WWW.DISS.SELUK.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА
(Авторефераты, диссертации, методички, учебные программы, монографии)

 

На правах рукописи

Шаврина Екатерина Юрьевна

РОЛЬ ХРОНИЧЕСКОГО ПОРАЖЕНИЯ ПЕЧЕНИ САМОК КРЫС В

НАРУШЕНИИ МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНОГО СОСТОЯНИЯ

СИСТЕМЫ МОНОНУКЛЕАРНЫХ ФАГОЦИТОВ ПОТОМСТВА

03.03.04 Клеточная биология, цитология, гистология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Оренбург, 2012

Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Челябинский государственный университет»

доктор медицинских наук, профессор

Научный руководитель:

Брюхин Геннадий Васильевич

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессора профессор кафедры микробиологии, вирусологии, иммунологии ГБОУ ВПО «Оренбургская государственная медицинская академия»

Министерства здравоохранения Российской Федерации Чайникова Ирина Николаевна доктор биологических наук, профессор заведующий кафедрой незаразных болезней животных ФГБОУ ВПО «Оренбургский государственный аграрный университет»

Сеитов Марат Султанович Государственное бюджетное образовательное

Ведущая организация:

учреждение высшего профессионального образования «Сибирский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации

Защита диссертации состоится « » декабря 2012 года в часов на заседании диссертационного совета Д 208.066.04 при Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Оренбургская государственная медицинская академия»

Министерства здравоохранения Российской Федерации по адресу: Россия, 460000, г. Оренбург, ул. Советская, 6, зал заседаний диссертационного совета.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Оренбургская государственная медицинская академия»

Министерства здравоохранения Российской Федерации».

Автореферат разослан « » ноября 2012 г.




Ученый секретарь диссертационного совета Н.Н. Шевлюк

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность исследования. Согласно результатам Всероссийской переписи населения России 2010 года, опубликованным Федеральной службой государственной статистики (Росстат), за последние 20 лет число жителей России сократилось более чем на 4 миллиона. Главной причиной уменьшения численности населения эксперты называют естественную убыль. Низкие показатели рождаемости, относительно высокая младенческая и детская смертность, рост распространенности хронических болезней у детей в России в значительной степени определяют величину репродуктивных потерь, негативно влияющих на развитие общества (Вельтищев Ю.Е., 2000). Именно поэтому воспроизводство здорового населения является ведущей проблемой современного общества.

Заболевания гепатобилиарной системы во всем мире являются одной из актуальных медико-социальных проблем в связи с широкой распространенностью и высокой частотой развития хронических форм (Шахгильдян И.В. с соавт., 2003; Комиссаров С.Н., 2008). К числу приоритетных задач общества и государства относится обеспечение «здорового старта» в жизни ребенка, которое начинается задолго до его рождения. При этом особая роль отводится здоровью будущих матерей (Никольская Л.А., 2003). Важное место в течении беременности занимает экстрагенитальная патология (Шехтман М.М, 1987; Савченко И.М, 2003; Медведь В.И., 2004;

Майоров М.В., 2009; Шехтман М.М., 2011), среди которой нередко встречаются заболевания гепатобилиарной системы, в том числе хронические гепатиты, холециститы и желчнокаменная болезнь (Медведь В.И., 2004;

Медведь В.И., 2007).

В настоящее время медиками активно изучается влияние патологии печени на течение беременности и здоровье будущего ребенка (Цогоева Л.М. с соавт., 2010). Точные ответы даны пока не на все вопросы, однако уже есть некоторые важные данные. Так многочисленными исследованиями сотрудников кафедры гистологии, эмбриологии и цитологии Челябинской государственной медицинской академии в экспериментальных условиях установлено, что патология гепатобилиарной системы матери неблагоприятно влияет на морфофункциональное становление различных органов и систем потомства, в том числе кроветворных и мононуклеарных (Брюхин Г.В., 1990Грачев А.Ю., 1994; Евченко Е.В., 2001; Бояков А.А., 2004; Вторушина Е.В., 2004; Пашнина Е.Н., 2004; Пивень Г.В., 2004; Федосов А.А., 2004;

Ильиных М.А., 2006; Леонов Н.В., 2007; Барышева С.В., 2008; Кузнецова А.Б., 2008; Переходнов А.С., 2008; Романов А.С., 2008; Бирюкова Т.И., 2009;

Николина О.В., 2009; Солянникова Д.Р., 2009; Смекалина О.Ю., 2011;

Сизоненко М.Л., 2012).

В то же время, одним из факторов, определяющих реактивность и резистентность организма, является морфофункциональное и цитохимическое состояние иммунной системы, одним из важных компонентов которой являются клетки системы мононуклеарных фагоцитов различных компартментов.

В связи с вышеизложенным, целью настоящего исследования явился анализ функционального состояния клеток системы мононуклеарных фагоцитов различных компартментов потомства самок крыс с экспериментальным хроническим поражением гепатобилиарной системы различной этиологии.





Для достижения поставленной цели нами были сформулированы следующие задачи:

1. Оценить функциональную активность моноцитов периферической крови потомства самок крыс с хроническим экспериментальным поражением печени в различные сроки постнатального развития.

2. Оценить особенности функционального состояния макрофагов различных компартментов потомства самок крыс с экспериментальным хроническим поражением гепатобилиарной системы различной этиологии.

3. Изучить ловушкообразующую способность альвеолярных и перитонеальных макрофагов потомства самок крыс с экспериментальным хроническим D-галактозаминовым поражением печени.

4. Исследовать в условиях длительного культивирования суммарную секреторную активность перитонеальных макрофагов потомства самок крыс с экспериментальным токсическим поражением гепатобилиарной системы.

Положения, выносимые на защиту 1. Экспериментальное поражение печени самок крыс, обусловленное введением супернатанта культуры E.coli и D(+) – галактозамина, является морфофункциональное состояние моноцитов периферической крови.

2. Экспериментальная патология гепатобилиарной системы самок крыс, обусловленная введением супернатанта культуры E.coli и D(+) – галактозамина гидрохлорида, является фактором риска, оказывающим неблагоприятное влияние на антенатальное и постнатальное морфофункциональное состояние клеток системы мононуклеарных фагоцитов различных компартментов потомства.

3. У потомства самок крыс с экспериментальным D-галактозаминовым поражением печени имеет место нарушение ловушкообразующей способности перитонеальных и альвеолярных макрофагов.

4. Хроническая токсическая патология гепатобилиарной системы матери обусловливает выраженные изменения секреторной активности перитонеальных макрофагов потомства.

Научная новизна Впервые на адекватных экспериментальных моделях, воспроизводящих различные формы поражения гепатобилиарной системы (E.coli и D(+)галактозамин), проведена комплексная оценка влияния патологии печени самок крыс на функциональную активность клеток системы мононуклеарных фагоцитов различных компартментов потомства в различные сроки постнатального онтогенеза.

Получены данные, свидетельствующие, что экспериментальная патология печени матери приводит к изменению числа и функциональной активности макрофагов потомства. Так установлено, что хроническое поражение печени самок крыс обусловливает нарушение становления поверхностно-рецепторного аппарата (миграция, адгезия, распластывание), внутриклеточной кислородзависимой (НСТ-тест) и кислороднезависимой метаболической активности (лизосомы), ферментативной активности (СДГ, КФ,-ГФДГ, миелопероксидаза), фагоцитарной и бактерицидной активности (фагоцитоз, киллинг) мононуклеаров различных компартментов потомства.

Впервые произведена оценка ловушкообразующей способности макрофагов различных компартментов потомства самок крыс с экспериментальной хронической патологией гепатобилиарной системы.

Впервые предложена оценка суммарной секреторной активности макрофагов перитонеального экссудата по выработке цитокинов в условиях длительного культивирования (Патент на изобретение №2460783 «Способ оценки суммарной секреторной активности макрофагов различных компартментов по выработке цитокинов в условиях длительного культивирования» от 10 сентября 2012 г.).

Практическое и теоретическое значение Диссертационная работа относится к фундаментальным исследованиям.

Совокупность полученных в ходе проведенного экспериментального исследования данных и их анализ дают представление о характере иммунологических и секреторных изменений в клетках системы мононуклеарных фагоцитов потомства при хроническом экспериментальном поражении гепатобилиарной системы матери, что расширяет представление о физиологических механизмах и адаптации мононуклеаров.

Проведенное экспериментальное исследование позволяет оценить роль патологии печени матери в морфофункциональном становлении макрофагов различных компартментов потомства, что может быть использовано для анализа дефектов фагоцитарных клеток у больных с различными патологическими процессами и заболеваниями, а также для обоснования направленной иммунной коррекции состояния детей, рожденных от матерей с поражением гепатобилиарной системы.

Полученные в ходе эксперимента данные расширяют представление о роли хронической патологии печени матери в нарушении становления звена неспецифической резистентности иммунной системы у потомства, что обосновывает необходимость выделения детей от матерей с поражением гепатобилиарной системы в группы повышенного риска, требующие диспансерного наблюдения у врача – иммунолога.

Результаты диссертационного исследования используются в научном и учебном процессах на биологическом факультете Челябинского государственного университета в дисциплинах: «Гистология человека» (раздел «Эмбриональное развитие человека. Нарушение внутриутробного развития»), «Иммунология» (раздел «Система мононуклеарных фагоцитов»), «Физиология человека и животных» (раздел «Неспецифическая реактивность и резистентность организма в норме и патологии»), а также на кафедре гистологии, эмбриологии и цитологии Челябинской государственной медицинской академии в разделах: «Эмбриональное развитие человека.

Нарушение внутриутробного развития», «Кровь», «Соединительная ткань», «Специальные методы исследования», «Культивирование».

Апробация работы Результаты исследования были представлены на конференции, посвященной 65-летию кафедры гистологии, эмбриологии и цитологии Челябинской государственной медицинской академии (Челябинск, 2009); на XXXIII студенческой научной конференции «Студент и научно-технический прогресс» (Челябинск, 2009); на всероссийской научной конференции молодых ученых «Проблемы биомедицинской науки третьего тысячелетия» (СанктПетербург, 2010); на I международной (VIII итоговой) научно-практической конференции молодых ученых (Челябинск, 2010); на международной научнопрактической конференции «Физиологические механизмы адаптации человека»

(Тюмень, 2010); на всероссийской научной конференции «Регенеративная биология и медицина» (Москва, 2011); на II международной (IX итоговой) научно-практической конференции молодых ученых (Челябинск, 2011); на IX всероссийской конференции иммунологов Урала, посвященной 90-летию профессора Л.Я. Эберта (Челябинск, 2011); на III эмбриологическом симпозиуме Всероссийского научного медицинского общества анатомов, гистологов, эмбриологов «ЮГРА-ЭМБРИО-2011. Закономерности эмбриофетальных морфогенезов у человека и позвоночных животных» (ХантыМансийск, 2011); на III международной (X итоговой) научно-практической конференции молодых ученых (Челябинск, 2012).

Публикации По теме диссертации опубликовано 16 работ, в том числе 7 в изданиях, рекомендованных ВАК Минобрнауки РФ для изложения основных научных результатов диссертаций на соискание ученых степеней кандидата и доктора наук и получен 1 патент РФ на изобретение.

Структура и объем диссертации Диссертация изложена на 246 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, главы описания результатов собственного исследования и их обсуждения, выводов, списка использованной литературы, включающего 365 наименования, в том числе 100 работ зарубежных авторов. Работа содержит 23 таблицы, рисунка, в том числе 35 микрофотографий.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

В эксперименте были использованы белые половозрелые лабораторные крысы (самки) «Вистар» и их потомство на 1-ый, 15-ый, 30-ый, 45-ый и 60-ый дни постнатального онтогенеза. Выбранные нами сроки исследования согласуются с общепризнанным подразделением возрастных периодов для данной группы животных (Западнюк И.П. с соавт., 1983).

Исходя из поставленных задач данного исследования, животные были разделены на 3 группы. В первую группу выделено потомство от интактных матерей – контрольная группа (К – 82 животных из 27 пометов). Вторую группу составили крысята от самок с хроническим поражением печени с помощью супернатанта E.coli – опытная группа №1 (О1 – 51 животное из 15 пометов), третью – животные от матерей с экспериментальным D-галактозаминовым поражением печени – опытная группа №2 (О2 – 62 животного из 18 пометов).

Работа с экспериментальными животными проводилась в соответствии с «Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных», утвержденными приказом МЗ СССР № 755 от 12.08.77.

Исследование проводилось с учетом суточных и сезонных колебаний. При этом животные содержались в одинаковых условиях вивария и получали стандартный пищевой рацион.

Модель хронического поражения печени путем введения супернатанта культуры E.coli. Методика получения экспериментального аутоиммунного поражения гепатобилиарной системы заключалась в двукратном введении супернатанта 6-ти дневной культуры E.coli (штамм АТСС 25922) под эфирным наркозом лабораторным животным (половозрелым самкам крыс). Сенсибилизирующую инъекцию в объеме 0, мл фильтрата шестидневной культуры E.coli, в разведении физиологическим раствором 1:4, производили в три участка печени (по одной с обеих сторон у основания мечевидного отростка и справа у реберного края по срединноключичной линии). Через сутки экспериментальным животным в хвостовую вену производилась разрешающая инъекция фильтрата 6-ти дневной культуры E.coli в разведении 1:4 в объеме 0,3мл на 1кг массы тела. Через неделю к самкам подсаживали здоровых самцов для получения потомства.

Формирование поражения печени подтверждали морфологическими, биохимическими и иммунологическими критериями (Сааков Б.А. с соавт., 1967).

Модель хронического поражения печени путем введения D(+)галактозамина гидрохлорида. Данную модель патологии печени создавали путем однократного внутрибрюшинного введения под эфирным наркозом взрослым половозрелым самкам крыс гепатотропного яда D(+) – галактозамина гидрохлорида («Sigma – G500», США) на 0,9% растворе натрия хлорида в дозе 250 мг/кг массы тела животного. Через 10 дней после введения галактозамина к самкам производилась подсадка здоровых самцов. Токсическое поражение гепатобилиарной системы экспериментальных животных верифицировали с помощью морфологических, биохимических и иммунологических критериев (Сугробова Н.П. с соавт., 1992).

Морфологические методы исследования. В работе в качестве объекта исследования служили перитонеальные (Фримель Г., 1987), альвеолярные (Учитель И.Я., 1978; Вазина И.Р. с соавт., 1984), селезеночные (Mosier D.E., 1972; Учитель И.Я., 1978), печеночные макрофаги (Crofton R.W., 1978;

Брюхина Г.В. с соавт., 1987), а также моноциты периферической крови (Gordon S. et al., 1975), которые выделяли с использованием общепринятых методик.

Полученные мононуклеарные фагоциты подвергались дальнейшим исследованиям в мазках (Фримель Г., 1987) и монослое клеток (Хейфец Л.Б., Абалакина В.А., 1973).

жизнеспособности клеточных элементов СМФ использовали смесь 0,1% раствора трипанового синего на дистиллированной воде и 0,1% раствора эозина в растворе Хенкса (Кондратьева И.А., Самуилова В.Д., 2001).

Для подсчета мононуклеаров различных компартментов к 0,1 мл клеточной взвеси добавляли 0,9 мл раствора Тюрка. Полученной клеточной взвесью заполняли камеру Горяева. Подсчет клеток производили в 100 больших квадратах.

Для изучения локомоторных функций макрофагов под агарозным покрытием использовали метод, предложенный Nelson R.D. et al. (1975).

Помещенные в лунку, вырезанную в слое агарозы, мононуклеары проявляют способность к спонтанной миграции, образуя вокруг лунки равномерную кольцевую зону. По величине данной зоны оценивали степень миграционной активности моноцитов/макрофагов (СМА). Если в центральную лунку поместить стандартный хемоаттрактант (супернатант активированных латексом нейтрофилов), в крайние лунки – среду 199, а в средние лунки поместить исследуемые макрофаги и проинкубировать, то формирование асимметричной зоны миграции, вытянутой в сторону лунки с хемотаксическим фактором, позволяет оценить активность хемотаксиса (АХ) мононуклеаров: АХ = А/В, где А – миграция клеток к хемоаттрактанту; В – миграция клеток к среде (Тотолян А.А., Фрейдлин И.С., 2000).

Адгезивные свойства исследуемых клеток оценивали нединамическим методом (Редчиц Е.Г., Гузева В.О., 1991), который основан на способности клеток прикрепляться к чистой обезжиренной стеклянной поверхности (Имельбаева Э.А. с соавт., 1996). Параллельно с оценкой адгезии проводили оценку распластывания (Rollany H., 1982). Оценку распластывания также проводили путем подсчета числа распластанных и нераспластанных макрофагов. Результаты теста распластывания мононуклеаров оценивали при подсчете 100 клеток. Определяли процентное соотношение распластанных форм к общему числу прикрепившихся клеток.

Активность лизосом в клетках СМФ изучали по методу (Фрейдлин И.С., 1976), основанному на инкубации монослоя фагоцитов в среде, содержащей флюоресцирующий краситель – акридиновый оранжевый. При оценке результатов данного теста определяли лизосомальную активность – число макрофагов, имеющих лизосомальные гранулы (акридиноранжпозитивные клетки). Также учитывали процентное содержание клеток с разной степенью лизосомальной активности. Для этого оценку проводили визуально полуколичественным методом с вычислением среднего цитохимического коэффициента (СЦК) Astaldi и Verga.

Для оценки поглотительных и киллинговых свойств мононуклеаров в качестве фагоцитируемых объектов выступали частицы полистеролового латекса и суточная культура St.aureus (штамм АТСС 25923). Для оценки фагоцитарной способности макрофагов (Фримель Г., 1987) подсчитывали фагоцитарный показатель (процент фагоцитирующих клеток), фагоцитарный индекс (количество частиц латекса или St.aureus, поглощенных 100 клетками в перерасчете на 1 клетку) и киллинг (количество убитых микроорганизмов, поглощенных 100 макрофагами в перерасчете на 1 клетку).

Постановку НСТ-теста осуществляли в модификации Маянского А.Н. и Виксмана М.К (1979) в 2х вариантах – спонтанном и индуцированном. При постановке индуцированного НСТ-теста в качестве стимулятора использовали инертные частицы латекса диаметром 1,2 мкм (Бумагина Т.К., Шмелёв Е.И., 1981). При учете реакции определяли процент НСТ-позитивных клеток. Кроме того, рассчитывали функциональный резерв макрофагов (коэффициент стимуляции НСТ-теста), который определяли как частное от деления числа индуцированных на число спонтанных НСТ-положительных клеток.

Для оценки способности фагоцитов к образованию внеклеточных ловушек (МВЛ) в качестве тестовой культуры использовали живую суточную культуру клинического штамма St. aureus (штамм АТСС 25923).

Вышеназванный способ позволяет оценить число макрофагальных ловушек (количество МВЛ из 100 подсчитанных клеточных структур), число активных внеклеточных ловушек (количество МВЛ, содержащее бактериальные клетки в сетеподобных структурах из 100 подсчитанных фагоцитов) и индекс МВЛ (число бактерий в 100 подсчитанных ловушках в перерасчете на 1 структуру).

Цитохимические методы исследования. Для оценки содержания кислой фосфатазы в мононуклеарах использовали реакцию азосочетания Burstone.

Исследование активности миелопероксидазы оценивали по методу Лилли Р.

(1980). Для комплексной оценки активности кислородзависимого метаболизма клеток СМФ нами было проведено исследование интенсивности цитохимической реакции на сукцинатдегидрогеназу по методу Хейхоу Ф.Г.Дж.

и Кваглино Д. (1983). Определение -глицерофосфатдегидрогеназы производили по методу Нарциссова Р.П. (1969). Выявление гликогена осуществляли с помощью ШИК-реакции по Мак-Манусу.

Для количественного выражения результатов всех цитохимических исследований ферментов и гликогена использовали средний цитохимический коэффициент: СЦК=0А+1Б+2В+3Г/n, где 0,1,2,3 – интенсивность содержания фермента в клетке; А, Б, В, Г – число клеток с разным уровнем ферментной активности; n – общее количество учтенных клеток.

Метод длительного культивирования (Патент на изобретение №2460783 от 10 сентября 2012 г.). В качестве исследуемого материала выделяли перитонеальные макрофаги. Проводили их культивирование в течение 7 суток. Выделенные мононуклеарами цитокины добавляли к моноцитам крови, совместное инкубирование которых производили в течение следующих 2 суток. Затем производили комплексную оценку морфофункционального состояния моноцитов периферической крови.

Статистические методы исследования. Статистическая обработка производилась с использованием программного обеспечения Microsoft Excel 2007 и лицензированного пакета прикладных компьютерных программ SPSS 17.0. При обработке полученных данных использовались методы вариационной статистики (определение среднего арифметического и его ошибки (М±m)).

Достоверность результатов оценивалась с помощью непараметрического критерия Манна – Уитни (Реброва О.Ю., 2002). При этом достоверными считали различия, где уровень значимости (p) был меньше 0,05 (Платонов А.Е., 2000).

ПОЛУЧЕННЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

1. Определение содержания клеток системы мононуклеарных фагоцитов различных компартментов Известно, что количественный состав фагоцитирующих клеток играет важную роль, обусловливающую адекватность клеточных реакций (Ильин Д.А., Архипов С.А., 2005).

В результате проведенного исследования нами установлено, что у потомства самок крыс как опытных, так и контрольной групп в ходе постнатального онтогенеза происходит постепенное увеличение числа макрофагов различных компартментов (таблица 1, 2, рис. 1).

В то же время, как видно из таблицы, у подопытных животных на всех сроках исследования количество мононуклеаров снижено по сравнению с контролем.

Общеизвестно, что печени принадлежит важная роль в механизмах защиты плода (Grup-puso et al., 2005). Печень является первым органом у плода на пути возбудителя (Хлыстова З.С., 1987; Цинзерлинг В.А., Мельникова В.Ф., 2002), и от ее морфофункционального состояния, зависит функциональное состояние системы резистентности плода.

Содержание перитонеальных и альвеолярных макрофагов у экспериментальных группа Число клеточных элементов СМФ в единице объема Перитонеальные макрофаги (106 / мл) Альвеолярные макрофаги (106 / орган) К 2,95± 3,25 ± 5,28 ± 9,74 ± 12,81 0,98 ± 2,48 ± 3,77 ± 5,35 ± 6,29 ± О1 1,99 ± 2,58 ± 2,92 ± 3,21 ± 5,96 ± 0,54 ± 2,03 ± 2,33 ± 3,15 ± 4,55 ± О2 1,41 ± 1,97 ± 2,85 ± 4,08 ± 6,04 ± 0,32 ± 1,51 ± 1,97 ± 2,85 ± 3,12 ± * - результаты статистически достоверны по сравнению с контролем (р0,05) Подтверждением вышесказанного являются наши результаты, анализ которых позволил констатировать, что у потомства самок крыс с хроническим экспериментальным поражением гепатобилиарной системы содержание купферовских клеток в печени на всех сроках исследования повышено (рис.1) по сравнению с интактными животными соответствующего возраста.

Рис.1. Содержание клеток Купфера у экспериментальных животных (106) (* - результаты статистически достоверны по сравнению с контролем, р0,05) Полученные в результате эксперимента данные также свидетельствуют о том, что для опытных животных характерно уменьшение числа моноцитов крови на разных этапах постнатального развития (таблица 2). Снижение содержания моноцитов сопровождается достоверным уменьшением числа органо- и тканеспецифических макрофагов. Исключение составили лишь клетки Купфера, содержание которых у подопытных крысят существенно увеличилось по сравнению с контролем.

Из всех изученных компартментов системы мононуклеарных фагоцитов увеличение содержания клеток Купфера, скорее всего, связано с тем, что при патологии печени матери в организме плода в первую очередь нагрузка приходится на одноименный орган (Брюхин Г.В., 1993; Евченко Е.В., 2001), следовательно, именно ему необходима усиленная защита, обеспечивающаяся рекрутированием дополнительного количества макрофагов, где они и превращаются в клетки Купфера. Можно предположить, что такое рекрутирование моноцитов/макрофагов в печень, прежде всего, происходит изза формирования высокого градиента хемааттрактантов для этих клеток в зоне локализации активированных клеток Купфера (Маянский А.Н., Маянский Д.Н., 1989).

Содержание моноцитов периферической крови у экспериментальных (* - результаты статистически достоверны по сравнению с контролем, р0,05) Таким образом, результаты данной серии исследований позволяют сделать заключение о перераспределения клеток СМФ в организме подопытного потомства. При этом можно заметить, что уменьшение содержания исследуемых макрофагов в подопытных группах во многом зависит от снижения числа моноцитов периферической крови, являющихся предшественниками зрелых органо- и тканеспецифических макрофагов.

2. Исследование поверхностно-рецепторного аппарата макрофагов экспериментальных животных Одним из важных показателей течения любого патологического процесса в организме является интенсивность подвижности фагоцитов. Помещенные в лунку макрофаги проявляют способность к случайной миграции, образуя вокруг лунки равномерную кольцевую зону.

Во всех экспериментальных группах в процессе постнатального онтогенеза спонтанная миграционная активность макрофагов постепенно возрастает, достигая максимальных величин к 60-му дню онтогенеза (рис. 2).

Рис. 2. Динамика изменений спонтанной миграции перитонеальных макрофагов (* - результаты статистически достоверны по сравнению с контролем, р0,05) Однако замечено, что процент угнетения спонтанной миграционной активности легочных фагоцитов обеих опытных групп достигает наибольшей выраженности уже к 15-му дню развития потомства. На 30-ый же день данный показатель снижается практически в 2 раза, но к 45-му дню снова происходит усиление угнетения спонтанной миграции, которое и продолжается вплоть до 60-го дня онтогенеза (рис. 3).

Рис. 3. Процент угнетения спонтанной миграции легочных макрофагов (* - результаты статистически достоверны по сравнению с контролем, р0,05) Исследование индекса хемотаксиса клеток СМФ выявило увеличение данного показателя у всех экспериментальных групп в процессе постнатального развития. Однако у опытного потомства наблюдается снижение исследуемого показателя по сравнению с контрольными значениями. Причем у всех макрофагов максимальные различия наблюдаются на 60-ый день постнатального развития (рис. 4).

Выявленное в ходе эксперимента угнетение спонтанной миграционной и хемотаксической активности клеток системы мононуклеарных фагоцитов у потомства самок крыс с экспериментальной патологией печени различного генеза может быть связано с разрушением весьма чувствительного мембранного компонента клеток и рецепторного аппарата на их поверхности.

Рис. 4. Активность хемотаксиса альвеолярных макрофагов (* - результаты статистически достоверны по сравнению с контролем, р0,05) Адгезия фагоцитирующих клеток к субстрату является одним из проявлений их активации. Она необходима для осуществления всех стадий фагоцитоза, начиная от распластывания клеток СМФ на поверхности объектамишени и заканчивая перевариванием субстрата (Маянский А.Н., Маянский Д.Н., 1989; Луговская С.А., 1997).

В результате проведенного исследования нами установлено, что процент макрофагов, подвергшихся адгезии при 30-минутном культивировании у всех экспериментальных животных после рождения постепенно увеличивается, достигая максимума к 60-му дню жизни (рис. 5).

Рис. 5. Адгезивная способность перитонеальных макрофагов, подвергшихся (* - результаты статистически достоверны по сравнению с контролем, р0,05) Анализ влияния патологии гепатобилиарной системы матери на адгезивные свойства клеток системы мононуклеарных фагоцитов потомства показал угнетение исследуемых характеристик у обеих опытных групп по сравнению с контрольными значениями соответствующего возраста. Так максимальное достоверное снижение адгезивной способности (практически в раза) перитонеальных макрофагов после 30-ти минутной экспозиции наблюдается у 60-дневных крысят первой опытной группы.

При исследовании другого показателя функционального состояния клеток системы мононуклеарных фагоцитов – способности к распластыванию была отмечена следующая закономерность.

В ходе исследования замечено увеличение числа контрольных распластанных клеток в процессе онтогенеза при 60-ти минутном культивировании (рис. 6). Однако обращает на себя внимание, что на 45-ый и 60-ый день развития у макрофагов подопытных групп обнаруживается тенденция к снижению пластических свойств.

Рис. 6. Способность перитонеальных макрофагов к распластыванию при 60-ти (* - результаты статистически достоверны по сравнению с контролем, р0,05) Кроме того было выявлено, что способность к распластыванию макрофагов крысят контрольной группы значительно превышает таковую в опыте при 60-ти минутной экспозиции.

3. Лизосомальная активность мононуклеарных фагоцитов различных компартментов. Неспецифическая резистентность организма человека во многом зависит от характера фагоцитарных свойств мононуклеаров, тогда как эффективность фагоцитоза, прежде всего, определяется наличием в цитоплазме лизосом (Маянский А.Н., Маянский Д.Н., 1989).

Рис. 7. Лизосомальная активность (%) макрофагов перитонеального экссудата потомства экспериментальных животных (* - результаты статистически достоверны по сравнению с контролем, р0,05) В результате проведенного нами исследования было установлено, что лизосомальная активность мононуклеаров различных компартментов у всех экспериментальных животных после рождения постепенно увеличивается, достигая максимума к 60-му дню онтогенеза (рис. 7, рис. 8).

Однако обращает на себя внимание то обстоятельство, что лизосомальная активность альвеолярных макрофагов выше, чем в фагоцитах других компартментов (рис. 7).

Рис. 8. Лизосомальная активность (%) альвеолярных макрофагов потомства (* - результаты статистически достоверны по сравнению с контролем, р0,05) Следствием вышеописанных изменений явилось достоверное уменьшение среднего цитохимического коэффициента в обеих опытных группах по сравнению с контролем на всех сроках исследования (рис. 9).

Рис. 9. Средний цитохимический коэффициент лизосомальной активности (* - результаты статистически достоверны по сравнению с контролем, р0,05) 4. Оценка активности лизосомальных ферментов мононуклеарных фагоцитов. Физиологическую стимуляцию макрофагов отражает изменение активности кислой фосфатазы, являющейся маркерным лизосомальным гидролитическим ферментом.

В ходе проведенного эксперимента было замечено, что средний цитохимический коэффициент при исследовании реакции на кислую фосфатазу во всех мононуклеарах в ходе постнатального развития постепенно увеличивается, достигая максимальных значений к 60-му дню.

Исследование влияния патологии печени матери на активность кислой фосфатазы в клетках потомства показало угнетение данного показателя по сравнению с контрольным потомством (рис. 10).

Рис. 10. Интенсивность цитохимической реакции на кислую фосфатазу в (* - результаты статистически достоверны по сравнению с контролем, р0,05) Так как кислая фосфатаза также является ферментом, участвующим в деградации углеводных субстратов (Плехова Н.Г. с соавт., 2007; Цыганкова О.В. с соавт., 2009), то ее снижение в макрофагах потомства матерей с поражением печени может быть связано с интенсивным расходованием ее для утилизации углеводов в клетках опытных групп.

Секреция миелопероксидазы является важнейшим фактором бактерицидности и патогенности макрофагов, обеспечивающим антимикробную резистентность организма (Маянский А.Н., Маянский Д.Н., 1989; Орлова Е.Г., Ширшев С.В., 2007).

Обращает на себя внимание то обстоятельство, что наибольшая активность миелопероксидазы наблюдается в моноцитах периферической крови (рис. 11).

Рис. 11. Содержание пероксидазопозитивных моноцитов крови (* - результаты статистически достоверны по сравнению с контролем, р0,05) Однако можно заметить, что для моноцитов периферической крови опытного потомства характерно наименьшее угнетение пероксидазной активности по сравнению с контрольными образцами. Таким образом, полученные в ходе эксперимента данные выявили угнетение активности миелопероксидазы в моноцитах/макрофагах потомства матерей с патологией печени различной этиологии.

5. Оценка внутриклеточной кислородзависимой метаболической активности мононуклеарных фагоцитов различных компартментов.

Наиболее простым и в тоже время очень надежным в оценке «респираторного взрыва» фагоцитирующих клеток является НСТ-тест.

Итак, в результате проведенного эксперимента было обнаружено, что в ходе постнатального онтогенеза в макрофагах всех экспериментальных групп интенсивность НСТ-теста постепенно увеличивается, достигая наибольших величин к 60-му дню развития (рис. 12).

Рис. 12. Активность спонтанного НСТ-теста (%) в моноцитах периферической (* - результаты статистически достоверны по сравнению с контролем, р0,05) Анализ влияния патологии гепатобилиарной системы матери на интенсивность спонтанного НСТ-теста в макрофагах потомства выявил угнетение исследуемого показателя у крысят от самок с хроническим экспериментальным поражением печени различного генеза.

Активированный тест с нитросиним тетразолием позволяет оценить внутренний функциональный метаболический резерв кислородзависимого механизма бактерицидности фагоцитов.

Анализ неблагоприятного влияния поражения гепатобилиарной системы матери на интенсивность стимулированного НСТ-теста в мононуклеарах потомства выявил угнетение исследуемого показателя у крысят обеих опытных групп по сравнению с контрольными величинами. Причем наибольшее снижение индуцированной кислородзависимой метаболической активности наблюдается на более поздних сроках исследования (рис. 13).

Анализ функционального резерва бактерицидной активности клеток системы мононуклеарных фагоцитов показал, что коэффициент стимуляции НСТ-теста во всех макрофагах контрольной группы превышает 100%.

Рис. 13. Интенсивность стимулированного НСТ-теста (%) в клетках Купфера (* - результаты статистически достоверны по сравнению с контролем, р0,05) Однако обращает на себя внимание тот факт, что в большинстве случаев у подопытных животных интенсивность стимулированного НСТ-теста либо практически не отличается от спонтанной активности, либо даже снижается по сравнению с ней (рис. 14).

Рис. 14. Коэффициент стимуляции НСТ-теста в клетках Купфера (* - результаты статистически достоверны по сравнению с контролем, р0,05) 6. Оценка фагоцитарной активности макрофагов различных компартментов. Процесс фагоцитоза является одним из важнейших защитно – приспособительных механизмов живого организма против различных патогенных бактерий.

Рис. 15. Активность фагоцитоза St. aureus альвеолярными макрофагами на (* - результаты статистически достоверны по сравнению с контролем, р0,05) В ходе проведенного исследования фагоцитарных свойств на модели поглощения St. aureus с возрастом отмечена тенденция к повышению функциональной активности макрофагов различных компартментов всех экспериментальных групп в ходе онтогенеза (рис. 15, рис. 16).

Оценка влияния патологии печени матери на фагоцитарный показатель и фагоцитарный индекс мононуклеаров потомства выявила угнетение изучаемых показателей у крысят опытных групп.

Рис. 16. Интенсивность фагоцитоза St. aureus альвеолярными макрофагами на (* - результаты статистически достоверны по сравнению с контролем, р0,05) 7. Исследование ловушкообразующей способности мононуклеарных фагоцитов. Так как образование макрофагальных внеклеточных ловушек является дополнительным механизмом, обеспечивающим защиту макроорганизма от бактериальной инвазии, нами производилась оценка данной способности мононуклеаров на примере альвеолярных и перитонеальных макрофагов на 30-ый день онтогенеза.

Детальное микроскопирование позволило установить, что число макрофагальных внеклеточных ловушек, образованных фагоцитами контрольной группы животных, оказалось выше аналогичного показателя в опыте (таблица 3). Также как видно из таблицы, у подопытных животных имеет место угнетение числа активных ловушек, а также снижение индекса макрофагальных внеклеточных структур.

Число макрофагальных внеклеточных ловушек, активных ловушек и индекс МВЛ в альвеолярных и перитонеальных макрофагах потомства (М ± m)

МВЛ МВЛ

(* - результаты статистически достоверны по сравнению с контролем, р0,05) 8. Оценка суммарной секреторной активности макрофагов. С целью определения суммарной секреторной активности макрофагов по выработке цитокинов в условиях длительного культивирования нами производилась комплексная оценка морфофункционального состояния моноцитов крови, подвергшихся инкубации совместно с цитокинами макрофагов.

В результате проведенного эксперимента было установлено, что при культивировании моноцитов крови без супернатанта перитонеальных макрофагов абсолютно все исследуемые показатели в контрольной группе животных превышают таковые опытной группы (рис. 17, таблица 4).

Рис. 17. Жизнеспособность моноцитов периферической крови (%) (* - результаты статистически достоверны по сравнению с контролем, р0,05) Однако при инкубации моноцитов с цитокинами макрофагов перитонеального экссудата значения изучаемых показателей в клетках подопытного потомства достигают аналогичных результатов контрольной группы, а ряде случаев даже превышают контрольные значения. Данная закономерность наблюдается при исследовании лизосомальной и фосфатазной активности: так число акридиноранжпозитивных клеток и интенсивность цитохимической реакции на кислую фосфатазу в опытной группе моноцитов с добавлением цитокинов превышает аналогичный показатель контрольной группы (рис. 18, рис. 19).

Характеристика фагоцитарных свойств моноцитов периферической крови на группа Без цитокинов С цитокинами Без цитокинов С цитокинами (* - результаты статистически достоверны по сравнению с контролем, р0,05) Таким образом, нами установлено, что у подопытных крысят в условиях длительного культивирования проявляется большая секреторная активность макрофагов по сравнению с таковой в контроле.

Рис. 18. Содержание акридиноранжпозитивных моноцитов крови (%) (* - результаты статистически достоверны по сравнению с контролем, р0,05) Рис. 19. Интенсивность цитохимической реакции на кислую фосфатазу (СЦК) в (* - результаты статистически достоверны по сравнению с контролем, р0,05) На основании данных литературы и результатов собственных исследований механизм выявленных изменений морфофункционального состояния мононуклеаров опытного потомства можно представить следующим образом.

Известно, что различные изменения гомеостаза материнского организма сказываются на развитии плода, обусловливая врожденные уродства и даже его гибель, а у потомства, родившегося живым, - существенные изменения обмена веществ (Савченков Ю.И., 1981). Общепризнанно, что печень в постнатальном онтогенезе является основным органом, выполняющим одновременно метаболические, экскреторные и барьерные функции (Арцимович Н.Г. с соавт., 1993). Введение гепатотропного яда D(+) – галактозамина гидрохлорида и супернатанта культуры E.coli вызывает у самки угнетение основных функций печени, а именно дезинтексикационной, белково-синтетической, а также нарушение углеводного и липидного обмена веществ (Сугробова Н.П. с соавт., 1992; Подымова С.Д., 1993). Нарушение вышеназванных функций печени неизбежно приводит к накоплению в организме матери токсичных метаболитов и шлаков, которые вызывают морфофункциональные нарушения различных органов и систем организма матери, а именно иммунной, кроветворной, эндокринной, сердечно-сосудистой, нервной, что приводит к изменениям межсистемных, межорганных, межтканевых, межклеточных и клеточноматриксных взаимоотношений (Азизова Ф.Х. с соавт., 2006). Продукты обмена веществ поступают в общий кровоток и могут оказывать негативное действие на органы и системы. Из крови продукты превращения могут захватываться почками, легкими и другими органами, а также повторно печенью (Зобнин Ю.В., 2006), вызывая в них изменения.

По данным литературы известно, что при различных заболеваниях печени развиваются изменения клеточного и гуморального иммунитета (Майер К.П., 1999). Так супернатант культуры E.coli и гепатотропный яд D(+) – галактозамин гидрохлорид обладают гепатотоксическим действием, связанным с повреждающими эффектами макромолекул и других метаболитов на гепатоциты. Наименее изученным механизмом гепатотоксичности является аутоиммунный процесс, который в некоторых случаях может стать преобладающим. Повреждения печени в таком случае сопровождаются нарушениями не только гуморального, но и клеточного звена иммунитета (Александрова И.В., 2009). Вызвано это тем, что индукция мембранных ферментов может привести к образованию аутоантител и повреждению гепатоцита. Возможно появление антител к поврежденным токсическим агентом органеллам клетки (Зобнин Ю.В., 2006).

Как известно, различные патологические процессы, протекающие в организме матери, приводят к увеличению проницаемости гематоплацентарного барьера (Савченко Ю.И., Лобынцев К.С., 1980).

Вследствие данного нарушения из крови матери в организм плода беспрепятственно будут проходить конечные и промежуточные продукты обмена веществ, а также сенсибилизированные лимфоциты, циркулирующие иммунные комплексы, специфические аутоантитела (Крыжановский Г.Н. с соавт., 1980; Аверкина Р.Ф., 1985). Известно, что плацента препятствует прохождению ряда материнских клеток и цитотоксических антител к плоду, что зависит от состояния синцитиотрофобласта. В случае его повреждения, например, в результате отложения иммунных комплексов, существенно изменяются и протеолитические свойства трофобласта, благодаря которым осуществляется инактивация чужеродных белков, связывание и нейтрализация антител системы АВО крови матери, антилейкоцитарных и других антител.

Нарушается избирательное распознавание различных классов иммуноглобулинов матери и секреция их в кровоток плода, вследствие чего резко ограничивается иммуномодулирующее эндогенное влияние материнского организма и задерживается формирование гуморального звена иммунитета у плода (Евсюкова И.И., 2001). В то же время при токсическом гепатите в органах иммунной системы отмечаются признаки антигенной активации, обусловленные как непосредственным действием токсического агента на лимфоидную ткань, так и реакцией иммунной системы в ответ на усиление процессов альтерации во внутренних органах, в первую очередь печени, как органа-мишени. Показано, что токсическое поражение печени приводит к дисбалансу основных звеньев иммунитета (Сивоконюк О.В., 2010).

Однако каждый орган плода активно работает, обеспечивая качественное своеобразие его гомеостаза, и реагирует на сдвиги этого гомеостаза изменением своей структуры и функций (Савченков Ю.И., 1981). Именно поэтому хроническая патология гепатобилиарной системы матери приводит к поражению одноименного органа у потомства (Брюхин Г.В., 1994; Евченко Е.В., 2001), что еще больше усугубляет и так измененные условия внутриутробного развития плода Данное нарушение обусловливает изменение процессов гистогенеза, органогенеза и системогенеза, что, в свою очередь, приводит к нарушению морфофункционального становления многих систем жизнеобеспечения развивающегося потомства, в том числе кроветворной и системы мононуклеарных фагоцитов.

Нами установлено, что у потомства самок крыс с экспериментальной патологий гепатобилиарной системы различной этиологии происходит нарушение морфофункционального состояния макрофагов различных компартментов. В процессе онтогенеза нами замечено максимальное угнетение функции макрофагов опытного потомства, что связано с прогрессированием нарушений процессов межклеточной, межтканевой и межорганной кооперации.

Таким образом, полученные нами данные свидетельствуют о присутствии угнетающего эффекта патологии печени матери, обусловленной введением супернатанта культуры E.coli и D(+) – галактозамина гидрохлорида, на морфофункциональное состояние и стимулирующего эффекта на цитокинпродуцирующую способность клеток системы мононуклеарных фагоцитов потомства.

В целом, полученные данные научно обосновывают положение о том, что потомство матерей с хронической патологией гепатобилиарной системы является иммунологически компрометированным и диктуют необходимость выделения таких детей в группу риска.

ВЫВОДЫ

1. Экстрагенитальная патология матери, обусловленная введением супернатанта культуры E.coli и D(+) – галактозамина гидрохлорида приводит к изменению функционального состояния клеток системы мононуклеарных фагоцитов потомства.

2. Хроническая экспериментальная патология гепатобилиарной системы матери вызывает количественное перераспределение макрофагов различных компартментов потомства: увеличение содержания клеток Купфера и уменьшение количества мононуклеаров других органов и тканей.

3. Экспериментальное хроническое поражение печени матери различной этиологии обусловливает неспецифические функциональные изменения макрофагов различных компартментов потомства, что проявляется в угнетении локомоторных функций, снижении адгезивных и пластических свойств, депрессии кислородзависимого и кислороднезависимого метаболизма, а также угнетении фагоцитарных и бактерицидных свойств.

4. Экстрагенитальная патология матери, обусловленная введением D(+) – галактозамина гидрохлорида приводит к нарушению ловушкообразующей способности перитонеальных и альвеолярных макрофагов потомства.

5. Экспериментальное хроническое токсическое поражение печени матери обусловливает у потомства подопытных животных увеличение суммарной секреторной активности перитонеальных макрофагов в условиях культивирования.

СПИСОК ПУБЛИКАЦИЙ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Шаврина, Е. Ю. Влияние неблагоприятного воздействия поражения печени матери на морфофункциональные особенности клеток системы мононуклеарных фагоцитов у потомства в эксперименте / С. В. Барышева, Е.

Ю. Шаврина // «Роль патологии печени матери в нарушении развития реактивности и резистентности потомства в условиях эксперимента»: сб.

научных трудов / под ред. Г.В. Брюхина. – Челябинск : ЧГМА, 2009. – Вып. 2. – С. 128-138.

2. Шаврина, Е. Ю. Влияние экспериментального поражения печени матери на становление клеток системы мононуклеарных фагоцитов потомства / Е. Ю. Шаврина // Студент и научно-технический прогресс : тез. докл. ХХХIII студенч. науч. конф. / отв. за вып. Л. И. Сахно ; Челяб. гос. ун-т. – Челябинск :

Изд-во Челяб. гос. ун-та, 2009. – С. 14-16.

3. Шаврина, Е. Ю. Морфофункциональная характеристика нейтрофилов периферической крови потомства самок крыс с хроническим поражением печени / Н. В. Невзорова, Е. Ю. Шаврина // Материалы I международной (VIII итоговой) научно-практической конференции молодых ученых. – Челябинск :

Челябинская государственная медицинская академия, 2010. – С. 162-164.

4. Шаврина, Е. Ю. Роль патологии печени матери в нарушении морфофункционального состояния моноцитов периферической крови потомства (экспериментальное исследование) / Е. Ю. Шаврина, Н. В. Невзорова // Материалы I международной (VIII итоговой) научно-практической конференции молодых ученых. – Челябинск : Челябинская государственная медицинская академия, 2010. – С. 273-275.

5. Шаврина, Е. Ю. Морфофункциональная характеристика экспериментальным хроническим поражением гепатобилиарной системы в различные сроки постнатального онтогенеза / Е. Ю. Шаврина, Г. В.

Брюхин // Медицинский академический журнал. – 2010. – Т. 10 (№ 5). – С.

80.

6. Шаврина, Е. Ю. Роль патологии печени матери в нарушении реакций кислородзависимого метаболизма в клетках Купфера у потомства в различные сроки постнатального развития / Е. Ю. Шаврина, Г. В. Брюхин // Физиологические механизмы адаптации человека: материалы международной научно-практической конференции. – Тюмень : Лаконика, 2010. – С. 89-92.

7. Шаврина, Е. Ю. Сравнительная оценка количественного соотношения макрофагов различных компартментов у потомства животных с поражением печени различного генеза (экспериментальное исследование) / Е. Ю. Шаврина // Материалы II международной (IX итоговой) научно-практической конференции молодых ученых. – Челябинск : Челябинская государственная медицинская академия, 2011. – С. 287-291.

8. Шаврина, Е. Ю. Исследование поверхностно-рецепторного аппарата мононуклеарных фагоцитов различных компартментов у потомства матерей с экспериментальным поражением гепатобилиарной системы / Е. Ю. Шаврина, Г. В. Брюхин // Вестник Уральской медицинской академической науки. – 2011. – № 2/1 (35). – С. 76-77.

9. Шаврина, Е. Ю. Морфофункциональная характеристика клеток Купфера у потомства самок крыс с экспериментальным хроническим поражением гепатобилиарной системы / Е. Ю. Шаврина, Г. В. Брюхин // Вестник международной академии наук экологии и безопасности жизнедеятельности. – 2011. – Т. 16 (№ 3). – С. 201-206.

10. Шаврина, Е. Ю. Влияние патологии гепатобилиарной системы матери на реактивность мононуклеарных фагоцитов различных компартментов у потомства / Е. Ю. Шаврина // Фундаментальные исследования. – 2011. – № 12 (ч. 4). – С. 716-722.

11. Шаврина, Е. Ю. Возрастная характеристика миграционной активности перитонеальных макрофагов и моноцитов крови потомства матерей с хронической патологией печени / Е. Ю. Шаврина // Регенеративная биология и медицина: сборник научных трудов Всероссийской конференции. – М. :

Нарконет, 2011. – С. 164-165.

морфофункционального состояния альвеолярных макрофагов у потомства животных с хронической патологией печени / Е. Ю. Шаврина, Г. В.

Брюхин // Морфология. – 2011. – Т. 140 (№ 5). – С. 64.

13. Шаврина, Е. Ю. Оценка фагоцитарных и бактерицидных свойств моноцитов периферической крови потомства животных с патологией гепатобилиарной системы различной этиологии / Г. В. Брюхин, Е. Ю.

Шаврина // Вестник Южно-Уральского государственного университета.

Сер. Образование, здравоохранение, физическая культура. – 2011. – Вып.

29. – №39 (256). – С. 85-89.

14. Шаврина, Е. Ю. Роль поражения гепатобилиарной системы матери в развитии гипохромной анемии у потомства на разных этапах постнатального онтогенеза (экспериментальное исследование) / Е. Ю. Шаврина, Т. Д. Мальгина // Материалы III международной (X итоговой) научно-практической конференции молодых ученых. – Челябинск : Челябинская государственная медицинская академия, 2012. – С. 375-379.

15. Шаврина, Е. Ю. Влияние экспериментальной патологии гепатобилиарной системы матери на функциональную активность альвеолярных и перитонеальных фагоцитов потомства / Е. Ю. Шаврина // Вестник Уральской медицинской академической науки. – 2012. – № 3 (40).

– С. 33-36.

цитохимического состояния перитонеальных и альвеолярных макрофагов потомства самок крыс с экспериментальным поражением печени / Г. В.

Брюхин, Е. Ю. Шаврина // Вестник Южно-Уральского государственного университета. Серия образование, здравоохранение, физическая культура.

– 2012. – Вып. 32. – № 28 (287). – С. 85-88.

1. Патент РФ на изобретение № 2460783 Способ оценки суммарной секреторной активности макрофагов различных компартментов по выработке цитокинов в условиях длительного культивирования / Г. В.

Брюхин, Е. Ю. Шаврина, С. В. Барышева. - № 2011133138; заявл.

05.08.2011; опубл. 10.09.2012, Бюл. № 25. – С.



 
Похожие работы:

«КОЩЕЕВА АННА ВАСИЛЬЕВНА ФИЗИОЛОГИЧЕСКОЕ СОСТОЯНИЕ ЛОШАДЕЙ ТРАКЕНЕНСКОЙ ПОРОДЫ РАЗЛИЧНЫХ ПОЛОВОЗРАСТНЫХ ГРУПП ПРИ ВВЕДЕНИИ В РАЦИОН КОНЪЮГИРОВАННЫХ ФОРМ МИКРОЭЛЕМЕНТОВ 03.03.01 – Физиология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учёной степени кандидата биологических наук Москва – 2012 1 Работа выполнена на кафедре физиологии, общей биологии и основ ветеринарии ФГБОУ ВПО Тверская государственная сельскохозяйственная академия Научный руководитель : доктор биологических наук,...»

«ЦАПЛИНА Ольга Анатольевна РОЛЬ ПРОТЕАЛИЗИНА В БАКТЕРИАЛЬНОЙ ИНВАЗИИ 03.03.04. - Клеточная биология, цитология, гистология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Санкт-Петербург – 2011 Работа выполнена в Учреждении Российской академии наук Институт цитологии РАН, Санкт-Петербург Научный руководитель : доктор биологических наук Хайтлина София Юрьевна Институт цитологии РАН Официальные оппоненты : доктор биологических наук Гамалей Ирина...»

«Хващинский Дмитрий Альбертович ФИЗИОЛОГИЧЕСКОЕ ОБОСНОВАНИЕ МЕТОДОВ ОТБОРА ПОДРОСТКОВ К СОВРЕМЕННОМУ ПРОФИЛЬНОМУ ОБУЧЕНИЮ 03.03.01 – Физиология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Москва – 2011 Работа выполнена на кафедре нормальной физиологии медицинского факультета Федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования Российский университет дружбы народов. доктор медицинских...»

«ПРОСЕКОВА Елена Александровна РОСТ И МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНОЕ СОСТОЯНИЕ ОРГАНОВ И ТКАНЕЙ БРОЙЛЕРОВ, ВЫРАЩЕННЫХ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ПРОБИОТИКОВ 03.03.01 – физиология Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Москва – 2011 Работа выполнена на кафедре морфологии и физиологии животных ФГОУ ВПО Российский государственный аграрный университет – МСХА имени К.А. Тимирязева Научный руководитель : доктор биологических наук, профессор Панов Валерий...»

«КОМАРОВА Елена Юрьевна Роль шаперона Hsp70 в реакции опухолевых клеток с повышенной экспрессией протоонкогена Myc на действие противоопухолевых препаратов 03.03.04 – клеточная биология, цитология, гистология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Санкт-Петербург 2010 22 Работа выполнена в Лаборатории защитных механизмов клетки Института цитологии РАН, Санкт-Петербург Научный руководитель : доктор биологических наук Ирина Владимировна...»

«Краюшкина Наталья Геннадьевна ЗАКОНОМЕРНОСТИ ДИНАМИКИ МОРФОМЕТРИЧЕСКИХ ПАРАМЕТРОВ ЛИМФАТИЧЕСКИХ УЗЛОВ ПРИ ВОЗДЕЙСТВИИ ПЕРЕМЕННОГО ЭЛЕКТРОМАГНИТНОГО ПОЛЯ ПРОМЫШЛЕННОЙ ЧАСТОТЫ (ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНО–МОРФОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ) 14.03.01 – анатомия человека 03.03.04 – клеточная биология, цитология, гистология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Волгоград, 2013 Работа выполнена в Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего...»

«Логинова Анастасия Константиновна СТРУКТУРНО - ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ИЗМЕНЕНИЯ ГИПОТАЛАМО – ГИПОФИЗАРНО – ГОНАДНОЙ СИСТЕМЫ КРЫС В УСЛОВИЯХ ВОЗДЕЙСТВИЯ ДЕСТАБИЛИЗИРУЮЩИХ ФАКТОРОВ 03.03.04 – Клеточная биология, цитология, гистология 03.02.03 - Микробиология Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Оренбург – 2013 Работа выполнена в Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования Оренбургская...»

«ШАРЛАИМОВА Наталья Сергеевна КЛЕТКИ ЦЕЛОМИЧЕСКОГО ЭПИТЕЛИЯ МОРСКОЙ ЗВЕЗДЫ ASTERIAS RUBENS L., ОБЛАДАЮЩИЕ СВОЙСТВАМИ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК 03.03.04. – Клеточная биология, цитология, гистология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Санкт-Петербург 2011 г. Работа выполнена в Учреждении Российской академии наук Институт цитологии РАН, Санкт-Петербург кандидат биологических наук Научный руководитель : Петухова Ольга Александровна Институт...»

«СТОЛЯРОВА Марина Владимировна СРАВНИТЕЛЬНАЯ МОРФОЛОГО-ФИЗИОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА И РЕАКТИВНЫЕ ОСОБЕННОСТИ ЭПИТЕЛИАЛЬНЫХ СИСТЕМ У ЖИВОТНЫХ РАЗНЫХ УРОВНЕЙ ОРГАНИЗАЦИИ И ЧЕЛОВЕКА: ФИЛОГЕНЕТИЧЕСКИЙ АСПЕКТ 03.03.04 – клеточная биология, цитология, гистология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук Санкт-Петербург 2012 2 Работа выполнена в Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования...»

«ЛЕЙХТЕР Светлана Николаевна ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ ПИЩЕВАРИТЕЛЬНЫХ ФЕРМЕНТОВ И ПРЕДСТАВИТЕЛЕЙ МИКРОФЛОРЫ ТОЛСТОЙ КИШКИ В НОРМЕ И ПРИ ОСТРОМ АЛКОГОЛЬНОМ ПСИХОЗЕ 03.03.01 – физиология 14.01.27 – наркология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Архангельск - 2010 2 Работа выполнена на кафедре биохимии ГОУ ВПО Северный государственный медицинский университет федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию Научные...»

«ЧЕРЕМИСИН Алексей Евгеньевич СТРУКТУРНО-ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ИЗМЕНЕНИЯ ХОРИАЛЬНЫХ ВОРСИН ФЕТОПЛАЦЕНТАРНОГО КОМПЛЕКСА ПРИ ЗАДЕРЖКЕ РОСТА ПЛОДА 03.03.04 - клеточная биология, цитология, гистология. 14.01.01 – акушерство и гинекология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Оренбург - 2011 Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования Оренбургская государственная медицинская академия...»

«Моросанова Мария Александровна Механизмы повреждения клеток эпителия почечных канальцев при моделировании пиелонефрита in vitro 03.03.04 - клеточная биология, цитология, гистология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук МОСКВА 2013 1 Работа выполнена на факультете биоинженерии и биоинформатики и в НИИ физикохимической биологии имени А.Н. Белозерского Федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего...»

«Давыдов-Синицын Александр Петрович Стволовые клетки в популяции культивируемых клеток колоректальной карциномы человека Специальность: 03.03.04 — Клеточная биология, цитология, гистология. Автореферат диссертации на соискание учёной степени кандидата биологических наук Санкт-Петербург 2014 1 Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении науки Институт цитологии Российской академии наук (Санкт-Петербург) Научный руководитель : кандидат биологических наук,...»

«МИТЮШОВА Елена Викторовна РОЛЬ ИНТЕРЛЕЙКИНА-2 И JAK/STAT СИГНАЛИЗАЦИИ В ЭКСПРЕССИИ РЕЦЕПТОРА ИНТЕРЛЕЙКИНА-2 В ЛИМФОЦИТАХ ЧЕЛОВЕКА 03.03.04 – клеточная биология, цитология, гистология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Санкт-Петербург 2013 2 Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении науки Институт цитологии Российской академии наук, Санкт-Петербург доктор биологических наук, старший Научный руководитель :...»

«АДОНИН Леонид Сергеевич ПЛАСТИНКА КОНТАКТА ООЦИТА СЦИФОМЕДУЗЫ AURELIA AURITA: СТРУКТУРНАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ И МОРФОДИНАМИКА 03.03.04 – Клеточная биология, цитология, гистология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Санкт-Петербург 2013 Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении науки Институт цитологии Российской академии наук Научный руководитель : доктор биологических наук, профессор Подгорная Ольга Игоревна...»

«ТАТАРИНОВА НАТАЛЬЯ ВАСИЛЬЕВНА ПСИХОФИЗИОЛОГИЧЕСКАЯ И ГЕМАТОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА СОСТОЯНИЯ ЗДОРОВЬЯ И АДАПТАЦИИ СТУДЕНТОВ К УЧЕБНОЙ ДЕЯТЕЛЬНОСТИ Специальность 03.03.01. - физиология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Москва 2012 1 Работа выполнена на кафедре анатомии, физиологии, гигиены и экологии человека ФГБОУ ВПО Орловский государственный университет Научный руководитель : кандидат биологический наук, профессор Овсянникова...»

«КОРЯГИНА Наталья Юрьевна ФИЗИОЛОГО - БИОХИМИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РЕЧНЫХ РАКОВ ПРИ ВЫРАЩИВАНИИ В ИСКУССТВЕННЫХ УСЛОВИЯХ 03.03.01 – физиология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Москва – 2010 Работа выполнена на кафедре физиологии и биохимии животных Российского государственного аграрного университета - МСХА имени К.А.Тимирязева и в лаборатории разведения речных раков ГНУ ВНИИР Научный руководитель : доктор биологических наук,...»

«СТАРУЩЕНКО АЛЕКСАНДР ВИКТОРОВИЧ РОЛЬ МАЛЫХ G-БЕЛКОВ В РЕГУЛЯЦИИ ЭПИТЕЛИАЛЬНЫХ НАТРИЕВЫХ КАНАЛОВ 03.03.04 – клеточная биология, цитология, гистология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук Санкт-Петербург 2010 Работа выполнена в Учреждении Российской академии наук Институт цитологии РАН, Научном центре здоровья Университета Техаса (США) и Медицинском колледже Висконсина (США) Научный консультант : доктор биологических наук Негуляев Юрий...»

«ШАРОВ Аркадий Валерьевич ВЛИЯНИЕ ЗАНЯТИЙ ЭКСТРЕМАЛЬНЫМИ ВИДАМИ СПОРТА НА АДАПТАЦИОННЫЕ ВОЗМОЖНОСТИ ОРГАНИЗМА СТУДЕНТОВ 03.03.01 физиология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Набережные Челны – 2012 2 Диссертация выполнена на кафедре адаптивной и лечебной физической культуры Федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования Пермский государственный гуманитарнопедагогический...»

«ФИРСАНОВ Денис Владимирович ДИНАМИКА ОБРАЗОВАНИЯ И ЭЛИМИНАЦИИ ФОСФОРИЛИРОВАННОГО ГИСТОНА Н2АХ В КЛЕТКАХ МЛЕКОПИТАЮЩИХ ПОСЛЕ РЕНТГЕНОВСКОГО ОБЛУЧЕНИЯ 03.03.04 — Клеточная биология, цитология, гистология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Санкт-Петербург 2012 Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении науки Институт цитологии Российской академии наук Научные руководители: кандидат биологических наук Кропотов...»








 
© 2013 www.diss.seluk.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Авторефераты, Диссертации, Монографии, Методички, учебные программы»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.