WWW.DISS.SELUK.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА
(Авторефераты, диссертации, методички, учебные программы, монографии)

 

На правах рукописи

ХИРАЗОВА Елизавета Эдуардовна

Исследование влияний обестатина и его фрагментов на

функциональные характеристики крыс

03.03.01 – физиология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени

кандидата биологических наук

Москва – 2013

2

Работа выполнена на кафедре физиологии человека и животных биологического факультета Московского государственного университета имени М.В.Ломоносова (заведующий кафедрой – доктор биологических наук, профессор А.А. Каменский).

НАУЧНЫЙ РУКОВОДИТЕЛЬ:

доктор биологических наук, Андрей Александрович заведующий кафедрой физиологии Каменский человека и животных биологического факультета МГУ имени М.В.Ломоносова

ОФИЦИАЛЬНЫЕ

ОППОНЕНТЫ:

кандидат биологических наук, доцент Института психологии Юрий Валентинович Лихачев имени Л.С. Выготского РГГУ доктор биологических наук, Олег Александрович Гомазков профессор, главный научный сотрудник ФГБУ «Научноисследовательский институт биомедицинской химии имени В.Н. Ореховича» РАМН

ВЕДУЩАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ:

ГБОУ ВПО РНИМУ им. Н.И. Пирогова

Защита состоится 30 сентября 2013 года в 15 часов 30 минут на заседании диссертационного совета Д501.001.93 при Московском государственном университете имени М.В.Ломоносова по адресу: 119234, Москва, Ленинские горы, д.1, корп. 12, МГУ, Биологический факультет, ауд. М-1.

С диссертацией можно ознакомиться в Фундаментальной библиотеке МГУ имени М.В. Ломоносова.

Автореферат разослан 29 августа 2013 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор биологических наук Б.А. Умарова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы Регуляция пищевого поведения всегда привлекала внимание физиологов и клиницистов, однако в последнее время это направление исследований приобрело особую актуальность в связи с обостряющейся проблемой ожирения. По последним данным Всемирной организации здравоохранения более миллиарда человек на планете имеют лишний вес, эта проблема актуальна даже для стран, в которых немалая часть населения постоянно голодает. Ожирение сопровождается нарушениями в сердечнососудистой, дыхательной, эндокринной и других системах организма, создает дополнительную нагрузку на опорно-двигательный аппарат, способствуя развитию артрозов. Часто ожирение сопровождается гипотрофией мышц и гипотонией кишечника, нарушениями эмоционального фона и развитием депрессивных состояний. Все это снижает качество жизни и укорачивает ее продолжительность. В связи с этим понятен тот интерес, который вызывают последние данные, касающиеся регуляции пищевого поведения и позволяющие прогнозировать новые подходы к решению проблемы нарушения веса.



В нормализации массы тела большое внимание уделяется фармакологической коррекции веса. Однако известно, что многие лекарственные препараты, применяемые с этой целью, оказывают серьезные побочные эффекты и не оправдывают ожидания. Поэтому поиск новых средств, оказывающих заметное анорексигенное действие без нежелательных побочных эффектов, является актуальным. В последнее время в литературе появляется все больше сведений об эндогенных пептидных регуляторах аппетита. Среди них в особое внимание уделяется обестатину («obedere» - поглощать и «statin» - подавлять). Обестатин состоит из 23 аминокислотных остатков, является продуктом посттрансляционного процессинга препрогрелина и обнаруживается во многих органах и тканях (Aydin et al., 2008). В ряде исследований было показано анорексигенное влияние обестатина, приводящее к снижению массы тела, потребления еды и воды (Zhang et al., 2005; Carlini et al., 2007).

ожирением, уровень обестатина существенно ниже, а у больных анорексией – значимо выше, чем у здоровых пациентов (Huda et al., 2008;

Zamrazilova et al., 2008). Снижение содержания обестатина связывают с ожирением не только у взрослых, но и у детей (Zou et al., 2009).

обестатина, однако в литературе таких данных чрезвычайно мало. Кроме того, в литературе не встречается сравнений эффектов различных способов введения обестатина. Практически отсутствуют данные о влиянии пептида на другие физиологические и биохимические показатели кроме массы тела и системы аппетита. В связи с этим очевидна острая необходимость фундаментального изучения физиологических и биохимических процессов, не только лежащих в основе анорексигенного действия обестатина, но и сопровождающих его.

Цели и задачи исследования Цель работы - исследовать влияния обестатина и его фрагментов на сформулированы следующие задачи исследования:

Исследовать влияния различных способов однократного введения обестатина на массу тела, потребление корма и воды, антиоксидантной защиты и уровень кортикостерона в плазме крови Исследовать влияния однократного введения различных фрагментов обестатина на массу тела, потребление корма и воды, вегетативный баланс, функциональное состояние системы антиоксидантной защиты и уровень кортикостерона в плазме крови самцов крыс;

Оценить эффекты хронического введения обестатина и его фрагментов на массу тела, потребление корма и воды, поведенческую активность, порог болевой чувствительности, вегетативный баланс, функциональное состояние системы антиоксидантной защиты и уровень кортикостерона в плазме крови самцов крыс;





Исследовать действие хронического введения обестатина и его фрагментов на модели ожирения на массу тела, потребление чувствительности, вегетативный баланс, функциональное состояние системы антиоксидантной защиты и уровень кортикостерона в плазме крови самцов крыс.

Научная новизна работы В представленном исследовании впервые был показан комплекс плейотропных эффектов обестатина и его фрагментов, не изученных ранее.

Комплексное исследование различных способов введения обестатина выявило, что наиболее выраженными эффектами обладает пептид при интраназальном введении. Впервые было показано действие пептида на уровень болевой чувствительности и баланс вегетативной регуляции внутренних органов.

Также впервые было изучено действие таких фрагментов обестатина, как 1-4, 5-10, 10-15, 16-23 на комплекс физиологических и биохимических показателей. Впервые была предпринята попытка сопоставления эффектов обестатина и его фрагментов после хронического введения не только в норме, но и на фоне патологии, а именно при повышенной массе тела.

Теоретическая и практическая значимость работы Результаты работы имеют как теоретическое, так и практическое значение. Полученные нами данные расширяют представление об эндогенных пептидах регуляторах аппетита не только как о веществах, влияющих на массу тела, но и как об эндогенных регуляторных факторах, действующих на организм в целом. Полученные результаты могут помочь в поиске путей профилактики и коррекции патологических состояний, связанных с повышенной массой тела и нарушениями аппетита.

Основные положения, выносимые на защиту 1. Обестатин в дозе 300 нмоль/кг in vitro и in vivo не влиял на осморезистентность эритроцитов, но оказывал ингибирующий эффект на агрегацию тромбоцитов.

2. При однократном интраназальном введении обестатин вызывал выраженные анорексигенные эффекты, сопровождавшиеся изменением поведенческой активности, порога болевой чувствительности и вегетативного баланса.

3. Концевые фрагменты обестатина (1-4, 16-23) обладали сходным действием с целым пептидом на массу тела, потребление пищи и воды и увеличивали уровень тревожности. Все исследуемые фрагменты увеличивали порог болевой чувствительности.

4. При хроническом введении только фрагмент обестатина 1- сохранял анорексигенный эффект, обестатин и фрагмент 16- вызывали увеличение массы тела.

5. Из исследуемых веществ только фрагмент обестатина 1-4 во всех описанных случаях и при различных функциональных состояниях организма обладал анорексигенным эффектом, как правило, выражавшемся в снижении потреблении пищи и воды и уменьшении массы тела.

Апробация материалов диссертации Результаты диссертационной работы были представлены на конференции «Физиологическая активность регуляторных пептидов», посвященной 85-летию со дня рождения академика РАМН И.П. Ашмарина (Россия, Москва, 2010), V Всероссийской конференции (с международным участием) «Клиническая гемостазиология и гемореология в сердечнососудистой хирургии» (Россия, Москва, 2011), XIX Международной научной конференцияи студентов, аспирантов и молодых ученых ЛОМОНОСОВ-2012 (Россия, Москва, 2012, 2 работы), IV Международной научной конференции "Химия, структура и функция биомолекул", (Белоруссия, Минск, 2012, 2 работы), XX Международной научной конференции студентов, аспирантов и молодых ученых ЛОМОНОСОВРоссия, Москва, 2013, 3 работы), 19th Annual International "Stress and Behavior" Neuroscience and Biopsychiatry Conference (Russia, St. Petersburg, 2013), 45th European Brain and Behaviour Society Meeting (Germany, Munich, 2013), 2013XXII Съезде физиологического общества им. И.П. Павлова (Россия, Волгоград, 2013, 3 работы) и на заседании кафедры физиологии человека и животных биологического факультета МГУ (Россия, Москва, 2013).

Публикации По материалам диссертации опубликовано 17 печатных работ (в том числе 3 статьи в изданиях, рекомендованных ВАК РФ) Структура и объем диссертации Диссертация изложена на 177 страницах и включает введение, обзор литературы, описание объектов и методов исследования, результаты, обсуждение, выводы, список цитируемой литературы (содержит источников, в том числе 25 опубликовано в российских изданиях и 152 в зарубежных). Работа иллюстрирована 56 рисунками и содержит таблицы.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Работа выполнялась на самцах крыс линии Вистар средней массой - 300 г. (n=400). Все исследования проводились в соответствии с рекомендованными Европейским научным фондом (ESF) и Хельсинской декларацией о гуманном отношении к животным. В экспериментах использовали обестатин крыс (FNAPFDVGIKLSGAQYQQHGRAL-NH2), фрагменты обестатина 1-4 (FNAP-NH2), 5-10 (FDVGIK-NH2), 10- (KLSGAQ-NH2), 11-23 (LSGAQYQQHGRAL-NH2) и 16-23 (YQQHGRALNH2), синтезированные в лаборатории пептидного синтеза химического факультета СПбГУ под руководством проф. М. И. Титова и в ФГУ «Российский кардиологический научно-производственный комплекс»

Министерства здравоохранения и социального развития РФ в лаборатории синтеза пептидов под руководством Ж.Д. Беспаловой.

Предварительно проводили эксперименты по исследованию влияний различных доз обестатина на показатели первичного плазменного гемостаза (агрегацию тромбоцитов) и реологические свойства крови (по показателю осморезистентности эритроцитов) in vitro с целью выбора дозы для исследований in vivo.

Во второй части работы исследовали влияния различных способов однократного введения обестатина в дозе 300 нмоль/кг на ряд физиологических и биохимических показателей in vivo. В качестве способов введения были выбраны внутрибрюшинный и интраназальный, позволяющие оценить как периферические, так и центральные эффекты веществ. По результатам экспериментов было выбрано интраназальное введение как наиболее эффективный способ введения для изучения эффектов фрагментов обестатина.

Далее в работе проводилось исследование эффектов хронического интраназального введения обестатина и его фрагментов в дозе нмоль/кг в норме и при патологии (у крыс с экспериментально вызванной повышенной массой тела). В экспериментах in vivo во всех исследуемых случаях регистрацию физиологических и биохимических показателей осуществляли через сутки и через неделю после окончания введения веществ, в течение всего времени эксперимента животных содержали в индивидуальных камерах, где у них проводили ежедневное измерение массы тела, потребления пищи и воды.

Моделирование ожирения Для создания модели алиментарного ожирения животных в течение месяцев содержали на специализированной высококалорийной диете (калорийность корма 3900 ккал/100г, производство ЗАО «АссортиментАгро»; калорийность стандартного корма составляла 300ккал/100г).

Определение осмотической резистентности эритроцитов Оценку осмотической резистентности эритроцитов проводили по методу Л.И. Идельсона (Баркаган и др., 1985). Метод основан на количественном определении степени гемолиза в гипотонических растворах хлорида натрия.

Определение агрегации тромбоцитов Исследование агрегации тромбоцитов осуществляли по методу Born (Берковский и др., 2001), используя в качестве индуктора агрегации АДФ (в конечной концентрации 15 мкМ) производства фирмы «Технология стандарт» (Россия). Кровь для исследований брали из яремной вены (v.

jugularis), используя в качестве консерванта 3,8% раствор цитрата натрия (соотношение кровь : консервант = 9:1).

Регистрация поведенческой активности Уровень локомоторной, ориентировочно-исследовательской активности и тревожности во всех частях исследования оценивали в тестах «Открытое поле» и «Приподнятый крестообразный лабиринт» (Буреш и др., 1991; Титов и Каменский, 1980). Во всех случаях тестирование проводили в течение 3-х минут.

Регистрация уровня порога болевой чувствительности Регистрацию уровня порога болевой чувствительности осуществляли в тесте «Tail flick», основанном на рефлекторной реакции отдергивания хвоста животного под действием источника тепла (D'Amour & Smith, 1941).

Оценка вегетативного баланса регуляции по показателям вариабельности сердечного ритма Для оценки вегетативного баланса регуляции проводили регистрацию ЭКГ и рассчитывали показатели вариабельности сердечного ритма:

амплитуда моды (AMo), %; вариабельность ритма (Х, разброс выборки), мс; стандартное отклонение массива RR-интервалов (SD), мс; стрессиндекс (SI); индекс тонуса парасимпатической вегетативной нервной выборке. О сдвиге вегетативного баланса в сторону активации или подавления симпатического или парасимпатического компонента судили по соответствующим изменениям регистрируемых показателей.

антиоксидантной защиты, оценка уровня кортикостерона в плазме крови В качестве параметров оценки активности системы АОЗ были выбраны следующие показатели: общая антиоксидантная способность плазмы крови (Benzie & Strain, 1996), содержание в крови небелковых тиолов (Sedlak & Lindsay, 1968), активность супероксиддисмутазы гемолизата и плазмы крови (Sun & Zigman, 1978), активность каталазы крови (Aebi, 1984), содержание церуллоплазмина в плазме крови (Сиверина и др., 1986), а также уровень веществ, реагирующих с тиобарбитуровой кислотой (ТБК-активные продукты) (Гаврилов и др., 1987). Определение уровня кортикостерона в плазме крови осуществляли по методу Панкова (Панков и Усватова, 1965).

Методы статистической обработки данных Статистическую обработку результатов проводили при помощи параметрических (t-критерий Стьюдента) и непараметрических критериев (U-критерий Вилкоксона-Манна-Уитни, точный метод Фишера). Отличия считали значимыми при уровне достоверности р0.05. Для выявления статистической связи между различными показателями проводили расчет коэффициента корреляции Спирмена.

Расчет показателей вариабельности сердечного ритма проводили при помощи программ Spike-C3 и Intervals (автор Воронцов Д.Д.)

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Оценка показателей первичного плазменного гемостаза, Для исследования действия обестатина на показатели гемостаза в опытные пробы с цельной кровью интактных животных добавлялся пептид в концентрациях 1,5, 4,5, 7,5, 12 и 15 нмоль/мл пептида в конечной пробе (что соответствует дозам 100, 300, 500, 800, 1000 нмоль/кг живого веса в экспериментах in vivo). Анализ действия пептида на систему гемостаза и реологические свойства крови производился по показателям агрегации тромбоцитов и осморезистентности эритроцитов.

Исследование влияния обестатина in vitro на выбранные показатели тромбоцитов во всем диапазоне выбранных доз. Процент ингибирования составил 23,2%, 25,5%, 50,4%, 48,4% и 62,7% соответственно. Поскольку известно, что патологические состояния, связанные с увеличением массы тела, часто сопровождаются и увеличением свертываемости крови (Bowles et al., 2003), а обестатин в нашем исследовании рассматривался как потенциальный препарат для коррекции массы тела, то снижение обестатином агрегации тромбоцитов мы трактовали как положительный эффект.

Кроме того, наблюдалось значимое увеличение процента гемолизированных клеток, а значит, снижение осморезистентности эритроцитов при добавлении обестатина к цельной крови в концентрациях 1,5, 7,5, 12, 15 нмоль/мл и только при добавлении пептида в концентрации 4,5 нмоль/мл никаких эффектов на данный показатель не наблюдалось.

Снижение осморезистентности мы считали нежелательным эффектом, поскольку эритроциты становятся более чувствительны к изменению состава плазмы и легче разрушаются. Вследствие этого в дальнейшем мы использовали обестатин в дозе 4,5 нмоль/мл (что соответствует дозе нмоль/кг живого веса в экспериментах in vivo) Оценка эффектов различных способов однократного введения Анализ изменения массы тела в течение 8 дней после однократного введения обестатина показал, что пептид значимо снижает массу только после интраназального введения, начиная со 2 суток регистрации (рис. 1).

Рис. 1. Влияние различных способов однократного введения обестатина в дозе 300 нмоль/кг на массу тела самцов крыс. Условные обозначения: * значимое отклонение от контроля (р0,05). За «нулевой день» по шкале абсцисс принят первый день измерений.

Кроме того, интраназальное введение обестатина значимо уменьшало потребление крысами воды на 1-2, 4 и 6-8 сутки (рис. 2) и корма на 1, 2 и 4-7 сутки (рис. 3) после введения пептида.

Рис. 2. Влияние различных способов однократного введения обестатина в дозе 300 нмоль/кг на потребление воды самцами крыс. Условные обозначения: * - значимое отклонение от контроля (р0,05). За «нулевой день» по шкале абсцисс принят первый день измерений.

После внутрибрюшинного введения регистрировали только значимое уменьшение потребления воды (на 1, 7 и 8 сутки) и корма (4, 5 сутки) (рис.

2, 3).

Рисунок 3. Влияние различных способов однократного введения обестатина в дозе 300 нмоль/кг на потребление корма самцами крыс.

Условные обозначения: * - значимое отклонение от контроля (р0,05). За «нулевой день» по шкале абсцисс принят первый день измерений.

Известно, что обестатин при центральном введении изменяет секрецию вазопрессина (Samson et al., 2008), что может являться причиной снижения питьевой мотивации, а, следовательно, и аппетита. Снижение потребления жидкости ведет к интенсификации процессов липолиза для поддержания водно-солевого баланса, что в сочетании с подавлением аппетита приводит к понижению массы тела. Кроме того, действие многих пептидов - регуляторов аппетита, в частности грелина, холецистокинина, NPY, на пищевое и питьевое поведение связывают с изменением синтеза NO (Morley et al., 2011), обестатин, в свою очередь также может изменять выброс оксида азота (Agnew et al., 2011), что может быть еще одной причиной анорексигенного действия вещества.

интраназального введения веществ выявил увеличение ориентировочноисследовательской активности и уровня тревожности (табл. 1).

Внутрибрюшинное введение обестатина также приводило к увеличению уровня тревожности, но лишь через неделю после введения.

Обестатин только при интраназальном введении вызывал увеличение порога болевой чувствительности как через сутки (на 5%) так и через неделю (на 25%) (табл. 1).

чувствительности после однократного введения обестатина самцам крыс.

ПОКАЗАТЕЛЬ ЛМА ОИР ТРЕВОЖНОСТЬ ПБЧ

НЕДЕЛЯ

НЕДЕЛЯ

НЕДЕЛЯ

НЕДЕЛЯ

ГРУППА

ИНТРАНАЗАЛЬНОЕ

ВВЕДЕНИЕ (n=11)

ВНУТРИБРЮШИННОЕ

ВВЕДЕНИЕ (n=11) Условные обозначения: ЛМА – локомоторная активность; ОИР – ориентировочно-исследовательская активность; ПБЧ – порог болевой чувствительности; «» - значимое увеличение показателя относительно контроля (p0,05); «=» - отсутствие значимых отклонений показателя от контроля.

Исследование вегетативного баланса у самцов крыс после введения обестатина показало, что через сутки после интраназального введения наблюдается увеличение симпатического (коэффициент SI) и значимое уменьшение парасимпатического (коэффициент RMSSD) компонентов вегетативной регуляции (табл. 2).

Таблица 2. Влияние различных способов однократного введения обестатина в дозе 300 нмоль/кг на показатели вариабельности сердечного ритма у крыс через сутки после введения (ср. ± станд. ош. ср.).

ГРУППА ВВЕДЕНИЕ ОБЕСТАТИНА

КОНТРОЛЬ ИНТРАНАЗАЛЬНОЕ ВНУТРИБРЮШИННОЕ

Условные обозначения: SI – стресс индекс, отражает вклад симпатической системы; RMSSD - отражает вклад парасимпатической системы. * значимое отклонение от контроля (р0,05).

Влияния однократного интраназального введения различных Мониторинг массы тела после интраназального введения фрагментов обестатина показал, что только фрагменты 1-4 и 16-23 значимо снижали данный показатель (в среднем на 5%). Фрагменты 1-4 и 11-23 подавляли потребление крысами воды (в среднем на 15%) и корма (в среднем на 10%).

Анализ поведенческой активности после введения фрагментов показал, что концевые фрагменты действовали на поведенческие паттерны, как правило, однонаправленно. Так, после введения фрагментов 11-23 и 16- фрагментов 1-4, 11-23 и 16-23 вызывало увеличение уровня тревожности (табл. 3). Все исследуемые фрагменты обестатина вызывали увеличение порога болевой чувствительности (табл. 3).

чувствительности после однократного введения фрагментов обестатина самцам крыс.

ПОКАЗАТЕЛЬ ЛМА ОИР ТРЕВОЖНОСТЬ ПБЧ

НЕДЕЛЯ

НЕДЕЛЯ

НЕДЕЛЯ

НЕДЕЛЯ

ГРУППА

ФРАГМЕНТ

1-4 (n=8)

ФРАГМЕНТ

5-10 (n=9)

ФРАГМЕНТ

10-15 (n=9)

ФРАГМЕНТ

11-23 (n=8)

ФРАГМЕНТ

16-23 (n=11) Условные обозначения: ЛМА – локомоторная активность; ОИР – ориентировочно-исследовательская активность; ПБЧ – порог болевой чувствительности; «» - значимое увеличение показателя относительно контроля (p0,05); «» - значимое уменьшение показателя относительно контроля (p0,05);

«=» - отсутствие значимых отклонений показателя от контроля.

В то же время показатели вегетативного баланса изменялись только после введения фрагмента 5-10. Эффект фрагмента 5-10 проявлялся только на следующие сутки после введения и заключался в увеличении симпатического компонента (на 71,4%) и уменьшении парасимпатического компонента (на 35,4%) вегетативной регуляции.

Влияния хронического интраназального введения обестатина и его фрагментов 1-4 и 16-23 самцам крыс в течение 5 дней Анализ изменения массы тела показал, что обестатин и его фрагмент 16-23 значимо повышали, а фрагмент обестатина 1-4 снижал данный показатель, начиная со вторых суток регистрации. Причем эффекты сохранялись в течение длительного времени после окончания введения веществ. Также только фрагмент 1-4 вызывал значимое снижение потребление крысами воды (на 1, 2, 4, 6, 8-12 сутки регистрации) и корма (2, 6, 8-12 сутки регистрации) После хронического введения фрагментов обестатина наблюдалось изменение поведенческой активности животных: оба фрагмента снижали уровень тревожности; кроме того, после введения фрагмента 16- наблюдалось увеличение уровня локомоторной и ориентировочноисследовательской активности (табл. 4). Ни одно из исследуемых веществ после хронического введения не вызвало изменений порога болевой чувствительности и показателей, отражающих вегетативный баланс.

Таблица 4. Изменение паттернов поведения после окончания хронического введения обестатина или его фрагментов 1-4, 16-23 самцам крыс.

ПОКАЗАТЕЛЬ ЛМА ОИР ТРЕВОЖНОСТЬ

НЕДЕЛЯ

НЕДЕЛЯ

НЕДЕЛЯ

ГРУППА

ОБЕСТАТИН

ФРАГМЕНТ 16- Условные обозначения: ЛМА – локомоторная активность; ОИР – ориентировочно-исследовательская активность; «» - значимое увеличение показателя относительно контроля (p0,05); «» - значимое уменьшение показателя относительно контроля (p0,05);

«=» - отсутствие значимых отклонений показателя от контроля.

состояния системы антиоксидантной защиты и уровня кортикостерона в плазме крови после однократного и хронического введения обестатина и фрагмента 1-4, поскольку эти вещества вызывали однонаправленное действие на массу тела, потребление пищи и воды при однократном введении и разнонаправленное при хроническом.

После однократного введения веществ не было выявлено изменений в активности системы антиоксидантной защиты и уровня кортикостерона в плазме крови, тогда как после хронического введения обестатина и его фрагмента 1-4 наблюдалось уменьшение общей антиоксидантной способности плазмы через неделю после окончания введения как обестатина (на 13,3%), так и фрагмента 1-4 (на 16,6%). Также обестатин вызывал снижение ТБК-активных продуктов в том же периоде (на 17,8%).

Такое изменение показателей, возможно, связано с подавлением обестатином процессов перекисного окисления липидов, что выражается в снижении ТБК-активных продуктов и, следовательно, понижении содержания низкомолекулярных антиоксидантов. Это в свою очередь приводит к снижению антиоксидантной способности плазмы. Кроме того, обестатин при хроническом введении вызвал значимое повышение уровня кортикостерона в плазме крови через сутки (на 45,3%) и понижение через неделю (на 24,7%) после окончания введения.

Исследование эффектов хронического введения обестатина и его Значимое увеличение прибавки массы тела животных, содержавшихся на высококалорийном корме, относительно массы тела животных, получавших стандартное сбалансированное питание, наблюдалось уже через 6 дней после начала эксперимента и через два месяца составило в среднем 10%. Далее одновременно с началом хронического введения сбалансированную диету. Введение обестатина и его фрагмента осуществляли ежедневно в течение 5 дней.

Изменений массы тела после хронического введения веществ зарегистрировано не было. Однако фрагмент 1-4 вызывал значимое снижение потребление крысами воды и корма. На этом основании можно предположить, что изменения массы тела, возможно, возникают в более отдаленном периоде и поэтому нам не удалось их зарегистрировать.

Введение обестатина приводило только к снижению потребления воды у крыс с повышенной массой тела Анализ поведенческой активности животных, содержащихся на высококалорийной диете относительно животных, содержащихся на стандартом сбалансированном корме, выявил снижение локомоторной активности, увеличение уровня тревожности и увеличение болевого порога Введение фрагмента 1-4 животным с повышенной массой вызывало увеличение локомоторной, ориентировочно-исследовательской чувствительности через неделю после окончания введения. В то же время эффекты обестатина заключались только в снижении болевого порога.

Можно предположить, что фрагмент 1-4 приближает значения ряда регистрируемых показателей к значениям, выявленным у животных с нормальным весом.

Таким образом, нами было выявлено наличие продолжительного отставленного действия обестатина и ряда его фрагментов уже после однократного введения. По-видимому, однократное введение обестатина и его фрагментов приводит к запуску каскадов реакций, связанных с интенсификацией синтеза и выброса других регуляторных пептидов, что, в свою очередь, и обеспечивает такое пролонгированное действие исследуемых веществ. Такой характер действия является общим свойством регуляторных пептидов и может служить не только для обеспечения быстрого прямого ответа, но и для относительно длительных регуляторных влияний (Герштейн и др., 1984; Ашмарин и Обухова, 1986;

Гомазков, 1992).

Также нами был обнаружен комплекс эффектов, затрагивающих поведенческую активность, болевую чувствительность, баланс вегетативной регуляции, а также ряд биохимических характеристик. Такой спектр различных эффектов может быть связан с локализацией рецепторов к данным пептидам в различных органах и тканях. И хотя в настоящее обнаружено, существует предположение, что обестатин способен связываться с сиротским рецептором GPR39, ассоциированным с G белком, достаточно широко представленным в организме (Zhang et al., 2005; Jackson et al., 2006; Moechars et al., 2006). Кроме того, существуют данные о том, что обестатин способен связываться с рецептором глюкагонподобного пептида 1 (GLP-1R), опосредующим действие инкретина (Granata et al., 2008). Существует также гипотеза о возможном вовлечении системы кортикотропин-рилизинг фактора и рецепторов CRF и CRF2 в механизм действия обестатина (Ataka et al., 2008). Вовлечение таких путей могло привести к наблюдаемым эффектам исследуемых веществ: известно, что система кортикотропин-рилизинг фактора участвует в регуляции болевой чувствительности, тревожных и депрессивных состояний, действуя, в частности на миндалину (Ryabinin et al., 2002).

анорексигенным действием при различных исходных функциональных состояниях организма обладал фрагмент обестатина 1-4. При частичном протеолизе пептида с участием пролиновой пептидазы с большой долей вероятности образуется именно этот фрагмент обестатина, на основании чего можно предположить, что этот участок молекулы и опосредует действие обестатина на массу тела и систему аппетита.

характерного для регуляторных пептидов свойства плейотропности как обестатином, так и его фрагментами. У всех исследованных веществ помимо эффектов на массу тела, потребление пищи и воды выявлялся комплекс влияний на ряд физиологических и биохимических показателей, проявление которых зависело не только от продолжительности введения веществ, но также и от функционального состояния организма.

Проведенный корреляционный анализ показал, что эффекты пептидов на массу тела, потребления пищи и воды и изменение других физиологических и биохимических показателей возможно не имеют функциональной связи. На основании полученных данных можно утверждать, что обестатин и его фрагмент 1-4 могут рассматриваться как эндогенные регуляторные факторы.

ВЫВОДЫ

При однократном интраназальном введении обестатина и его фрагментов были выявлены две группы эффектов:

снижение массы тела, потребления пищи и питья Обестатин увеличивал ориентировочноисследовательскую активность, тревожность, активировал симпатический и подавлял парасимпатический компонент увеличивали уровень тревожности. Фрагменты 16-23 и 11- активировал симпатический и подавлял парасимпатический фрагменты увеличивали порог болевой чувствительности.

Корреляционный анализ показал, что между эффектами первой и второй группы нет корреляционной зависимости.

При хроническом введении были выявлены две группы эффектов:

Фрагмент 1-4 сохранял анорексигенный эффект, тогда как обестатин и его фрагмент 16-23 проявляли орексигенное Обестатин увеличивал уровень тревожности, изменял уровень кортикостерона в плазме крови и активность системы антиоксидантной защиты. Фрагмент 1-4 снижал способность плазмы крови. Фрагмент 16-23 увеличивал локомоторную, ориентировочно-исследовательскую активность и снижал уровень тревожности.

На модели животных с повышенной массой тела также наблюдали две группы эффектов:

Фрагмент 1-4 вызывал снижение потребление пищи и питья Обестатин снижал порог болевой чувствительности и увеличивал СОД-подобную активность в плазме крови.

Фрагмент 1-4 увеличивал локомоторную, ориентировочноисследовательскую активность, снижал уровень тревожности и порог болевой чувствительности.

На основании полученных данных и их анализа можно утверждать, что обестатин и его фрагмент 1-4, с большой степенью вероятности, образующийся при частичном протеолизе пептида, могут рассматриваться как эндогенные регуляторные факторы.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ

ДИССЕРТАЦИИ:

Е.Э. Хиразова, М.В.Маслова, Н.А.Соколова Избыточный вес и ожирение: возможная коррекция // Природа. 2013. Т. 2 (2), С. 18.

Е.Э Хиразова, М.Г. Голубева, М.В. Маслова, А.В. Граф, А.С.


Маклакова, А.А. Байжуманов, Л.К. Трофимова, Н.А. Соколова, А.А.

Каменский. Влияние анорексигенного пептида обестатина на агрегацию тромбоцитов и осмотическую резистентность эритроцитов // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины.

2013. Т. 155 (2). С. 136-139.

Е.Э. Хиразова, А.В. Граф, Е.С. Моторыкина, М.В. Маслова, А.С. Маклакова, Н.А. Соколова, А.А. Каменский. Влияния фрагментов обестатина на массу тела, потребление корма и воды самцами белых крыс при однократном введении // Доклады академии наук (в печати) Хиразова Е.Э., Сейтеблаева С.Р., Маслова М.В., Граф А.В., Трофимова Л.К., Маклакова А.С., Титов М.И., Каменский А.А., Соколова Н.А. Анорексигенные и поведенческие влияния обестатина на самок крыс // Материалы конференции «Физиологическая активность регуляторных пептидов», посвященной 85-летию со дня рождения академика РАМН И.П. Ашмарина. Москва. 2010.

Хиразова Е.Э., Голубева М.Г., Маслова М.В., Сейтаблаева С.Р., Титов М.И., Соколова Н.А., Каменский А.А. Влияние обестатина на функции первичного и плазменного гемостаза и осмотическую резистентность эритроцитов in vitro // Материалы V Всероссийской конференции (с международным участием) «Клиническая гемостазиология и гемореология в сердечнососудистой хирургии». Москва. 2011. С. 545-546.

Моторыкина Е.С., Хиразова Е.Э. Влияние обестатина и его фрагментов у самцов крыс на пищевое поведение // Материалы XIX Международной научной конференции студентов, аспирантов и молодых ученых ЛОМОНОСОВ-2012. Москва. 2012. С. 256-257.

Ягубова С.С., Хиразова Е.Э. Влияние обестатина и его фрагментов на некоторые физиологические параметры самцов крыс // Материалы XIX Международной научной конференции студентов, аспирантов и молодых ученых ЛОМОНОСОВ-2012. Москва. 2012.

С. 290-291.

Е.Э. Хиразова, А.В. Граф, М.Г. Голубева, М.В. Маслова, Н.А.

Соколова, А.А. Каменский. Влияние обестатина на агрегацию тромбоцитов и осмотическую резистентность эритроцитов// Материалы IV Международной научной конференции "Химия, структура и функция биомолекул". Минск. Е.Э. Хиразова, А.В. Граф, Е.С. Моторыкина, М.В. Маслова, А.С. Маклакова, Н.А. Соколова, А.А. Каменский. Влияния фрагментов обестатина на массу тела, потребление корма и воды самцами белых крыс при однократном введении // Материалы IV Международной научной конференции "Химия, структура и функция биомолекул". Минск. Девятов А.А., Хиразова Е.Э. Влияние обестатина и его 10.

фрагмента (1-4) на систему антиоксидантной защиты и уровень стресса у крыс // Материалы XX Международной научной ЛОМОНОСОВ-2013. Москва. 2013. С. 324-325.

Моторыкина Е.С., Хиразова Е.Э. Эффекты фрагментов 11.

обестатина на массу тела, пищевое и питьевое поведение при однократном введении // Материалы XX Международной научной ЛОМОНОСОВ-2013. Москва. 2013. С. 338.

Ягубова С.С., Хиразова Е.Э. Анализ депрессивно-подобного 12.

поведения самцов крыс после однократного и хронического Международной научной конференции студентов, аспирантов и молодых ученых ЛОМОНОСОВ-2013. Москва. 2013. С. 353.

13. S.S.Yagubova, E.E.Khirazova, M.V.Maslova, A.S.Maklakova, Zh.D.Bespalova, D.A.Frid, N.A.Sokolova, A.A.Kamensky Effects of single intranasal injection of obestatin and its fragments on depression level in male rats // 19th Annual International "Stress and Behavior" Neuroscience and Biopsychiatry Conference. St. Petersburg. 2013. P. 24.

А.А. Девятов, Е.Э. Хиразова, А.А. Байжуманов, М.В. Маслова, 14.

А.С. Маклакова, Ж.Д. Беспалова, Д.А. Фрид, Н.А. Соколова, А.А.

Каменский Влияние обестатина и его фрагмента (1-4) на систему антиоксидантной защиты и уровень стресса у крыс // Материалы XXII Съезда физиологического общества им. И.П. Павлова.

Волгоград. 2013.

Моторыкина Е.С., Хиразова Е.Э., Маслова М.В., Граф А.В., 15.

Беспалова Ж.Д., Фрид Д.А., Соколова Н.А., Каменский А.А. Влияние обестатина и его фрагментов на пищевое поведение у самцов крыс // Материалы XXII Съезда физиологического общества им. И.П.

Павлова. Волгоград. 2013.

Ягубова С.С., Хиразова Е.Э., Маслова М.В., Маклакова А.С., 16.

Беспалова Ж.Д., Фрид Д.А., Соколова Н.А., Каменский А.А.

Фрагменты обестатина снижают уровень депрессивности у крыс после однократного интраназального введения // Материалы XXII Съезда физиологического общества им. И.П. Павлова. Волгоград.

2013.

17. Yagubova S.S., Khirazova E.E., Maslova M.V., Maklakova A.S., Bespalova Z.D., Frid D.A., Sokolova N.A., Kamensky A.A. Effects of acute and chronic injection of obestatin and its fragments on some behavioral characteristics of male rats // 45th European Brain and Behaviour Society Meeting. Munich.

 


Похожие работы:

«САРЫЧЕВ Александр Сергеевич ХАРАКТЕРИСТИКА АДАПТИВНЫХ РЕАКЦИЙ ОРГАНИЗМА ВАХТОВЫХ РАБОЧИХ В УСЛОВИЯХ ЗАПОЛЯРЬЯ 03.03.01 – Физиология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук Архангельск 2012 Работа выполнена в ГБОУ ВПО Северный государственный медицинский университет на кафедре гигиены и медицинской экологии Научный консультант : доктор медицинских наук, профессор Гудков Андрей Борисович Официальные оппоненты : заслуженный деятель науки РФ,...»

«АДОНИН Леонид Сергеевич ПЛАСТИНКА КОНТАКТА ООЦИТА СЦИФОМЕДУЗЫ AURELIA AURITA: СТРУКТУРНАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ И МОРФОДИНАМИКА 03.03.04 – Клеточная биология, цитология, гистология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Санкт-Петербург 2013 Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении науки Институт цитологии Российской академии наук Научный руководитель : доктор биологических наук, профессор Подгорная Ольга Игоревна...»

«Челноков Андрей Алексеевич ЗАКОНОМЕРНОСТИ ФОРМИРОВАНИЯ СПИНАЛЬНОГО ТОРМОЖЕНИЯ У ЧЕЛОВЕКА 03.03.01 - Физиология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук Краснодар – 2014 2 Диссертация выполнена в Великолукской государственной академии физической культуры и спорта Городничев Руслан Михайлович, заслуженный работник Научный физической культуры России, доктор биологических наук, консультант: профессор Официальные Фомина Елена Валентиновна,...»

«ФИРСАНОВ Денис Владимирович ДИНАМИКА ОБРАЗОВАНИЯ И ЭЛИМИНАЦИИ ФОСФОРИЛИРОВАННОГО ГИСТОНА Н2АХ В КЛЕТКАХ МЛЕКОПИТАЮЩИХ ПОСЛЕ РЕНТГЕНОВСКОГО ОБЛУЧЕНИЯ 03.03.04 — Клеточная биология, цитология, гистология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Санкт-Петербург 2012 Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении науки Институт цитологии Российской академии наук Научные руководители: кандидат биологических наук Кропотов...»

«ШАРЛАИМОВА Наталья Сергеевна КЛЕТКИ ЦЕЛОМИЧЕСКОГО ЭПИТЕЛИЯ МОРСКОЙ ЗВЕЗДЫ ASTERIAS RUBENS L., ОБЛАДАЮЩИЕ СВОЙСТВАМИ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК 03.03.04. – Клеточная биология, цитология, гистология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Санкт-Петербург 2011 г. Работа выполнена в Учреждении Российской академии наук Институт цитологии РАН, Санкт-Петербург кандидат биологических наук Научный руководитель : Петухова Ольга Александровна Институт...»

«ТУЛУПОВ Андрей Александрович ВОЗМОЖНОСТИ МАГНИТНО-РЕЗОНАНСНОЙ ТОМОГРАФИИ В МОРФО-ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ ОЦЕНКЕ ЦЕРЕБРАЛЬНОГО ВЕНОЗНОГО КРОВОТОКА И ЛИКВОРОЦИРКУЛЯЦИИ 14.01.13 - лучевая диагностика, лучевая терапия 03.03.01 - физиология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук Томск – 2011 Работа выполнена в Учреждении Российской академии наук Институте Международный томографический центр Сибирского отделения РАН (г. Новосибирск, Россия). Научные...»

«АМБАРЦУМЯН Михаил Вазгенович ЭКОЛОГО-ФИЗИОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ МИНЕРАЛЬНОГО ОБМЕНА И РЕАКЦИИ МЕСТНОГО ИММУНИТЕТА У ЖЕНЩИН НИЖНЕГО ПОВОЛЖЬЯ 03.03.01 – физиология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Москва – 2012 Работа выполнена на кафедре нормальной физиологии медицинского факультета Федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования Российский университет дружбы народов...»

«ЕКИМОВА ЕЛЕНА ВЯЧЕСЛАВОВНА АЛЬФАФЕТОПРОТЕИН И 2-МИКРОГЛОБУЛИН КАК ВОЗМОЖНЫЕ ПРОГНОСТИЧЕСКИЕ МАРКЕРЫ СОСТОЯНИЯ НОВОРОЖДЕННОГО В РАННЕМ НЕОНАТАЛЬНОМ ПЕРИОДЕ 03.03.01 - физиология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Москва – 2010 Работа выполнена в лаборатории эндокринологии ФГУ Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии им. академика В.И. Кулакова Минздравсоцразвития России Научный руководитель : доктор биологических наук,...»

«ГУЛИК ЕЛЕНА СЕРГЕЕВНА ВЛИЯНИЕ ХИТАБИСА НА ФУНКЦИОНАЛЬНОЕ СОСТОЯНИЕ ОРГАНИЗМА ЖИВОТНЫХ ПРИ ОКИСЛИТЕЛЬНОМ СТРЕССЕ 03.03.01 – физиология Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Томск – 2010 Работа выполнена в отделе физиологии обособленного структурного подразделения Научно-исследовательский институт биологии и биофизики Томского государственного университета Научный руководитель : доктор биологических наук, профессор Костеша Николай...»

«Деревянчук Екатерина Григорьевна ЭПИГЕНЕТИЧЕСКИЕ, МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИЕ И БИОХИМИЧЕСКИЕ КРИТЕРИИ НАРУШЕНИЙ ЭМБРИОГЕНЕЗА ЧЕЛОВЕКА 03.03.05 – биология развития, эмбриология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Ставрополь – 2011 Работа выполнена в ФГАОУ ВПО Южный федеральный университет и Научно-исследовательском институте биологии ЮФУ. доктор биологических наук, профессор Научный руководитель : Шкурат Татьяна Павловна. доктор...»

«Майорова Лариса Алексеевна Реорганизация процессов начального этапа восприятия речи у пациентов с постинсультной сенсорной афазией: фМРТ - исследование 03.03.01 Физиология Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Москва, 2013 Работа выполнена в лаборатории клеточной нейробиологии обучения и лаборатории высшей нервной деятельности человека Федерального государственного бюджетного учреждения науки Института высшей нервной деятельности и...»

«ДУГИНА ВЕРА БОРИСОВНА СТРУКТУРНО-ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ РАЗЛИЧИЯ ЦИТОПЛАЗМАТИЧЕСКИХ ИЗОФОРМ АКТИНА В НЕМЫШЕЧНЫХ КЛЕТКАХ Специальность 03.03.04 – клеточная биология, цитология, гистология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук Москва – 2014 2 Работа выполнена в отделе математических методов в биологии НИИ физикохимической биологии имени А. Н. Белозерского Федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего...»

«Тараканова Оксана Ивановна РОЛЬ ХОЛЕСТЕРИНА МЕМБРАНЫ В СЕКРЕЦИИ НЕЙРОМЕДИАТОРА И ЭКЗОЦИТОЗЕ СИНАПТИЧЕСКИХ ВЕЗИКУЛ ИЗ ДВИГАТЕЛЬНЫХ НЕРВНЫХ ОКОНЧАНИЙ 03.03.01 - физиология Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Казань-2011 1 Работа выполнена в ГБОУ ВПО Казанский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию РФ Научный руководитель : доктор медицинских наук, профессор, член-корр....»

«ЧЕТИНА Елена Васильевна КЛЕТОЧНЫЕ И МОЛЕКУЛЯРНЫЕ МЕХАНИЗМЫ РАЗРУШЕНИЯ СУСТАВНОГО ХРЯЩА ПРИ ОСТЕОАРТРОЗЕ 03.03.04 – клеточная биология, цитология, гистология Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук Москва - 2011 2 Работа выполнена в Учреждении Российской академии медицинских наук Научно-исследовательском институте ревматологии РАМН Официальные оппоненты : доктор медицинских наук, профессор Макарова Ольга Васильевна...»

«Швед Никита Александрович Вителлогенин полосатой камбалы Liopsetta pinnifasciata как биомаркер эстрогенного загрязнения 03.03.04 – клеточная биология, цитология, гистология Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Владивосток – 2011 Работа выполнена в Учреждении Российской академии наук Институте биологии моря им. А.В. Жирмунского Дальневосточного отделения РАН Научный руководитель : кандидат биологических наук, старший научный...»

«ДЁМИН Александр Викторович ОСОБЕННОСТИ ПОСТУРАЛЬНОГО БАЛАНСА У МУЖЧИН ПОЖИЛОГО И СТАРЧЕСКОГО ВОЗРАСТА 03.03.01 – физиология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Архангельск – 2011 2 Работы выполнена на кафедре физиологии и патологии развития человека ГОУ ВПО Поморский государственный университет имени М.В. Ломоносова Научный руководитель : Заслуженный работник высшей школы РФ доктор медицинских наук, профессор, Гудков Андрей...»

«Ожева Разиет Шумафовна ЭКОЛОГО-ФИЗИОЛОГИЧЕСКИЕ И ЭТНИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ АДАПТИВНЫХ РЕАКЦИЙ ОРГАНИЗМА ПОДРОСТКОВ К УСЛОВИЯМ СЕВЕРО-КАВКАЗСКОГО РЕГИОНА 03.03.01-физиология 14.03.03-патологическая физиология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук Москва 2012 Работа выполнена на кафедре нормальной физиологии медицинского факультета Федерального государственного бюджетного образовательного учреждения Российский университет дружбы народов...»

«ФЕДОРОВСКАЯ Татьяна Викторовна РЕГИОНАРНЫЕ АДАПТАЦИОННО-ТРОФИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ ПРИ СЕГМЕНТАРНОЙ И НАДСЕГМЕНТАРНОЙ КАРДИАЛГИЯХ 03.03.01 – физиология 14.03.03 – патологическая физиология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Москва – 2011 Работа выполнена на кафедре нормальной физиологии медицинского факультета и кафедре геронтологии ФПКМР Федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального...»

«Егорова Маргарита Владимировна РОЛЬ ЖИРНЫХ КИСЛОТ В АДАПТИВНЫХ РЕАКЦИЯХ КАРДИОМИОЦИТОВ ПРИ МЕТАБОЛИЧЕСКОЙ ИШЕМИИ 03.03.01 – физиология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук Томск – 2014 2 Работа выполнена в Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования Сибирский государственный медицинский университет Министерства здравоохранения Российской Федерации Научный консультант : доктор медицинских...»

«Очеретина Руфина Юрьевна МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ПЕЧЕНИ МЫШЕЙ ДО И ПОСЛЕ ПЕРЕЛОМА КОСТЕЙ ГОЛЕНИ 03.03.04 - клеточная биология, цитология, гистология Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук АСТРАХАНЬ – 2014 Работа выполнена в федеральном государственном бюджетном учреждении Российский научный центр Восстановительная травматология и ортопедия имени академика Г.А. Илизарова Министерства здравоохранения Российской Федерации...»






 
© 2013 www.diss.seluk.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Авторефераты, Диссертации, Монографии, Методички, учебные программы»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.