WWW.DISS.SELUK.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА
(Авторефераты, диссертации, методички, учебные программы, монографии)

 

На правах рукописи

ЗУБАТКИНА Ирина Сергеевна

ИНТЕГРАЛЬНАЯ ОЦЕНКА РЕГУЛЯЦИИ ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ

АКТИВНОСТИ ИММУНОКОМПЕТЕНТНЫХ КЛЕТОК НА ОСНОВЕ

СИНЕРГЕТИЧЕСКОГО ПОДХОДА

03.03.01 – Физиология

АВТОРЕФЕРАТ

Диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Архангельск – 2013

Работа выполнена в отделе экологической иммунологии Института физиологии природных адаптаций Уральского отделения Российской академии наук (г. Архангельск)

Научный руководитель: заслуженный деятель науки РФ, доктор медицинских наук, профессор Добродеева Лилия Константиновна

Официальные оппоненты: Макарова Валерия Ивановна доктор медицинских наук, профессор, ГБОУ ВПО «Северный государственный медицинский университет», заведующий кафедрой педиатрии и пропедевтики детских болезней Панков Михаил Николаевич кандидат медицинских наук, доцент ФГАОУ ВПО «Северный (Арктический) федеральный университет имени М.В. Ломоносова», заместитель директора института медикобиологических исследований

Ведущая организация: Северо-Западный государственный медицинский университет имени И.И. Мечникова, г. Санкт-Петербург

Защита диссертации состоится «13» декабря 2013 г. в 12 часов на заседании диссертационного совета Д 212.008.04 на базе Северного (Арктического) федерального университета имени М.В.Ломоносова по адресу:

163045, г. Архангельск, ул. Бадигина, д.3.

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке ФГАОУ ВПО «Северного (Арктического) федерального университета имени М.В. Ломоносова».

Автореферат разослан: «09» ноября 2013 г.

Ученый секретарь диссертационного совета Старцева Лариса Федоровна

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность исследования. Особенность биосистем состоит в том, что они не просто открытые системы, а системы, находящиеся в стационарном состоянии, для которого характерны два основных свойства. Прежде всего, это его энергетический уровень, который показывает, насколько далеко система удалена от термодинамического равновесия. Другой особенностью стационарного состояния биосистем является определенная степень его устойчивости. Организм человека как динамическая открытая биосистема непрерывно обменивается веществом и энергией с окружающей средой, поддерживая свое устойчивое стационарное состояние за счет множества метаболических процессов, сбалансированных настолько, что основные параметры гомеостаза сохраняются неизменными (Шредингер Э., 2002;



Николас Г., Пригожин И., 2003; Самойлов В.О., 2007). Причина устойчивости стационарного состояния, в котором сохраняется работоспособность и способность к авторегуляции, была обоснована И. Пригожиным и заключается в контроле продукции энтропии на постоянном минимальном уровне (Гленсдорф П., Пригожин И., 2003; Трубецков Д.И., 2005; Karl F., 2012).

Синергетика изучает процессы самоорганизации и устойчивости систем, которые развиваются вследствие открытости и притока энергии извне и характеризуются нелинейностью протекания внутренних процессов (Хакен Г., 1980, Князева Е.Н., Курдюмов С.П., 2002; Капица С.П. и соавт., 2003; Баранцев Р.Г., 2003; Пригожин И., 2003; Дмитриева М.С., 2005; Лоскутов А.Ю. и соавт., 2007). Синергетический подход позволяет получить информацию в сжатой, но без потерь форме, путем перехода от множества параметров состояния сложной системы к параметрам порядка, которые, в свою очередь, являются функциями параметров состояния (Хакен Г., 2003; Чернавский Д.С., 2004; Штеренберг М.И., 2004). Использование синергетической методологии обогащает формализованное, абстрактное описание медико-биологических процессов, позволяет разработать общие, в методическом и теоретическом плане, направления, которые по-новому могут представлять состояние нормы и патологии организма человека в рамках многомерных фазовых пространств состояний (Тараненко А.М., 2005; Филатова О.Е. и соавт., 2006; Еськов В.М. и соавт., 2010; Бурыкина А.С. и соавт., 2010; Meirovitch H., 2010; Varela M. et al., 2010; Davies P. et al., 2013).

Иммунная система является нелинейной самоорганизующейся системой, непосредственно контактирующей с внешней средой и сохраняющей память о происходящих на не воздействиях, обладает большим разнообразием процессов, реализуя сложные механизмы защиты против чужеродных агентов.

Иммунные реакции находят отражение в динамике структурноорганизационных взаимодействий и имеют отличие в качественном составе участвующих в них компонентов, взаимодействующих друг с другом посредством различных сигналов. Оценка регуляции функциональной активности иммунокомпетентных клеток с учетом относительной степени упорядоченности состояния системы иммунитета позволит вычленить наиболее информативные параметры, по которым возможно не только определить е текущее состояние, но и предвидеть направление протекания процессов, что является актуальным для раннего выявления нарушений иммунной защиты.

Цель и задачи исследования. Цель работы - оценить роль метаболических механизмов регуляции энергетической обеспеченности функционирования иммунокомпетентных клеток в зависимости от устойчивости и степени упорядоченности состояния иммунной системы.





Для достижения поставленной цели решались следующие задачи:

1. Установить направленность иммунных реакций при различной интенсивности энергетического метаболизма и обеспеченности аденозинтрифосфатом иммунокомпетентных клеток.

2. Выявить согласованные изменения показателей иммунитета и параметра порядка, отражающего относительную степень хаотичности системы.

3. Изучить характер взаимосвязей и построить регрессионную модель расчета параметра порядка для оценки устойчивости системы иммунитета.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Изменение уровня энергообеспеченности лимфоцитов в процессе их активизации базируется на метаболическом перепрограммировании через положительную регуляцию интенсивности гликолиза с повышением соотношения лактат/пируват и сопровождается снижением реакций со стороны фагоцитарной активности нейтрофилов крови и интерферона-гамма.

2. Нарастание степени неупорядоченности иммунной системы связано с изменением активности цитотоксических реакций и апоптозом иммунокомпетентных клеток.

3. Устойчивость иммунной системы соотносится с величиной параметра порядка, которая может быть рассчитана по минимальному числу иммунологических показателей и обусловлена степенью функционирования и реагирования иммунной защиты, зависящей от уровня энергетического метаболизма.

Научная новизна исследования. Впервые осуществлена оценка иммунного статуса, учитывающая степень упорядоченности состояния системы и установлены параметры, обладающие наибольшей информативностью.

Показано, что степень упорядоченности состояния иммунной системы зависит от уровня энергообеспеченности (АТФ) лимфоцитов периферической крови.

Установлено снижение содержания АТФ в лимфоцитах периферической крови человека в период активизации, пролиферации и дифференцировки иммунокомпетентных клеток. Доказано, что рост неупорядоченности состояния системы иммунитета связан с увеличением активности разрушения клеток путем цитолиза и апоптоза. Проведена верификация параметра порядка комплексом иммунологических показателей и установлен диапазон его значений, при котором сохраняется динамическая устойчивость иммунной системы. Установлено, что в поддержании динамической устойчивости иммунной системы наиболее значимы Т-лимфоциты с рецептором к трансферрину, Т-хелперы и натуральные киллеры.

Теоретическая и практическая значимость исследования. Для оценки иммунного статуса организма предлагается подход, учитывающий биоэнергетические характеристики и степень упорядоченности состояния системы. Определение относительной степени упорядоченности для скрининговой оценки состояния системы иммунитета в обширных мониторинговых исследованиях ускоряет обследование и сокращает финансовые затраты. Предложенная регрессионная модель расчета параметра порядка для оценки устойчивости системы иммунитета помогает выявить нарушения е функционирования на донозологическом этапе. Оценка состояния иммунной системы по параметру порядка в динамике лечебнопрофилактических мероприятий позволяет дать объективную оценку их эффективности.

Материалы исследования используются в практической работе медицинской компании «Биолам» (акт внедрения от 18.11.2012.) и научных исследованиях лаборатории регуляторных механизмов иммунитета ФГНБУН ИФПА УрО РАН (акт внедрения от 23.02.12).

Диссертационное исследование выполнено в соответствии с комплексным планом НИР Института физиологии природных адаптаций УрО РАН (номер государственной регистрации 0120.0601941).

Апробация работы. Основные результаты работы доложены на международной конференции «B-cells and Protection: Back to Basics», (Испания, Барселона, постерный доклад); на Всероссийской молодежной научно-практической конференции «Адаптация человека на Севере: медикобиологические аспекты», 2012 (Россия, Архангельск); на пятом международном научном конгрессе «Нейробиотелеком-2012: инфокоммуникационные технологии в инновациях, медико-биологических и технических науках»

(Россия, Санкт-Петербург); на объединенном иммунологическом форуме, (Россия, Нижний Новгород); на XXII съезде физиологического общества им.

И.П. Павлова, 2013 (Россия, Волгоград); на заседании ученого совета института физиологии природных адаптаций УрО РАН (Архангельск), 2013.

По материалам исследования опубликованы 6 печатных работ, в том числе 4 статьи в рецензируемых научных журналах.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на страницах машинописного текста и состоит из введения, 3 глав (обзор литературы, материалы и методы исследования, результаты исследования и их обсуждение), заключения, выводов, списка литературы. Работа иллюстрирована 11 таблицами и 8 рисунками. Список литературы включает 234 источника, из них 55 отечественных и 179 зарубежных.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Все исследования проводились с согласия волонтеров и в соответствии с требованиями Хельсинкской Декларации Всемирной Медицинской Ассоциации об этических принципах проведения медицинских исследований (2000 г.).

Было проведено комплексное обследование 110 практически здоровых волонтеров, жителей Архангельска. Группу волонтеров составили 63 женщины и 47 мужчин разного возраста (от 23 до 65 лет). У всех волонтеров определялся широкий спектр иммунологических показателей, и проводилась регистрация кроунограмм с использованием метода кроуноскопии. Также у 49 человек из общего числа волонтеров было проведено определение ряда биохимических показателей, позволяющих оценить уровень энергетического метаболизма, в том числе у 34 человек была исследована обеспеченность лимфоцитов аденозинтрифосфатом.

Комплекс иммунологических исследований включал определение содержания лейкоцитов в венозной крови и лейкограмму с последующей оценкой концентраций лимфоцитов фенотипов CD3+, CD4+, CD8+, CD10+, CD16+, CD23+, CD25+, CD71+, CD95+, HLADR с помощью непрямой иммунопероксидазной реакции и моноклональных антител (НПЦ «МедБиоСпектр», г. Москва). Были изучены фагоцитарное число и процент активных фагоцитов. Содержание в сыворотке крови IL-6, IL-10, TNF-, INF- и лептина определяли методом «конкурентного» иммуноферментного анализа тест-наборами BCM Diagnostics фирмы Bio-RAD (США), «CYTIMMUNE sciences INC и CytElisa (США), «Dr. Fooke» (Германия) с использованием спектрофотомера «Multisсan MS» фирмы «Labsystems» (Финляндия).

Биохимические показатели крови: содержание глюкозы, лактата, пирувата, триглицеридов (ТГ), неэстерифицированных жирных кислот (НЭЖК), трансферрина, лактоферрина, уровень железа и общая железосвязывающая способность сыворотки (ОЖСС) определялись по унифицированным методикам с использованием биохимического анализатора STAT FAX 3300 (Awareness Technology, США) и стандартных наборов реактивов фирмы «DiaSys» (Германия) и НПФ «Абрис +» (Россия).

Концентрацию АТФ в лимфоцитах определяли люциферинлюциферазным методом на люминометре ЛЮМ-1 («Люмтек») с использованием стандартных наборов реактивов «Люмтек» (Россия).

Кроуноскопическое исследование проводилось непосредственно перед забором крови на аппаратно-программном комплексе «Кроуноскоп», который запатентован, сертифицирован и рекомендован к применению в медицинской практике Комитетом по новой медицинской технике Министерством здравоохранения Российской Федерации (Сертификат соответствия № РОСС RU.АВ52.H25951). При работе прибора под действием газового разряда вокруг пальца возникает короноразрядное свечение, преобразующееся системой видеонаблюдения и последующей цифровой обработкой в двумерное динамическое распределение газоразрядной эмиссии – кроунограмму.

Количественные показатели кроунограммы (энтропия, симметрия, площадь засветки и изрезанность контура изображения) определялись с помощью программ модуля «Кроун-лаборатория» (Крыжановский Э.В.,2008).

Статистический анализ результатов исследования проводился в программе «STATISTICA 6.0» («StatSoft», США). Подчинение количественных данных закону нормального распределения оценивали с помощью критерия 2Пирсона. В модуле «описательная статистика» вычислялись средние значения определяемых показателей, стандартное отклонение, величина стандартной ошибки среднего, границы 95%-го доверительного интервала. Сравнение двух разных групп по количественным признакам в случае подчинения данных закону нормального распределения проводилось с использованием t-критерия Стьюдента для независимых выборок. В случае неподчинения данных закону нормального распределения сравнение двух исследуемых групп проводилось с использованием непараметрического критерия Манна-Уитни. Различия считали достоверными при уровне значимости 95% (р0,05). Для оценки зависимости между двумя параметрами вычислялся коэффициент корреляции Пирсона. В модуле «множественная регрессия» строились регрессионные уравнения с использованием способа пошагового включения предикторов. Оценка адекватности регрессионной модели проводилась по коэффициенту детерминации (R2) и анализу остатков с использованием критерия ДарбинаУотсона (DW) и дополнительной проверкой на нормальность распределения остатков по критерию 2-Пирсона. Факторные модели строились с применением вращения по методу нормализованного варимакса.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Процессы, направленные на поддержание гомеостаза организма находят отражение в динамике структурно-организационных взаимодействий. При необходимости повышения активности или при недостаточности резервных возможностей функциональных систем организм использует энергию, получаемую от диссоциативных процессов. Наиболее интенсивно указанные процессы протекают в регуляторных системах, каковой является иммунная система. Особый интерес в этом отношении представляют исследования по изучению метаболического окружения находящихся в покое иммунокомпетентных клеток и изменений внутриклеточного метаболизма лимфоцитов при переходе их в активное состояние (Fitzpatrick M.A., 2013;

Wahl D.R. et al., 2010; Maciver N.J. et al., 2008; Bental M. et al., 1993).

Действительно, уровень энергии может быть тем универсальным параметром, который можно использовать для оценки состояния, согласованности действия системы и ее устойчивости. При этом следует учитывать, что клеткой расходуется энергия, которая аккумулирована в макроэргических связях аденозинтрифосфата – универсальной форме свободной энергии, и что снижение свободной энергии (АТФ) системы всегда сопровождается ростом е энтропии (степени хаотичности).

В комплексном исследовании определены показатели клеточного и цитокинового этапов иммунной защиты, компоненты вне- и внутриклеточной среды, характеризующие энергетический метаболизм, параметры кроунограмм, отражающие функциональное состояние организма, как сложной открытой системы с нелинейной динамикой, и проанализированы их согласованные изменения.

Иммунологический статус волонтеров оценивался по 20-ти параметрам, уровень которых был сопоставлен с пределами физиологических колебаний содержания иммунокомпетентных клеток и цитокинов в крови взрослых жителей Архангельской области (Добродеева Л.К. и соавт., 2005).

Сформированы две группы: первая - в количестве 67 человек, у которых определяемые параметры находились в пределах регионального интервала нормы, и вторая группа в составе 43 человек, у которых более чем один параметр иммунограммы отличался от значений пределов региональной нормы.

Установлен статистически достоверный, довольно высокий уровень различий (р0,01) в содержании изучаемых в работе иммунокомпетентных клеток в периферической крови обследуемых указанных групп сравнения (рис.1).

109кл/л Рис. 1. Различия в содержании иммунокомпетентных клеток в периферической крови обследованных (р0,01 для всех сравниваемых показателей).

В группе 2, у лиц с наличием отклонений в составе иммунограммы содержание Т-лимфоцитов, способных к бласттрансформации (CD10+), цитотоксических Т-лимфоцитов (CD8+) и активированных Т-лимфоцитов с рецептором к трансферрину (CD71+) было ниже по сравнению с теми же показателями в группе 1. У этих же людей было выше общее содержание зрелых Т-клеток (CD3+), Т-лимфоцитов, активированных интерлейкином- (CD25+), моноцитов и интенсивность фагоцитоза по фагоцитарному числу, что можно рассматривать как вариант компенсации.

Регистрация индуцированных энергоэмиссионных процессов с последующей числовой обработкой кроунограмм и проведением статистического анализа полученных результатов позволили установить, что имеется определенная направленность изменений кроуноскопических параметров, которая выражается в достоверном снижении площади засветки изображения и симметрии при статистически значимом (р0,05) росте показателя энтропии и увеличении изрезанности контура кроунограммы.

Известно, что величина энтропии отражает уровень свободной энергии в системе и, чем меньше величина энтропии, тем больше свободная энергия системы, и наоборот. Данная зависимость проявляется изменением площади засветки изображения, которая, исходя из механизма развития стимулированной импульсной эмиссии (Коротков К.Г., 2001; Райзер Ю.П., 1980), косвенно отражает энергетический уровень в текущий момент времени и с ростом величины энтропии достоверно (р0,05) уменьшается. Но энтропия выступает ещ и как мера упорядоченности - чем меньше порядка в системе, тем больше ее энтропия. Это отображается изменением изрезанности контура изображения, когда с увеличением показателя энтропии возрастает число флуктуаций кроунограммы, и при этом также снижается симметрия.

Установлено, что у волонтеров, не имеющих значимых отклонений показателей иммунитета от их региональных норм, средние значения параметров кроунограммы составили: площадь засветки изображения 0,85±0,04 ед., изрезанность контура кроунограммы 1,69±0,07 ед., симметрия 92±1,05%, величина энтропии 1,39±0,06 ед..

Полученный диапазон значений параметра энтропии соответствует интервалу от 1,33 до 1,45 ед., согласно которому все обследуемые волонтеры были разделены на три группы. В первую группу были включены 30 человек, разброс показателя энтропии у которых был ниже наименьшего значения установленного диапазона и находился в интервале от 1,21 до 1,32 ед.; вторую группу составили 49 человек с разбросом значений показателя энтропии в пределах установленного диапазона 1,33–1,45 ед.; в третью группу вошел человек, разброс показателя энтропии у которых был выше наибольшего значения и находился в интервале от 1,46 до 1,57 ед. Средние значения показателя энтропии в указанных группах имели статистически достоверные различия, составив соответственно 1,28±0,01 ед., 1,38±0,01 ед. и 1,50±0,01 ед.

(p0,05).

Сравнительный анализ числовых характеристик кроунограмм и иммунограмм лиц указанных групп позволил установить статистически достоверные различия (p0,05) в содержании трех фенотипов лимфоцитов:

CD8, CD16 и CD95 (рис.2). При увеличении энтропии наблюдается повышение содержания натуральных киллеров (CD16+), цитотоксических Т-лимфоцитов (CD8+) и клеток, меченных к апоптозу (CD95+). Преимущественное положение указанных изменений объяснимо и обосновано. Натуральные киллеры фактически первыми обеспечивают реакции защиты врожденного иммунитета с помощью эффекторных цитолитических белков перфоринов и гранзимов. При сближении натурального киллера с клеткой-мишенью происходит высвобождение цитолитических белков из гранул в околоклеточное пространство. Встраиваясь в мембраны клеток-мишеней перфорин формирует трансмембранные поры, через которые проникают гранзимы – ферменты с протеолитической активностью, следствием является гибель перфорированных клеток, а их содержимое вытекает во внеклеточную среду. Реакция натуральных киллеров соизмерима с уровнем антигенного (патогенного) воздействия. При недостаточности защиты со стороны реакций врожденного иммунитета первой и наиболее ранней реакцией адаптивного иммунитета является ответ Т-цитотоксических клеток, способных специфически поражать клетки, несущие антигенные детерминанты. Среди эффекторов апоптоза цитотоксические лимфоциты, натуральные киллеры, антителозависимые цитоксические клетки и провоспалительные цитокины. Апоптоз лимфоцитов нарастает практически одновременно с лимфопролиферацией, так как у митоза и апоптоза одни и те же сигнальные пути регуляции. Увеличение уровня апоптоза отработавших свой цикл клеток является естественным физиологическим процессом, подобную роль выполняет и активизация апоптоза лимфоцитов среди активированных клеток, служащая для регуляции уровня лимфопролиферации. Таким образом, с учетом физиологической роли цитотоксических реакций и апоптоза выявленная закономерность согласованности изменения концентрации клеток с цитотоксической активностью и клеток, меченных к апоптозу, с величиной энтропии вполне обоснованна. Оба процесса приводят к накоплению продуктов клеточной деградации, что сопровождается продукцией энтропии, отдаляя систему от устойчивого состояния.

109кл/л Рис. 2. Изменение содержания клеток с ростом величины энтропии (от 1-й к 3-й группе, p0,05) Анализ иммунологических показателей и результатов исследования энергетического метаболизма с учетом соотношения гликолитического и митохондриального путей образования аденозинтрифосфата позволил установить направленность иммунных реакций в зависимости от содержания метаболитов и субстратов энергообмена.

Установлено, что низкие значения соотношения лактат/пируват (6,04±0,43) складываются на фоне накопления пирувата в плазме крови (от 62,71±5,48 до 89,21±5,41 мкмоль/л, p0,05), что, вероятно, может быть связано с его недостаточной утилизацией в процессах митохондриального катаболизма.

Высокий уровень лактата, как и рост соотношения лактат/пируват (от 6,04±0, до 17,43±1,62, p0,05), сопровождается низким содержанием триглицеридов в плазме крови (0,76±0,09 ммоль/л), так как усиление интенсивности анаэробных процессов приводит к недостатку энергетических ресурсов для их синтеза и стимулирует первичный сенсор клеточной энергообеспеченности АМФзависимую протеинкиназу, что тормозит энергозатратные процессы в клетке и уровень триглицеридов падает. При этом внутримитохондриальное окисление жирных кислот снижается и основным становится путь внемитохондриального катаболизма глюкозы. Известно, что глюкоза служит преимущественным энергетическим субстратом для обеспечения функций Т-клеток, их роста и дифференцировки и, что в активированных Т-клетках резко увеличивается интенсивность аэробного гликолиза, в регуляции которого принимают участие и внешние и внутренние сигналы. В частности, гликолиз активируется АМФкиназой как прямым стимулированием через фосфорилирование фермента фосфофруктокиназы-2, так и посредством экспрессии генов ряда белковферментов гликолитического пути, например, гексокиназы и других, например, белка GLUT1, являющегося переносчиком глюкозы через мембрану лимфоцитов (Finlay D.K., 2012, Jacobs S.R., 2008, Fox C.J., 2005). Увеличение количества глюкозного транспортера способствует повышению продукции IL- и его поверхностного рецептора CD25, тем самым запускается Т-хелперный иммунный ответ 1-го типа, который реализуется при активации гликолиза. Это позволяет объяснить установленный факт увеличения числа активированных Тлимфоцитов CD25+ с рецептором к IL-2 при повышении концентрации лактата, что отражает и выявленный характер положительной корреляционной связи (r=0,42, p0,05) между концентрацией лактата и количеством Т-лимфоцитов CD25+ с рецептором к IL-2 в крови обследованных. Также при усилении гликолиза и повышении соотношения лактат/пируват происходит увеличение (p0,05) числа Т-клеток с рецептором CD3, CD4, CD8, CD16, CD23 и в особенности HLADRII. Достоверно растет и количество Т-клеток CD71+ с рецептором к трансферрину, которое наблюдается на фоне снижения железосодержащего белка в крови, что отражает известную закономерность изменения активности мембранных рецепторов и субстрата к ним (Цинкернагель Р., 2007; Ройт А., 2000; Wally J., Buchanan S.K., 2011).

Экспрессия рецепторов к трансферрину (CD71) является признаком активизации лимфоцитов и их пролиферации под влиянием IL-2, который данные клетки усиленно синтезируют после появления данного рецептора на мембране (Gerriets V.A., Rathmell J.C., 2012; Kominsky D.J. et al., 2010; MeyronHoltz E.G. et al., 2004; Rolfs A. et al., 1997). В тоже время количество активных фагоцитов, фагоцитарное число и концентрация интерферона-гамма при повышении соотношения лактат/пируват снижаются. Факт уменьшения процента активных фагоцитов (от 61,2±1,82 до 52,7±2,57%, p0,05) и фагоцитарного числа (от 5,42±0,34 до 3,67±0,23, p0,05) по мере роста соотношения лактат/пируват (от 6,40±0,43 до 17,43±1,62, p0,05) может быть обусловлен снижением концентрации интерферона-гамма (от 20,01±0,10 до 19,47±0,15 пг/л, p0,05), который участвует в активации кислород-зависимых механизмов бактерицидности через НАДФН-оксидазный путь образования активных форм кислорода (АФК). Это приводит к снижению АФК-зависимой деградации -субъединицы HIF (hyрoxia-inducible factor) в протеасоме и тем самым способствует формированию функционально активной димерной молекулы HIF(). Экспрессия HIF ведет к запуску АМФ-киназного пути и активации гликолитических ферментов (Semenza G.L., 2009, 2012; Wang R., Green D.R., 2012; Frauwirth K.A. et al., 2004). Повышение интенсивности гликолиза еще больше увеличивает соотношение лактат/пируват и это, в свою очередь, также может служить причиной снижения индукции фагоцитоза, являющегося весьма высоко энергозатратным процессом.

Таким образом, реакции активизации, пролиферации и дифференцировки лимфоцитов периферической крови ассоциированы с увеличеним интенсивности гликолитического окислительного пути, проявляющегося повышением утилизации пирувата до лактата, уменьшением активности митохондриальных окислительных процессов при снижении концентрации триглицеридов на фоне роста содержания свободных жирных кислот в крови.

Наблюдается экспрессия молекул МНС II класса, рост числа Т-хелперов CD4+, активированных Т-клеток CD25+ с рецептором к IL-2 и Т-клеток CD71+ с рецептором к трансферрину, цитотоксических Т-клеток CD8+ и натуральных киллеров CD16+. При этом снижается уровень интерферона-гамма, процент активных фагоцитов и фагоцитарное число, что делает менее эффективной защиту от внутриклеточных патогенов, особенно в случае их массированного проникновения.

Повышение значимости гликолиза и глутаминолиза при снижении интенсивности митохондриального бета-окисления жирных кислот в энергообеспечении активированных Т-лимфоцитов рассматривается как процесс метаболического перепрограммирования Т-клеток (Maclver N.J. et al., 2008; Michalek R.D., Rathmell J.C., 2010; Pearce E.L., 2010; Wang R. et al., 2011).

Увеличение концентрации лактата указывает на то, что процесс активации Тклеточной защиты сопровождается усилением гликолиза при этом имеет место достоверное (p0,05) снижение концентрации трансферрина в плазме крови.

Уменьшение АТФ в лимфоцитах происходит на фоне повышения уровня неэстерифицированных жирных кислот в плазме крови, что свидетельствует о снижении их использования в качестве источника энергии активированными Тклетками (рис. 3).

АТФ, мкмоль/млн кл лактат, ммоль/л НЭЖК, ммоль/л трансферрин, г/л Рис. 3. Изменение содержания лактата, неэстерифицированных жирных кислот и трансферрина в плазме крови при снижении уровня АТФ в лимфоцитах.

Результаты проведенного исследования указывают на прямо противоположный характер изменения количества АТФ и числа иммунокомпетентных клеток. Понижение количества иммунокомпетентных клеток в периферической крови сопряжено с повышением содержания АТФ в клетке, в то время как выраженное увеличение в циркуляции общего содержания лейкоцитов и лимфоцитов практически всех изучаемых фенотипов ассоциировано с уменьшением содержания АТФ в лимфоцитах (от 1,16±0,05 до 0,76±0,04 мкмоль/106кл, p0,05). Это подтверждается полученными статистически значимыми (p0,05) обратными корреляционными связями между уровнем АТФ и количеством лейкоцитов (r=-0,64), лимфоцитов (r=фагоцитов (r=-0,52), клеток с рецепторами CD3 (r=-0,72), CD4 (r=-0,58), CD8 (r=-0,42), CD10 (r=-0,51), CD16 (r=-0,78), CD23 (r=-0,63), CD25 (r=-0,67), CD95 (r=-0,64) и HLADR (r=-0,43).

Одним из сигналов регуляции энергетического метаболизма лимфоцитов является адипокин лептин. Известно, что лептин напрямую воздействует на Тклетки, запуская Jak/STAT (Janus kinases /Signal Transducer and Activator of Transription) сигнальный путь, который значительно повышает утилизацию глюкозы внутри клетки. Оказывая воздействие подобно IL-2, лептин стимулирует экспрессию GLUT1 и активирует АМФ-киназу (Fruhbeck G., 2006;

Zhang F. et al., 2005; Sweeney G., 2002), тем самым осуществляя регуляцию энергетической обеспеченности клеток.

Более высокое содержание лептина установлено у лиц с относительно более высокими концентрациями глюкозы и триглицеридов в плазме крови и АТФ в лимфоцитах (рис. 4).

лептин, нг/мл глюкоза, ммоль/л триглицериды, АТФ, мкмоль/млн кл Рис 4. Изменение концентрации глюкозы, триглицеридов и АТФ в зависимости от уровня лептина.

Функциональное состояние биосистемы может быть описано в виде набора энергетических уровней, одни из которых устойчивы и характеризуются экономным расходом свободной энергии, а другие нестабильны и соответствуют состоянию с высокими энергозатратами (Гленсфорд П., Пригожин И., 2003; Meirovitch H., 2010). Концентрация АТФ, как известно, отражает уровень свободной энергии, рост свободной энергии системы сопровождается падением продукции энтропии. Следует отметить эту противоположную, по сравнению с АТФ, направленность в изменении величины энтропии, которая у группы, характеризующейся наибольшим уровнем АТФ (1,04±0,07 мкмоль/106кл), составила 1,28±0,01 ед. против 1,50±0,01 ед. (p0,05) у другой группы, где содержание АТФ было меньшим (0,72±0,05 мкмоль/106кл, p0,05).

В обычных условиях организм поддерживает стационарное состояние, в котором продукция энтропии вследствие внутренних процессов всегда положительна и минимальна по величине, что обеспечивает системе наибольшую устойчивость. Е величина целиком обусловлена параметрами системы в данный момент времени и однозначно определяет возможность протекания того или иного процесса (Пригожин И., Стенгерс И., 2003). Для установления значимости энтропийного параметра был проведен факторный анализ. Ротация методом нормализованного варимакса с пошаговым исключением анализируемых параметров позволила построить факторные модели с минимальным числом определяемых показателей, которые удовлетворительно описывали взаимосвязь всех компонентов.

Модель для первой группы состояла из четырех факторов (рис. 5А). В первый фактор вошли показатели абсолютного содержания лейкоцитов и лимфоцитов, активированные лимфоциты (CD71+, HLADRII+) и лимфоциты, меченные к апоптозу (CD95+). Во втором факторе определяющими были показатели кроунограммы: симметрия, площадь засветки и изрезанность контура изображения. Третий фактор включал результаты содержания Тлимфоцитов (CD3+, CD8+) и противовоспалительного цитокина (IL-10).

Четвертый фактор был представлен показателем, отражающим величину энтропии, который имел наибольшее значение факторного веса (0,87).

Модель для второй группы обследуемых, у которых показатели иммунограммы отличались от региональных уровней, также была четырехфакторной (рис. 5Б). Первый фактор в ней был представлен числовыми характеристиками кроунограммы с наибольшими значениями факторных весов для площади засветки изображения и изрезанности контура кроунограммы. Во втором факторе определяющими являлись иммунологические показатели:

цитотоксические Т-лимфоциты (CD8+), натуральные киллеры (CD16+), активированные Т-лимфоциты с рецептором к трансферрину (CD71+) и лимфоциты, меченные к апоптозу (CD95+). Третий фактор включал содержание Т-лимфоцитов (CD3+), активированных лимфоцитов с рецептором к IL- (CD25+) и фагоцитарное число. Четвертый фактор был представлен только показателем энтропии (с факторным весом 0,85).

Рис. 5. Структура факторных моделей: А – для 1-й группы, Б – для 2-й группы.

Таким образом, в каждой из моделей два из общих факторов (включающие в себя иммунологические показатели) ответственны за функциональное состояние, а два других (содержащие кроунографические параметры) отражают уровень функционирования системы. Одним из этих факторов, который вне зависимости от ротационных преобразований имеют обе модели, является четко выделенный однокомпонентный фактор энтропии, что позволяет рассматривать его в качестве показателя, характеризующего относительную устойчивость системы.

В обеих обследуемых группах (для 39 человек из 1-й группы обследованных и 32 человек из 2-й группы) были проведены исследования степени хаотичности по следующим иммунологическим показателям:

фагоцитарное число, процент активных фагоцитов, количество Т-клеток с рецептором CD3, CD4, CD8, CD10, CD16, CD25, CD71, CD95 и HLA DRII. Для каждого показателя в группах была построена функция плотности распределения. Оценка функции плотности строилась с помощью фундаментального метода моментов (Frederick J., 2006). Для сравнения хаотичности распределений иммунологических показателей в группах использовалась дифференциальная энтропия, или энтропия Шеннона для непрерывных случайных величин. Дифференциальная энтропия характеризует хаотичность распределения, в некотором смысле определяя число состояний, в которых может находиться описываемая распределением система. Так, например, для гауссова распределения дифференциальная энтропия зависит только от дисперсии и увеличивается при увеличении дисперсии. Ещ одним важным свойством шенноновской энтропии для непрерывных распределений является независимость от среднего значения.

Значения дифференциальной энтропии для показателей рассчитывались с помощью численного интегрирования по формуле:

где интеграл берется по всей области определения функции x.

В результате дифференциальная энтропия для большей части анализируемых параметров (CD8, CD10, CD16, CD25, CD71, CD95, HLA DRII, процент активных фагоцитов) у группы волонтеров с отклонением иммунологических показателей от региональной нормы оказалась меньше, чем у волонтеров с нормальной иммунограммой. То есть, распределение таких показателей оказывается более «узким», сосредоточенным вблизи среднего значения. Другими словами показатели распределены менее хаотично, и, следовательно, сами показатели содержат больше информации и именно они могут стать наиболее информативными и точными индикаторами иммунных нарушений.

Регрессионный анализ, проведенный способом пошагового включения переменных, помог получить уравнение регрессии, по которому фактор энтропии может быть описан уравнением множественной регрессии, включающим минимальное число иммунологических показателей:

Y = 1,43 – 0,40CD4 + 0,36CD16 – 0,32CD R2 = 0,73; F = 4,19; P 0,006; DW= 2, Модель информационно способна и значима. Значение критерия Дарбина-Уотсона приближено к двум, гистограмма остатков имеет нормальное распределение, что подтверждает адекватность регрессионной модели.

Исходя из регрессионной модели, можно установить вклад иммунокомпетентных клеток в величину энтропии. Положительное значение коэффициента у члена уравнения «СD16» указывает на роль в производстве энтропии натуральных киллеров, определяющих эффективность врожденного иммунитета и участвующих в процессах цитотоксичности. Отрицательное по величине значение регрессионных коэффициентов у членов уравнения «CD4» и «CD71» указывает на роль в купировании продукции энтропии Т-хелперов и активированных Т-лимфоцитов с рецептором к трансферрину. Наличие отрицательного знака иллюстрирует тот факт, что организация сложных высокомолекулярных структур имеет антиэнтропийную направленность и сопровождается ростом свободной энергии системы. Это также может быть связано с тем, что активизация иммунокомпетентных клеток приводит к появлению на их поверхности в большом количестве рецептора CD25 и популяция активированных Т-клеток CD4+CD25+ оказывает регуляторное влияние на Т-клеточный ответ посредством секреции иммуносупрессорных цитокинов, ингибирующих пролиферацию других Т-клеток (Mesquita Junior D.


Et al., 2010). Другими словами, изменение одних параметров иммунной системы, ведущих к росту величины энтропии, парируются изменением других, способствующих сдерживанию ее продукции, что позволяет сохранить стационарное наиболее устойчивое состояние, нарушение которого неблагоприятно для прогноза работы системы, направленной как на защиту внутренней среды, так и поддержание информационно-энергетического гомеостаза организма.

Таким образом, иммунологическая устойчивость соотносится с величиной параметра порядка, которая может быть рассчитана по минимальному числу иммунологических показателей и обусловлена степенью функционирования и реагирования иммунной защиты, зависящей от уровня энергетического метаболизма.

ВЫВОДЫ

1. Снижение уровня энергетической обеспеченности лимфоцитов сопряжено с повышением соотношения лактат/пируват на фоне уменьшения концентраций триглицеридов, трансферрина в плазме крови и интенсивности реакций фагоцитарной активности нейтрофилов крови и интерферона-гамма.

2. Увеличение концентраций CD25+, HLADRII+, а также Т-хелперов и Тцитотоксических клеток ассоциировано с понижением количества аденозинтрифосфата в лимфоцитах периферической крови организма человека.

3. Нарастание степени неупорядоченности системы иммунитета связано с увеличением содержания натуральных киллеров, цитотоксических Тлимфоцитов и процессом апоптоза лимфоцитов.

4. Устойчивость состояния иммунной системы может быть оценена с помощью параметра порядка, рассчитанного по значению трех иммунологических показателей (CD4, CD16, CD71).

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Для скринингового выявления функциональных изменений со стороны иммунных реакций рекомендуется использовать определение содержания в крови фенотипов клеток CD8+, CD10+, CD16+, CD71+ и HLADRII+ как наиболее информативных показателей, имеющих «узкий» коридор распределения.

2. Определение параметра порядка в оценке иммунного статуса и прогнозе развития начальных отклонений удобно в практике проведения мониторинговых наблюдений и контроля эффективности лечебнопрофилактических мероприятий.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Зубаткина И.С. Энтропийная модель иммунологической устойчивости / И.С. Зубаткина, Л.К. Добродеева, А.А. Попов, Э.В.

Крыжановский // Вестник Поморского университета. Серия «Естественные науки». – 2011. – №4. – С. 66–70.

2. Зубаткина И.С. Энтропия как фактор оценки иммунного статуса / И.С. Зубаткина, Л.К. Добродеева, М.Я. Малахова, Э.В.

Крыжановский, О.В. Зубаткина // Вестник Северо-Западного государственного медицинского университета им. И.И. Мечникова.

- 2012. - №1, т.4. - С. 57-61.

3. Зубаткина И.С. Зависимость иммунологических показателей от уровня энергетического метаболизма / И.С. Зубаткина // Материалы Всероссийской молодежной научно-практической конференции «Адаптация человека на Севере: медико-биологические аспекты», Архангельск, 2012. – С. 107-110.

4. Добродеева Л.К. Участие рецепторов к трансферрину в метаболических процессах / Л.К. Добродеева, А.В. Самодова, И.С.

Зубаткина, О.А. Ставинская, О.Е. Карякина // Российский аллергологический журнал. - 2013. - № 2. - С. 84 - 85.

5. Самодова А.В. Влияние внеклеточного пула рецепторов на развитие иммунных реакций / А.В. Самодова, И.С. Зубаткина, О.Е.

Карякина // Российский иммунологический журнал. - 2013. №2-3, т.7. – С. 162-163.

6. Патракеева В.П. Пролиферативная активность клеток периферической крови / В.П. Патракеева, С.Н. Балашова, Е.В. Сергеева, И.С. Зубаткина // XXII Съезд Физиологического общества им. И.П. Павлова – Волгоград, 2013. – С. 406.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

CD3+ зрелые Т-лимфоциты CD4+ Т-хелперы CD8+ цитотоксические Т-лимфоциты CD10+ ранний антиген В-клеток, предшественников В-лимфоцитов CD16+ натуральные киллеры CD23+ В-лимфоциты с рецептором к иммуноглобулину Е CD25+ Т-лимфоциты с рецепторами к интерлейкину- CD71+ Т-лимфоциты с рецептором к трансферрину CD95+ Т-лимфоциты с рецептором апоптоза HLADR+ главный комплекс гистосовместимости класса II аденозинмонофосфат зависимая киназа AMФK фактор индуцируемый гипоксией сигнальные трансдукторы и активаторы транскрипции STAT

 


Похожие работы:

«Михеева Эльза Равилевна МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНАЯ И БИОХИМИЧЕСКАЯ АЛЬТЕРАЦИЯ КЛЕТОК КРОВИ КВАНТОВЫМИ ТОЧКАМИ 03.03.01 – физиология Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Нижний Новгород 2011 Работа выполнена в Нижегородском государственном техническом университете им. Р.Е. Алексеева доктор биологических наук, профессор Научный руководитель : Плескова Светлана Николаевна доктор биологических наук, профессор Официальные оппоненты : Корягин...»

«БУДУК-ООЛ Лариса Кара-Саловна АДАПТАЦИЯ СТУДЕНТОВ РЕСПУБЛИКИ ТЫВА К ОБУЧЕНИЮ В ВУЗЕ (ЭТНОЭКОЛОГИЧЕСКИЕ, МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ И ПСИХОФИЗИОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ) 03.03.01 – Физиология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук Челябинск – 2010 2 Работа выполнена на кафедрах анатомии, физиологии и безопасности жизнедеятельности ГОУ ВПО Тывинский государственный университет и Новосибирский государственный педагогический университет Научный...»

«Почекутова Ирина Александровна ВЗАИМОСВЯЗИ ДЫХАТЕЛЬНЫХ ШУМОВ И БИОМЕХАНИКИ ФОРСИРОВАННОГО ВЫДОХА 03.03.01 – физиология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук Владивосток – 2011 Работа выполнена в Учреждении Российской академии наук Тихоокеанский океанологический институт им. В.И. Ильичева Дальневосточного отделения РАН (ТОИ ДВО РАН) Официальные оппоненты : доктор медицинских наук, академик РАМН Баранов Виктор Михайлович доктор медицинских...»

«ПЕТРОВ Николай Сергеевич Взаимодействие р130 – белка семейства pRb, и -катенина – передатчика сигналов Wnt, в ходе дифференцировки и трансформации мезенхимных стволовых клеток мыши 03.03.04 – клеточная биология, цитология, гистология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Санкт-Петербург 2012 Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении науки Институт цитологии Российской академии наук (Санкт-Петербург) Научный...»

«СУДАРИКОВА Анастасия Владимировна НАТРИЕВЫЕ КАНАЛЫ В КЛЕТКАХ ЛЕЙКЕМИИ ЧЕЛОВЕКА К562 И ЛИМФОМЫ U937: ИДЕНТИФИКАЦИЯ И ОСОБЕННОСТИ РЕГУЛЯЦИИ 03.03.04 – Клеточная биология, цитология, гистология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук САНКТ-ПЕТЕРБУРГ 2011 Работа выполнена в Учреждении Российской академии наук Институт цитологии РАН Научный руководитель : доктор биологических наук Юрий Алексеевич Негуляев Институт цитологии РАН,...»

«КИПРЮШИНА Юлия Олеговна ФАКТОРЫ РОСТА ИЗ СЕМЕЙСТВ ФАКТОРОВ РОСТА ЭНДОТЕЛИЯ СОСУДОВ И ФАКТОРОВ РОСТА ФИБРОБЛАСТОВ, Si-VEGF2 И Si-FGF, И ИХ РЕЦЕПТОРЫ В ОНТОГЕНЕЗЕ МОРСКОГО ЕЖА STRONGYLOCENTROTUS INTERMEDIUS 03.03.04 – клеточная биология, цитология, гистология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук ВЛАДИВОСТОК – 2013 2 Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении науки Институт биологии моря им. А.В. Жирмунского...»

«ЛЕЙХТЕР Светлана Николаевна ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ ПИЩЕВАРИТЕЛЬНЫХ ФЕРМЕНТОВ И ПРЕДСТАВИТЕЛЕЙ МИКРОФЛОРЫ ТОЛСТОЙ КИШКИ В НОРМЕ И ПРИ ОСТРОМ АЛКОГОЛЬНОМ ПСИХОЗЕ 03.03.01 – физиология 14.01.27 – наркология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Архангельск - 2010 2 Работа выполнена на кафедре биохимии ГОУ ВПО Северный государственный медицинский университет федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию Научные...»

«ЦЫМБАЛ АЛЕКСАНДР АЛЕКСАНДРОВИЧ ЗАКОНОМЕРНОСТИ И МЕХАНИЗМЫ БИОЛОГИЧЕСКОГО ДЕЙСТВИЯ ЭЛЕКТРОМАГНИТНЫХ ВОЛН ТЕРАГЕРЦЕВОГО ДИАПАЗОНА НА ЧАСТОТАХ АКТИВНЫХ КЛЕТОЧНЫХ МЕТАБОЛИТОВ 03.03.01 - физиология Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук Саратов – 2014 Работа выполнена в Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования Саратовский государственный медицинский университет имени В.И. Разумовского...»

«ГОРЕЛИК Виктор Владимирович СИСТЕМА ПСИХОФИЗИОЛОГИЧЕСКИХ МЕТОДОВ ОПТИМИЗАЦИИ ФУНКЦИОНАЛЬНОГО СОСТОЯНИЯ ОРГАНИЗМА ШКОЛЬНИКОВ 03.03.01 – Физиология (биологические наук и) АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук Москва 2013 1 Работа выполнена в Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования города Москвы Московский городской педагогический университет. Научный консультант : Беляев Василий...»

«ДЖЕТЫБАЕВ ИЛЬЯС ЕРКИНОВИЧ МОЛЕКУЛЯРНО-ЦИТОГЕНЕТИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ ПУТЕЙ И МЕХАНИЗМОВ КАРИОТИПИЧЕСКОЙ ЭВОЛЮЦИИ САРАНЧОВЫХ ПОДСЕМЕЙСТВА GOMPHOCERINAE (ORTHOPTERA, ACRIDIDAE) 03.02.07 – Генетика 03.03.04 – Клеточная биология, цитология, гистология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Новосибирск 2012 Работа выполнена в лаборатории морфологии и функции клеточных структур Федерального бюджетного государственного учреждения науки Института...»

«ЛОЦМАНОВА Наталья Сергеевна ГЕНЕТИЧЕСКАЯ ТРАНСФОРМАЦИЯ ПОЛОВЫХ КЛЕТОК КРОЛИКОВ И ХРЯКОВ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ РЕТРОВИРУСНЫХ ВЕКТОРОВ 03.02.07 – Генетика 03.03.01 – Физиология Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Дубровицы - 2011 Работа выполнена в Центре биотехнологии и молекулярной диагностики животных Государственного научного учреждения Всероссийский научноисследовательский институт животноводства Российской академии...»

«СЕМАШКО ЛИЛИЯ ВАСИЛЬЕВНА ФИЗИОЛОГИЧЕСКОЕ ОБОСНОВАНИЕ ИНТЕГРАТИВНЫХ МЕТОДОВ ПСИХОФИЗИЧЕСКОГО ВОЗДЕЙСТВИЯ НА ФУНКЦИОНАЛЬНОЕ СОСТОЯНИЕ ОРГАНИЗМА УЧАЩИХСЯ 03.03.01 – физиология 14.02.01 – гигиена АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук Москва – 2011 Работа выполнена на кафедре здоровьесберегающего содержания образовательных технологий ГОУ ВПО Московский институт открытого образования. Научные консультанты: Член-корреспондент РАМН, доктор...»

«АФАНАСЬЕВ-ГРИГОРЬЕВ Алексей Григорьевич ЭЛЕКТРОННО-МИКРОСКОПИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ МУЖСКОЙ ПОЛОВОЙ СИСТЕМЫ И СПЕРМАТОГЕНЕЗА СВОБОДНОЖИВУЩИХ МОРСКИХ НЕМАТОД ИЗ ОТРЯДА ENOPLIDA (NEMATODA, ENOPLEA) 03.03.05 – биология развития, эмбриология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Владивосток – 2011 2 Работа выполнена в Учреждении Российской академии наук Институте биологии моря им. А.В. Жирмунского Дальневосточного отделения РАН Научный...»

«Бибарцева Елена Владимировна ОСОБЕННОСТИ АДАПТАЦИОННЫХ РЕАКЦИЙ МУЖЧИН РАЗЛИЧНЫХ ЭТНИЧЕСКИХ ГРУПП 03.03.01 – физиология Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Москва, 2010 Работа выполнена на кафедре профилактической медицины химико-биологического факультета ГОУ ВПО Оренбургский государственный университет. Научный руководитель : доктор медицинских наук, Нотова Светлана Викторовна профессор Официальные оппоненты : доктор медицинских...»

«ИГНАТЕНКО Мария Викторовна ВЛИЯНИЕ СЕЛЕНИЗИРОВАННОГО ТОПИНАМБУРА НА АКТИВНОСТЬ ЗАЩИТНЫХ МЕХАНИЗМАОВ ОРГАНИЗМА У ТЕЛЯТ В РАЗЛИЧНЫХ ЭКОЛОГИЧЕСКИХ ЗОНАХ 03.03.01 – физиология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Боровск – 2012 Диссертационная работа выполнена в ФГБОУ ВПО Брянская ГСХА на кафедре нормальной и патологической физиологии и морфологии животных Научный руководитель : доктор биологических наук, профессор Крапивина Елена...»

«ЛУКИНА ГАЛИНА ПЕТРОВНА ФИЗИЧЕСКОЕ РАЗВИТИЕ И СОСТОЯНИЕ ЗДОРОВЬЯ МЛАДШИХ ШКОЛЬНИКОВ, ПОЛУЧАВШИХ ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНЫЕ УСЛУГИ С ТРЕХЛЕТНЕГО ВОЗРАСТА 03.03.01 – физиология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Москва – 2010 Работа выполнена в ГОУ ВПО Смоленская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию Научный руководитель кандидат биологических наук, Чижова Жанна...»

«Ходанович Марина Юрьевна ПСИХОФИЗИОЛОГИЧЕСКИЕ МЕХАНИЗМЫ И ИНДИВИДУАЛЬНЫЕ ОСОБЕННОСТИ ВОСПРИЯТИЯ ЧЕЛОВЕКОМ КОРОТКИХ ИНТЕРВАЛОВ ВРЕМЕНИ 03.03.01 – физиология Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук Томск – 2010 Работа выполнена на кафедре физиологии человека и животных ГОУ ВПО Томский государственный университет и в лаборатории физиологии высшей нервной деятельности человека обособленного структурного подразделения Научно-исследовательский...»

«ГУМЕРОВА АНИСА АЗАТОВНА ГИСТО- И ЦИТОГЕНЕЗ ПЕЧЕНИ ЧЕЛОВЕКА И КРЫСЫ В ХОДЕ ПРЕНАТАЛЬНОГО РАЗВИТИЯ И РЕПАРАТИВНОЙ РЕГЕНЕРАЦИИ 03.03.04 – клеточная биология, цитология, гистология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учёной степени доктора медицинских наук Казань – 2012 2 Работа выполнена в ГБОУ ВПО Казанский государственный медицинский университет Министерства здравоохранения и социального развития России Научный консультант : доктор медицинских наук, профессор Киясов Андрей...»

«АБРАМОВА Марина Алексеевна ФЛОУМЕТРИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ВНЕШНЕГО ДЫХАНИЯ У ДЕТЕЙ ШКОЛЬНОГО ВОЗРАСТА СО СКОЛИОЗОМ В УСЛОВИЯХ ЕВРОПЕЙСКОГО СЕВЕРА 03.03.01 – Физиология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Архангельск - 2013 Работа выполнена в Институте медико-биологических исследований федерального государственного автономного образовательного учреждения высшего профессионального образования Северный (Арктический) федеральный...»

«ПРОСЕКОВА Елена Александровна РОСТ И МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНОЕ СОСТОЯНИЕ ОРГАНОВ И ТКАНЕЙ БРОЙЛЕРОВ, ВЫРАЩЕННЫХ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ПРОБИОТИКОВ 03.03.01 – физиология Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Москва – 2011 Работа выполнена на кафедре морфологии и физиологии животных ФГОУ ВПО Российский государственный аграрный университет – МСХА имени К.А. Тимирязева Научный руководитель : доктор биологических наук, профессор Панов Валерий...»






 
© 2013 www.diss.seluk.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Авторефераты, Диссертации, Монографии, Методички, учебные программы»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.