WWW.DISS.SELUK.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА
(Авторефераты, диссертации, методички, учебные программы, монографии)

 

Pages:   || 2 |

«МЕЖКЛЕТОЧНЫЕ ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ В МОЗГЕ ЧЕЛОВЕКА ПРИ ШИЗОФРЕНИИ (УЛЬТРАСТРУКТУРНО-МОРФОМЕТРИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ) ...»

-- [ Страница 1 ] --

На правах рукописи

Коломеец Наталья Степановна

МЕЖКЛЕТОЧНЫЕ ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ В МОЗГЕ ЧЕЛОВЕКА ПРИ ШИЗОФРЕНИИ

(УЛЬТРАСТРУКТУРНО-МОРФОМЕТРИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ)

03.03.04 - клеточная биология, цитология, гистология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

Москва – 2010 г.

Работа выполнена в Учреждении Российской академии медицинских наук Научный центр психического здоровья РАМН.

Научный консультант:

Уранова Наталия Александровна доктор медицинских наук

Официальные оппоненты:

академик РАМН, профессор, Боголепов Николай Николаевич доктор медицинских наук академик РАМН, профессор, Акмаев Ильдар Ганиевич доктор биологических наук Дубовая Татьяна Клеониковна член-корр. РАЕН, профессор, доктор медицинских наук Учреждение Российской академии наук

Ведущая организация:

Институт высшей нервной деятельности и нейрофизиологии РАН

Защита диссертации состоится «---» --------------- 2010 г. в ------- часов на заседании диссертационного совета Д 212.203.08 при ГОУ ВПО «Российский университет дружбы народов» по адресу 117198 ГСП, г. Москва, ул. Миклухо-Маклая, д.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Российского университета дружбы народов по адресу 117198 ГСП, г. Москва, ул. Миклухо-Маклая, д.

Автореферат разослан « » --------------2010 г.

Ученый секретарь специализированного совета кандидат биологических наук Саврова Ольга Борисовна

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Шизофрения является одной из основных проблем современной психиатрии, имеющей существенное социально-экономическое значение, поскольку ею страдает около 1% популяции (Жариков Н.М., 1972; Тиганов А.С., 1999). По прогнозу ВОЗ, к 2020 г. шизофрения может выйти на пятое место среди болезней, вызывающих потерю трудоспособности.

Несмотря на длительный период изучения шизофрении, в настоящее время отсутствует единая точка зрения в отношении этиологии и патогенеза этого тяжелого психического заболевания.


К средине прошлого века на основании результатов качественных нейроморфологических исследований сложились представления о том, что для шизофрении характерна особая «стертая» картина дистрофического процесса с очаговыми выпадениями нейронов коры в сочетании с ареактивностью глии (Александровская М.М., 1939; Снесарев П.Е., 1950; Гиляровский В.А., 1955; ЛевковичСоколова А.П., 1958). Современный этап исследований шизофрении характеризуется появлением объективных стереологических методов морфометрических исследований в нейроморфологии, а также внедрением в практику клинических исследований чувствительных методов прижизненной структурной (компьютерная, магнито-резонансная и диффузионно-тензорная томография) и функциональной (позитронно-эмиссионная томография, магнито-резонансная спектроскопия) визуализации мозга. Применение стереологической морфометрии позволило установить, что дефицит нейронов в мозге не является характерной особенностью этого заболевания. Отсутствие астро- и микроглиоза в мозге также рассматривается большинством авторов как свидетельство отсутствия дегенеративного процесса в мозге при шизофрении (Harrison P., 1999, 2004; Weinberger D., McClure R., 2002). Но что за патологический процесс лежит в основе этого заболевания остается неясным.

В настоящее время на первый план вышла гипотеза, согласно которой в основе патогенеза шизофрении лежат нарушения межнейрональных синаптических связей, определяемые гиперфункцией дофаминергических нейронов среднего мозга (в том числе черной субстанции), а также снижением активности глутамат-зависимого проведения нервных импульсов. Наиболее четко это представлено в концепции A. Carlsson (2000, дофаминергической и глутаматергической нейронных систем мозга на уровне базальных ганглиев мозга.

Синаптическая гипотеза находит косвенные подтверждения в результатах прижизненных и нейроморфологических исследований мозга больных шизофренией. Были установлены как нарушения микроструктурной организации миелиновых трактов и пучков, связывающих различные отделы мозга пациентов по данным диффузионно-тензорной томографии (Kuroki N. et al., 2006; Nestor P. et al., 2007), так и изменения корреляционных взаимосвязей между активацией ряда структур головного мозга при шизофрении по данным позитронно-эмиссионной томографии и магнито-резонансной спектроскопии (Suzuki M. et al., 2005; Goodrich-Hunsaker N. et al., 2005).

Важным результатом нейроморфологических исследований являются данные об уменьшении размеров нейронов и/или редукции их дендритного дерева, которое является основным рецептивным полем нейрона, в различных областях мозга (Kalus P. еt al., 2000;

Rosoklija G. et al., 2000). Многие авторы расценивают эти изменения как нарушение развития мозга (Cotter D., Pariante C., 2002; Arnold S. et al., 2005). Исследования, проведенные с использованием методов гистохимии, авторадиографии и гибридизации in situ позволили выявить нарушения плотности глутаматергических и дофаминергических аксонов, а также нарушения экспрессии различных синаптических маркеров и связывания рецепторов медиаторов в областях коры и гиппокампе при шизофрении (Benes F., 2000;





Lewis D.A., Gonzlez-Burgos G., 2008). Выявленные изменения затрагивают, по крайней мере, три нейротрансмиттерные системы: дофаминергическую, глутаматергическую и ГАМК (-амино-маслянная кислота) - ергическую, и касаются как внутренних ассоциативных связей, так и путей, связывающих различные структуры мозга. Однако полученные в этом направлении результаты не позволяют заключить, связаны ли выявляемые нарушения с изменениями собственно синаптических контактов.

Большое значение для подтверждения основных положений синаптической гипотезы имеют исследования ультраструктуры и числа синаптических контактов в указанных областях мозга. Однако такие исследования немногочисленны и касаются в основном таких ключевых структур синаптической гипотезы патогенеза шизофрении, как префронтальная кора и полосатое тело, поэтому многие вопросы остаются нерешенными.

До сих пор не получено подтверждения гиперфункции дофаминергических нейронов среднего мозга, изначально постулировавшейся синаптической гипотезой шизофрении. A. Carlsson (2000) выдвинул предположение, что для шизофрении характерно нарушение регуляции активности дофаминергических нейронов, а не их гиперфункция.

Последнее нашло подтверждение в данных о качественных изменениях при шизофрении ультраструктуры синапсов в черной субстанции, которая является одним из основных источников дофамина в мозге (Уранова Н.А., Левите О.И., 1987). Для выяснения вопроса, приводят ли эти изменения к нарушениям иннервации именно дофаминергических нейронов необходимо использование иммуноцитохимической идентификации постсинаптических мишеней измененных аксонных терминалей с количественной оценкой числа соответствующих синапсов.

Что касается глутаматергической составляющей синаптической гипотезы (особенно в аспекте связи между дофаминергической и глутаматергической системами), в этом отношении большой интерес представляет гиппокамп, который осуществляет обработку и интеграцию информации, поступающей от ассоциативных зон коры всех сенсорных представительств (Vinogradova O., 2004). Имеются как клинические, так и экспериментальные свидетельства влияния повреждения нейронов гиппокампа на активность дофаминергических нейронов среднего мозга (Csernansky I., Bardgett M., 1998;

Lodge D., Grace A., 2007). Показаны также прижизненные нарушения кортикогиппокампальных взаимодействий при шизофрении (Goodrich-Hunsaker N. et al., 2005;

Suzuki M., 2005).

По данным позитронно-эмиссионной томографии дисфункция гиппокампа при шизофрении положительно коррелирует преимущественно с тяжестью позитивной (бред, галлюцинации и т.п.), а не негативной симптоматики (эмоциональная дефицитарность, расстройства мышления и др.) (Tamminga C.A. et al., 1992; Lahti A.C. et al., 2006).

Подавление активации гиппокампа связано также с когнитивными расстройствами у пациентов, такими, как нарушения вербальной памяти и внимания, которые авторы связывают с проявлениями психоза (Goldberg T.E. et al., 1994; Heckers S. et al., 1998).

По данным магнито-резонансной спектроскопии в основе дисфункции гиппокампа при шизофрении лежат нарушения глутаматергической нейромедиации (Maier М. et al., 2000;

Blasi G. et al., 2004). Результаты исследований рецепторов глутамата и синаптических маркеров в аутопсийном мозге указывают на преимущественное поражение поля СА гиппокампа (Eastwood S.et al., 1995a,b; Harrison P.. et al., 2003). Гигантские глутаматергические синаптические контакты, образуемые мшистыми волокнами на шипиках пирамидных нейронов поля СА3, играют ведущую роль в экспрессии когнитивных функций у человека и животных (Kesner R. et al., 2004; Vinogradova O., 2004) и являются важным звеном афферентного пути, осуществляющего кортико гиппокампальные взаимодействия (Замбржицкий И.А., 1972; Vertes R., 2006). Эти синапсы обладают уникальной ультраструктурой и могут быть легко идентифицированы без дополнительных маркеров (Amaral D., Dent J., 1991). Тем не менее, ультраструктура и число синаптических контактов в гиппокампе при шизофрении до настоящего времени практически не изучены.

В рамках вопроса о состоянии межнейрональных синаптических связей при шизофрении большое место занимает патология глиальных клеток и нарушения глионейрональных и глио-глиальных взаимодействий. Это связано с появлением в последние годы целого ряда новых данных. Во-первых, установлено, что глиальные клетки непосредственно участвуют в передаче нервных импульсов, при этом астроциты являются полноценным участником глутаматергической нейромедиации (Ventura R., Harris K., 1999;

Haydon P., Carmignoto G., 2006), а олигодендроциты, как известно, образуют миелиновые оболочки аксонов, регулирующие скорость проведения нервных импульсов (Fields D.R., 2005). Во-вторых, астроциты, олигодендроглия и микроглия участвуют в поддержании адекватной цито-, миело и синаптоархитектоники мозга (Cuadros M.A., Navascues, 1998;

Streit, 2002). В-третьих, глиальные клетки осуществляют энергетическую и трофическую поддержку нейронов, а также экспрессируют специфические факторы, от которых зависят размеры и архитектура дендритного дерева нейронов (Dai X., et al., 2003; Foster R. et al., 2006). Наконец, микроглия и астроциты являются иммунокомпетентными клетками мозга, они экспрессируют широкий спектр цитокинов и трофических факторов, посредством которых глиальные клетки взаимодействуют между собой, а также с нейронами и их отростками (Lehnardt S. et al., 2002; Sloane J.A., 1999, 2003; Hinman J.D. et al., 2004).

При шизофрении по последним данным речь идет о дисфункции глии. При этом в такой глутаматергической структуре как гиппокамп изменения обнаруживаются наиболее часто и касаются всех видов глиальных клеток. Показаны нарушения экспрессии и активности ферментов обмена глутамата в астроцитах гиппокампа, которые по некоторым данным прогрессируют в течении заболевания (Steffek A. et al., 2006; Bendikov I., 2007).

Получены данные о нарушениях при шизофрении экспрессии целого ряда миелин- и олигодендроцит-связанных генов в мозге, при этом гиппокамп является областью с наибольшей выраженностью таких изменений (Dracheva S. et al., 2006). Появление новых маркеров микроглиальных клеток для позитронно-эмиссионной томографии позволило установить, что для шизофрении характерна активация микроглии в мозге (van Berckel et al., 2008), наиболее выраженная в гиппокампе (Doorduin J. et al., 2009).

В связи с этим в настоящее время изменения глии при шизофрении стали привлекать к себе и повышенное внимание нейроморфологов. Особенно это касается олигодендроглии, что связано с многократно показанными в прижизненных исследованиях нарушениями структуры миелинизированных трактов мозга у пациентов. Был установлен дефицит олигодендроцитов в сером и белом веществе ряда областей мозга (Востриков В.М. и др., 2004; Byne W. et al., 2006), который, по последним данным, характерен и для гиппокампа (Schmitt A. et al., 2009). В префронтальной коре обнаруженный дефицит олигодендроцитов сочетается с выраженными изменениями их ультраструктуры (Uranova N.A. et al., 2001).

Но в гиппокампе эти клетки исследованы недостаточно, особенно в плане возможных изменений аксо-глиальных взаимодействий и структуры миелинизированных аксонов.

Интерес к микроглии обусловлен данными об активации этих иммунокомпетентных клеток в мозге пациентов, а также полученными доказательствами важной роли иммунных нарушений в патогенезе шизофрении. Принято считать, что микроглиоз не характерен для шизофрении, однако в последние годы существенно расширились представления о разнообразии морфологических форм микроглии, а также о связи их морфологии с особенностями функционального статуса. Описаны (в том числе в мозге человека) новые морфологические формы активированной микроглии - палочковидные («rod») и круглые, которые характеризуются определенными особенностями взаимодействия с нервными клетками ( Wierzba-Bobrowicz T., et al., 2004; Xue Q.-S. et al., 2007). Эти новые аспекты реактивности микроглии при шизофрении еще не изучались.

Исследования глии и в особенности межклеточных взаимодействий требуют электронномикроскопического подхода, однако до сих пор имеются только единичные описания изменения ультраструктуры глии. Эти ранние работы, выполненные на небольшом количестве случаев, проводились без использования количественных методов, что лишает их необходимой доказательности (Глезер И.И., Сухорукова Л.И., 1966;

Сухорукова Л.И., 1966). Тем не менее, авторы считают, что при шизофрении изменены все типы глиальных клеток и тяжесть этих изменений заметно больше при прогредиентном течении заболевания.

Приведенные данные позволяют выдвинуть в качестве актуальной задачи при выяснении патогенеза шизофрении исследование на ультраструктурном уровне особенностей межнейрональных, глио-нейрональных и глио-глиальных взаимодействий в мозге при этом заболевании. Возможности для решения такой задачи дает электронномикроскопический метод в сочетании с иммуноцитохимическими и количественными стереологическими подходами, что позволит одновременно идентифицировать синаптические контакты, различные типы глиальных клеток, нейроны и их отростки и комплексно охарактеризовать особенности межклеточных взаимодействий.

Учитывая клиническую гетерогенность шизофрении для выяснения роли нарушений межклеточных взаимодействий в формировании патологии мозга при шизофрении необходимо проведение клинико-морфологического анализа.

Цель исследования. Выявить изменения ультраструктуры и числа межнейрональных синаптических связей в структурах дофаминергической (черная субстанция) и глутаматергической (гиппокамп) систем мозга, а также изучить особенности глионейрональных и глио-глиальных взаимоотношений в гиппокампе при шизофрении и оценить возможную связь изменений межклеточных взаимодействий с клиническими особенностями шизофрении.

Задачи исследования.

1. Изучить качественные и количественные характеристики ультраструктуры, а также число синаптических контактов на дендритах тирозингидроксилаза – иммунопозитивных дофаминергических нейронов черной субстанции в норме и при шизофрении.

2. Провести качественное и количественное исследование ультраструктуры синаптических контактов между аксонами гранулярных нейронов зубчатой фасции и шипиками пирамидных нейронов поля СА3 гиппокампа и определить их численную плотность в норме и при шизофрении.

3. Провести качественное исследование ультраструктуры олигодендроцитов, а также качественное и количественное исследование ультраструктуры миелинизированных аксонов в поле СА3 гиппокампа в норме и при шизофрении.

4. Определить качественные и количественные характеристики ультраструктуры астро- и микроглии и оценить их объемную фракцию и численную плотность в поле СА гиппокампа в норме и при шизофрении.

5. Провести анализ возможных взаимосвязей между изменениями ультраструктурных морфометрических параметров миелинизированных аксонов и глиальных клеток в поле СА3 гиппокампа при шизофрении.

6. Провести сопоставление выявленных изменений межнейрональных, глионейрональных и глио-глиальных взаимодействий с клиническими особенностями шизофрении по показателям длительности болезни, возраста пациентов к периоду начала заболевания, типа течения заболевания и преобладанию позитивной или негативной симптоматики шизофрении к моменту смерти.

Научная новизна. В настоящей работе впервые описаны изменения ультраструктуры синаптических контактов и снижение их числа на дендритах иммуноцитохимически идентифицированных дофаминергических нейронов черной субстанции в мозге больных шизофренией, свидетельствующие о нарушении афферентной регуляции активности этих нейронов.

Получены новые данные о снижении численной плотности гигантских глутаматергических синаптических контактов между аксонами гранулярных нейронов зубчатой фасции и гигантскими шипиками пирамидных нейронов поля СА3 гиппокампа.

Показано, что характер изменений ультраструктуры этих синаптических контактов связан с преобладанием позитивной или негативной симптоматики шизофрении: снижение размеров шипиков наблюдалось только в случаях шизофрении с преобладанием позитивной симптоматики заболевания.

ультраструктуры олигодендроцитов в сочетании с нарушением аксо-глиальных взаимодействий и атрофией части миелинизированных аксонов пирамидном слое гиппокампа при шизофрении.

Впервые в мозге человека в норме и при шизофрении на ультраструктурном уровне микроглиальных клеток: рамифицированная, амебоидная, круглая и палочковидная микроглия. Установлено, что при шизофрении происходит сдвиг в количественном составе популяции микроглиальных клеток в сторону преобладания либо амебоидной, либо палочковидной микроглии, и этот сдвиг тесно связан с возрастом манифестации психоза.

При ранней манифестации психоза преобладали микроглиальные клетки амебоидного типа, при начале заболевания в зрелом возрасте – палочковидная микроглия.

Впервые обнаружена тесная связь выраженности атрофии миелинизированных аксонов и патологии олигодендроглии с преобладанием определенных морфологических форм микроглии при шизофрении: для случаев шизофрении с преобладанием палочковидной миелинизированных аксонов.

Впервые выявлены прогрессирующие с течением заболевания дефицит митохондрий и накопление липофусцина в астроцитах гиппокампа при шизофрении. Показано увеличение численной плотности и объемной фракции перинейрональных астроцитов пирамидном слое гиппокампа при шизофрении.

Теоретическая и практическая значимость. Выявленные в работе нарушения ультраструктуры и дефицит синаптических контактов, образованных на дендритах дофаминергических нейронов черной субстанции, являются морфологическим подтверждением существующей гипотезы о том, что нарушения дофаминергической нейромедиации в мозге при шизофрении связаны с нарушением регуляции активности нейронов дофаминовой системы мозга. В клинических исследованиях показана тесная связь мотивационного обучения и проявлениями психоза у пациентов.

Теоретическая значимость данных о дефиците синаптических контактов между мшистыми волокнами зубчатой фасции и шипиками пирамидных нейронов поля СА гиппокампа при шизофрении определяется тем, что эти синапсы играют важную роль в экспрессии гиппокамп-зависимых когнитивных функций и являются существенным звеном афферентного пути, ответственного за кортико-гиппокампальные связи, нарушения которых при шизофрении легли в основу одной из существующих теорий психоза.

Теоретическое значение имеют данные, обосновывающие существенное значение изменений межклеточных глио-нейрональных и глио-глиальных взаимодействий в нарушениях межнейрональных связей при шизофрении. При шизофрении патология олигодендроглии сочеталась с нарушением аксо-глиальных взаимодействий и атрофией части миелинизированных аксонов. Гетерогенность в распределении морфологических форм микроглии при шизофрении проявлялась как преобладание либо амебоидной, либо палочковидной микроглии, при этом только с преобладанием последней связано достоверное увеличение численной плотности атрофичных миелинизированных аксонов и большая выраженность изменений олигодендроглии. Снижение численной плотности глутаматергических синаптических контактов в гиппокампе сочеталось с прогрессирующим в течение болезни дефицитом митохондрий и накоплением липофусцина в астроцитах, непосредственно участвующих в глутаматергической нейромедиации. Увеличение численной плотности и объемной фракции перинейрональных (но не свободных) астроцитов можно расценивать как проявление компенсаторных процессов в гиппокампе при шизофрении, направленных на поддержание функционирования нейрона.

Учитывая клиническую гетерогенность шизофрении, важным результатом исследования является обнаружение связи особенностей выявленных нарушений межклеточных взаимодействий с клиническими характеристиками заболевания: снижение размеров постсинаптических шипиков на дендритах пирамидных нейронов поля СА гиппокампа найдено только в случаях шизофрении с преобладанием позитивных психотических симптомов; преобладание амебоидных или палочковидных микроглиальных клеток и связанная с ним выраженность патологии олигодендроглии и миелинизированных аксонов зависели от возраста манифестации психоза; дефицит митохондрий и накопление липофусцина в астроцитах нарастали в процессе заболевания. Вывяленные клиникоморфологические корреляции являются существенным вкладом в развитие патогенетических представлений, и в дальнейшем могут послужить основой для выработки новых, патогенетически обоснованных терапевтических подходов к лечению заболевания.

Предложенный автором комплексный подход к оценке патологии мозга путем исследования межклеточных взаимодействий с использованием современных стереологических методов морфометрии, иммуноцитохимии и статистических методов для анализа ультраструктуры ткани мозга на достаточно больших площадях срезов, сравнимых с используемыми при светооптических количественных исследованиях (метод оптического диссектора), был внедрен в практику лаборатории клинической нейроморфологии Научного центра психического здоровья РАМН и может быть применен при изучении ткани мозга в экспериментальных и клинико-анатомических исследованиях.

Апробация работы. Основное содержание работы

отражено в 24 научных публикациях, в том числе в 11 статьях. Из них в рецензируемых журналах, рекомендованных ВАК России, опубликовано 10 статей (5 в отечественных и 5 в зарубежных журналах).

межлабораторной конференции НЦПЗ РАМН 29 сентября 2009 года, протокол № 4.

Основные положения работы доложены и обсуждены на 9-ом Всемирном конгрессе по биологической психиатрии (Париж, Франция, 2009), 2-й Всероссийской конференции с международным участием «Современные проблемы биологической психиатрии и наркологии» (Томск, 2008), на Российской конференции «Взаимодействие науки и практики в современной психиатрии» (Москва, 2007), на 8-ом Всемирном конгрессе по биологической психиатрии (Вена, Австрия, 2005), на 13-й Российской конференции по нейроиммунологии (Санкт-Петербург, 2004), на 10-ом зимнем рабочем совещании по шизофрении (Давос, Швейцария, 2000), на 29-ом ежегодном заседании общества нейронаук США (Майами Бич, США, 1999), на 17-й Российской конференции по электронной микроскопии (Москва, Черноголовка, 1998), на международном конгрессе по шизофрении (Колорадо Спрингс, США, 1997), на 8-ом зимнем рабочем совещании по шизофрении (Кранс-Монтана, Швейцария, 1996).

Объем и структура диссертации. Работа изложена на русском языке, состоит из введения, обзора литературы, 7 глав собственных исследований, заключения, выводов, списка цитированной литературы. Диссертация изложена на 296 страницах машинописного текста, включая 52 рисунка и 5 таблиц. Библиография включает 44 наименования работ отечественных и 562 зарубежных авторов.

1. Получены прямые морфологические доказательства гипотезы нарушений межнейрональных связей в мозге при шизофрении: выявлены дефицит синаптических контактов, образованных на дендритах дофаминергических нейронов компактной части черной субстанции, а также гигантских глутаматергических синапсов между аксонами гранулярных нейронов зубчатой фасции и шипиками пирамидных нейронов поля СА гиппокампа.

2. Выявленный при шизофрении дефицит синаптических контактов сопровождался выраженными изменениями ультраструктуры пресинаптических аксонных терминалей (появление аномальных миелиноподобных включений и темная дегенерация части терминалей) в черной субстанции, а также нарушениями ультраструктурной пластичности синапсов в гиппокампе: снижение размеров шипиков не сопровождалось изменениями пресинаптической части синапса, достоверные корреляции между размерами аксонных терминалей и объемной фракцией митохондрий в них выявлены только при шизофрении.

3. Выявленная при шизофрении атрофия части миелинизированных аксонов, связанная с набуханием периаксонального отростка олигодендроцита, свидетельствует о нарушении взаимодействия между олигодендроцитами и аксонами и является важным свидетельством нарушений межнейрональных связей при этом заболевании. Олигодендроциты являются наиболее измененными клетками гиппокампа при шизофрении, для которых характерны выраженные дистрофические и деструктивные изменения ультраструктуры, приводящие к гибели клетки.

4. Микроглия в гиппокампе в норме представлена рамифицированными, амебоидными и круглыми клетками, единичные палочковидные клетки встречаются в отдельных случаях.

Состав микроглиальных клеток изменяется при шизофрении и эти изменения связаны с возрастом больного к периоду манифестации психоза: при раннем начале заболевания преобладает амебоидная микроглия, а в случаях начала заболевания в зрелом возрасте палочковидная микроглия, что может свидетельствовать о разных типах активации этих клеток.

5. Патологические изменения миелинизированных аксонов и олигодендроцитов тесно связаны с реактивностью микроглии:

а) достоверное повышение численной плотности атрофичных миелинизированных аксонов найдено только в случаях с преобладанием микроглии палочковидного типа;

б) олигодендроциты с признаками тяжелых дистрофических изменений чаще встречаются в случаях шизофрении с преобладанием палочковидной микроглии, для них характерны тесные контакты с палочковидной микроглией.

6. При шизофрении выявлены достоверные отрицательные корреляционные связи между длительностью заболевания и объемной фракцией и численной плотностью митохондрий в астроцитах и положительные – между длительностью заболевания и объемной фракцией липофусцина в них, а также достоверное снижение объемной фракции и численной плотности митохондрий в случаях шизофрении с большой длительностью заболевания, что свидетельствует о прогрессирующей дисфункции астроцитов при этом заболевании.

7. Увеличение численной плотности и объемной фракции перинейрональных астроцитов в гиппокампе может быть проявлением защитной компенсаторной реакции в ответ на прогрессирующую функциональную неполноценность астроцитов и патологические процессы, связанные с олигодендроглией, миелинизированными аксонами и микроглией.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Демографическая и клиническая характеристика аутопсийного материала Работа выполнена на образцах мозга (40 случаев шизофрении и 37 случаев без психической патологии) из коллекции лаборатории клинической нейроморфологии Научного центра психического здоровья РАМН. Особенностью использованного аутопсийного материала является короткий постмортальный интервал (в среднем – 6 часов), что обеспечило хорошую сохранность ультраструктуры ткани мозга и позволило провести ультраструктурно-морфометрический анализ. Соответствующие временные границы были определены в специальных исследованиях ранее (Савулев Ю.И., Агафонов В. А., 1977;

Коломеец Н.С. и др., 1982) и согласуются с данными, имеющимися в литературе (Sheleg S.

et al., 2008).

Образцы мозга больных шизофренией были получены в процессе аутопсий, проводившихся в патологоанатомических отделениях Московских психиатрических больниц № 1 и № 15, являющихся клиническими базами центра, а также городской клинической больницы № 55 и судебно-медицинского морга № 2, где был получен контрольный материал.

При подборе образцов учитывалось соответствие между случаями шизофрении и контрольными по длительности постмортального интервала, возрасту и полу, а также отсутствие в анамнезе травм, нейродегенеративных и сосудистых заболеваний мозга.

Данные о возрасте пациентов к периоду начала заболевания, длительности заболевания и нейролептической терапии были получены из историй болезни. Демографические и клинические данные представлены в таблице 1.

Непосредственные причины смерти в основной и контрольной группе были сходными:

преобладали острая сердечно-сосудистая недостаточность, инфаркт миокарда, тромбоэмболия легочной артерии.

Диагностика шизофрении проводилась по МКБ-10. В работу были вовлечены только случаи шизофрении, не вызывающие сомнений в диагностическом отношении (после консультации с сотрудниками НИИ клинической психиатрии НЦПЗ РАМН). В 30 случаях диагностирована параноидная шизофрения. Кроме того, группа включала 2 случая кататонической шизофрении (F20.21); 6 случаев - недифференцированной шизофрении (F20.30 и F20.31); 1 случай – гебефренической формы (F20.10); 1 случай – неуточненной формы шизофрении (F20.98).

ТАБЛИЦА 1. Характеристика основной и контрольной

КОНТРОЛЬ ШИЗОФРЕНИЯ

интервал (часы) заболевания (годы) заболевания (годы) Для целей клинико-морфологического анализа были также выделены клинические признаки, позволившие разделить случаи шизофрении на соответствующие подгруппы, допускающие количественную оценку различий между ними (таблица 2).

ТАБЛИЦА 2. Выделенные для целей клинико-морфологического Возраст пациентов к периоду Длительность течения болезни, Оценка преобладающих симптомов (негативные или позитивные) во время последней госпитализации (к периоду наступления летального исхода) проводилась по шкалам SANS и SAPS (соответственно, Scale for the Assessment of Negative/Positive Symptoms; Andreasen N.C., 1982; Andreasen N.C., Olsen S., 1982).

Кроме того, оценивали интенсивность нейролептической терапии, для чего использовали суммарный хлопромазиновый эквивалент (American Psychiatric Association, 1997).

Кусочки ткани черной субстанции и гиппокампа вырезали из левого полушария мозга, руководствуясь стереологическим атласом мозга человека (Савельев С.В., 1996), а также цитоархитектоническими схемами черной субстанции (Braak H., Braak E., 1986; Gibb W., Lees A., 1991) и гиппокампа (Lorente de No, 1934; Rosene D., Van Hoesen G., 1987).

Все образцы мозга были подвергнуты предварительному нейрогистологическому исследованию срезов, окрашенных по Нисслю, лаксолевым синим, конго красным, которое не выявило признаков существенных травматических или сосудистых повреждений, равно как и признаков нейродегенеративных изменений.

Иммуноцитохимическое выявление дофаминергических нейронов. В качестве маркера дофаминергических нейронов использовали антитела к тирозингидроксилазе ключевому ферменту обмена дофамина. Иммуноцитохимическая реакция на тирозингидроксилазу проводилась ПАП-методом на вибратомных срезах толщиной 30- мкм с использованием мышиных моноклональных антител к тирозингидроксилазе (1-е антитела, разведение 1:200, Boeringer Manheim Biochemica), а также козьей антисыворотки к IgG мыши (2-е антитела, разведение 1:100, Sigma) и мышиного комплекса пероксидазаантипероксидаза (1:500, ПАП, Sigma). Визуализацию связанных первичных антител производили при помощи хромогена диаминобензидин тетрагидрохлорид (ДАБ; 0,01%, Sigma). Затем часть срезов каждой серии монтировали на предметные стекла, покрытые раствором желатины, и заключали в канадский бальзам для световой микроскопии.

тирозингидроксилазы были проведены отдельные серии контрольных опытов, в которых часть срезов обрабатывали в соответствии со стандартным протоколом, однако первые или, соответственно, вторые антитела заменяли соответствующими неиммунными сыворотками или 0.9% раствором NaCl на фосфатном буфере (рН 7,4). Во всех контрольных опытах результаты окрашивания были отрицательными.

Электронно-микроскопический метод. После завершения иммуногистохимической реакции, часть серии срезов черной субстанции заключали в Аралдит (Fluca, Швейцария) на предметных стеклах. Идентифицированные участки компактной части черной субстанции иссекали скальпелем и наклеивали на готовые блоки эпоксидной смолы.

Образцы гиппокампа фиксировали в виде фронтальных срезов толщиной 2-3 мм, после чего из фиксированной ткани иссекали область, содержащую материал СА3 поля гиппокампа и заключали в Аралдит (Fluka, Швейцария). Для выбора участка для ультратонкой резки использовали полутонкие (1 мкм) срезы, окрашенные толуидиновым синим.

Полутонкие и ультратонкие срезы гиппокампа и черной субстанции получали с помощью ультрамикротома Reichert-Jung Ultracut E (Reichert, Австрия). Ультратонкие срезы собирали на медные бленды с подложкой из формвара, окрашивали последовательно растворами уранилацетата и цитрата свинца и исследовали с помощью электронного микроскопа Philips-420 (Philips, Голландия).

Для измерений перечисленных ниже параметров использовали ультратонкие срезы с блоков, содержащих материал черной субстанции или гиппокампа (для каждого случая).

тирозингидроксилаза иммунопозитивных дендритах компактной части черной субстанции методом систематического случайного отбора отбирали и снимали при увеличении 10 500х 25 поперечных срезов тирозингидроксилаза-иммунопозитивных дендритов. Определяли следующие параметры ультраструктуры компактной части черной субстанции в контрольных случаях и при шизофрении: площадь и периметр дендрита, площадь и периметр аксонной терминали, площадь и число митохондрий в аксонной терминали, численная плотность (Na) митохондрий в аксонной терминали, длина постсинаптического уплотнения, число синаптических контактов на дендрит. Учитывая вариабельность диаметра и плоскости поперечных срезов дендритов, число синаптических контактов на дендрит выражали как число синапсов на единицу периметра дендрита.

Все измерения проводили с помощью системы полуавтоматического анализа изображения «MOP-videoplan» фирмы «Kontron» (Германия) на негативах. Изображение на негативе с помощью телекамеры передавалось на монитор системы, с помощью которого осуществлялся контроль над процессом обводки измеряемых объектов.

Для исследования ультраструктуры синаптических контактов, образованных аксонными терминалями мшистых волокон (ТМВ) гранулярных клеток зубчатой фасции на шипиках пирамидных нейронов поля СА3 гиппокампа (ТМВ-синапсы) получали микрофотографии 30 случайно выбранных ТМВ-синапсов при увеличении 6 350х.

Определяли следующие параметры синаптических контактов: площадь аксонных терминалей мшистых волокон (ТМВ) гранулярных нейронов зубчатой фасции, площадь и число головок инвагинированных в ТМВ шипиков пирамидных нейронов поля СА3, площадь и число митохондрий на ТМВ, объемная фракция (Vv) шипиков на ТМВ, Vv и численная плотность (Na) митохондрий на ТМВ, число синаптических контактов в единице объема (Nv) ТМВ.

Для определения численной плотности ТМВ - синапсов в единице объема индивидуальной ТМВ, использовали стереологический метод двойного физического диссектора (Hovard, Reed, 1998; Mandarim-de-Lacerda 2003). Подсчет проводили на серии последовательных ультратонких срезов stratum lucidum из 10-16 последовательных микрофографий для каждого из 15-25 ТМВ-синапсов. Определение числа синаптических контактов осуществляли в соответствии с принятыми правилами подсчета (Hovard, Reed, 1998; Mandarim-de-Lacerda 2003).

Объемную плотность синаптических контактов рассчитывали по формуле:

где N - общее число синапсов на диссектор, V синапсов – общий объем диссектора.

Общий объем диссектора (V син) подсчитывали по принципу Cavalieri:

где n(syn) – число точек, покрывающих ТМВ на каждом срезе, a/p - площадь, ассоциированная с каждой точкой сетки, T – толщина срезов. Толщину срезов определяли при помощи метода малых складок на срезе (Geinisman Y. et al., 1996).

Для исследования численной плотности миелинизированных аксонов снимали систематическим случайным образом по 72 участков нейропиля пирамидного слоя поля СА3 гиппокампа при увеличении 3 800х, общая площадь анализа составила для одного случая. Определяли общую численную плотность миелинизированных аксонов в пирамидном слое гиппокампа, а также Na и пропорцию миелинизированных аксонов с различными патологическими изменениями миелиновых оболочек и аксонов, которую вычисляли как частное от деления Na миелинизированных аксонов соответствующего типа к Na миелинизированных аксонов в целом и выражали в процентах.

Определяли следующие параметры ультраструктуры и числа глиальных клеток:

- для астроцитов: площадь астроцитов, их цитоплазмы и ядер, Vv и Na митохондрий и Vv липофусциновых гранул в астроцитах, а также Vv и Na свободных и перинейрональных астроцитов в пирамидном слое;

- для микроглии: площадь микроглиальных клеток, их цитоплазмы и ядер, ядерноцитоплазматическое соотношение, Vv и Na микроглии в нейропиле пирамидного слоя.

Для оценки объемной фракции и численной плотности глиальных клеток в пирамидном слое гиппокампа общая площадь анализа составляла в среднем 200x103 ± 57.2x10 мкм на случай и была сравнима с используемой для светооптических исследований (Highley J. et al., 2003; метод оптического диссектора). Учитывая, что объем поля СА3 в мозге человека составляет около 60мм3, как было показано в стереологическом исследовании с использованием метода Кавалери (Walker M.A. et al., 2002), это обеспечило достаточную точность измерений (коэффициент ошибки составлял 0.05-0.17 для Vv и Na астроцитов; 0.13 – 0.15 для микроглии). Полученные нами величины численной плотности астроцитов и микроглии в гиппокампе были сравнимы с имеющимися в литературе данными, полученными при светооптических исследованиях (Damadzic R. et al., 2001;

Steiner J. et al., 2006b).

микрофотографии 40-50 клеток, в ядрах которых присутствовали ядрышки. Смысл этого критерия отбора заключается в относительной стандартизации уровня прохождения среза через такие крупные клетки, как астроциты, и уменьшении разбросов средних значений.

микрофотографии 25-30 клеток.

Все площади измеряли на негативах, снятых при соответствующих каждому объекту увеличениях, и увеличенных затем с помощью фотоувеличителя «Minolta» в 8 раз. На негативы накладывали тестовые сетки для двумерных подсчетов (Hovard, Reed, 1998;

Mandarim-de-Lacerda 2003). Шаг сетки подбирали в соответствии с размерами измеряемого индивидуальный профиль (ТМВ, клетки, органеллы) на площадь, ассоциированную с каждой точкой, и выражали в мкм (Gundersen et al., 1988; Hovard, Reed, 1998). На основании полученных данных вычисляли объемную фракцию объекта.

Статистический анализ данных проводили с использованием пакета «Статистика 6.0». При соблюдении условий нормальности распределения (критерий КолмогороваСмирнова) и гомогенности дисперсий (Levene-тест) применяли дисперсионный ковариационный анализ (двухфакторный ANCOVA) с диагнозом и полом в качестве независимых переменных и возрастом и постмортальным интервалом в качестве ковариат, а также дисперсионный анализ (ANOVA) с последующим “post-hoc” тестом (критерий Данкана). При использовании дисперсионного анализа для малых выборок (ТМВ-синапсы) применяли анализ мощности. Групповые коэффициенты ошибки вычисляли для каждой из групп сравнения для определения точности оценки среднего.

В случае несоблюдения условий нормальности распределения и гомогенности дисперсий для сравнения параметров использовали непараметрические методы: ANOVA Краскала-Уоллиса и U тест Манна-Уитни. Корреляционный анализ применяли для выявления взаимосвязей между исследованными параметрами. Корреляционный и регрессионный анализ использовали также для выявления связи исследованных параметров с возрастом, постмортальным интервалом, продолжительностью заболевания, интенсивностью нейролептической терапии. Статистические гипотезы проверяли при уровне значимости p = 0,01.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Исследования ультраструктуры и числа синапсов, а также ультраструктуры глиальных клеток и миелинизированных аксонов серого вещества при шизофрении требуют применения количественных методов, однако до сих пор такие исследования немногочисленны и касаются избранных областей мозга, таких как префронтальная кора и полосатое тело. Во многом это объясняется ограниченными возможностями в получении материала, пригодного для количественного ультраструктурного анализа. Коллекция образцов аутопсийного мозга лаборатории клинической нейроморфологии НЦПЗ РАМН (более 200 случаев), обработанных для электронной микроскопии, является одной из немногих в мире и отличается коротким постмортальным интервалом (в среднем 6 часов).

Для материала коллекции характерна хорошая сохранность ультраструктуры нейронов и нейропиля, которые, как известно особенно чувствительны к процессам посмертных изменений мозга. По данным литературы изменения ультраструктуры ткани мозга минимальны в течение 6 часов после наступления смерти (Лушников Е.Ф., Шапиро Н.А., 1974; Савулев Ю.И., Агафонов В. А., 1977; Sheleg S. et al., 2008). Материал коллекции также позволяет осуществить адекватный подбор случаев психических заболеваний и контрольных по возрасту и полу. По каждому случаю шизофрении собраны и запротоколированы клинические и патологоанатомические данные, а также информация о нейролептических препаратах, которые получал больной, что позволило при проведении статистического анализа вводить такие показатели, как возраст, пол, длительность постмортального интервала и хлорпромазиновый эквивалент для случаев шизофрении в качестве переменных в корреляционный и/или регрессионный анализ. Эти параметры использовали также в качестве независимых переменных или ковариат в 2-факторном ANCOVA. Ни для одного из исследованных параметров не выявлено влияния перечисленных факторов, единственным исключением является влияние возраста на параметры ультраструктуры астроцитов, которое будет описано в соответствующем разделе.

тирозингидроксилазе [ТГ]) дофаминергических нейронов позволило установить, что число синапсов, образованных на их дендритах в компактной части черной субстанции, достоверно снижено (р 0.001) при шизофрении по сравнению с контролем (рис.1). Анализ выраженные патологические изменения аксонных терминалей.

дофаминергических нейронов, как в контрольных случаях, так и в случаях шизофрении представлены тремя разновидностями. Для аксонных терминалей 1-го типа (диаметр 0,5 мкм) характерны круглые и овальные прозрачные синаптические пузырьки, одна- две митохондрии и синаптическая специализация асимметричного типа. Более крупные митохондрий и наличием единичных крупных гранулярных пузырьков. Относительно редко встречались аксонные терминали 3-го типа (диаметр 1.5-2.0 мкм), заполненные мелкими N синапсов/перим етр дендрита полиморфными синаптическими пузырьками, и содержащие многочисленные крупные гранулярные пузырьки и 1-2 митохондрии. Описанные терминали 2-го и 3-го типа образуют на дофаминергических дендритах черной субстанции преимущественно асимметричные синаптические контакты, симметричные синапсы встречались редко. Выявленные нами особенности синаптических контактов, образованных на дендритах дофаминергических нейронов черной субстанции соответствуют имеющимся в литературе описаниям таких синапсов в мозге приматов (Smith Y. et al., 1996).

К наиболее частым изменениям ультраструктуры аксонных терминалей при шизофрении относится появление в них включений в виде концентрических мембранных структур. В результате аксонная терминаль отделяется от дендрита несколькими слоями мембран, а синаптические пузырьки часто оказываются заключенными внутри концентрических мембран такого включения. Аксонные терминали с описанными изменениями ультраструктуры образуют синапсы преимущественно на дендритах дофаминергических нейронов. Механизм образования мембранных включений не ясен, однако к аксонным терминалям с такими включениями часто прилежат тонкие профили, напоминающие мелкие уплощенные астроцитарные отростки и внедряющиеся в терминаль.

Другой характерной особенностью синаптических контактов в случаях шизофрении было наличие терминалей, которые отличались небольшими размерами, неправильной формой и повышенной электронной плотностью матрикса аксоплазмы, в результате чего плотноупакованные синаптические пузырьки становились плохо различимыми. Такие темные аксонные терминали образуют контакты и на иммунонегативных дендритах. При максимальной выраженности изменений их ультраструктура соответствует темной дегенерации.

Таким образом, выраженные нарушения ультраструктуры аксонных терминалей в компактной части черной субстанции при шизофрении характерны преимущественно для синаптических контактов, образованных на дендритах ТГ-иммунопозитивных нейронов.

При шизофрении наблюдается достоверное снижение числа синаптических контактов на дендритах дофаминергических нейронов компактной черной субстанции.

Значение выявленных нарушений межнейрональных связей в черной субстанции при шизофрении определяется тем, что адекватная афферентация дофаминергических нейронов черной субстанции играет решающую роль в экспрессии электрической активности фазического типа этих нейронов, существенной для организации мотивационного обучения и целенаправленного поведения индивидуума (Berridge K., 2007). Взаимосвязь между нарушениями оценки мотивационных стимулов, отклонениями в активности дофаминергических нейронов черной субстанции и проявлениями психоза показана при шизофрении с использованием методов прижизненной функциональной нейровизуализации (Murray G. et al., 2008), и может, как считают, лежать в основе неадекватной оценки значимости индифферентных стимулов пациентами (Kapur S., 2003).

(ТМВ) гранулярных нейронов зубчатой фасции на шипиках пирамидных нейронов поля СА3 гиппокампа (ТМВ-синапсы), являются глутаматергическими и могут быть легко уникальной ультраструктуре – разветвленные шипики инвагинированы в гигантскую пресинаптическую терминаль (Amaral D., Dent J., 1991).

синапсов не зависел от преобладания у пациентов негативной или позитивной шизофрении. Однако при шизофрении были изменены взаимоотношения между размерами пресинаптических терминалей и числом митохондрий в них: достоверная отрицательная корреляция между объемной фракцией митохондрий в ТМВ и площадью пресинаптических терминалей выявлена в случаях шизофрении (R = - 0.8, p = 0.0009), но не в контрольных (R Nv синапсов на ТМВ (N/мкм3) симптоматики заболевания характерно достоверное уменьшение числа головок шипиков на ТМВ (рис.3), а также объемной фракции шипиков в ТМВ, что говорит об уменьшении размеров шипиков. Важно, что при этом не выявлено достоверных различий по площади аксонных терминалей между подгруппами шизофрении с преобладанием позитивной или негативной симптоматики и контрольной группой (для всех сравнений р 0.09).

Рисунок 3. Индивидуальные и средние значения: А - площади пресинаптических терминалей мшистых волокон (ТМВ), Г - числа головок шипиков на ТМВ в контроле (треугольники) и в подгруппах шизофрении с преобладанием позитивной (белые кружки) и негативной (серые кружки) симптоматики заболевания и отсутствие связи этих параметров с возрастом (Б, Д) и длительностью посмортального интервала (ПМИ) [В, Е]. Звездочкой отмечен случай шизофрении не получавший нейролептической терапии в течение 2-х месяцев.

Выявленные при шизофрении нарушения взаимосвязей между изменениями пре- и постсинаптических структурных компонентов ТМВ-синапсов свидетельствуют о нарушении их ультраструктурной пластичности при этом заболевании. По данным экспериментальных исследований функциональной морфологии ТМВ-синапсов изменения их пре- и постсинаптической части тесно взаимосвязаны (Madeira M. et al., 1993; Sousa N. et al., 2000).

Митохондрии являются особенно важным фактором синаптической пластичности, поскольку процесс синаптической передачи, связанный с генерацией мощных ионных градиентов, существенно зависит от энергетического обеспечения (Nicholls D., Budd S., 2000). Обнаруженная только при шизофрении достоверная отрицательная корреляция между площадью аксонных терминалей мшистых волокон и объемной фракцией митохондрий в них может свидетельствовать об относительном дефиците митохондрий в крупных ТМВ при шизофрении.

Таким образом, при шизофрении установлено достоверное снижение численной плотности ТМВ-синапсов в гиппокампе, при этом различия, касающиеся изменений размеров шипиков в случаях шизофрении с преобладанием позитивной или негативной симптоматики заболевания, предполагают существование различных механизмов, лежащих в основе дефицита ТМВ-синапсов у этих пациентов.

Описанные в настоящем исследовании нарушения межнейрональных синаптических связей в гиппокампе при шизофрении могут быть одной из причин нарушений кортикогиппокампальных взаимодействий при этом заболевании, установленных в прижизненных функциональных исследованиях (Goodrich-Hunsaker N.J. et al., 2005; Suzuki M., 2005), поскольку мшистые волокна гранулярных клеток зубчатой фасции являются частью афферентного пути, осуществляющего опосредованный перенос информации от ассоциативных областей коры к гиппокампу.

Нарушения возрастных закономерностей изменений Астроциты не только осуществляют энергетическое обеспечение нейронов, являются полноценным участником процессов нейромедиации, но и представляют собой резидентные иммунокомпетентные клетки мозга. Это в значительной мере определяет их высокую реактивность даже в отсутствие астроглиоза и нейродегенерации (Drage M.G. et al., 2002;

John G.R. et al., 2004; Silva M.C. et al., 2005). Изменения ультраструктуры астроцитов, описанные при ишемии мозга, деменциях, нормальном старении, а также в единичных имеющийся работах при шизофрении достаточно однотипны и включают патологию митохондрий и накопление липофусцина в клетках (Глезер И.И., Сухорукова Л.И., 1966;

Боголепов Н.Н.,1979; Peters A. et al., 1991). Установление связи нарушений ультраструктуры астроцитов с заболеванием при шизофрении требует доказательного морфометрического анализа и учета таких факторов, как возраст и длительность постмортального интервала при статистическом анализе.

По нашим данным изменения ультраструктуры астроцитов, включающие увеличение размеров митохондрий и частичную потерю крист, а также накопление многочисленных липофусциновых гранул, можно было наблюдать как в случаях контролей и шизофрении старше 50 лет, так и в более молодых случаях шизофрении с большой длительностью заболевания.

Морфометрический анализ позволил установить, что возрастные закономерности изменений ультраструктуры астроцитов гиппокампа, характерные для контрольных случаев, нарушаются при шизофрении. Так, для контрольных случаев старше 50 лет характерно достоверное увеличение площади астроцитов, их ядра и цитоплазмы (для всех параметров: ~22%, р 0.01), а также уменьшение объемной фракции и численной плотности митохондрий в астроцитах (2-факторный ANOVA, 30%, р 0.005) по сравнению с контролями моложе 50 лет.

При шизофрении аналогичных различий между случаями, принадлежащими к разным возрастным группам, не обнаружено. Более того, в обеих возрастных подгруппах шизофрении размеры астроцитов были достоверно больше, а объемная фракция и численная плотность митохондрий в астроцитах достоверно меньше, по сравнению с подгруппой контролей моложе 50 лет (для обоих параметров p 0.005), но не отличались от старшей возрастной подгруппы контролей. Тот факт, что параметры ультраструктуры астроцитов гиппокампа при шизофрении вне зависимости от возраста соответствуют таковым в старшей возрастной группе контролей предполагает определенное сходство механизмов нарушений при этом заболевании с имеющими место при старении мозга.

Кроме того, выявлены нарушения взаимосвязей между размерами астроцитов и распределением митохондрий и липофусцина в них при шизофрении: Na митохондрий, также как и Vv липофусциновых включений, достоверно коррелировали с площадью астроцитов и их цитоплазмы в контроле, такие корреляции отсутствовали при шизофрении (таблица 3).

Полученные результаты позволяют предположить, что нарушение возрастных закономерностей изменений ультраструктуры астроцитов при шизофрении связано с болезнью, что и было подтверждено при дальнейшем анализе.

Таблица 3. Корреляции цитологических параметров астроцитов

КОНТРОЛЬ ШИЗОФРЕНИЯ

Значения R и p для корреляции Пирсона, * - статистически значимые (р 0.01) корреляции.

Связь изменений ультраструктуры астроцитов с длительностью Связь нарушений возрастных закономерностей изменений ультраструктуры астроцитов при шизофрении с болезнью подтверждают данные корреляционного анализа: в группе шизофрении выявлены достоверные отрицательные корреляции между Vv митохондрий (R = -0.66, p=0.002), а также Na митохондрий (R = -0.72, p = 0.001) и длительностью заболевания (рис. 4А). Напротив, Vv липофусцина коррелировала достоверно и положительно (R = 0.72, p = 0.001) с длительностью заболевания (рис.4 Б).

Важно подчеркнуть, что эти параметры не коррелировали с возрастом, ни в контроле, ни при шизофрении (рис. 4 В-Г).

Кроме того, обнаружены достоверные различия между подгруппами шизофрении, различающимися по длительности заболевания: снижение Vv и Na митохондрий в астроцитах наблюдалось в подгруппе шизофрении с большой длительностью заболевания (более 21 года) по сравнению с подгруппой с меньшей (менее 21 года) длительностью заболевания, а также по сравнению с контролем (рис. 5).

Поскольку астроцитам принадлежит ведущая роль в сопряженных между собой процессах энергетического обеспечении нейронов и глутаматергической нейромедиации (Бокша И.С., 2006; Haydon P.G., Carmignoto G., 2006), выявленный при шизофрении прогрессирующий дефицит митохондрий в них является важным показателем нарушения глио-нейрональных взаимодействий при этом заболевании. По нашим данным, нарушения Длительность заболевания Возраст (годы) Возраст (годы) Рисунок 4. Достоверные корреляции численной плотности (Na) митохондрий (A) и объемной фракции (Vv) липофусцино-лизосомных включений (Б) в астроцитах с длительностью заболевания при шизофрении. Отсутствие корреляций этих параметров с возрастом при шизофрении (В, Г) и в контроле (Д, Е).

Vv митохондрий в астроцитах (%) ультраструктурной пластичности, связанные с относительным дефицитом митохондрий в касающиеся экспрессии синаптических маркеров и рецепторов глутамата, а также астроцитарных ферментов обмена D-серина, в гиппокампе при шизофрении могут прогрессировать с течением заболевания (Eastwood S.L. et al., 1995a,b; Harrison P.J. et al., 2003; Bendikov I. et al., 2007).

астроцитов в гиппокампе нельзя считать окончательно решенным, так как для их идентификации обычно использовались антитела к глиальному фибриллярному кислому белку (ГФКБ), экспрессия которого существенно подавлена при шизофрении (Webster M.J.

et al., 2001а, 2005; Rajkowska G. et al., 2002). Поскольку астроциты могут быть легко идентифицированы по ультраструктурным признакам, метод определения объемной фракции и численной плотности клеток был адаптирован нами для оценки числа астроцитов на ультраструктурном уровне. Полученные нами величины численной плотности астроцитов в гиппокампе сравнимы с имеющимися в литературе данными, полученными при светооптических исследованиях (Damadzic R. et al., 2001).

шизофрении по сравнению с контролем. Это увеличение происходит за счет объемной увеличивается только численная плотность перинейрональных астроцитов, тогда как выявленные изменения не являются результатом уменьшения объема гиппокампа.

заболевания, возрасту манифестации психоза, по типу течения заболевания, а также по преобладанию позитивной или негативной симптоматики заболевания (рис.7), объемная фракция и численная плотность перинейрональных астроцитов не различались между соответствующими подгруппами и были достоверно выше, чем в контрольной группе [2факторный ANСOVA; p 0.009, для всех сравнений].

Vv перинейрональных астроцитов астроглиоза в мозге при шизофрении и расценивает этот факт как одно из доказательств отсутствия дегенеративного процесса в мозге при этом заболевании (Arnold S.E. et al., 1998;

обязательно является проявлением астроглиоза и следствием дегенеративных процессов.

экспериментальных воздействий (таких, как врожденные судорожные расстройства, введение лигандов глутаматных рецепторов), не вызывающих потери нейронов или их патологических изменений (Araujo M. et al., 1996; Drage M. et al., 2002). Важно отметить, что при сравнительной послойной оценке числа ГФКБ-иммунореактивных астроцитов в префронтальной коре при шизофрении выявлено значительное увеличение численной плотности тел астроцитов исключительно в V пирамидном слое. Такого увеличения не наблюдалось в III и IV слоях, для которых характерно избирательное снижение размеров пирамидных нейронов в отличие от слоя V (Rajkowska G. et al., 2002). В настоящем исследовании увеличение численной плотности и объемной фракции астроцитов обнаружено в пирамидном слое поля СА3, также содержащем наиболее крупные пирамидные нейроны гиппокампа, и, более того, оно касалось только перинейрональных астроцитов.

перинейрональных астроцитов в гиппокампе при шизофрении отражает изменение глионейрональных взаимодействий при этом заболевании и может рассматриваться как проявление компенсаторной реакции в ответ на прогрессирующую дисфункцию астроцитов, направленной на поддержку функционирования нейронов.

Изменения ультраструктуры олигодендроглиоцитов и миелина и нарушения аксо-глиальных взаимодействий в мозге при шизофрении Подавляющее большинство олигодендроцитов в пирамидном слое гиппокампа в контрольных случаях, и часть их при шизофрении характеризовались интактной ультраструктурой, типичные особенности которой многократно описаны для данных клеток (Peters A. et al., 1991a,b). Однако для случаев шизофрении характерны дистрофические изменения ультраструктуры олигодендроцитов: увеличение глыбок конденсированного хроматина в ядрах, набухание и потеря части органелл цитоплазмы, появление электронноплотных включений в ней, встречавшиеся иногда и в контроле. Деструктивные изменения олигодендроцитов заключались в пикнозе и эктопии ядра, резком набухании цитоплазмы с потерей органелл, нарушении целостности цитоплазматической мембраны. Пропорция таких клеток в случаях шизофрении составляет около 20%, однако в контроле они практически не встречались. Гораздо реже (практически только в двух случаях шизофрении) встречались изменения ультраструктуры олигодендроцитов, которые характеризовались массивной агрегацией конденсированного хроматина вдоль ядерной оболочки, уменьшением размеров и повышением электронной плотности цитоплазмы, в которой при этом присутствовали рибосомы и митохондрии, что соответствует морфологическим критериям апоптоза (Saraste A., 1999).

Таким образом, олигодендроциты являются клетками с наиболее выраженными изменениями ультраструктуры, включая необратимые деструктивные нарушения, в поле СА3 гиппокампа при шизофрении. Это положение согласуется с недавно опубликованными данными о выраженном дефиците олигодендроглии в гиппокампе при шизофрении (Schmitt A et al., 2009), а также о существенном подавлении экспрессии ряда олигодендроцит- и миелин-связанных генов в гиппокампе при этом заболевании (Dracheva S. et al., 2006). По нашим данным патология олигодендроцитов в гиппокампе сочеталась с существенными нарушениями ультраструктуры миелинизированных аксонов, свидетельствующими о нарушении аксо-глиальных взаимодействий при шизофрении.

В пирамидном слое поля СА3 гиппокампа как в контрольных случаях, так и при шизофрении преобладали миелинизированные аксоны с диаметром 2-4 мкм, которые были диффузно распределены в нейропиле. Наряду с множеством волокон с хорошей сохранностью ультраструктуры миелиновых оболочек и аксона, как в контроле, так и при шизофрении встречаются три основных типа повреждений в части миелиновых волокон:

локальное выпячивание наружной части миелиновой оболочки, которое часто оказывается погруженным в прилежащий отросток астроцита; «грыжеподобное» выпячивание части миелиновой оболочки внутрь волокна; набухание периаксиального отростка олигодендроцита при резком уменьшении диаметра аксона и смещении его от центра волокна к миелиновой оболочке. Последний тип изменений ультраструктуры, свидетельствующий об атрофии части миелинизированных аксонов, часто встречался в случаях шизофрении, и, гораздо реже, в контроле. Чаще всего в таких случаях миелиновая оболочка состояла всего из нескольких ламелл.

Морфометрический анализ позволил подтвердить достоверное повышение при шизофрении численной плотности (в 2 раза, р = 0.003) и пропорции (на 140%, p = 0.0014, U тест Манна-Уитни) атрофичных миелинизированных аксонов. Полученные результаты согласуются с экспериментальными данными, свидетельствующими, что дисфункция олигодендроцитов и нарушения экспрессии белков миелина индуцируют грубые нарушения цитоскелета нейронов, приводящие к патологии аксонов (Griffiths I. et al., 1998;

Yin X. et al., 1998).

Однако, сравнение подгрупп случаев шизофрении, разделенных по клиническим особенностям заболевания, показало, что достоверное увеличение численной плотности и пропорции атрофичных миелинизированных аксонов по сравнению с контролем наблюдалось только в подгруппе шизофрении (13 случаев) с началом заболевания в зрелом возрасте (ANOVA Краскала-Уоллиса, для всех параметров р 0.001), тогда как случаи с ранним началом заболевания (до 23 лет, 12 случаев) не отличались по этим параметрам от контролей (рис.8).

Выявленные взаимосвязи между нарушениями аксо-глиальных взаимодействий, сопровождающимися атрофией части аксонов, и возрастом манифестации психоза являются важным показателем дисфункции гиппокампа при шизофрении, поскольку данные прижизненных исследований свидетельствуют, что при начале заболевания в раннем возрасте отсутствуют уменьшение объема гиппокампа, а также площади сечения свода мозга (в котором проходят основные волокна гиппокампа), характерные для вновь заболевших пациентов зрелого возраста (Davies D. et al., 2001; Matsumoto H. et al., 2001).

Однако корреляционный анализ не выявил взаимосвязи между численной плотностью и пропорцией атрофичных миелиновых волокон и возрастом пациентов к началу заболевания (R = 0.2, p = 0.2), также как и с длительностью болезни или возрастом. Это позволяет предположить, что различия по числу атрофичных миелиновых волокон между подгруппами шизофрении, различающимися по возрасту манифестации психоза могут быть опосредованы дополнительными факторами.

шизофрения, манифестация психоза до 23 лет (n =12) шизофрения, манифестация психоза после 28 лет (n=13) ультраструктуры олигодендроцитов сочетались с выраженными нарушениями аксоглиальных взаимодействий и атрофией части миелинизированных аксонов, что может быть важной составляющей нарушений межнейрональных связей при этом заболевании.

Редукция дендритного дерева пирамидных нейронов гиппокампа при шизофрении была убедительно показана с использованием метода Гольджи и иммуноцитохимических подходов, однако данные об атрофии части миелинизированных аксонов в гиппокампе при В настоящее время преобладает мнение об отсутствии микроглиоза в мозге при шизофрении (Александровская М.М., 1939; Arnold S.E. et al., 1998; Steiner J. et al., 2006).

Наши результаты подтвердили эти данные: ни объемная фракция, ни численная плотность микроглиальных клеток в СА3 поле гиппокампа не различались достоверно между микроглиальных клеток преобладал в поле СА3 гиппокампа.

Согласно полученным данным, как в контроле, так и при шизофрении микроглия была представлена 4 основными морфологическими типами: рамифицированная, амебоидная, палочковидная и круглая микроглия, что соответствует современным представлениям о морфологической гетерогенности микроглии. В гиппокампе, как в случаях шизофрении, так и в контрольных, рамифицированная микроглия представляет собой клетки с узким ободком цитоплазмы, содержащей единичные органеллы и овальными ядрами с гладкими контурами. Для микроглии амебоидного типа характерны более крупные размеры и развитая цитоплазма с неправильными очертаниями, содержащая многочисленные органеллы и вакуоли, а также включения в виде конгломератов крупных осмиофильных глыбок. Палочковидная микроглия представляет собой мелкие клетки с очень узким ободком цитоплазмы, ядром палочковидной или подковообразной формы, заполненным конденсированным хроматином и 1-2 очень тонкими отростками. Круглая микроглия представлена клетками правильной круглой формы, очень узким ободком цитоплазмы, иногда с тонким коротким отростком или отростком в виде небольшой псевдоподии. Две последние формы микроглиальных клеток были описаны в мозге животных (Zhang Z. et al., 1997; Xue Q.-S. et al., 2007) и в культуре нервной ткани (Tanaka J. et al., 1998; Cheepsunthorn P. et al., 2001; Ovanesov M. et al., 2006) при различных экспериментальных воздействиях. В мозге человека при нейродегенеративных заболеваниях описаны, в том числе на ультраструктурном уровне, палочковидные (“rod”) микроглиальные клетки (WierzbaBobrowicz T. et al., 2004; Lewandowska E., et al., 2004).

Полуколичественный анализ позволил показать, что при шизофрении примерно в 50% случаев (преимущественно с ранним началом заболевания), микроглиальные клетки представлены преимущественно клетками амебоидного типа (более 50%), а также рамифицированной и круглой микроглией, тогда как единичные палочковидные клетки встречались только в половине этих случаев. В остальных 13 случаях (с началом заболевания в зрелом возрасте, после 28 лет) палочковидные микроглиальные клетки составляли от 1/3 до 2/3 всей микроглии, а амебоидные клетки встречались редко. В контрольных случаях не выявлено гетерогенности в распределении морфологических форм микроглиальных клеток между случаями, здесь представлены в разных пропорциях первые три типа микроглии: амебоидная, рамифицированная и круглая микроглия. Единичные палочковидные микроглиоциты выявлены только в 15% контрольных случаев (3 случая из 25).

При выборе количественных критериев для статистического анализа различий в распределении морфологических форм микроглии исходили из того, что амебоидные и палочковидные клетки, очевидно, отличаются по размерам цитоплазмы и ядерноцитоплазматическому соотношению. Количественный анализ подтвердил эти различия:

величина ядерно-цитоплазматического соотношения для соответствующих подгрупп шизофрении составляла, соответственно, от 0.45 до 0.96 (М ± : 0.7 ± 0.14) и от 1.0 до 1. (М ± : 1.2 ± 0.24) Поэтому случаи шизофрении и контрольные были разделены на подгруппы в соответствии с величиной ядерно-цитоплазматического соотношения (соответственно, больше или меньше 0.96) с целью дальнейшего использования для выявления связи изменений различных параметров с преобладающей морфологией микроглии.

Статистический анализ подтвердил, что различия в ядерно-цитоплазматическом отношении и площади цитоплазмы микроглиальных клеток между соответствующими подгруппами не объясняются уровнем среза, а достаточно адекватно отражают особенности морфологии микроглиальных клеток. Так, соответствующие подгруппы шизофрении и контролей достоверно различались между собой по площади цитоплазмы, но не ядер. В обеих группах наблюдений ядерно-цитоплазматическое соотношение коррелировало достоверно и отрицательно только с площадью цитоплазмы микроглиальных клеток (R = p = 0.0001), но не их ядер (R = 0.22, p = 0.13).

Случаи шизофрении и контрольные не различались достоверно по площади микроглиальных клеток, их цитоплазмы и ядер, как показал анализ с использованием 2факторного ANCOVA с диагнозом (контрольная группа и группа шизофрении) и полом в качестве независимых переменных, а также возрастом и постмортальным интервалом как ковариатами. Не было выявлено также значимых эффектов пола, возраста и постмортального интервала на исследованные параметры микроглиальных клеток (для всех сравнений F 1.71; p 0.2).

Однако при сравнении подгрупп шизофрении, различающихся по клиническим особенностям заболевания, выявлено достоверное влияние возраста пациентов к началу заболевания на параметры микроглиальных клеток: в случаях с ранним началом заболевания площадь микроглиальных клеток (+40%, р 0.001) и их цитоплазмы (+60%, р = 0.0001) были достоверно выше (рис.9), а величина ядерно-цитоплазматического отношения меньше, по сравнению со случаями с началом заболевания в зрелом возрасте.


Площадь цитоплазмы МК (мкм2) заболевания, достоверно отличались по возрасту между собой (М ±, соответственно: 43. сравнение площади микроглиальных клеток и их цитоплазмы между возрастными только между возрастными подгруппами шизофрении, но не контролей (рис.10): площадь цитоплазмы микроглиальных клеток была достоверно выше в подгруппе случаев шизофрении моложе 50 лет (+ 40%, р 0.05) по сравнению с подгруппой старше 50 лет.

Различия между возрастными подгруппами шизофрении по размерам микроглиальных клеток были существенно меньше по величине, чем между подгруппами, различающимися по возрасту манифестации психоза.

микроглиальных клеток связаны преимущественно с возрастом начала заболевания:

преобладание амебоидной микроглии наблюдается при ранней манифестации психоза, палочковидной – при начале заболевания в зрелом возрасте.

Корреляционный анализ подтвердил эту связь: выявлены достоверные отрицательные возрастом манифестации психоза (рис.11 А). При этом площадь микроглиальных клеток и площадь их цитоплазмы не коррелировали с возрастом ни при шизофрении (рис.11 Б), ни в контроле (рис. 11 В). Возраст начала заболевания достоверно коррелировал с возрастом при шизофрении (R = 0.73, p = 0.00001).

Площадь цитоплазмы МК Многочисленные данные о возможности взаимных трансформаций различных типов микроглии в соответствии с изменениями их функционального статуса, описанные как в культурах ткани, так и в мозге животных (Tanaka J. et al., 1998; Cheepsunthorn P. et al., 2001;

Ovanesov M. et al., 2006; Xue Q.-S. et al., 2007), а также данные относительно общности спектра синтезируемых этими клетками антигенов (Melzer P. et al., 2001; Guillemin G., Brew B., 2004), позволяют заключить, что различные морфологические формы микроглии отражают особенности их функциональной активности и не представляют собой самостоятельных клеточных типов.

Связь между преобладанием амебоидной или палочковидной микроглии и возрастом манифестации психоза при шизофрении может быть опосредована особенностями иммунного статуса пациентов, так как имеются данные о зависимости между типом активации микроглиальных клеток и состоянием периферического Т-клеточного иммунитета (Town T. et al., 2005). При шизофрении одни группы пациентов могут характеризоваться активацией Тh-1, другие – Тh-2 клеток (Arolt V. et al., 2002; Strous R., Shoenfeld Y., 2006), при этом ряд показателей, определяющих соотношение, отрицательно коррелирует с возрастом пациентов к периоду начала заболевания (Ganguli R. et al.,1995;

Avgutin B. et al., 2005). Наши собственные данные свидетельствуют, что добавление сыворотки крови больных шизофренией к органотипической культуре эмбрионального мозга человека способно активировать микроглиальные клетки, и этот эффект зависел от особенностей клинического и иммунного статуса пациентов (Коломеец Н.С. и др., 2004).

Переход микроглии в активированную амебоидную форму вызывали только сыворотки пациентов с высоким уровнем психоза (оцененным по шкале PANSS) и относительно сохранным Т-клеточным иммунитетом (способность лимфоцитов продуцировать интерлейкин 2).

Таким образом, случаи шизофрении достоверно различались, по тому какой морфологический тип микроглиальных клеток преобладает в поле СА3 гиппокампа. Эти особенности зависят от возраста манифестации психоза и могут свидетельствовать о разных типах активации микроглии при этом заболевании. Полученные данные согласуются с результатами прижизненных исследований, выявивших активацию микроглии в мозге при шизофрении, в том числе на ранних стадиях заболевания (van Berckel B. et al., 2005, 2008), которая по некоторым данным особенно выражена в гиппокампе (Doorduin J. et al., 2009).

Взаимосвязь особенностей ультраструктуры микроглии с изменениями олигодендроглии и миелинизированных аксонов В настоящем исследовании выявлены особенности взаимодействий различных типов микроглиальных клеток с олигодендроцитами и миелинизированными аксонами в контроле и при шизофрении, которые также подтверждают, что различия между случаями шизофрении по преобладанию определенных морфологических типов микроглии могут объясняться различным характером активации микроглиальных клеток.

В подавляющем большинстве контрольных случаев микроглиальные клетки, непосредственно прилежащие к олигодендроглии, относились к круглому типу, при этом для олигодендроцитов характерна нормальная ультраструктура или минимальные ее изменения в виде незначительного набухания цитоплазмы и появления небольших электронно-плотных включений. Такие контакты, когда микроглиальная клетка и олигодендроцит соприкасались цитоплазматическими мембранами, обнаружены в контрольных случаях из 25. При шизофрении большинство микроглиальных клеток в непосредственном контакте с олигодендроцитами относились к морфологическому типу палочковидных (60%-70% микроглиальных клеток, непосредственно контактирующих с олигодендроглией). В этих случаях олигодендроциты характеризовались выраженными дистрофическими изменениями ультраструктуры, вплоть до необратимых. Соответственно, микроглиальные клетки гораздо чаще локализовались в непосредственной близости с олигодендроцитами подгруппе шизофрении с преобладанием палочковидной микроглии: в 70% таких случаев обнаружено более четырех палочковидных клеток в контакте с олигодендроцитом.

Эти наблюдения ставят вопрос и о возможной связи патологии миелинизированных аксонов с особенностями морфологии микроглии при шизофрении. Для проверки предположения было проведено сравнение численной плотности и пропорции миелинизированных аксонов, включая и патологически измененные, в подгруппах контролей и шизофрении, характеризующихся низким или высоким значением ядерноцитоплазматического соотношения микроглиальных клеток (подгруппы 1 контролей и шизофрении, ядерно-цитоплазматическое соотношение 0.96; подгруппы 2, ядерноцитоплазматическое отношение 0.96). Это позволило установить, что случаи шизофрении с преобладанием микроглии палочковидного типа (подгруппа 2) характеризуются достоверно большей численной плотностью и пропорцией атрофичных миелинизированных аксонов (в 2.5-3.5 раза, для всех сравнений р 0.005, ANOVA Краскала-Уоллиса), как по сравнению с обеими подгруппами контролей, так и по сравнению с подгруппой шизофрении с преобладанием микроглии амебоидного типа (Рис. 12).

соответствующими подгруппами контролей не выявлено (р = 0.98).

морфологического типа микроглии при шизофрении. Только при шизофрении численная плотность атрофичных миелинизированных аксонов коррелировала достоверно как с площадью цитоплазмы (R = - 0.53, p = 0.007) микроглии (рис.13).

достоверно коррелирует с цитологическими параметрами микроглиальных клеток в группе коррелируют. Результаты исследования позволяют предположить, что число атрофичных миелинизированных аксонов зависит преимущественно от преобладания той или иной формы микроглиальных клеток, и влияние возраста пациентов к началу заболевания на выраженность этих изменений также опосредовано реактивностью микроглии.

Na атрофичных миелинизированных аксонов ( N/1000 мкм2) миелинизированных аксонов Роль микроглиальных клеток, как возможных триггеров патологии олигодендроглии и миелина, показана неоднократно в экспериментальных исследованиях (Lehnardt S. et al., 2002; Sloane J., 1999, 2003; Hinman J. et al., 2004). Имеются данные о высокой экспрессируемых микроглией (фактор некроза опухолей, лимфотоксин) (Selmaj K. et al., 1991; Qi Y., Dal Canto M., 1996). Однако микроглия экспрессирует и более специфические факторы, от которых зависит структурная и функциональная целостность миелиновых оболочек, такие, как микроглиальный фермент калпаин-1 (Hinman J. et al., 2004). В мозге белка семейства S100, который синтезируется преимущественно микроглией, является неспецифическим маркером воспаления и способен вызывать редукцию дендритного дерева нейронов (Foster R. et al., 2006).

клеток и выраженностью изменений олигодендроглии и миелинизированных аксонов при шизофрении свидетельствуют, что реактивность микроглии может быть важным связующим звеном между изменениями иммунного статуса пациентов, изучение которых в настоящее время является самостоятельным направлением в биологической психиатрии (Коляскина Г.И и др., 2004; Клюшник Т.П. и др., 2005; Strous R. et al., 2006), и нарушениями межнейрональных и глио-нейрональных взаимодействий при этом заболевании.

Оценка влияния нейролептической терапии на исследованные параметры При исследовании аутопсийного мозга больных шизофренией необходимо принимать во внимание возможное влияние длительного приема нейролептиков на исследуемые параметры. Для оценки интенсивности нейролептической терапии мы использовали хлопромазиновый эквивалент, который определяли общепринятым способом (American Psychiatric Association, 1997). Этот показатель, введенный J.M.Davis (1974), служит для оценки усредненной дозы нейролептиков (мг/день), принимаемой больным в течение последнего года перед смертью.

Ни для одного параметра, исследованного в настоящей работе, не выявлено достоверных корреляций с хлорпромазиновым эквивалентом. Кроме того, часть параметров различались достоверно между случаями шизофрении, получавшими нейролептики, но выделенными по клиническим особенностям заболевания в разные подгруппы. Для ряда параметров наш вывод об отсутствии влияния нейролептической терапии подтверждается экспериментальными данными.



Pages:   || 2 |
 


Похожие работы:

«Михеева Эльза Равилевна МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНАЯ И БИОХИМИЧЕСКАЯ АЛЬТЕРАЦИЯ КЛЕТОК КРОВИ КВАНТОВЫМИ ТОЧКАМИ 03.03.01 – физиология Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Нижний Новгород 2011 Работа выполнена в Нижегородском государственном техническом университете им. Р.Е. Алексеева доктор биологических наук, профессор Научный руководитель : Плескова Светлана Николаевна доктор биологических наук, профессор Официальные оппоненты : Корягин...»

«Григорян Анаит Суреновна ВЛИЯНИЕ ТРАНСПЛАНТАЦИИ МЕЗЕНХИМНЫХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК НА РАЗВИТИЕ ПОСТТРАВМАТИЧЕСКИХ ПРОЦЕССОВ В ГОЛОВНОМ МОЗГЕ КРЫС 03.03.04 – клеточная биология, цитология, гистология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Санкт-Петербург – 2010 Работа выполнена в Отделе общей и частной морфологии Учреждения РАМН Научноисследовательский институт экспериментальной медицины Северо-западного отделения РАМН и ООО Транс-Технологии...»

«Мокиенко Олеся Александровна Интерфейс мозг-компьютер, основанный на воображении движения, в реабилитации больных с последствиями очагового поражения головного мозга 03.03.01 Физиология 14.01.11 Нервные болезни Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Москва, 2013 Работа выполнена в лаборатории математической нейробиологии обучения Федерального государственного бюджетного учреждения науки Института высшей нервной деятельности и...»

«ДЕМЬЯНЕНКО ИЛЬЯ АЛЕКСАНДРОВИЧ МОРФОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РЕПАРАТИВНЫХ ПРОЦЕССОВ В КОЖЕ ПРИ ДЕЙСТВИИ МИТОХОНДРИАЛЬНО-НАПРАВЛЕННОГО АНТИОКСИДАНТА SkQ1 03.03.04. – клеточная биология, цитология, гистология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Москва 2012 Работа выполнена на кафедре клеточной биологии и гистологии Биологического факультета Московского государственного университета имени М.В.Ломоносова Научный руководитель : кандидат...»

«ТУЛУПОВ Андрей Александрович ВОЗМОЖНОСТИ МАГНИТНО-РЕЗОНАНСНОЙ ТОМОГРАФИИ В МОРФО-ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ ОЦЕНКЕ ЦЕРЕБРАЛЬНОГО ВЕНОЗНОГО КРОВОТОКА И ЛИКВОРОЦИРКУЛЯЦИИ 14.01.13 - лучевая диагностика, лучевая терапия 03.03.01 - физиология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук Томск – 2011 Работа выполнена в Учреждении Российской академии наук Институте Международный томографический центр Сибирского отделения РАН (г. Новосибирск, Россия). Научные...»

«БУРАКОВ Антон Владимирович ЦИТОСКЕЛЕТ КАК СИСТЕМА ПУТЕЙ ВНУТРИКЛЕТОЧНОГО ТРАНСПОРТА В КЛЕТКАХ ЖИВОТНЫХ 03.03.04 – Клеточная биология, цитология, гистология Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук Москва – 2014 Работа выполнена в лаборатории структуры и функции цитоскелета НИИ физико-химической биологии имени А.Н. Белозерского Федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования...»

«ЗУБАТКИНА Ирина Сергеевна ИНТЕГРАЛЬНАЯ ОЦЕНКА РЕГУЛЯЦИИ ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ АКТИВНОСТИ ИММУНОКОМПЕТЕНТНЫХ КЛЕТОК НА ОСНОВЕ СИНЕРГЕТИЧЕСКОГО ПОДХОДА 03.03.01 – Физиология АВТОРЕФЕРАТ Диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Архангельск – 2013 Работа выполнена в отделе экологической иммунологии Института физиологии природных адаптаций Уральского отделения Российской академии наук (г. Архангельск) Научный руководитель : заслуженный деятель науки РФ, доктор...»

«Аристов Антон Викторович ФРАКТАЛЬНЫЙ АНАЛИЗ ЭЛЕКТРИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ ГОЛОВНОГО МОЗГА ПРИ ГЕНЕРАЛИЗОВАННОЙ ЭПИЛЕПСИИ Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Специальность 03.03.01 – физиология Москва, 2010 Работа выполнена на кафедре физиологии человека и животных Биологического факультета Московского государственного университета им. М.В. Ломоносова (заведующий кафедрой профессор А.А. Каменский) Научный руководитель кандидат...»

«Карантыш Галина Владимировна ОНТОГЕНЕТИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ ПОВЕДЕНЧЕСКИХ РЕАКЦИЙ И ФУНКЦИОНАЛЬНЫХ ИЗМЕНЕНИЙ В МОЗГЕ КРЫС В МОДЕЛЯХ ИШЕМИИ/ГИПОКСИИ Специальность 03.03.01 – физиология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук Ростов-на-Дону – 2014 2 Работа выполнена на кафедре анатомии и физиологии детей и подростков факультета естествознания Федерального государственного автономного образовательного учреждения высшего профессионального...»

«Караман Юлия Константиновна МЕХАНИЗМЫ АДАПТАЦИИ ОРГАНИЗМА К АЛИМЕНТАРНОЙ ВЫСОКОЖИРОВОЙ НАГРУЗКЕ 03.03.01 – физиология 03.01.04 – биохимия АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук Владивосток – 2011 2 Работа выполнена в лаборатории биомедицинских исследований во Владивостокском филиале Учреждения Российской академии медицинских наук Дальневосточного научного центра физиологии и патологии дыхания Сибирского Отделения Российской академии...»

«Цветков Иван Сергеевич СТРУКТУРНО–ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ИЗМЕНЕНИЯ ПРЕДСТАТЕЛЬНОЙ ЖЕЛЕЗЫ И ОРГАНОВ ИММУННОЙ СИСТЕМЫ КРЫС ВИСТАР ПРИ ХРОНИЧЕСКОМ АУТОИММУННОМ ВОСПАЛЕНИИ В УСЛОВИЯХ НОРМО- И ГИПЕРАНДРОГЕНЕМИИ 03.03.04 клеточная биология, цитология, гистология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Москва-2012 1 Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении Научно-исследовательский институт морфологии человека Российской...»

«ШАРЛАИМОВА Наталья Сергеевна КЛЕТКИ ЦЕЛОМИЧЕСКОГО ЭПИТЕЛИЯ МОРСКОЙ ЗВЕЗДЫ ASTERIAS RUBENS L., ОБЛАДАЮЩИЕ СВОЙСТВАМИ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК 03.03.04. – Клеточная биология, цитология, гистология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Санкт-Петербург 2011 г. Работа выполнена в Учреждении Российской академии наук Институт цитологии РАН, Санкт-Петербург кандидат биологических наук Научный руководитель : Петухова Ольга Александровна Институт...»

«Никанова Людмила Анатольевна ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ПРОДУКТОВ ГИДРОБИОНТОВ И ПРИРОДНЫХ КОРМОВЫХ ДОБАВОК В ПРОФИЛАКТИКЕ НАРУШЕНИЙ ОБМЕНА ВЕЩЕСТВ, ПОВЫШЕНИИ РЕЗИСТЕНТНОСТИ ОРГАНИЗМА И ИХ ВЛИЯНИЕ НА ПРОДУКТИВНОСТЬ СВИНЕЙ 03.01.04 – биохимия 03.03.01 – физиология Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук - п. Дубровицы – 2011 г. Работа выполнена в отделе биохимических и химико-аналитических исследований Государственного научного учреждения...»

«БАИШНИКОВА Ирина Валерьевна Возрастная и сезонная динамика витаминов А и Е у песцов (Alopex lagopus L.) и лисиц (Vulpes vulpes L.) 03.03.01 – физиология Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Петрозаводск – 2012 Работа выполнена в лаборатории экологической физиологии животных Федерального государственного бюджетного учреждения науки Института биологии Карельского научного центра Российской академии наук (ИБ КарНЦ РАН) Научный...»

«СТОЛЯРОВА Марина Владимировна СРАВНИТЕЛЬНАЯ МОРФОЛОГО-ФИЗИОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА И РЕАКТИВНЫЕ ОСОБЕННОСТИ ЭПИТЕЛИАЛЬНЫХ СИСТЕМ У ЖИВОТНЫХ РАЗНЫХ УРОВНЕЙ ОРГАНИЗАЦИИ И ЧЕЛОВЕКА: ФИЛОГЕНЕТИЧЕСКИЙ АСПЕКТ 03.03.04 – клеточная биология, цитология, гистология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук Санкт-Петербург 2012 2 Работа выполнена в Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования...»

«Мальцева Елена Александровна ОСОБЕННОСТИ ВНЕШНЕГО ДЫХАНИЯ И СОСТОЯНИЯ СЕРДЕЧНО-СОСУДИСТОЙ СИСТЕМЫ У ЗДОРОВЫХ ЛИЦ ЮНОШЕСКОГО ВОЗРАСТА 03.03.01 – физиология Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Красноярск - 2011 Работа выполнена в Государственном общеобразовательном учреждении высшего профессионального образования Красноярский государственный медицинский университет имени профессора В.Ф.Войно-Ясенецкого Министерства здравоохранения и...»

«СУДАРИКОВА Анастасия Владимировна НАТРИЕВЫЕ КАНАЛЫ В КЛЕТКАХ ЛЕЙКЕМИИ ЧЕЛОВЕКА К562 И ЛИМФОМЫ U937: ИДЕНТИФИКАЦИЯ И ОСОБЕННОСТИ РЕГУЛЯЦИИ 03.03.04 – Клеточная биология, цитология, гистология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук САНКТ-ПЕТЕРБУРГ 2011 Работа выполнена в Учреждении Российской академии наук Институт цитологии РАН Научный руководитель : доктор биологических наук Юрий Алексеевич Негуляев Институт цитологии РАН,...»

«МАНЖУЛО ИГОРЬ ВИКТОРОВИЧ НЕЙРО-ГЛИАЛЬНЫЕ ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ В МЕХАНИЗМАХ РАЗВИТИЯ БОЛИ И ЛЕКАРСТВЕННОГО ОБЕЗБОЛИВАНИЯ У КРЫС 03.03.04 – клеточная биология, цитология, гистология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Владивосток – 2013 Работа выполнена в лаборатории фармакологии Федерального государственного бюджетного учреждения науки Институт биологии моря им. А.В. Жирмунского Дальневосточного отделения Российской академии наук Научный...»

«РАЙДАН Мазен ПОВЫШЕННАЯ УСТОЙЧИВОСТЬ НЕДИФФЕРЕНЦИРОВАННЫХ И ОПУХОЛЕВЫХ КЛЕТОК К ПОВРЕЖДАЮЩЕМУ ДЕЙСТВИЮ НИЗКИХ ТЕМПЕРАТУР 03.03.04 – клеточная биология, цитология, гистология Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Санкт-Петербург 2011 Работа выполнена в Учреждении Российской академии наук Институт цитологии РАН, Санкт-Петербург Научный руководитель : доктор биологических наук, профессор Пинаев Георгий Петрович Институт цитологии РАН...»

«Егерев Евгений Сергеевич ОСОБЕННОСТИ МОРФОФИЗИОЛОГИЧЕСКИХ ПОКАЗАТЕЛЕЙ И СОДЕРЖАНИЯ ХИМИЧЕСКИХ ЭЛЕМЕНТОВ В ВОЛОСАХ У ДЕВОЧЕК 7,8 ЛЕТ, ПРОЖИВАЮЩИХ В СЕЛЬСКОЙ МЕСТНОСТИ Специальность 03.03.01 – физиология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Казань – 2013 Работа выполнена на кафедре анатомии, физиологии и охраны здоровья человека Института физической культуры, спорта и восстановительной медицины Казанского (Приволжского) федерального...»






 
© 2013 www.diss.seluk.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Авторефераты, Диссертации, Монографии, Методички, учебные программы»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.