WWW.DISS.SELUK.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА
(Авторефераты, диссертации, методички, учебные программы, монографии)

 

На правах рукописи

Сороковикова Екатерина Георгиевна

ЦИАНОБАКТЕРИИ ТЕРМАЛЬНЫХ ИСТОЧНИКОВ

БАЙКАЛЬСКОЙ РИФТОВОЙ ЗОНЫ И ИХ РОЛЬ В ОСАЖДЕНИИ

КРЕМНЕЗЕМА КАК МОДЕЛЬНЫХ ОБЪЕКТОВ ДЛЯ

ИССЛЕДОВАНИЯ МИКРОФОССИЛИЙ

25.00.02 – палеонтология и стратиграфия

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва – 2008

Работа выполнена в отделе ультраструктуры клетки Лимнологического института СО РАН (г. Иркутск)

Научный руководитель: кандидат биологических наук, доцент Белых Ольга Ивановна

Официальные оппоненты: доктор биологических наук Герасименко Людмила Михайловна кандидат биологических наук Астафьева Марина Михайловна

Ведущая организация: Сибирский федеральный университет

Защита диссертации состоится 24 декабря 2008 г. в 13.00 часов на заседании диссертационного совета Д.002.212.01. при Палеонтологическом институте РАН по адресу: 117997, г. Москва ГСП-7, ул. Профсоюзная, д. 123. Факс:

(495) 339-12-66.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Палеонтологического института РАН

Автореферат разослан 22 ноября 2008 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат геолого-минералогических наук Ю.Е. Демиденко

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Цианобактерии являются древнейшими фотосинтезирующими организмами на планете, возраст которых по находкам окаменевших строматолитов определяется 3,5 млрд. лет назад (Walsh, 1992;

Allwood et al., 2006). Цианобактериальные пленки или маты, сходные с ископаемыми сообществами, в массе развиваются в современных термальных источниках, являясь моделью для реконструкции процессов, происходивших в докембрии (Орлеанский, Раабен, 1996; Бактериальная палеонтология, 2002; Заварзин и др., 2003). Исследование строматолитов, кремневых туфов, травертинов и других минеральных отложений в гидротермах показало, что в них наряду с абиогенным отложением происходит биоминерализация соединений кремния, кальция, фосфора, железа и марганца цианобактериями (Герасименко и др., 1999; Konhauser et al., 2001; Sigler et al., 2003). Показано, что из всех минералов кремнезем лучше фиксирует структуру клеток, сохраняя морфологию микроорганизмов (Бактериальная палеонтология, 2002; Walsh, 1992). Для изучения процесса биоминерализации кремнезема цианобактериями предпринят ряд лабораторных экспериментов, после которых механизмы и динамика окремнения остаются невыясненными (Крылов, Тихомирова, 1988; Westall et al., 1995; Phoenix et al., 2000; Yee et al., 2003; Benning et al., 2004).





Геомикробиологические исследования важны не только для задач изучения современного воздействия микроорганизмов на геологическую среду, но и как актуалистический материал для интерпретации ископаемых объектов.

В пределах Байкальской рифтовой зоны известно более 50 групп термальных источников (Кустов, Лысак, 2000). Данным исследованием охвачены гидротермы, находящиеся на побережье озера Байкал и в Тункинской долине, имеющие важное рекреационное и бальнеологическое значение. Цианобактерии гидротерм Байкальского региона изучены недостаточно. В исследованиях микробных сообществ Котельниковского, Давшинского и Хакусского источников цианобактериальной составляющей уделено мало внимания, литературные сведения о цианобактериях других источников отсутствуют (Компанцева, Горленко, 1988; Белькова и др., 2005).

Цель и задачи. Целью работы было исследование видового разнообразия цианобактерий в термальных источниках Байкальской рифтовой зоны и изучение отложения кремнезема цианобактериями – модельными объектами для исследования фоссилизированных остатков.

Для достижения цели были поставлены следующие задачи:

1. Изучить видовой состав цианобактерий термальных источников Котельниковский, Змеиный, Хакусы, Сухая, Давшинский, Горячинский, Аршан и Жемчуг.

2. Сформировать коллекцию чистых культур цианобактерий из термальных источников, описать их морфологию и ультраструктуру клеток, установить систематическое положение.

3. Определить филогенетическое положение культивируемых цианобактерий по 16S рибосомному гену.

4. Исследовать способы, локализацию и динамику отложения кремнезема в экспериментах с цианобактериями разных видов, используемых как модельные объекты для исследования фоссилизированных остатков.

Научная новизна работы. Впервые дана комплексная характеристика цианобактерий термальных источников Байкальской рифтовой зоны. В работе приводятся данные микроскопических и молекулярно-биологических исследований цианобактерий в культурах и природных пробах. Выявлено значительное видовое разнообразие цианобактерий в термальных источниках. Описаны особенности ультраструктуры девяти штаммов цианобактерий. С помощью молекулярно-биологических методов проведен сравнительный анализ цианобактерий исследованных гидротерм с цианобактериями из различных гидротерм мира.





Практическая значимость. Сформирована коллекция культур цианобактерий, изолированных из термальных источников, которая используется в учебных и научных целях. Охарактеризована их морфология и ультраструктура, определено систематическое положение, получены и внесены в мировую базу данных GenBank 16 последовательностей 16S рРНК генов. Выявленные в работе морфологические и ультраструктурные признаки цианобактерий могут быть использованы при составлении определителей. Результаты изучения видового состава позволяют дать оценку качества вод термальных источников, широко применяемых в бальнеологии. Данные об ультраструктуре силифицированных цианобактерий могут быть использованы при анализе ископаемых остатков.

В диссертацию вошли результаты, полученные при финансовой поддержке грантов Президиума РАН № 18.4; НШ-2195.2003.4 (поддержка ведущих научных школ), гранта 2006-РИ-112/001/007 и Фонда содействия отечественной науке.

Защищаемые положения:

1) В сообществах термальных источников Котельниковский, Змеиный, Хакусы, Сухая, Давшинский, Горячинский, Аршан и Жемчуг доминируют цианобактерии родов Phormidium, Leptolyngbya, Chroococcus, Geitlerinema и Pseudanabaena. Видовой состав цианобактерий варьирует в зависимости от условий обитания и географического расположения источников.

2) По данным филогенетического анализа большинство выделенных из исследованных термальных источников штаммов являются родственными термофильным цианобактериям из различных гидротерм мира.

3) Нитчатые цианобактерии способны к осаждению кремнезема с формированием трубок с гладкими и неравномерно утолщенными стенками и состоящих из наносфер.

4) Окремнение ограничивается чехлами цианобактерий, полисахариды которых адсорбируют частицы аморфного кремнезема и являются матрицей для окремнения. Живые клетки цианобактерий, находясь в окремненных чехлах, не подвергаются минерализации, сохраняют типичную ультраструктуру и способность к размножению.

Апробация работы. Основные результаты диссертационной работы представлены и обсуждены на международном симпозиуме "Живые клетки диатомей" (Иркутск, 2004), на III международной конференции "Климатические изменения в Центральной Азии" (Улан-Батор, Монголия, 2005), на международном рабочем совещании "Происхождение и эволюция биосферы" (Новосибирск, 2005), на 19-ом международном диатомовом симпозиуме (Иркутск, 2006), на III, IV и V Всероссийских научных школах молодых ученых-палеонтологов (Москва, 2006, 2007, 2008), на международном симпозиуме "Происхождение и эволюция биосферы" (Лутраки, Греция, 2007), на IV съезде Российского общества биохимиков и молекулярных биологов (Новосибирск, 2008).

Публикации. По результатам исследования опубликовано 18 научных работ, из них 6 – статьи, 1 – глава в монографии.

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, шести глав, выводов, списка литературы, приложения. Работа изложена на 126 страницах, содержит 14 таблиц и 25 рисунков. Список литературы включает 186 наименований, в том числе 148 на иностранных языках.

Благодарности. Автор выражает глубокую признательность научному руководителю Ольге Ивановне Белых, сотрудникам отдела ультраструктуры клетки, сотрудникам центра коллективного пользования "Электронная микроскопия" за совместную работу и полученные результаты.

Определение химического состава воды источников провела М.В.

Сакирко (лаборатория гидрохимии и химии атмосферы ЛИН СО РАН).

Определение нуклеотидных последовательностей выполнил к.б.н. Р.В.

Адельшин (приборный центр "Секвенирование"). Анализ и фотографирование образцов в SEM-EDAX провели д.б.н. Е.В. Лихошвай и д.х.н. В.В. Анненков (отдел ультраструктуры клетки). Определение количества кремния в биомассе цианобактерий выполнили д.х.н. В.В.

Анненков и к.х.н. Е.Н. Даниловцева. Автор искренне благодарит всех упомянутых участников работы.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ Приведены литературные данные по систематике, экологии, ультраструктуре клеток и молекулярной биологии цианобактерий. Освещены факты биоминерализации кремнезема цианобактериями в современных гидротермах мира и сохранности их клеток в ископаемых остатках.

Проанализированы данные о силицификации цианобактерий в экспериментах и современные представления о механизмах этого процесса.

Глава 2. ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ Объектами исследования являлись цианобактерии термальных источников Байкальской рифтовой зоны: Змеиный, Котельниковский, Хакусы, Давшинский, Сухинский, Горячинский, Аршан, Жемчуг (рис. 1).

Пробы цианобактериальных матов отбирали в 2003-2007 гг.

Рис. 1. Карта отбора проб.

Таксономическое положение цианобактерий идентифицировали по определителям (Komrek, Anagnostidis, 1999, 2005). Для оценки степени видового сходства использовали коэффициент Серенсена (Василевич, 1969).

Для выделения культур из природных образцов использовали минеральную среду Z-8 (Rippka, 1988). Выделение чистых культур цианобактерий проводили многократным пересевом на 1% агаризованную среду Z-8 и отбором трихомов капиллярами в стерильные 96-луночные планшеты для микрокультивирования Linbro ("ICN Biomedicals", Дания).

Для сканирующей электронной микроскопии (СЭМ) пробы цианобактериальных матов и образцы из экспериментов фиксировали глутаровым альдегидом или параформальдегидом (конечная концентрация 2%) и дегидратировали в спиртах восходящей концентрации. После сушки в критической точке (Balzers CPD 030 Critical Point Dryer, "Bal-Tec AG", Лихтенштейн) образцы помещали на столики, напыляли золотом в установке Balzers SCD 004 и исследовали в микроскопе Philips SEM 525M (Голландия).

Для трансмиссионной электронной микроскопии (ТЭМ) образцы культур цианобактерий фиксировали 1% глутаровым альдегидом и 0,25% OsO4 с последующей фиксацией 1% OsO4. После обезвоживания в этаноле и ацетоне образцы пропитывали смесью ацетон:смола, заключали в эпон-аралдит, полимеризовали и ультрамикротомировали. Ультратонкие срезы после окрашивания 2% уранил-ацетатом и цитратом свинца по Рейнольдсу наблюдали в электронный микроскоп Leo 906E ("Carl Zeiss", Германия) при ускоряющем напряжении 80 кВ. Микрофотографии получали с помощью цифровой камеры MegaView II ("LEO Elektronenmikroskopie GmbH", Германия).

ДНК из образцов штаммов выделяли реагентами "ДНК-сорб" ("ФГУН ЦНИИЭ Роспотребнадзора", Россия) в соответствии с инструкцией производителя. Амплификацию фрагмента гена 16S рРНК проводили с использованием цианоспецифичных праймеров (Nbel et al., 1997) с применением реагентов фирмы "Амплисенс" (Москва) на амплификаторе MiniCycler ("MJ Research, Bio-Rad", США). ПЦР-продукты очищали элюцией нуклеотидного материала методом замораживания-оттаивания.

Нуклеотидные последовательности генов получали прямым секвенированием на Beckman CEQtm 8800 ("Beckman Coulter Inc.", США), затем сравнивали с помощью программы поиска гомологичных последовательностей BLAST (GenBank, www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST). Элаймент последовательностей и построение филогенетических деревьев проводили с использованием пакета программ MEGA (Kumar et al., 2004). Полученные последовательности депонированы в базе данных GenBank под номерами DQ408367-DQ408371, EU057151, EU068733-EU068740, EU072718, EU072719.

Для экспериментов по окремнению использовали среды с повышенным содержанием силиката натрия, в которых конечное содержание кремния составляло 10,7; 20 и 50 мМ. К раствору пятиводного силиката натрия ("Fluka Chemika", Германия) приливали 10% среды Z-8, титровали 2M HCl до рН=7±0,5 (Microprocessor pH Meter, "Hanna instruments", США) и добавляли в пробирки с цианобактериями. Раствор через два дня меняли на свежий в течение 24-26 дней. Эксперименты проводили в трех повторностях. Образцы цианобактерий исследовали с помощью эпифлуоресцентной микроскопии, СЭМ, ТЭМ и рентгеноспектрального микрозондового анализа на СЭМEDAX (Объединенный институт геологии, геофизики и минералогии, г.

Новосибирск; Хельсинский университет, Финляндия). Содержание кремния в биомассе цианобактерий измеряли методом молибденовой сини (Айлер, 1982). Фазу кремнезема аморфный/кристаллический определяли на световом микроскопе Olympus DP12 в поляризованном свете (Институт земной коры СО РАН, аналитики: член-корр. РАН В.К. Скляров и к.г.-м.н. Ю.В.

Меньшагин). Статистическую обработку результатов экспериментов проводили с помощью программы Excel for Windows.

Глава 3. БИОРАЗНООБРАЗИЕ ЦИАНОБАКТЕРИАЛЬНЫХ СООБЩЕСТВ

ГИДРОТЕРМ

Исследованные термальные источники имеют значительные различия в физико-химических характеристиках: температуре и pH показателе воды, содержании биогенных ионов, кислорода и растворенного кремния (табл. 1).

В пробах цианобактериальных матов термальных источников выявлено 45 видов и внутривидовых таксонов цианобактерий, относящихся к порядкам, 7 семействам. Ведущие роды по количеству таксонов: Phormidium (12 видов), Leptolyngbya (9 видов), Chroococcus (4 вида), Geitlerinema(4 вида), Pseudanabaena (3 вида), Synechococcus (2 вида), Aphanocapsa (2 вида), Spirulina (2 вида), Lyngbya (2 вида), Oscillatoria (2 вида); единственными представителями своего рода были Mastigocladus laminosus, Anabaena variabilis, Synechocystis salina, Cyanobacterium minervae.

Таблица 1. Физико-химические условия гидротерм Для всех исследованных гидротерм был характерен вид Leptolyngbya laminosa, который доминировал в сообществах источников Хакусы, Змеиный и Котельниковский. Наибольшее видовое разнообразие отмечено в источниках Жемчуг, Аршан, Змеиный и Хакусы (12-19 видов и форм).

Максимальное сходство видового состава цианобактерий отмечено для источников, различающихся по химическому составу вод, но близких географически – Аршан и Жемчуг (коэффициент Серенсена 51%), Горячинский и Сухинский (коэффициент Серенсена 50%).

Глава 4. МОРФОЛОГИЯ И УЛЬТРАСТРУКТУРА КУЛЬТИВИРУЕМЫХ

ЦИАНОБАКТЕРИЙ

Морфология культивируемых цианобактерий исследована с использованием световой микроскопии. Штаммы охарактеризованы по таким признакам, как цвет и форма колоний, строение трихома: размер клеток, форма конечной клетки, наличие перетяжек, гетероцист, чехла, подвижность.

С помощью ТЭМ изучена ультраструктура представителей 8 родов цианобактерий, принадлежащих к 4 порядкам (рис. 2а-е).

Для штамма Synechococcus bigranulatus 0431 были характерны пристеночных тилакоида, тонкая клеточная стенка без дополнительных выростов и оболочек и присутствие полярных включений цианофицина (рис. 2а). По размеру клеток, числу тилакоидов и наличию включений S. bigranulatus 0431 отличался от всех, ранее описанных нами, представителей данного рода из оз. Байкал и оз. Хубсугул. Характерное расположение полярных включений у S. bigranulatus 0431 отличает его и от других, описанных в литературе видов рода Synechococcus, и может считаться видоспецифичным ультраструктурным признаком.

Ультраструктурные признаки штаммов Anabaena variabilis 0441 и Mastigocladus laminosus 0422, 0423 были схожими (рис. 2д, е). Для них свойственно равномерное распределение извитых тилакоидов и включений по всей клетке. Характерными чертами цианобактерий рода Mastigocladus является сложное строение ветвящегося трихома и толстый трехслойный чехол, один из слоев которого разделяет клетки трихома (рис. 2е).

Рис. 2. Ультратонкое строение культивируемых цианобактерий по данным ТЭМ, а – Synechococcus bigranulatus 0431, б – Pseudanabaena sp.

0411, в – Geitlerinema amphibium 0519, г – Phormidium sp. 0417, д – Anabaena variabilis 0441, е – Mastigocladus laminosus 0422. л – липидные включения, н – нуклеоид, п – полиэдральные тела, пф – гранулы полифосфатов, т – тилакоиды, ц – цианофициновые гранулы, ч – чехол, L2 – пептидогликановый слой клеточной стенки, L4 – внешняя мембрана.

Масштаб – 1 мкм.

У цианобактерий порядка Oscillatoriales выявлен ряд ультраструктурных особенностей, необходимых для определения родовой принадлежности (табл. 2). Наибольшие отличия имеют цианобактерии рода Phormidium:

радиальное расположение тилакоидов в клетке, большое количество пор и мощный пептидогликановый слой (L2) в клеточной стенке (рис. 2г).

Остальные представители осциллаториевых имеют схожее пристеночное расположение тилакоидов, одинаковую толщину слоев клеточной стенки, и основные ультраструктурные различия между цианобактериями родов Leptolyngbya, Geitlerinema и Pseudanabaena заключаются в толщине чехла и расположении пор в клеточной стенке.

Таблица 2. Таксономически важные ультраструктурные признаки Leptolyngbya Geitlerinema Phormidium Pseudanabaena внешняя мембрана.

Особенности в ультраструктуре клеток внутри рода отмечены у штаммов Pseudanabaena spp., однако, согласно литературным данным (Komrek, Anagnostidis, 2005), они не являются видоспецифичными. Так, наличие пор в межклеточных перегородках, характерное для штамма P. thermalis 0542, свойственно также некоторым другим видам этого рода, и не зафиксировано в ультраструктуре штамма Pseudanabaena sp. 0411.

Таким образом, исследование ультраструктуры выделенных штаммов цианобактерий выявило их видо- и родоспецифичные признаки.

Глава 5. СРАВНИТЕЛЬНЫЙ И ФИЛОГЕНЕТИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ

ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ КУЛЬТИВИРУЕМЫХ

ЦИАНОБАКТЕРИЙ ПО ГЕНУ 16S рРНК

Определено 16 последовательностей 16S рДНК культивируемых цианобактерий длиной 420-680 пар нуклеотидов. Полученные последовательности были проанализированы с помощью дистантных (рис. 3) и дискретных методов филогенетического анализа.

Анализ методом ближайших соседей показал, что штамм Synechococcus bigranulatus 0431, выделенный из Котельниковского источника, на древе входит в устойчивую кладу с высокой бутстреп-поддержкой (96%) в кластер с изолятами из термальных источников Таиланда и Китая. Тогда как Synechococcus spp. из гидротерм США сформировали сестринскую группу.

Штаммы Pseudanabaena sp. 0411, изолированный из Котельниковского источника, и Leptolyngbya sp. 0412 из Змеиного были близкими по последовательностям ДНК (99% сходства) и вошли в смешанный кластер с бутстреп-индексом 97, включающий как P. amphigranulata из термальных Рис. 3. Филогенетическое древо цианобактерий, построенное с использованием метода ближайших соседей. Цифрами показаны результаты бутстреп-анализа. fw – пресноводный, hs – термальный источник, s – почва;

термальные источники: А – Аршан, Г – Горячинский, Ж – Жемчуг, З – Змеиный, К – Котельниковский, Х – Хакусы. Масштаб соответствует пяти заменам на 100 п.н.

источников Новой Зеландии и Leptolyngbya sp. из гидротерм Гренландии, так и некультивируемые цианобактерии из термальных источников Филиппин.Штаммы Leptolyngbya sp. 0418, выделенный из источника Жемчуг, Leptolyngbya sp. 0612 из Змеиного и Leptolyngbya sp. 0413 из Хакусов сформировали на древе общую монофилетическую кладу с высоким бутстреп-индексом (96%). При этом морфологически сходные штаммы Leptolyngbya sp. 0418 и Leptolyngbya sp. 0612 образовали кластер с пресноводными Leptolyngbya sp. и L. frigida, а штамм Leptolyngbya sp. вошел в кластер с термофильными Leptolyngbya sp. и некультивируемыми цианобактериями из гидротерм Таиланда и Филиппин.

Штамм Leptolyngbya laminosa 0414 (источник Аршан) не имел среди ближайших родственников культивируемых цианобактерий и с 99% бутстреп-поддержкой сформировал кладу с некультивируемыми цианобактериями из гидротерм США и Китая.

Последовательность штамма Leptolyngbya sp. 0511, выделенного из Котельниковского источника, была наиболее близка (98%) последовательностям штаммов Shizothrix sp., изолированных из травертинов гидротерм США, с которыми формировала на филогенетическом древе отдельную устойчивую кладу, не связанную с другими представителями рода Leptolyngbya.

Штаммы рода Geitlerinema – G. lemmermannii 0513, изолированный из Горячинского источника и G. amphibium 0519 из Сухинского – образовали монофилетическую кладу, бутстреп-индекс которой был невысоким при анализе методом ближайших соседей (48%), но на древах, построенных с помощью методов минимальной эволюции и максимальной экономии бутстреп-поддержка была высокой (74% и 100%, соответственно), что подтверждает монофилию данной клады. При этом в группе с G.

lemmermannii 0513 находятся штаммы Geitlerinema sp., выделенные из пресного озера, Люксембург, а в кластере с G. amphibium 0519 – некультивируемые цианобактерии из травертинов гидротерм США.

Штаммы рода Phormidium – P. corium 0415 и P. corium 0416, выделенные из источников Аршан, и Phormidium sp. 0417 из источника Жемчуг – на древе сформировали общую монофилетичную кладу с бутстрепподдержкой 72%. Штаммы P. corium группируются с P. murrayi, некультивируемой цианобактерией и близкими им по морфологии трихомов видами рода Microcoleus из различных мест обитания. Тогда как штамм Phormidium sp. 0417 входит в сестринскую группу с термофильными Phormidium sp., Италия, и P. terebriformis, Кения.

Штаммы Mastigocladus laminosus 0421 (источник Хакусы) и M. laminosus 0423 (источник Жемчуг) близкие морфологически и генетически (99% сходства) сформировали устойчивый кластер с цианобактериями родов Fischerella и Mastigocladus из гидротерм США, Исландии и Японии, отделившись от представителей своего порядка, выделенных из других мест обитания.

Последовательность штамма Anabaena variabilis 0441 (источник Аршан) на 100% была близка последовательностям штаммов A. variabilis, выделенным из почв и пресных водоемов Кореи, Японии и США, и вошла с ними в общую кладу.

близкородственные связи с цианобактериями различных гидротерм мира.

Кроме того, большая часть выделенных штаммов цианобактерий группируется по родовому признаку, что является ценной таксономической информацией.

Глава 6. РОЛЬ ЦИАНОБАКТЕРИЙ В ОСАЖДЕНИИ КРЕМНЕЗЕМА

Окремнение цианобактерий – важный геологический процесс, происходящий в современных гидротермах (Konhauser et al., 2001; Guidry, Chafetz, 2002; Jones et al., 2005). Содержание кремнезема в водах исследованных гидротерм Байкальской рифтовой зоны колеблется от минимального – 0,03 mM в Хакусах, до 2,5 mM в Котельниковском, что считается недостаточным для его осаждения. По данным (Айлер, 1979) растворимость аморфного кремнезема в щелочных условиях при повышенной температуре составляет около 3,3 mM. Тем не менее, исследование с помощью рентгеноспектрального микрозондового анализа показало, что в цианобактериальных матах источников Котельниковский, Змеиный и Хакусы происходит накопление преимущественно кремния, с участием железа, кальция и других элементов.

Эксперименты со штаммами цианобактерий, выделенных из вышеуказанных гидротерм, позволили проследить динамику окремнения и выявили ультрамикроскопические особенности этого процесса у цианобактерий разных видов.

Исследование образцов нитчатых цианобактерий с помощью СЭМ показало, что в ходе эксперимента в период с 1 по 5 день происходит выделение слизи цианобактериями, многочисленные нити которой выглядят как ажурная сетчатая структура, на 10 день нити минерализуются, утолщаются, и на 15 день эксперимента они не наблюдаются, очевидно, сливаясь в единый опаловый матрикс. Постепенное окремнение чехлов цианобактерий можно проследить на рис. 17. В 1-5 дни эксперимента чехлы тонкие, под ними просматривается поверхность клеток трихома. Далее, с по 25 день, чехлы утолщаются в 1,5-2 раза, трихомы в них не просматриваются, формируются трубки с круглыми отверстиями на концах и отложениями кремнезема поверх них. Показано, что часть трубок состоит из кремнезема в форме наносфер (рис. 4а-г). На сколах минерализованной культуры видно, что форма и поверхность самих клеток не изменяется. В ЭФМ автофлуоресценция клеток цианобактерий на протяжении всего опыта остается интенсивной, как в контрольных образцах без кремния. Цвет колоний не меняется, на них формируются пузырьки газа, указывающие на интенсивный фотосинтез.

Рис. 4. СЭМ (а-г), СЭМ-EDAX (д, е) и ТЭМ ультратонких срезов (ж-и) цианобактерий Pseudanabaena sp. 0411 (а, б, д-и) и Leptolyngbya sp. (в, г), культивированных в среде без кремния (а, ж) и средах с высоким содержанием силиката натрия (б-д, з, и). г – образец, обработанный 30% H2O2; ж, з – срезы контрастированные уранил-ацетатом и цитратом свинца;

и – неконтрастированный срез. Обозначения см. рис. 2. Масштаб: а-г – 5 мкм;

д – 40 мкм; ж-и – 1 мкм.

Исследование тонких срезов образцов из эксперимента в поляризованном свете показало, что минеральные отложения на цианобактериях соответствуют аморфному некристаллическому кварцу.

По данным SEM-EDAX в 1-10 дни эксперимента в образцах цианобактерий легко найти мало- или совсем неокремненные особи. На день и позднее кремний детектировали на всех трихомах цианобактерий без исключения. В параллельном опыте с культурой, инактивированной 2% глутаровым альдегидом, процесс окремнения протекал гораздо быстрее, и уже с 5 дня эксперимента неокремненные участки отсутствовали. Таким образом, спустя 26 дней эксперимента в присутствии 20 mM Si, в элементном составе цианобактерий детектировали преимущественно кремний и кислород, а в контроле, инкубированном на среде Z-8, наблюдали пики кислорода, фосфора, кальция, натрия и серы (рис. 4д, е).

По данным ТЭМ-исследования ультратонких срезов штаммов цианобактерий Pseudanabaena sp. 0411 и Leptolyngbya laminosa 0412 с первого дня опыта отмечалось уплотнение полисахаридных чехлов, более отчетливой становилась их слоистая структура, внешний край разрыхлялся в виде бахромы (рис. 4ж, з). Кроме того, изучение неконтрастированных срезов показало постепенное повышение электронной плотности чехлов вследствие их пропитывания кремнеземом (рис. 4и). Нарушений в строении клеточной стенки, мембран тилакоидов и характере включений не наблюдали.

Отложения аморфного кремнезема выглядели как фибриллярная масса, расположенная на внешней поверхности чехлов. Отложений кремнезема между чехлом и клеточной стенкой не наблюдали. На срезах зафиксированы клетки, находящиеся на стадии деления, что является дополнительным подтверждением жизнеспособности окремненных снаружи цианобактерий.

В отличие от нитчатых цианобактерий, имеющих чехол, палочковидные клетки одноклеточной цианобактерии Synechococcus bigranulatus 0431 в ходе эксперимента с 10.7 мМ силикатом натрия оставались живыми, сохраняли способность к образованию агрегатов и размножению, но отложения частиц кремнезема на клетках отсутствовало.

Динамика окремнения нитчатых цианобактерий по данным химического анализа выглядела следующим образом (рис. 5).

Рис. 5. Динамика окремнения цианобактерии Pseudanabaena sp. 0411 по данным химического анализа.

В первые сутки происходило максимальное осаждение кремнезема на живые и инактивированные цианобактерии – 59 и 73 мг/г сухой биомассы, соответственно. В дальнейшем увеличение доли кремния в биомассе инактивированных цианобактерий было менее скачкообразным и составляло в среднем по 9 мг/г в день, максимум осаждения кремнезема соответствовал 1-5 дню опыта. Живые цианобактерии, напротив, с 1 по 10 день опыта осаждали минимальное количество кремнезема. Резкое увеличение количества кремния в их биомассе наблюдали после 10 дня опыта. Средняя скорость прироста доли кремния в биомассе живых цианобактерий составляла 7 мг/г в день. Таким образом, содержание кремния в биомассе цианобактерий на 25 день опыта было в среднем на 45 мг больше в образцах с инактивированной культурой и составляло 226 мг/г. Большее количество кремния в инактивированной культуре очевидно связано с разрушением клеточных стенок и высвобождением дополнительных органических веществ, на которые осаждались частицы кремнезема. Резкий скачок осаждения кремния в живой культуре после 10 дня эксперимента, связан с нарастанием биомассы цианобактерий, адаптировавшихся к условиям эксперимента, и синтезом новых чехлов, полисахариды которых являются матрицей для осаждения кремнезема.

ВЫВОДЫ

1. В составе цианобактериальных сообществ восьми термальных источников Байкальской рифтовой зоны на основе данных световой микроскопии выявлено 45 видов цианобактерий, относящихся к 13 родам.

Преобладающими по количеству видов были рода Phormidium (12 видов), Leptolyngbya (9 видов), Chroococcus (4 вида), Geitlerinema (4 вида) и Pseudanabaena (3 вида). Цианобактерии родов Synechococcus, Synechocystis, Cyanobacterium, Aphanocapsa, Spirulina, Lyngbya, Oscillatoria, Mastigocladus, Anabaena были представлены 1-2 видами. Вид Leptolyngbya laminosa встречался во всех исследованных гидротермах, являясь доминирующим в сообществах источников Хакусы, Змеиный и Котельниковский.

2. Выделены в культуру 19 штаммов цианобактерий, включающие представителей всех четырех порядков цианобактерий и относящиеся к родам Synechococcus, Pseudanabaena, Geitlerinema, Leptolyngbya, Phormidium, Anabaena, Mastigocladus. С помощью световой и трансмиссионной электронной микроскопии ультратонких срезов охарактеризована их морфология, выявлены особенности ультраструктуры клеток.

3. Проанализированы 16 штаммов цианобактерий по последовательностям фрагментов 16S рДНК. Филогенетический анализ показал, что 10 штаммов образуют кластеры с термофильными цианобактериями из различных гидротерм мира (Италии, Гренландии, Китая, Таиланда, Филиппин, Нов.

Зеландии, Японии, США).

4. Эксперименты по окремнению цианобактерий показали, что биоминерализация нитчатых цианобактерий происходит тремя способами:

пропитыванием чехлов кремнеземом, отложением аморфного кремнезема вокруг чехлов и образованием сфер субмикронных размеров (наносфер). С помощью рентгеноспектрального микрозондового анализа выявлено, что в химическом составе образцов цианобактерий из эксперимента преобладают кремний и кислород, минорные пики дают натрий, кальций, фосфор, железо, алюминий и сера.

5. С помощью трансмиссионной электронной микроскопии выявлено, что силицификация нитчатых цианобактерий ограничивается чехлом, в пространстве между клеточной стенкой и чехлом и внутри клеток отложения кремнезема отсутствуют. Цианобактерии остаются жизнеспособными в течение 26 дней опыта, и при этом ультраструктура их клеток и Видоспецифичных особенностей окремнения нитчатых цианобактерий не обнаружено, роль матрицы для осаждения кремнезема играет полисахаридный чехол.

Список работ, опубликованных по теме диссертации 1. Belykh O.I., Sorokovikova E.G. Autotrophic picoplankton in Lake Baikal:

abundance, dynamics and distribution // Aquat. Ecosyst. Health and Management. – 2003. – V. 6. – P. 251-261.

2. Belykh O.I., Sorokovikova E.G., Tikhonova I.V., Fedotov A.P. Abundance, biodiversity, and spatial distribution of autotrophic picoplankton in Lake Hovsgol (Mongolia) // Aquat. Ecosyst. Health and Management. – 2005. – V.

3. Лихошвай Е.В., Сороковикова Е.Г., Белькова Н.Л., Белых О.И., Титов А.Т., Сакирко М.В., Парфенова В.В. Минерализация кремния при культивировании цианобактерий из горячих источников // Доклады АН.

– 2006. – Т. 407, №4. – С. 556-560.

4. Belykh O.I., Sorokovikova E.G., Saphonova T.A., Tikhonova I.V. Autotrophic picoplankton of Lake Baikal: composition, abundance and structure // Hydrobiologia, Springer Netherlands. – 2006. – V. 568(1). – P. 9-17.

5. Сороковикова Е.Г., Белых О.И., Лихошвай Е.В. Цианобактерии термальных источников Байкальской рифтовой зоны: видовой состав, ультраструктура клеток, биоминерализация кремния // Современная палеонтология: классические и новейшие методы. – М.: ПИН РАН, 2007.

6. Likhoshway Ye.V., Sorokovikova E.G., Belykh O.I., Kaluzhnaya O.V., Belikov S.I., Bedoshvili Ye.D., Kaluzhnaya O.V., Masyukova Ju.A., Sherbakova T.A. Visualization of the silicon biomineralization in cyanobacteria, sponges and diatoms / in Biosphere origin and evolution. N.

Dobretsov et al. (eds.) // Springer. – 2008. – P. 219-230.

7. Сороковикова Е.Г., Тихонова И.В., Белых О.И., Клименков И.В., Лихошвай Е.В. Идентификация двух штаммов цианобактерий из Котельниковского термального источника Байкальской рифтовой зоны // Микробиология. – 2008. – Т. 77, №3. – C. 412-420.

8. Сорокoвикова Е.Г., Сакирко М.В., Белых О.И., Лихошвай Е.В.

Биоминерализация кремния цианобактериями из минеральных термальных источников Прибайкалья в опытах in vitro // Тезисы межд.

симпоз. "Живые клетки диатомей", 17-22 сент., 2004. – Иркутск, 2004. – 9. Сорокoвикова Е.Г., Белых О.И. Видовой состав цианобактериальных матов гидротерм Байкальской рифтовой зоны // Тез. докл. III Межд.

конф. "Актуальные проблемы современной альгологии", 20-23 апр., 2005. – Харьков, 2005. – С. 151.

10. Sorokovikova E.G., Belykh O.I., Likhoshway Ye.V. Cyanobacteria in thermal springs of Baikal Rift Zone // Geographica-Oekologica, J. of MOLARE Research Centre (MRC). Abstracts of IIIrd International Conference "Environmental Change in Central Asia", Apr. 22-29, Ulaanbaatar, Mongolia.

11. Сороковикова Е.Г., Лихошвай Е.В., Белых О.И., Титов А.Т.

источников // Тез. докл. межд. рабоч. совещания "Происхождение и эволюция биосферы", 26-29 июня, 2005. – Новосибирск, 2005. – С. 175Лихошвай Е.В., Сороковикова Е.Г., Белых О.И., Беликов С.И.

Визуализация процессов биоминерализации кремния у цианобактерий, диатомовых водорослей и губок // Тез. докл. межд. рабоч. совещания "Происхождение и эволюция биосферы", 26-29 июня, 2005. – Новосибирск, 2005. – С. 89-90.

13. Sorokovikova E.G., Belykh O.I., Likhoshway Ye.V. Silica precipitation by cyanobacteria from thermal springs // 19th International Diatom Symposium, 28 Aug. – 3 Sept. 2006. – Irkutsk, 2006. – P. 142.

14. Сороковикова Е.Г., Белых О.И., Лихошвай Е.В. Цианобактерии термальных источников Байкальской рифтовой зоны: видовой состав, биоминерализация кремния, ультраструктура // Тез. докл. III Всероссийской научной школы молодых ученых-палеонтологов, 3-5 окт.

2006. – Москва, 2006. – С. 66-67.

15. Сороковикова Е.Г. Цианобактерии термальных источников Байкальской рифтовой зоны: видовой состав, биоминерализация кремния // Тез. докл.

IV Всероссийской научной школы молодых ученых-палеонтологов, 15окт. 2007. – Москва, 2007. – С. 47-48.

16. Sorokovikova E.G., Belykh O.I., Likhoshway Ye.V. Investigation of cyanobacterial strains isolated from thermal springs of the Baikal Rift Zone:

morphological and molecular approach // IInd International conference "Biosphere origin and evolution", 28 Oct. – 2 Nov., 2007. – Loutraki, Greece, 17. Сороковикова Е.Г., Даниловцева Е.Н., Анненков В.В., Каресоя M., Лихошвай Е.В. Изучение окремнения цианобактерий методами химического анализа и электронной микроскопии // Тез. докл. IV съезда Российского общества биохимиков и молекулярных биологов, 11-15 мая 2008. – Новосибирск, 2008. – С. 484.

18. Сороковикова Е.Г. Цианобактерии термальных источников Байкальской рифтовой зоны: видовой состав, биоминерализация кремния // Тез. докл.

V Всероссийской научной школы молодых ученых-палеонтологов, 6- окт. 2008. – Москва, 2008. – С. 48.



 
Похожие работы:

«Бибикова Татьяна Сергеевна Антропогенные воздействия на водные ресурсы России, Украины и Белоруссии в постсоветский период Специальность: 25.00.27 – гидрология суши, водные ресурсы, гидрохимия Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата географических наук Москва 2007 Работа выполнена в лаборатории гидрологии Института географии РАН Научный руководитель доктор географических наук, профессор Коронкевич Николай Иванович Официальные оппоненты доктор...»

«Сорокина Елена Серафимовна ОНТОГЕНИЯ И КАЧЕСТВО ЮВЕЛИРНОГО РУБИНА МЕСТОРОЖДЕНИЙ ЦЕНТРАЛЬНОЙ И ЮГО-ВОСТОЧНОЙ АЗИИ Специальность 25.00.05 – минералогия, кристаллография Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата геолого-минералогических наук Москва – 2011 г. Работа выполнена во Всероссийском научно-исследовательском институте минерального сырья им. Н.М. Федоровского (ФГУП ВИМС) Научный руководитель : доктор геолого-минералогических наук Ожогина Елена...»

«Тумуреева Наталья Николаевна ГЕОЭКОЛОГИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ ТУРИСТСКОРЕКРЕАЦИОННЫХ РЕСУРСОВ ВОСТОЧНОГО ПОБЕРЕЖЬЯ ОЗЕРА БАЙКАЛ Специальность 25.00.36. - геоэкология (географические наук и) Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата географических наук Улан-Удэ - 2007 Работа выполнена в Восточно-Сибирском государственном технологическом университете Научный руководитель : доктор географических наук, профессор Иметхенов Анатолий Борисович Официальные оппоненты :...»

«Белохин Василий Сергеевич О БР А БО Т К А Г А М М А -С П Е К Т РО В Я Д ЕР Н Ы Х М ЕТ О Д О В К А Р О Т А ЖА Специальность 25.00.10- Геофизика, геофизические методы поисков полезных ископаемых АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата физико-математических наук Москва – 2010 Работа выполнена на кафедре геологии и геохимии горючих ископаемых геологического факультета Московского государственного университета им. М.В. Ломоносова Кандидат технических наук,...»

«Аверкиев Александр Сергеевич Закономерности реакции верхнего слоя в промысловых и прибрежных районах морей России на атмосферное воздействие Специальность 25.00.28 – океанология Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора географических наук Санкт-Петербург 2013 Работа выполнена в Российском государственном гидрометеорологическом университете Официальные оппоненты : Родин Александр Васильевич, доктор географических наук, советник генерального директора, ООО...»

«ЕМЕЛЬЯНОВА Ирина Андреевна ПРОГНОЗ ИЗМЕНЕНИЯ ИНЖЕНЕРНО-ГЕОЛОГИЧЕСКИХ УСЛОВИЙ ГОРОДСКОЙ ИНФРАСТРУКТУРЫ В КРИОГЕННОЙ ЗОНЕ ЗАПАДНОЙ СИБИРИ (НА ПРИМЕРЕ Г. НАДЫМ) Специальность 25.00.08 – Инженерная геология, мерзлотоведение и грунтоведение АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата геолого-минералогических наук Екатеринбург – 2010 Работа выполнена на кафедре гидрогеологии, инженерной геологии и геоэкологии ГОУ ВПО Уральский государственный горный университет...»

«БОГОМОЛОВ Леонид Михайлович ОТКЛИКИ ЭМИССИОННЫХ СИГНАЛОВ ГЕОСРЕДЫ НА ВОЗДЕЙСТВИЯ ЭЛЕКТРОМАГНИТНЫХ ПОЛЕЙ И ВИБРАЦИЙ Специальность 25.00.10Геофизика, геофизические методы поисков полезных ископаемых АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора физико-математических наук Москва - 2012 Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении науки Институт морской геологии и геофизики Дальневосточного отделения РАН и Федеральном государственном бюджетном...»

«Храмченкова Резида Хавиловна Физико-структурные характеристики почвы и их влияние на энерго-массообмен между почвой и нижней атмосферой 25.00.29 – Физика атмосферы и гидросферы Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата физико-математических наук Казань – 2006 Работа выполнена в Научно-исследовательском институте математики и механики им. Н. Г. Чеботарева Казанского государственного университета Научный руководитель : доктор физико-математических наук,...»

«0У УДК 330.1+913 а Андреевских Павел Александрович ТЕРРИТОРИАЛЬНО-ОТРАСЛЕВЫЕ СДВИГИ В ПРОМЫШЛЕННОСТИ ПОСТИНДУСТРИАЛЬНОЙ ВЕЛИКОБРИТАНИИ Специальность 25.00.24 – экономическая, социальная, политическая и рекреационная география АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата географических наук Санкт-Петербург 2014 Работа выполнена на кафедре экономической географии федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального...»

«Митрофанова Анна Владимировна РЕГИОНАЛЬНЫЙ ТУРИСТСКИЙ КЛАСТЕР КАК ФОРМА ПРОСТРАНСТВЕННОЙ ОРГАНИЗАЦИИ ТУРИЗМА (НА ПРИМЕРЕ КАЛИНИНГРАДСКОЙ ОБЛАСТИ) Специальность 25.00.24 – экономическая, социальная, политическая и рекреационная география АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата географических наук Калининград 2010 Работа выполнена на кафедре социально-экономической географии и геополитики в ФГОУ ВПО Российский государственный университет имени Иммануила...»

«ЯСАКОВА Ольга Николаевна ФИТОПЛАНКТОН СЕВЕРО-ВОСТОЧНОЙ ЧАСТИ ЧЕРНОГО МОРЯ 25.00.28 – океанология Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Мурманск 2013 1 Работа выполнена в Южном Научном Центре РАН и Институте аридных зон ЮНЦ РАН Научный руководитель : Макаревич Павел Робертович доктор биологических наук, профессор Мурманский морской биологический институт КНЦ РАН Официальные оппоненты : Кренева Софья Викторовна доктор биологических...»

«ПЕРОВ АЛЕКСАНДР ЮРЬЕВИЧ МОНИТОРИНГ И ОЦЕНКА ЭКОЛОГИЧЕСКОГО СОСТОЯНИЯ АГРОЛАНДШАФТОВ БАЙРАЧНЫХ ЛЕСОСТЕПЕЙ СТАВРОПОЛЬСКОЙ ВОЗВЫШЕННОСТИ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ГЕОИНФОРМАЦИОННЫХ ТЕХНОЛОГИЙ 25.00.26 – землеустройство, кадастр и мониторинг земель АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата географических наук Москва – 2014 Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования Ставропольский...»

«МАРИНИН Михаил Анатольевич ОПРЕДЕЛЕНИЕ ПАРАМЕТРОВ ОТВАЛОВ НА ГОРНОТЕХНИЧЕСКОМ ЭТАПЕ РЕКУЛЬТИВАЦИИ ПРИ ПРОЕКТИРОВАНИИ ОТКРЫТОЙ РАЗРАБОТКИ КРУТОПАДАЮЩИХ РУДНЫХ МЕСТОРОЖДЕНИЙ Специальность 25.00.21 – Теоретические основы проектирования горнотехнических систем Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата технических наук Санкт-Петербург – 2014 Работа выполнена в федеральном государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования...»

«ВИВЧАР АНТОН НИКОЛАЕВИЧ ВЛИЯНИЕ СНЕЖНЫХ ЛАВИН НА РЕКРЕАЦИОННОЕ ОСВОЕНИЕ БАССЕЙНА РЕКИ МЗЫМТА (ЗАПАДНЫЙ КАВКАЗ) Специальность 25.00.31 гляциология и криология Земли Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата географических наук МОСКВА 2011 Работа выполнена на кафедре криолитологии и гляциологии Географического факультета Московского государственного университета имени М.В. Ломоносова Научный руководитель : кандидат географических наук, доцент Наталья...»

«УДК 622.272 СЕМЕНОВ Юрий Михайлович ОБОСНОВАНИЕ ПАРАМЕТРОВ ПОДЗЕМНОЙ ГЕОТЕХНОЛОГИИ НАКЛОННЫХ ЗОЛОТОРУДНЫХ ЖИЛ В КРИОЛИТОЗОНЕ (на примере Ирокиндинского месторождения) Специальность: 25.00.22 – Геотехнология (подземная, открытая, строительная) Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата технических наук Иркутск - 2010 Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования Иркутский государственный технический...»

«УДК: 550.42 ДАВЫДОЧКИНА АЛЕНА ВАЛЕРЬЕВНА МОНИТОРИНГ ТРИТИЯ В ЭКОСИСТЕМАХ СЕВЕРО-ЗАПАДА РОССИИ Специальность: 25.00.36. – геоэкология (наук и о Земле) АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата географических наук Санкт-Петербург 2014 2 Работа выполнена на кафедре геологии и геоэкологии федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования Российский государственный педагогический университет имени А. И....»

«БЫХОВЕЦ Сергей Станиславович ПОЧВЕННО–КЛИМАТИЧЕСКИЕ СЦЕНАРИИ В МОДЕЛЯХ КРУГОВОРОТА УГЛЕРОДА И АЗОТА В ЛЕСНЫХ ЭКОСИСТЕМАХ УМЕРЕННОГО ПОЯСА Специальность 25.00.30 – Метеорология, климатология, агрометеорология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата географических наук Москва 2009 2 Работа выполнена в Учреждении Российской Академии наук Институте физико-химических и...»

«САМБУУ ГАНТОМОР ГЕОЭКОЛОГИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА УРБАНИЗИРОВАННОЙ ТЕРРИТОРИИ НА ОСНОВЕ ЛАНДШАФТНО-ГЕОХИМИЧЕСКОГО ПОДХОДА (на примере г. Улан-Батора) 25.00.36 – геоэкология (наук и о Земле) Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата географических наук Хабаровск – 2013 Работа выполнена на кафедре обогащения полезных ископаемых и инженерной экологии Института недропользования ФГБОУ ВПО Иркутский государственный технический университет Научный руководитель доктор...»

«БЕЛОБОРОДОВ Анатолий Владимирович СОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ МЕТОДИКИ ПРОЕКТИРОВАНИЯ ЗАПОРНОЙ АРМАТУРЫ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ЧИСЛЕННЫХ МЕТОДОВ Специальность 25.00.19 – Строительство и эксплуатация нефтегазопроводов, баз и хранилищ АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата технических наук Тюмень – 2005 Работа выполнена на кафедре Машины и оборудование нефтяной и газовой промышленности Тюменского государственного нефтегазового университета. Научный руководитель :...»

«БОНДАРЬ Елена Дмитриевна ИССЛЕДОВАНИЕ ПОЛЯРИЗАЦИОННОГО ДЖЕТА В СУБАВРОРАЛЬНОЙ ИОНОСФЕРЕ ЕВРАЗИИ 25.00.29 – Физика атмосферы и гидросферы АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата физико-математических наук Якутск – 2011 Работа выполнена в Институте космофизических исследований и аэрономии им. Ю.Г.Шафера Сибирского отделения Российской академии наук Научный руководитель : доктор физико-математических наук, профессор Голиков Иннокентий Алексеевич...»






 
© 2013 www.diss.seluk.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Авторефераты, Диссертации, Монографии, Методички, учебные программы»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.