белков с последующей их агрегацией и сорбентом, в результате которой формируются зоны осаждением. Для ферментов в качестве высаливающих белковых фракций.[23,24, 5 ].

агентов используют соли щелочных металлов или сульфат После стадии концентрирования вышеуказанными аммония. Метод высаливания солями удобен для хроматографическими методами получается сырец, препаративного выделения отдельных фракций белка. При содержащий 50-80% целевого фермента. На этом выделение белка наблюдается при весьма высоких заключительных стадиях выделения и очистки ферментов концентрациях солей и как следствие возникает также применяют хроматографические методы:

необходимость в операциях по переработке стоков и молекулярно-ситовая, аффинная, высокоэффективная Растворимость ферментов также часто снижают с процессах используются иммобилизованные на матрице помощью органических растворителей. Данный процесс, специфические лиганды, к которым имеют сродство те называемый кристаллизацией, наиболее полно реализуется или иные ферменты [25].

при охлаждении раствора до -10о С. Для его проведения На завершающих этапах технологических схем используют различные кристаллизаторы - емкостные, выделения и очистки ферментов практикуется и шнековые, барабанные и другие, конструкции которых гельфильтрация. Поры внутри гранул геля имеют размеры описаны в [8,9,22]. Такие аппараты имеют охлаждающие недоступные для крупных молекул, тогда как более рубашки или снабжены различными теплообменными мелкие молекулы легко в них проникают [5,26].

элементами. При этом требуются внушительные объемы органического растворителя и операции по его На более поздних стадиях разделения смеси ферментов ПОВЕРХНОСТНЫЙ СПОСОБ КУЛЬТИВИРОдля концентрирования раствора применяют различные ВАНИЯ МИКРООРГАНИЗМОВ ПРОДУЦЕНТОВ модификации хроматографических методов. При ФЕРМЕНТОВ НА ТВЕРДЫХ ПИТАТЕЛЬНЫХ адсорбционной хроматографии используется различие в СРЕДАХ относительном сродстве белков к твердому адсорбенту или неподвижной фазе, распределительной – относительная На первых этапах развития ферментная растворимость белков между подвижной и неподвижной промышленность как специализированное производство по фазой, в качестве последней, наоборот, используется выращиванию микробных продуцентов шла по пути жидкость удерживаемая на инертном носителе. В культивирования микроорганизмов поверхностным ионообменниках белки связываются с неподвижной фазой способом на твердых питательных средах. Поэтому в с помощью электростатических сил. Фронтальная Китае, Японии, Англии, Франции и т.д. в первую очередь ионообменная хроматография представляет собой создавались предприятия на основе поверхностного фильтрацию раствора ферментов через колонку с способа культивирования плесневых грибов и бактерий. В поверхностный способ выращивания продуцентов а) спороносящая посевная культура на твердой довольно широко распространен и хорошо изучен. Такое питательной среде;

повсеместное распространение его связано с простотой б) споровый материал;

технологии, отсутствием сложных механизмов, в) мицелиальная или бактериальная масса возможностью использования малоквалифицированного микроорганизма, выращенного глубинным методом.

ручного труда. С развитием науки о микроорганизмах, 2.Приготовление питательной среды, ее стерилизация, техники, механизации и автоматизации, а главное с увлажнение, засев посевным материалом.

расширением производства метод поверхностного 3.Раскладка засеянной среды на стерильные культивирования в последнее время стал заметно перфорированные кюветы, транспортировка их в вытесняться более современным способом культивирова- растильные камеры, установка на этажерки или стеллажи.

ния микроорганизмов – глубинным. 4.Выращивание микроорганизма при строго определенных Однако, несмотря на очевидные преимущества условиях влажности и температуре воздуха.

глубинного способа культивирования, до сих пор удельный 5.Снятие готовой культуры продуцента с кювет, вес предприятий с поверхностным способом выращивания измельчение и высушивание до воздушно-сухого продуцентов ферментов еще очень велик. состояния (до влажности культуры 10-12%).

Поверхностному способу выращивания микроорганиз- Цель работы – получение амилолитических и мов посвящается данная работа.[27] протеолитических ферментов поверхностным способом Выращивание обычно проводится на увлажненных культивирования плесневого гриба Aspergillus oryzae на пшеничных отрубях или на отрубях с небольшими твердой питательной среде. Работа рассчитана на добавками других компонентов. лабораторных занятия или 18 академических часов. После Питательная среда при поверхностном способе каждого занятия формируется журнал наблюдений и культивирования размещается невысоким слоем в общий отчет по работе. На основании данных 3-х сводных перфорированных кюветах. Кюветы со средой таблиц делают заключение о способности плесневого устанавливаются на этажерках или стеллажах в гриба Aspergillus oryzae накапливать ферменты на среде специальных растильных камерах с кондиционированным заданного состава, проводят оценку выхода культуры, воздухом. Технологический процесс производства потерь на жизнедеятельность микроорганизма и факторов, технических ферментных препаратов складывается из влияющих на процесс культивирования продуцента 1.Получение производственного посевного материала.

Процесс получения посевного материала начинается на Первое занятие производстве с пробирки чистой культуры продуцента.

Посевной материал может быть получен в виде трех Знакомство с поверхностным способом F1 – активного продуцента разнообразного комплекса культуры продуцента с косого сусла-агара 5 мл стерильной 1. Приготовление посевного материла.

2. Подготовка посуды к стерилизации.

4. Определение насыпного веса 5. Подготовка среды к стерилизации.

6. Определение влажности среды.

Для регистрации результатов работы формируется Вся посуда перед стерилизацией должна быть нижеприведенный журнал наблюдения. тщательно вымыта и высушена.

1.Приготовление посевного материала вырезанным по размерам крышки листом непроклееной За 3-4 дня до начала занятия делается пересев бумаги; 3) сосуд емкостью 1,5-2 литра для увлажнения продуцента с музейной пробирки на свежескошенный среды и ее засева; 4) мерный цилиндр на 250 мл для сусло-агар. Посевы на косом сусловом агаре помещаются дозировки стерильной воды; 5) стеклянную палочку для в термостат с температурой 30оС на 3-4 суток. Рост гриба перемешивания посевной культуры; 6) колбу (емкостью заканчивается обильным спороношением. На первом 500 мл с 250 мл водопроводной воды.

занятии производится пересев продуцента с пробирок на Стерилизацию следует проводить в автоклаве при 1 ати твердую питательную среду (пшеничные отруби). Для в течение 30 минут.

осуществления этого пересева в конические колбы Стерильная посуда после стерилизации должна быть емкостью 250 мл раскладывают по 15 г пшеничных подсушена в сушильном шкафу при 105оС, т.к. бумага при отрубей с влажностью 45%. Колбы со средой стерилизации слегка увлажняется.

стерилизуются в автоклаве при давлении 1 ати в течение часа. Охлажденные до температуры 40оС отруби в стерильных условиях засевают суспензией спор плесневого гриба. Суспензию спор получают смывом спороносящей 3. Приготовление заданного варианта среды Среда заданного состава готовится в количестве 200 г материалом, г; М2 – масса пустого сосуда, г; v – объем по воздушно-сухому весу.

Предлагается следующие варианты сред:

2 вариант - 80% пшеничных отрубей + 20% солодовых Из приготовленной смеси после тщательного 3 вариант - 80% пшеничных отрубей + 20% древесных заполнения кюветы. Среду помещают в сухую марлевую 4 вариант - 80% пшеничных отрубей + 20% лузги конца салфетки резинкой. Салфетка вместе с резинкой 5 вариант - 80% пшеничных отрубей + 20% кукурузной 0,1 г (а).

6 вариант - 80% пшеничных отрубей + 20% молотой Салфетки со средами помещают в бикс и стерилизуют При приготовлении среды 4-го варианта необходимо во время стерилизации открыт. При стерилизации в лузгу подсолнечника измельчить на мельнице в течение результате конденсации пара при соприкосновении с Состав компонентов питательной среды приведен в стерилизации салфетку с питательной средой вновь Материалы и оборудование: Среда заданного состава, n = (В – а – 125,0) = (150,0 – 15,0 – 125,0) = 10 г.

воронка для определения насыпной плотности, мерный Здесь допускается определенная неточность, т.к. марля сосуд, металлическая или деревянная линейка. также увлажняется при стерилизации, но в данном расчете После взвешивания компонентов среды их следует этим увлажнением марли можно пренебречь.

тщательно перемешать и определить насыпной вес, который рассчитывается по следующей формуле: 6. Определение влажности сыпучей среды до постоянной массы и рассчитывается по следующей Расчет добавляемой воды проводится следующим где mб – масса пустой бюксы; m1 – масса бюксы с навеской до высушивания; m2 – масса бюксы с навеской 2. Увлажнение и засев стерильной питательной среды.

3. Определение содержания крахмала.

Для регистрации результатов работы формируется нижеприведенный журнал наблюдения.

1. Расчет воды, необходимой для увлажнения Для хорошего развития плесневого гриба и интенсивного образования ферментов необходимо, чтобы среда имела влажность 60%.

4) Гср = 150,0 – 15,0 = 135,0 г ;

6) Д = 281,25 – 135.0 =146,25 г.

Таким образом, в результате расчета установлено, что для увлажнения среды до W=60% в данном варианте требуется 146,25 мл стерильной воды.

2. Увлажнение стерильной питательной среды,ее засев и раскладка в кюветы Эта операция выполняется вдвоем с соблюдением правил асептики при горящем факеле или горелке.

Стол, на котором должен производиться засев, полностью освобождается от посторонних предметов, тщательно протирается этиловым спиртом. На руки работающих надеты перчатки, которые промываются спиртом.

На чистом столе помещаются вся необходимая стерильная посуда, колба с посевной культурой гриба, колба со стерильной водой и стерильная питательная среда в салфетке.

Работа осуществляется в следующем порядке:

Если учесть, что среда имеет влажность 60%, то на превышает 2-3 объемов воздуха на объем камеры в час, Вср = 112,50 г следовательно, в результате механические потери (Пмех) составляет Пмех = Вср – Мс.в. = 112,50 – 108, = 4,50 г.

Засеянная плесневым грибом твердая питательная среда, помещенная в строго кондиционированные условия растильной камеры, начинает прорастать мицелием гриба по всей толще среды к 24-30 час. роста. Для плесневого гриба Aspergillus oryzae 8F1 максимум в накоплении амилолитических и протеолитических ферментов наступает на 23-25 час. культивирования. К этому времени спорообразование культуры еще не наступает. Такая культура, имеющая влажность приблизительно 45-50%, называется “сырой готовой культурой” плесневого гриба.

В процессе культивирования поверхностным способом различают три стадии роста плесневого гриба:

1. Стадия первая, продолжающаяся от 8 до 12 час. с момента засева – это стадия наклевывания спор и выхода ростовой трубочки. Обычно эта стадия не требует сильной аэрации, но очень чувствительна к температуре. Обмен воздуха в камере, где происходит выращивание, не относительная влажность его 100%. От сильной аэрации Холодная дистиллированная.вода культура слегка подсыхает.

3. Стадия третья, продолжающаяся с 18-21 час. до Фосфорно-вольфрамовая кислота, момента начала спорообразования. Этот период принято 4% раствор связывать с моментом наиболее интенсивного образования Выдержка 20 мин завершается и достигает максимума как правило в начале Дистиллированная вода До от 30 до 15 ккал/кг культуры за 1 час. Эту стадию принято Отсчет показаний сахариметра (3) называть стадией «ферментации». Аэрация культуры не Примечание: (0) – 26,6 мл =1,19 г/мл или 40 мл =1, превышает 20-25 объемов на 1 объем камеры за 1 час. г/мл довести до 1 л дист. водой.

Выращенная поверхностным способом культура гриба (1) – В течение первых трех минут, не вынимая колбы из Aspergillus oryzae 8F1 является исходным материалом для бани, размешивают ее содержимое плавными круговыми 3. Определение содержания крахмала (2) – Первые порции фильтрата возвращают в воронку.

Сущность метода заключается в способности крахмала, Фильтратом наполняют поляризационную трубку и сразу растворенного в разбавленной кислоте, давать оптически же делают первый отсчет.

активные растворы, изменяющие угол вращения плоскости (3) - Отсчет показаний сахариметра должен быть сделан поляризованного луча света.[29] быстро, чтобы избежать неправильных результатов Материалы и оборудование: Среда заданного состава 5 определения. По трем отсчетом вычисляют среднее г., технические весы, мерная колба на 100 мл, водяная арифметическое. Расхождение между крайними баня, сахариметр, HCl 1,124%, фосфорно-вольфрамовая значениями результатов отсчета не должна превышать 0,1о кислота 4%, этиловый эфир, дистиллированная вода. шкалы.

Ход работы Взвешивают 5 г питательной среды на технических Содержание крахмала (Х,%) в каждой навеске среды в весах до сотых долей грамма. Навеску пересыпают в сухую пересчете на абсолютное сухое вещество вычисляют по Выдержка на кипящей водяной бане, 15 мин (1) Переводные коэффициенты рассчитаны на длину трубки Кювета с культурой взвешивается – это будет величина сахариметра l тр= 200 мм, если lтр= 100 мм, то полученный К1. Вычитаем из нее вес пустой кюветы (Р), и получаем вес арифметическое результатов 2-х параллельных определений. Расхождение между результатами 2.Определение влажности культуры длине трубки 200 мм и 1,1% - при длине трубки 100 мм. Сырую культуру плесневого гриба вынимают из кюветы 1.Определение веса сырой готовой культуры. 1. Содержание сухого вещества в готовой культуре (Вк) 2.Определение влажности культуры и расчет ее выхода.

3.Приготовление ферментативных вытяжек из 4. Определение амилолитической активности. 2.Содержание сухого вещества в исходной среде известно 5. Определение протеолитической активности. из первого занятия, и оно равно (Мс.в.).

Для регистрации результатов работы формируется составляет (Ус.в.):

1.Определение веса сырой готовой культуры Из первого занятия известен вес пустой кюветы и листа непроклееной бумаги (Р).

Известен вес влажной среды в объеме кюветы (Мвл) и вес сухого вещества среды в кювете (Мс.в.).

3.Ус.в. = 108,0 – 81,0 = 27,0 г.

Таким образом, выход культуры от веса исходной среды йодистом калии.

жизнедеятельность микроорганизма определились Берут 6 пронумерованных пробирок для пробы и Материалы и оборудование: Сырая культура плесневого фосфатный буфер рН=7,3; толуол, углекислый кальций.

Готовится две вытяжки – одна для определения амилолитических ферментов (АФ), вторая – для плесневого гриба Ацетатный буфер рН=4,7 20 мл жидкости соответствует 1/8.

Следовательно, 1 мл неразведенной культуральной ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА жидкости расщепляет за 15 мин 16 мл 0,1%-го раствора ГЛУБИННЫЙ СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ФЕРМЕНТОВ крахмала.[31] 5. Определение протеолитической активности Принцип метода: В результате расщепления белков под ферментации. В частности, глубинная ферментация действием протеолитических ферментов, образуются предоставляет большие возможности для управления и аминокислоты. Учет аминокислот осуществляется путем автоматизации, высокую асептику и более широкие их связывания в окрашенные комплексы. возможности для масштабирования.

Материалы и оборудование: Штатив, пробирки, Дрожжеподобные микроорганизмы и спороносные термостат t=37оС, фосфатный буфер рН=7,3; экстракт бактерии, реже – актиномицеты обладают способностью фермента, желатин 0,1%, медный раствор. накапливать в среде амилолитические ферменты (- и Ход работы амилазы, глюкоамилазы комплекс ферментов, называемый Берут 6 пронумерованных пробирок пробы и 6 в литературе декстриназой ). Наиболее часто используют Перемешивание, разведение,,1/8, 1/16, 1/32, 1/ Сравнивают контрольные пробирки с пробирками, содержащими экстракт фермента. Для расчета принимают во внимание разведение, в котором после добавления медного раствора появился отличительный цвет. Единицы протеолитической активности рассчитывают аналогично амилолитической активности.

3. Посев на ферментационную среду.

4. Отбор проб.

5. Подготовка бумажных фильтров.

1.Приготовление сред и стерилизация Среда (А) для выращивания посевного материала культивирования.

содержит : 2% кукурузного экстракта (задается по Стерильными пипетками в асептических условиях рефрактометру) – 20мл; водопроводной воды- 80 мл; рН – отбирают по 25 мл пробы в стерильные пробирки и ставят естественный. Среду наливают в колбу на 750 мл и в холодильник. Через 72 часа культивирования колбы Среда (Б) имеет следующий состав (г/л): кукурузный Отобранные пробы КЖ используют для определения крахмал – 10; кукурузный экстракт – 30. Олеиновую морфологического состояния культуры, контроля рН среды кислоту вносят в каждую колбу в количестве 0,2%; рН – и динамики накопления биомассы, ферментов в процессе 4,0 (доводят рН концентрированной HCl). Среду готовят на глубинного культивирования водопроводной воде в количестве 100 мл в колбе на 750 мл Характеристика компонентов питательных сред Бумажные фильтры высушивают до постоянной массы используемых в работе приведена в приложении 3.

2. Приготовление посевного материала культуру с остатками твердой питательной среды размером 10х10 мм. Посевным материалом служит 24-часовая План работы культура гриба, выращенная при t=30о на круговой 1.Оценка морфологического состояния культуры в Количество вносимого в среду (Б) посевного материала 4.Определение ферментативной активности КЖ.

Условия культивирования. Продуцент культивируют на Готовят препараты грибной культуры (раздавленная качалке 200-220 об/мин в течение 72 ч при t=28-30о. капля). Микроскопируют препараты и делают зарисовки культуры, биомассы, рН и ферментативной активности. рН среды Биомассу гриба определяют по массе сухого мицелия. изменений.

Для этого из глубинной культуры гриба в жидкой среде Ферментативная после тщательного перемешивания пипеткой отбирают 10 активность:

мл пробы и отфильтровывают через заранее высушенный и - амилолитическая взвешенный бумажный фильтр. Мицелий на фильтре -протеолитическая промывают дистиллированной водой и высушивают до постоянной массы при t=80о в течение одних-двух суток. На основании сводных данных таблицы делают По разности массы фильтра с мицелием и без него заключение о способности штамма End. fibuliger определяют массу сухого мицелия в 10 мл жидкой накапливать в среде ферменты, влиянии глубинного рН среды измеряют потенциометрически.

4. Определение ферментативной активности Ферментативную активность определяют по 2. Дайте характеристику получаемых ферментов в вышеприведенной методике в лабораторной работе 1. лабораторной работе 1, 2.

Полученные результаты представляют в таблице. Имея 4. Какие факторы влияют на процесс культивирования в распоряжении серию многократных измерений величины продуцента при: а) поверхностном способе;

одного и того же параметра при аналогичных условиях б) глубинном способе.

ведения процесса, оценивают полученные результаты. 5. Как зарегистрировать синтез:

7. На базе каких предпосылок делают первоначальную 15. Какую стратегию интенсификации биосинтеза ориентировку в выборе состава питательной среды амилолитических (протеолитических) ферментов вы 8. Дайте характеристику используемого продуцента в а) поверхностном способе, 9. Какие критерии при оценке продуцента и его пригодности для использования в технологии ФП, на ваш взгляд, являются наиболее важными.

10. Почему при пересевах продуцента использовали споровый материал.

11. Вам нужно заменить компонент питательной среды пшеничные отруби, на имеющееся в наличии сырье, не меняя при этом технологию ФП. Какое из ниже перечисленных видов сырья вы выберите для биосинтеза культурой Asp. оryzae амилолитических культивирования:

1) гидролизаты крахмала;

2) свекловичная меласса;

3) сгущенный сок сорго;

5) древесные опилки;

6) гидролизаты торфа.

Ответ аргументируйте.

12. Может ли в процессе глубинного культивирования иметь место явление самостерилизации.

13. На какой фазе роста продуцента осуществляется интенсивный синтез амилолитических и протеолитических ферментов.

14. Какие прогрессивные технологии в производстве ФП вы знаете?

Список рекомендуемой литературы 1. Егорова Т.А., Клунова С.М., Живухина Е.А.Основы 17. Мочихин Ю.А., Зурабшвили Г.Г. Таблетирование биотехнологии. М., 2003. 208 с. пищевых материалов. М.: Пищепром,1978. 136 с.

2. Номенклатура ферментов./Под ред.А.Е. Браунштейна.- 18. Шумский К.П., Мялкин А.М., Максимовская И.С.

3. Чиркина Т.Ф., Цыренов В.Ж. Биохимия сырья животного М.: Машиностроение, 1966. 224 с.

происхождения: Учебное пособие/ ВСГТУ. Улан-Удэ, 19. Дытнерский Ю.И. Процессы и аппараты химической 4. Инженерные основы биотехнологии. Учебное пособие // 20. Дытнерский Ю.И. Обратный осмос и Под ред. Д.Г.Победимского. М.: МИТХТ, 1998. 387 с. ультрафильтрация., М.: Химия, 1978. 352 с.

5. Грачева И.М. Технология ферментных препаратов. М.: 21. Дытнерский Ю.И. Мембранные методы разделения 6. Бротников М.М., Босенко А.М. Машины и аппараты 22. Матусевич Л.Н. Кристаллизация из растворов в микробиологических производств. Минск.: Высшая химической промышленности. М.: Химия, 1968. 302 с.

7. Соколов В.Н., Яблокова М.А. Аппаратура кислот. М.: Наука, 1985.

микробиологической промышленности. Л.: 24. Диксон М., Уэбб Э. Ферменты. Т.1-3. М.: Мир, 1982.

8. Гельперин Н.И., Носов Г.А. Основы техники Д.Г.Кнорре. Новосибирск: Наука, 1983.

кристаллизации расплавов. М.: Химия, 1975. 352 с. 26. Комов В.П., Шведова В.Н. Биохимия. М.: Дрофа, 2004.

9. Гельперин Н.И., Носов Г.А. Основы техники С.639.

фракционной кристаллизации. М.:Химия, 1982. 304 с. 27. Методические рекомендации к проведению 10. Пап Л. Концентрирование вымораживанием. М.: лабораторных работ по технологии белковых препаратов, Легкая и пищевая промышленность.,1982. 97 с. аминокислот и липидов. /Под ред. И.М.Грачевой. М.:

11. Жужиков В.А. Теория и практика разделения МТИПП, 1984. 69 с.

12. Малиновская Т.А. Разделение суспензий в химической технологии для студентов специальности промышленности органического синтеза. М.,1971. 318 с. 070100 «Биотехнология». / ВСГТУ. Улан-Удэ, 2001.53 с.

13. Муштаев В.М., Ульянов В.М. Сушка дисперсных 29. Ловачева Г.Н.,Мглинец А.И., Успенская Н.Р.

материалов. М.: Химия, 1988. 352 с. Стандартизация и контроль качества продукции. М.:

14. Лыков М.В., Леончик Б.И. Распылительные сушилки. Экономика, 1990. 238 с.

М.: Машиностроение, 1966. 321 с.

15. Классен Л.В., Гришаев И.Г., Шалин И.П.

Гранулирование. М.: Химия, 1991. 240 с.

30. Елисеева С.И. Контроль качества сырья, полуфабрикатов и готовой продукции на хлебозаводах. М.:

Агропромиздат, 1987. 192 с.

31. Чиркин А.А. Практикум по биохимии. Минск: ООО «Новое знание», 2002. 516 с.

32. Руководство к практическим занятиям по микробиологии. /Под ред. Н.С.Егорова. М.: Изд-во Моск.

микробиологии. /Под ред. Н.С. Егорова. М.: Изд-во Моск. 1.11. Действующие на пероксид водорода в качестве 34. Микробная биотехнология. Методическое пособие к 1.11.1.6 Каталаза Н2О2 + Н2О2 2Н2О + О, О.А. Алексинцева, Н.В. Котова, В.А. Колодязная.

СПб:СПХФА, 2000. 55 с.

35. Грачева И.М., Иванова Л.А., Кантера В.М. Технология микробных белковых препаратов, аминокислот и питание и пищевые продукты. Киев: Урожай, 1994. 330 с. 3.2.1. Гидролизующие О-гликозиды.

3.4.16.2 Пролин Пептидилпролил-Lкарбоксипептидаза аминокислота + Н2О 3.4.17. Металлокарбоксипептидазы.

3.4.17.1 Карбоксипептидаза А Пептидил-L-аминокислота 3.4.21.1 Химотрипсин Преимущественное 3.4.21.9 Энтеропептидаза Селективное расщепление 3.4.21.36 Элостаза Преимущественное расщеппанкреотическая ление по СО-группам Gly, Глюкоизомераза Более 80 видов Кондитерская, (КФ 5.3.1.18) микроорганизмов ликероводочная, и каталаза P.nigricans, P.nota- консервная, Фруктофуранозидаза Микроорганизмы: Кондитерская, (КФ 3.2.1.26) Aspergillus ssp., ликероводочная, Характеристика компонентов питательных сред Наибольшее биогенное значение для любого живого соединенных -гликозидными связями между 1 и органических молекул, образующихся в клетке и на его место среди компонентов питательных сред.

В промышленности микробного синтеза широко используются чистые углеводы, а также природные и относятся глюкоза, сахароза, лактоза, крахмал, кукурузная мука, меласса, зеленая патока.

Азотное питание микроорганизмов по своему значению приближается к углеродному, хотя уступает по объему.

Азот входит в состав клеточных компонентов, которые обеспечивают жизнеспособность организмов. Источниками азотного питания для продуцентов БАВ служат различные органического происхождения. Источниками минерального азота чаще всего является соли аммония и азота в промышленности наиболее широко применяются фактически представляет собой чистый углевод.

собой дисахарид, состоящий из глюкозы и фруктозы.

Крахмал на 96-97% состоит из полисахаридов, кроме того, в нем присутствуют минеральные вещества и жирные кислоты. Полисахариды крахмала представлены двумя полимеризации и некоторым другим свойствам. Под Соевую муку получают при размалывании соевых бобов, действием амилолитических ферментов крахмал а также соевого жмыха и шрота, образующихся после расщепляется до глюкозы, которая в дальнейшем извлечения соевого масла. Соевая мука подразделяется на утилизируется продуцентом по гликолитическому или необезжиренную, полуобезжиренную и обезжиренную.

Кукурузную муку получают при размалывании зерен (обработанная паром) и недезодорированная. Обработка кукурузы. В промышленных средах кукурузная мука часто паром позволяет увеличить срок хранения, и заменяет крахмал, являясь более дешевым сырьем. дезодорированная мука может храниться в течение года, а - другие углеводы (клетчатка, пентозаны, для процессов ферментации имеют азотсодержащие Среди зольных элементов в наибольшем количестве органические кислоты – 1,5%; зола – 4,5-6,5%. В присутствуют ионы фосфора, калия, магния. Состав необезжиренной муке присутствует 19,5% жира. В состав кукурузной муки может колебаться в значительных золы входят ионы калия, фосфора, магния, кальция, а пределах в зависимости от сорта кукурузы, условий ее также ряд микроэлементов.

Кукурузный экстракт – это отходы производства необходимы для регулирования осмотического давления, крахмала из кукурузы. По внешнему виду это густая окислительно-восстановительных условий и величины рН.

жидкость темно-коричневого цвета с хлопьевидной Одна из основных функций минеральных элементов – взвесью или почти однородная. В состав кукурузного участие в ферментативном катализе. В настоящее время экстракта входят (в процентах): действие четвертой части всех ферментов в клетке связано Основными элементами золы являются фосфор, калий, электрического потенциала клеток может изменить их магний. Кукурузный экстракт также содержит витамины физиологическую деятельность, воздействовать на группы В, некоторые ростовые вещества, биостимуляторы. селективность клеточной мембраны, вызвать флокуляцию Лузга подсолнечника – отход при производстве масла из стандартом, пшено подразделяют на три сорта: высший, семян подсолнечника. Лузга содержит 1,4% богатого первый и второй.[36].

углеродом пигмента фитомелана, 23,6-28% пентозанов, 52- В таблице представлены средние данные по 66% клетчатки, 24,8-29,6% лигнина, 31-42,4% целлюлозы. химическому составу продуктов переработки зерна.

Для выращивания микроорганизмов используют Данные приведены из расчета содержания в 100 г продукта пентозогексозные гидролизаты лузги после удаления из технологическими приемами помола зерна и просеивания моносахаров собой целые или раздробленные части зерен злаковых, гречихи и семян бобовых, с которых полностью или Солод – продукт искусственного проращивания зерен частично удалены оболочки. Гречневую крупу злаков, содержащий фермент. Солод выпускают в виде вырабатывают 2-х видов: ядрица и продел (обычная и целых зерен и в виде порошка (размолотые зерна), быстроразваривающаяся). Продел- это раздробленные ядра ферментированный – с низкой активностью ферментов, и гречихи, получают его как побочный продукт при неферментированный – с высокой активностью. Последний Из риса вырабатывают крупы таких наименований: рис крахмалсодержащего сырья, так как содержит в активном шлифованный, полированный и дробленый шлифованный. состоянии амилолитические ферменты. Массовая доля Последний получают как побочный продукт при влаги солода не должна превышать по государственному производстве шлифованного и полированного. Он стандарту – 10%.[30].

представляет собой колотые ядра риса размером менее 2/3 Древесные опилки являются отходами лесного хозяйства. В целого ядра. Сорт крупы – пшено, вырабатывают из проса. таблице приведен основной состав древесного сырья В зависимости от показателей качества, предусмотренных Показатели лиственные хвойные Органические кислоты, % 10-12 4- Для выращивания микроорганизмов используют гидролизаты древесных отходов. [35].



 


Похожие работы:

«База нормативной документации: www.complexdoc.ru РОССИЙСКОЕ АКЦИОНЕРНОЕ ОБЩЕСТВО ЭНЕРГЕТИКИ И ЭЛЕКТРИФИКАЦИИ ЕЭС РОССИИ Департамент научно-технической политики и развития МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ПО ОЦЕНКЕ ВЛИЯНИЯ ГИДРОТЕХНИЧЕСКИХ СООРУЖЕНИЙ НА ОКРУЖАЮЩУЮ СРЕДУ РД 153-34.2-02.409-2003 ОАО ВНИИГ им. Б.Е. Веденеева Санкт-Петербург 2003 СОДЕРЖАНИЕ 1. ОБЩИЕ ПОЛОЖЕНИЯ 2. ВЛИЯНИЕ ГИДРОТЕХНИЧЕСКИХ СООРУЖЕНИЙ НА РЕЖИМ ВОДОТОКА 2.1. Гидравлический режим водотока 2.2. Русловой режим водотока 2.3....»

«Федеральное агентство по образованию Государственное образовательное учреждение Среднего профессионального образования Нижнекамский нефтехимический колледж Методические указания и контрольные задания по дисциплине Экологические основы природопользования для студентов заочников специальности: 150411, 240401, 240503, 080110, 220301,140613, 230103 Нижнекамск 2007 РАССМОТРЕНО На заседании кафедры ТППМ Протокол № от _ 200 г. зав. кафедры _ Н.А.Яминова СОГЛАСОВАНО Методист заочного отделения Г.Г....»

«Донецкий национальный медицинский университет им. М.Горького. Кафедра медицинской химии. МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ к практическим занятиям по биоорганической химии (для студентов первого курса медицинского факультета). Донецк - 2011 Методические указания подготовили: -зав. кафедрой доцент Рождественский Е.Ю. -доценты: Сидун М.С., Селезнева Е. В. -ст. преподаватель Павленко В.И. -ассистенты кафедры: Бусурина З.А., Сидоренко Л.М., Игнатьева В.В., Бойцова В.Е. -2Вступление. Целью развития...»

«МИНИСТРЕСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ ВОЛГОГРАДСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ КАФЕДРА МЕДИЦИНЫ КАТАСТРОФ Методические указания для выполнения контрольной работы студентами заочного отделения 3 курса фармацевтического факультета по дисциплине Безопасность жизнедеятельности. Медицина катастроф Волгоград – 2013 г 1 Методические рекомендации Контрольная работа является индивидуальной обязательной формой контроля самостоятельной внеаудиторной работы студента заочного...»

«Амурская государственная медицинская академия Кафедра детских болезней ФПК и ППС Амурская областная детская клиническая больница ОТРАВЛЕНИЯ В ДЕТСКОМ ВОЗРАСТЕ Методическое пособие для врачей-педиатров Благовещенск, 2003 Составители: Т.В ЗАБОЛОТСКИХ – заведующая кафедрой детских болезней ФПК и ППС АГМА, кандидат медицинских наук, доцент; Г.В.ГРИГОРЕНКО – доцент кафедры детских болезней ФПК и ППС АГМА, кандидат медицинских наук; Н.В.КЛИМОВА – ассистент кафедры детских болезней ФПК и ППС АГМА,...»

«Федеральное агентство по образованию Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования АМУРСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ (ГОУ ВПО АмГУ) Инженерно-физический факультет ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА И МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ КАЧЕСТВА УЧЕБНО-МЕТОДИЧЕСКИЙ КОМПЛЕКС ДИСЦИПЛИНЫ Составитель: В.И. Митрофанова Благовещенск, 2007 Печатается по решению редакционно-издательского совета инженерно-физического факультета Амурского государственного университета Митрофанова В.И....»

«Министерство образования Российской Федерации САНКТ-ПЕТЕРБУРГСКАЯ ГОСУДАРСТВЕННАЯ ЛЕСОТЕХНИЧЕСКАЯ АКАДЕМИЯ кафедра целлюлозно-бумажного производства Химия технология и оборудование производства бумаги и картона Методические указания по выполнению контрольных заданий для студентов специальности 240406 Санкт-Петербург 2010 Рассмотрены и рекомендованы к изданию методической комиссией факультета химической технологии и биотехнологии Санкт-Петербургской государственной лесотехнической академии 31...»

«Национальная библиотека Удмуртской Республики Центр информации по технике и сельскому хозяйству Экология жилища Каталог выставки                             Ижевск 2013 Составители О. В. Лукиных, И. А. Сергеева Редактор М. В. Богомолова Верстка Т. В. Панова Ответственный за выпуск Т. В. Панова Экология жилища : каталог выставки / Национальная библиотека Удмуртской Республики ; составители О. В. Лукиных, И. А. Сергеева. – Ижевск, 2013. – 16 с. Источники, представленные в каталоге выставки,...»

«ФЕДЕРАЛЬНОЕ АГЕНТСТВО ПО ОБРАЗОВАНИЮ Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования Ивановская государственная текстильная академия (ИГТА) Кафедра химии БЕЗОПАСНОСТЬ И ГИГИЕНА ПИТАНИЯ Методические указания для студентов специальности 351300 Коммерция (торговое дело) всех форм обучения Иваново 2009 Методические указания разработаны для студентов, обучающихся по специальности 351300 Коммерция (торговое дело). Охарактеризованы существующие системы питания,...»

«Федеральное агентство по образованию Государственное образовательное учреждение Высшего профессионального образования Казанский государственный технологический университет Р.А. Хайруллин, М.Б. Газизов, А.И. Алехина, Л.Р. Багаува МЕТОДЫ ПОЛУЧЕНИЯ ОРГАНИЧЕСКИХ СОЕДИНЕНИЙ Учебное пособие Казань 2008 ББК УДК 547 (075.8) Методы получения органических соединений: учебное пособие/ Р.А.Хайруллин, М.Б.Газизов, А.И.Алехина, Л.Р.Багаува; Казан. гос. технол. ун-т. Казань, 2008. – 309 с. Рассмотрены методы...»

«Министерство здравоохранения и социального развития РФ ГОУ ВПО ИГМУ Кафедра фармакогнозии с курсом ботаники Методические указания для студентов 1 курса к практическим занятиям по ботанике по разделу : Голосеменные растения Иркутск 2008 Составители: доцент кафедры фармакогнозии с курсом ботаники, кандидат биологических. Бочарова Галина Ивановна, ассистент кафедры фармакогнозии с курсом ботаники, кандидат фармакогностических наук Горячкина Елена Геннадьевна, Рецензенты: старший преподаватель...»

«Департамент образования города Москвы Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования города Москвы Московский городской педагогический университет (ГОУ ВПО МГПУ) Институт естественных наук Химико-биологический факультет В.А. Калявин, М.Е. Миняев Органическая химия в вопросах и ответах (Часть I) Учебно-методическое пособие для студентов Химикобиологического факультета Института естественных наук ГОУ ВПО МГПУ, обучающихся по специальности 050101.65 Химия. Москва...»

«Тема. Основы массопередачи Методические указания При изучении этой темы необходимо усвоить место и роль процессов межфазного массообмена в химической технологии, классификацию и общую характеристику массообменных процессов. Значение массообменных процессов для защиты окружающей среды от вредных выбросов химических производств. Знать, и умело применять процесс межфазного массообмена для разделения смесей различных смесей на чистые компоненты. Видеть аналогию и отличать существенные различия...»

«1 МИНИСТЕРСТВО ОБРАЗОВАНИЯ И НАУКИ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ВЫСШЕГО ПРОФЕССИОНАЛЬНОГО ОБРАЗОВАНИЯ САНКТ-ПЕТЕРБУРГСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ ЭКОНОМИЧЕСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ КАФЕДРА ФИЗИЧЕСКОГО ВОСПИТАНИЯ ПРОФИЛАКТИКА ОСТЕОХОНДРОЗА У СТУДЕНТОВ НА ЗАНЯТИЯХ ФИЗИЧЕСКОЙ КУЛЬТУРОЙ В ВУЗЕ Методические указания ИЗДАТЕЛЬСТВО САНКТ-ПЕТЕРБУРГСКОГО ГОСУДАРСТВЕННОГО ЭКОНОМИЧЕСКОГО УНИВЕРСИТЕТА Рекомендовано...»

«Федеральное агентство по образованию Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования САНКТ-ПЕТЕРБУРГСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ ИНЖЕНЕРНО-ЭКОНОМИЧЕСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ Факультет экономики и управления в химической промышленности и природопользовании Кафедра современного естествознания и экологии ЗАОЧНОЕ ОБУЧЕНИЕ ТЕОРЕТИЧЕСКИЕ ОСНОВЫ ПРОГРЕССИВНЫХ ТЕХНОЛОГИЙ (Часть 1. Физика) Методические указания к изучению дисциплины и выполнению контрольной работы для студентов заочной...»

«Министерство образования и науки Российской Федерации Сыктывкарский лесной институт (филиал) федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования Санкт-Петербургский государственный лесотехнический университет имени С. М. Кирова Кафедра целлюлозно-бумажного производства, лесохимии и промышленной экологии ОРГАНИЧЕСКАЯ ХИМИЯ И ОСНОВЫ БИОХИМИИ Учебно-методический комплекс по дисциплине для подготовки дипломированного специалиста по направлению...»

«Федеральное агентство по образованию Сыктывкарский лесной институт – филиал государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования Санкт-Петербургская государственная лесотехническая академия имени С. М. Кирова КАФЕДРА ОБЩЕТЕХНИЧЕСКИХ ДИСЦИПЛИН МАТЕРИАЛОВЕДЕНИЕ САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА СТУДЕНТОВ Методические указания для подготовки дипломированного специалиста по направлению 655000 Химическая технология органических веществ и топлива специальности 240406 Технология...»

«Ветеринарная микробиология и иммунология: учебник : [для вузов по специальности 111801 Ветеринария], 2012, 746 страниц, Виктор Никифорович Кисленко, Колычев Н.М., Госманов Р.Г. / Под ред. В.Н. Кисленко, 5970422983, 9785970422984, ГЭОТАР-Медиа, 2012. Учебник состоит из 3 разделов. В первом разделе Общая микробиология приведены сведения о месте прокариот среди живых организмов, морфологии и химическом составе микроорганизмов об обмене веществ и энергии в микробной клетке. Опубликовано: 13th July...»

«МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ И СОЦИАЛЬНОГО РАЗВИТИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ ВОЛГОГРАДСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ Биохимия полости рта Учебное пособие Рекомендовано Учебно-методическим объединением по медицинскому и фармацевтическому образованию вузов России в качестве учебного пособия для студентов, обучающихся по специальности 060105 -Стоматология Волгоград 2010 УДК 577.1.616.31-08(075.8) ББК 28.072я7+56.6 УМО – 17-28/486-д 12.08.08 Авторы: зав. кафедрой теоретической и...»

«Министерство образования и науки Российской Федерации Сыктывкарский лесной институт (филиал) федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования Санкт-Петербургский государственный лесотехнический университет имени С. М. Кирова Кафедра целлюлозно-бумажного производства, лесохимии и промышленной экологии ХИМИЯ Учебно-методический комплекс по дисциплине для подготовки дипломированного специалиста по направлению 250000 Воспроизводство и...»














 
© 2013 www.diss.seluk.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Авторефераты, Диссертации, Монографии, Методички, учебные программы»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.