WWW.DISS.SELUK.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА
(Авторефераты, диссертации, методички, учебные программы, монографии)

 

На правах рукописи

Зубарев Илья Владимирович

РОЛЬ ХРОНИЧЕСКИХ ПОРАЖЕНИЙ ПЕЧЕНИ МАТЕРИ В НАРУШЕНИИ

СТАНОВЛЕНИЯ ЭНДОКРИННОЙ И РЕПРОДУКТИВНОЙ ФУНКЦИИ

ЯИЧНИКОВ ПОТОМСТВА В УСЛОВИЯХ ЭКСПЕРИМЕНТА

03.03.04 Клеточная биология, цитология, гистология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Оренбург, 2012

Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном 1 образовательном учреждении высшего профессионального образования «Челябинский государственный университет»

доктор медицинских наук, профессор

Научный руководитель:

Брюхин Геннадий Васильевич

Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор, профессор кафедры общей биологии ФГБОУ ВПО «Оренбургский государственный университет»

Завалеева Светлана Михайловна доктор биологических наук, профессор, профессор кафедры ветеринарно-санитарной экспертизы и фармакологии ФГБОУ ВПО «Оренбургский государственный аграрный университет»

Топурия Лариса Юрьевна Государственное бюджетное образовательное

Ведущая организация:

учреждение высшего профессионального образования «Сибирский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации

Защита диссертации состоится «28» декабря 2012 года в 9-00 часов на заседании диссертационного совета Д 208.066.04 при Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Оренбургская государственная медицинская академия»

Министерства здравоохранения Российской Федерации по адресу: Россия, 460000, г. Оренбург, ул. Советская, 6, зал заседаний диссертационного совета.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Оренбургская государственная медицинская академия»

Министерства здравоохранения Российской Федерации.

Автореферат разослан « 27» ноября 2012 г.

Ученый секретарь диссертационного совета Н.Н. Шевлюк

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность исследования. Сложившаяся демографическая ситуация в России в настоящее время остается крайне неблагоприятной, поэтому сохранение и восстановление репродуктивного здоровья в современном мире является важнейшей медицинской и государственной задачей. В последние годы отмечается рост числа бесплодных браков, увеличение количества семейных пар, у которых происходило невынашивание беременности, а число врожденных аномалий, не имеет тенденции к уменьшению [Сидельникова В.М., 2007; Доклад ВОЗ «Врождённые пороки», 2010]. Одной из причин нарушения внутриутробного развития являются экстрагенитальные заболевания женщины, при этом в структуре заболеваний особое место занимает патология гепатобилиарной системы, в том числе хронические гепатиты [Подымова С.Д., 2004; Шехтман М.М., 2005].





Многочисленными работами сотрудников кафедры гистологии, эмбриологии и цитологии Челябинской государственной медицинской академии в условиях эксперимента было показано неблагоприятное влияние хронических заболеваний печени матери на морфофункциональное становление различных органов и систем потомства [Брюхин Г.В., 1991Михайлова Г.И., 1990; Грачев А.Ю., 1990; Бояков А.А., 1998; Евченко Е.В., 2004; Николина О.В., 2004; Пивень Г.В., 2004; Федосов А.А., 2002;

Вторушина Е.В., 2008; Леонов Н.В., 2007; Барышева С.В., 2008; Ильиных М.А., 2009; Пашнина Е.Н., 2009; Солянникова Д.Р.; 2010, Романов А. С.;

2010, Смекалина О. Ю., 2011]. В месте с тем исследованиями Сизоненко М.Л. [2011] показано, что у самок крыс с экспериментальным хроническим поражением печени различного генеза рождается потомство с нарушением мужской репродуктивной функции.

В связи с этим целью настоящего исследования явился анализ морфофункционального становления генеративной и эндокринной функции яичников потомства самок крыс с экспериментальным поражением печени различного генеза в различные сроки постнатального периода.

Для достижения поставленной цели нами были сформулированы следующие задачи:

Изучить особенности морфофункционального становления яичников потомства самок крыс с хроническим экспериментальным поражением печени.

Исследовать особенности фолликулогенеза яичников потомства самок крыс с хроническим экспериментальным поражением печени различного генеза на разных стадиях постнатального развития.

Оценить структурно-функциональные особенности популяции тучных клеток яичника потомства самок крыс с хроническим экспериментальным поражением печени в различные сроки постнатального периода.

Оценить эндокринную функцию яичников потомства самок крыс с хроническим экспериментальным поражением печени на разных стадиях постнатального развития Проанализировать биологические показатели второго поколения самок крыс с экспериментальным поражением печени различного Научная новизна. На адекватных экспериментальных моделях (D(+)галактозамин и E.coli), воспроизводящих различные формы поражения печени у матери, впервые установлены общие особенности морфофункционального становления яичников потомства. Впервые показано изменение числа и апоптозной активности ооцитов полового гнезда под влиянием хронического поражения печени матери. Впервые выявлена закономерность фолликулогенеза потомства самок крыс с хроническим экспериментальным поражением печени, заключающаяся в снижении в яичниках общего числа фолликулов и усилении их роста, овуляции и образования жёлтых тел. Впервые проведён анализ биологических показателей второго поколения самок крыс с хроническим экспериментальным поражением печени различного генеза.





Теоретическая и практическая значимость работы Исследование, проведённое нами, относится к фундаментальным. Результаты проведенных исследований углубляют и расширяют представление о физиологических механизмах, лежащих в основе нарушения становления репродуктивного здоровья потомства от матерей с экспериментальным поражением печени.

Полученные результаты содержат новые сведения о влиянии хронических поражений гепатобилиарной системы у самок на процесс фолликулогенеза, клеточные элементы микроокружения, эндокринную функцию яичника.

Несмотря на условность экстраполяции экспериментальных данных на клинические ситуации, результаты исследований позволяют расценивать наличие патологии гепатобилиарной системы у матерей как фактор риска в отношении становления репродуктивной функции у потомства. Отсюда вытекает целесообразность организации диспансерного наблюдения за девочками, рождёнными от матерей, имеющих в анамнезе заболевания гепатобилиарной системы.

Результаты проведенного научного исследования используются в научно-исследовательской и учебной деятельности кафедры микробиологии ФБГОУ ВПО «Челябинский государственный университет» в курсе «Гистология человека», «Эмбриональное развитие человека. Нарушение внутриутробного развития», «Физиология человека и животных».

Положения, выносимые на защиту Экспериментальная патология матери в виде хронического поражения гепатобилиарной системы является существенным фактором риска, оказывающим неблагоприятное влияние на антенатальное и постнатальное становление генеративной функции яичников потомства.

Экспериментальная патология гепатобилиарной системы у самок крыс вызывает изменение активности клеточного микроокружения яичников потомства.

Экспериментальная патология гепатобилиарной системы у самок крыс вызывает нарушение процесса фолликулогенеза в яичниках потомства.

Хроническое экспериментальное поражение печени самок крыс, моделируемое путем введения токсина E. сoli и D (+) - галактозамина, обусловливает нарушение эндокринной функции яичников потомства.

Апробация работы. Материалы диссертации были обсуждены на I (VIII итоговой) и II (IХ итоговой) международной научно-практической конференции молодых ученых Челябинской государственной медицинской академии (Челябинск, 2010, 2011); на VI Международной конференции «Актуальные проблемы биологии и ветеринарной медицины мелких домашних животных» (Троицк, 2009).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 11 работ, в том числе 4 в изданиях, рекомендованных ВАК Минобрнауки РФ для изложения материалов докторских и кандидатских диссертаций.

Структура и объем диссертации: Основное содержание работы

изложено на 200 страницах машинописного текста, содержит 6 таблиц, рисунков, из которых 27 микрофотографии. Диссертация состоит из введения, обзора литературы (глава I), описания материалов и методов исследования (глава II), результатов собственных исследований и их обсуждения (глава III), заключения (глава IV), приложения, выводов и списка использованной литературы, включающего 408 источников, в том числе работы зарубежных авторов.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

В эксперименте были использованы белые лабораторные крысы (самки) породы «Вистар». Всего было использовано 232 животных, из них составили взрослые крысы самки, 162 крысят из 79 пометов в различные сроки постнатального онтогенеза (на 1-ые, 15-ые, 30-е, 45-е и 60-ые сутки).

Сроки исследования согласуются с общепризнанным подразделением возрастных периодов у данной группы животных [Заподнюк И.П. и др., 1983].

Исходя из поставленных задач данного исследования, все экспериментальные животные были разбиты на 3 группы. В первую группу были выделены животные от интактных родителей (контрольная группа животных) - «Контроль» (61 животных из 26 помётов). Во вторую группу вошли животные от матерей, сенсибилизированных супернатантом Е. coli (Опытная группа 1) - «ОГ1» (50 животных из 23 помётов). В третью группу выделены животные от самок крыс с D (+) -галактозаминовым поражением печени (Опытная группа 2) - «ОГ2» (51 животных из 21 помёта).

Исследования проводились с учетом суточных и сезонных колебаний.

Работа с экспериментальными животными проводилась в соответствии с «Правилами проведения работ с использованием лабораторных животных».

Модель хронического поражения печени путем введения E. coli. Для создания модели экспериментального гепатита у крыс, была использована культура Е. coli (штамм Американской коллекции типовых культур микроорганизмов, АТСС 25922 - Escherichia coli (Migula) Castellani and Chalmers). Сначала взрослым половозрелым крысам самкам вводили 0,2 мл фильтрата шестидневной культуры Е. coli в три участка печени - по одной с обеих сторон у основания мечевидного отростка и справа у края реберной дуги по срединно-ключичной линии. В течение 24 часов после введения сенсибилизирующей инъекции животные получали только воду. По истечении этого срока в хвостовую вену животным вводили фильтрат шестидневной культуры Е. coli из расчёта 0,1 мл на 100 г массы тела животного [Сааков Б.А. и др., 1967].

Модель хронического поражения печени путем введения D(+)галактозамина. Моделирование D(+) - галактозаминового поражения печени осуществляли путем однократного внутрибрюшинного введения взрослым половозрелым самкам гепатотропного яда D(+) - галактозамина гидрохлорида («Sigma -G500», США) в дозе 250 мг/кг массы тела [Сугробова Н.П., 1992]. По совокупности морфологических и биохимических критериев данная модель поражения печени соответствует острому вирусному гепатиту В человека [Венгеровский А.С., 1988].

Морфологические методы исследования. Отпрепарованные яичники взвешивались, определяли весовой индекс данного органа (мг). Оценку особенностей структурно-функционального становления генеративной и эндокринной функции яичников потомства самок крыс с хроническим экспериментальным поражением печени производили с использованием общепринятых критериев [Бессалова Е.Ю., 2006].

Гистохимические методы исследования. Яичники после взвешивания фиксировали в 10% нейтральном формалине. Гистологические срезы окрашивали 0,1% раствором толуидинового синего для выявления тучных клеток. Для выявления холестерина срезы получали в криостате и исследовали их в поляризационном свете по методу Меркулова [Кононский А. И., 1976]. Производилась оценка числа светящихся клеток в единице условной площади (103 мкм2) и их индекса свечения. Аскорбиновую кислоту выявляли методом Кисели в модификации Чайно [Кононский А. И., 1976] Морфометрические методы исследования. Анализ абсолютной и относительной площади интерстициальной соединительной ткани оценивали при помощи программно-аппаратного комплекса для анализа и обработки изображений в микроскопии - «ВидеоТест - Морфология 5.0». С его помощью проводилось измерение диаметра фолликулов, жёлтых тел, подсчёт числа фолликулярных клеток в фолликулах, определялась площадь срезов, площадь коркового и мозгового вещества.

Интенсивность фолликулогенеза оценивали на основании международной классификации фолликулов. Согласно данной классификации Pedersen, Peters [Pedersen et. al., 1968] можно выделить несколько типов фолликулов: 1-За типы фолликулов - малые, Зб-5а типы средние фолликулы, 5б-8 типы - большие фолликулы. Данная классификация основывается на двух морфометрических показателях - размерах фолликулов и численности фолликулярных эпителиальных клеток на максимальном сечении фолликула. Производился подсчёт числа клеток гранулёзы в фолликулах и диаметр фолликулов.

Для оценки активности атрезии, подсчитывали общее количество атретических фолликулов на серийных срезах согласно критериям Byskov A.G. (1979). Для оценки процесса лютеогенеза оценивалось число жёлтых тел, их площадь и диаметр.

Анализ популяции тучных клеток производили по общепринятой методике Линднер Д.П. и др. (1980). При этом подсчитывалось абсолютное количество тучных клеток и их субпопуляционный состав по уровню гранулярного насыщения и степени дегрануляции.

Метод твердофазного иммуноферментного анализа. Об эндокринной функции яичников 45 и 70 дневных крысят от самок крыс с хроническим экспериментальным поражением печени судили на основании концентрации в сыворотке крови эстрогенов (Е2) и прогестерона (PRG). Кроме того, производился анализ концентрации в сыворотке крови экспериментальных животных фолликулостимулирующего (FSH) и лютеинизирующего (LH) гормонов гипофиза. Концентрацию гормонов яичника определяли в сыворотке крови 45 и 70 дневных крысят методом твердофазного иммуноферментного анализа.

Метод электронной микроскопии. Материал для электронной микроскопии фиксировали в параформальдегиде на фосфатном буфере (по Карновскому), затем дофиксировали в 2% тетраоксиде осмия и заливали в смолу. Полутонкие срезы с эпоксидных блоков окрашивали двуцветным методом по Гримлею и просматривали в световом микроскопе. Ультратонкие срезы толщиной 60 нм контрастировали по методу Рейнольдса уранилацетатом и цитратом свинца. Изучали в трансмиссионном электронном микроскопе Libra-120 («Carl Zeiss & MT», Германия) с цифровой SSCCD камерой UltraScan 950 (4 мпикс.) в диапазоне увеличения 1200-20000.

Биологические методы. Исходя из цели настоящего исследования, предпринята попытка оценить степень физиологической зрелости и фертильность потомства самок с хроническим поражением печени различного генеза. В связи с этим, проводился подсчёт численности помёта (второго поколения), числа живых родившихся плодов, вес новорождённых, процент наступления беременности. Кроме того, определяли показатель выживаемости животных в период раннего постнатального онтогенеза (к исходу 2-х и 15-ти суток жизни).

Статистические методы исследования. Статистический анализ полученных данных проводили с использованием программного обеспечения: Microsoft Excel 2003, SPSS 17.0. При статистической обработке определялась средняя арифметическая и ее ошибка (М±m). При сравнительном анализе данных, использовался непараметрический метод – критерий Манна - Уитни [Медик О.Ю., 2007]. Корреляционный анализ проводили с использованием программы SPSS 17.0 (метод корреляции по Спирману). Учитывались только сильные корреляционные связи с коэффициентом корреляции от 0,7 до 1,0 и достоверностью р0,05. Также использовали метод ранжирования, который заключается в определении места (ранга) объектов проводимого исследования [Гринчель Б.М. с соавт., 2003; Медик В.А. с соавт., 2003].

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

экспериментальных животных.

Анализ весовых параметров экспериментальных животных и яичника показал, что у потомства самок крыс с хроническим экспериментальным поражением печени различного генеза с возрастом происходит увеличение массы тела, абсолютной массы яичников и весового индекса.

Рис. 1. Динамика изменения массы тела потомства экспериментальных животных в различные сроки постнатального развития.

*–результаты статистически достоверны (p0.05) Рис. 2. Вес яичников экспериментальных животных контрольной и опытной групп в различные сроки постнатального развития (мг.) *–результаты статистически достоверны (p0.05) Рис. 3. Динамика изменения весового индекса яичников экспериментальных животных в различные сроки постнатального *–результаты статистически достоверны (p0.05) При этом на большинстве сроков исследования наблюдается тенденция к увеличению изучаемых показателей по сравнению с группой контроля.

Наибольшие значение исследуемых показателей зафиксировано на большинстве сроков исследования в экспериментальной группе №1 (рис.1, 2, 3).

2. Морфологический анализ яичников экспериментальных животных Нами установлено увеличение после рождения площади коркового и мозгового вещества яичников у подопытных животных. При этом обращает на себя внимание факт, что на 30 день у подопытных крысят несколько увеличено мозговое вещество, а на 45 день снижена площадь коркового вещества по отношению к контролю. Показано, что к периоду полового созревания коэффициент, отражающий отношение коркового вещества к мозговому веществу яичника несколько снижается, а к концу данного периода существенно увеличивается до максимального значения (рис. 4).

Рис. 4. Динамика изменения коэффициента, отражающего отношение коркового вещества к мозговому веществу яичника экспериментальных животных в различные сроки постнатального развития.

*-результаты статистически достоверны (р0,05) Обращает на себя внимание уменьшение исследуемых показателей в обеих подопытных группах на 30-й и 45-й дни.

Характеристика клеток полового гнезда яичников новорождённых крысят Важной стадией в формировании зародышевых линий является «Гнездо» половых клеток. Показано, что у подопытных животных отмечается увеличение числа клеток прегранулёзы и снижение числа оогоний (рис. 5). При оценке клеточной плотности нами было показано незначительное увеличение клеточной плотности у подопытных животных.

Увеличение относительного содержания клеток полового синцития, подвергшихся апоптозу, у подопытных животных коррелирует с уменьшением числа клеток полового гнезда (рис. 6).

Рис. 5. Клеточный состав (%) половых гнёзд новорождённых яичников экспериментальных животных в единице условной площади (104 мкм2).

*–результаты статистически достоверны (p0.05) Рис. 6. Клеточная плотность и число клеток, подвергшихся апоптозу яичников экспериментальных животных в единице условной площади ( мкм2).

*–результаты статистически достоверны (p0.05) Характеристика процесса фолликулогенеза. Одним из важнейших показателей структурно-функциональной зрелости яичника является общее количество фолликулов и их популяционный состав. Интенсивность фолликулогенеза оценивали на основании международной классификации фолликулов. В яичниках экспериментальных крысят с возрастом наблюдается снижение общего числа фолликулов. У подопытных животных суммарное содержание фолликулов в яичниках на большинстве сроков исследования снижено по сравнению с контролем (рис. 7).

экспериментальных животных в различные сроки постнатального развития в единице условной площади (107 мкм2).

*-результаты статистически достоверны (р0,05) Исключение составили 15-дневные крысята первой опытной группы, у которых суммарное число фолликулов превысило таковое у интактных животных.

Наибольший интерес представляют данные популяционного состава фолликулов яичников экспериментальных животных, отражающие особенности процесса фолликулогенеза при различных патологиях. Анализ популяционного состава фолликулов позволил выявить следующую закономерность (рис. 8, 9, 10, 11). У экспериментальных крысят на 15-й день в яичниках преобладают фолликулы 1-5а типов. При этом обращает на себя внимание, что у животных первой опытной группы число малых фолликулов значительно увеличено относительно контроля, в то время как число растущих фолликулов, напротив, снижено. У животных второй опытной группы число малых фолликулов оказалось сниженным, а число растущих фолликулов незначительно изменено. Так, число фолликулов 4-го типа уменьшилось, а 5-го типа увеличилось.

Рис. 8. Популяционный состав фолликулов яичников 15-дневных экспериментальных животных.

*-результаты статистически достоверны (р0,05) К 30 дню жизни у экспериментальных крысят начинают преобладать средние фолликулы, при этом доминирующими являются фолликулы 4 типа.

На этом сроке появляются первые большие фолликулы.

Рис. 9. Популяционный состав фолликулов яичников 30-ти дневных экспериментальных животных.

*–результаты статистически достоверны (p0.05) Обращает на себя внимание, что у животных первой опытной группы отмечается снижение числа 1-5а типов фолликулов, тогда как число фолликулов 5б и 6 типов оказалось увеличено относительно контроля. У животных второй опытной группы число малых и средних фолликулов незначительно изменено, в основном за счёт уменьшения числа фолликулов 1 и 3б типа. Число больших фолликулов (5б и 6 типы) также оказалось увеличено по сравнению с контролем.

К концу периода полового созревания (45-й день) у интактных животных уменьшается число малых фолликулов. Число средних фолликулов незначительно изменяется (в сторону снижения) за счёт, с одной стороны, увеличения числа фолликулов 3б типа и уменьшения числа фолликулов 4-5а типа с другой стороны. Содержание больших фолликулов увеличивается, в первую очередь за счёт фолликулов 5б типа. У животных обеих подопытных групп на 45 день наблюдается уменьшение числа малых и средних фолликулов. Особенно сильно это выражено для фолликулов 3б и типов. Содержание больших фолликулов у подопытных животных оказалось увеличенным, за исключением фолликулов 7-8 типа, число которых снижено относительно контроля.

Рис. 10. Популяционный состав фолликулов яичников 45-ти дневных экспериментальных животных.

*–результаты статистически достоверны (p0.05) На 60-й день (в период половой зрелости) у интактных животных уменьшается число малых, средних и больших фолликулов. Схожая закономерность выявляется у подопытных животных. На 60 день у подопытных животных наблюдается уменьшение числа малых и средних фолликулов, относительно контроля.

Рис. 11. Популяционный состав фолликулов яичников 60 дневных экспериментальных животных.

*–результаты статистически достоверны (p0.05) Исключение составили животные первой подопытной группы, у которых имеет место увеличение числа фолликулов 3б и 4 типов и крысят второй опытной группы у которых имеет место увеличение числа фолликулов типа. Содержание больших фолликулов изменилось незначительно, при этом в первой опытной группе увеличено число фолликулов 6 типа, а во второй фолликулов 7-8 типа.

Таким образом, анализ результатов данной серии исследований позволяет констатировать, что у потомства самок крыс с хроническим экспериментальным поражением печени различного генеза на большинстве сроков исследования имеет место снижение содержания малых и средних фолликулов. В то же время содержание больших фолликулов оказалось повышенным. Результаты анализа субпопуляционного состава фолликулов яичников, позволяют предположить, что нарушение условий внутриутробного развития при хроническом поражении печени обусловливает преждевременную активацию пула примордиальных фолликулов и ускоренное созревание большого количества фолликулов.

Полученные данные согласуются с данными литературы. Так, исследованиями Reddy P. и соавторов [Reddy P. et al., 2008] было показано, что мутация гена Pten у мышей вызывает преждевременную активацию пула примордиальных фолликулов. Исследованиями Williams S.A. и соавторов [Williams S.A. et al., 2008], было показано, что мутация гена Cigalt1 вызывает ускоренное созревание и овуляцию большого количества фолликулов. На основе результатов этих авторов, можно предположить, что наблюдаемая нами закономерность может быть связана с изменением экспрессии этих генов. Кроме того, может существовать связь между усиленной активацией пула примордиальных фолликулов, с одной стороны, и уменьшением суммарного числа фолликулов, что объясняется гипотезой латеральной спецификации и гипотезой трофического градиента.

Многие авторы отмечают структурно–функциональные изменения репродуктивных органов у самок млекопитающих, (увеличение или уменьшение количества разных типов фолликулов, изменение скорости созревания яйцеклетки, усиление процесса атрезии созревающих фолликулов, задержка инволюции желтых тел и др.) в экстремальных условиях обитания и экспериментах по действию токсичных веществ [Мелик–Алавердян Н.О., 1967; Шейко Л.Д., 1999; Иваницкая Н.Ф. и др., 2001]. У неполовозрелых самок на загрязнённых участках обнаружено увеличение количества, и максимальных диаметров растущих фолликулов, что свидетельствует об интенсификации процесса фолликулогенеза [Байтимирова Е. А., 2008]. В работе Блиновой Е.В., [2009] показана сходная закономерность: под влиянием загрязнения окружающей среды у животных наблюдается возрастание активности размножения (о чём свидетельствует больший процент животных, принимающих участие в размножении, участие в репродукции животных более раннего возраста) и ускорение истощения резерва фолликулов (связанное с интенсификацией репродуктивной активности, и с повышенной элиминацией фолликулов).

Вместе с тем, было показано, что у потомства от животных с патологией гепатобилиарной системы, вызванной воздействием различных химических токсинов, имеет место снижение фертильности [Bruner–Tran K.L. et al., 2011;

Zama A. M. et al., 2010]. В основе такого эффекта может лежать трансгенерационный эпигенетический эффект, заключающийся в отсроченном влиянии патологии печени матери на фертильность последующих поколений [Perera F. J., 2011; Skinner M. K. et al., 2010, 2011;

Zama A. M. et al., 2010].

Показателем эффективности роста и овуляции фолликула служит образование жёлтых тел (рис. 12, 13). У экспериментальных животных наблюдается увеличение жёлтых тел с 45-го дня на 60-й день.

Рис. 12. Количество жёлтых тел яичников экспериментальных животных.

*–результаты статистически достоверны (p0.05) Нами установлено, что содержание жёлтых тел в яичниках у подопытных животных первой опытной группы на 45-й день не изменено, а содержание жёлтых тел в яичниках у подопытных животных второй опытной группы оказалось слегка сниженным. На 60 день содержание жёлтых тел в яичниках у подопытных животных обеих групп оказалось достоверно выше по сравнению с контролем. В то же время, нами было показано, что площадь жёлтых тел у подопытных животных достоверно снижена на всех сроках исследования. Увеличение числа жёлтых тел может отражать усиленную овуляцию больших фолликулов 7-8 типа у подопытных животных обеих групп, что в свою очередь согласуется с общей тенденцией ускоренного роста и созревания фолликулов в подопытных группах. Снижение площади жёлтых тел может быть связано с ограничением, задаваемым максимальным общим объёмом органа.

Рис. 13. Площадь жёлтых тел (мм2) яичников экспериментальных животных.

*–результаты статистически достоверны (p0.05) Таким образом, анализ результатов данной серии исследований позволяет сделать вывод, что у потомства самок крыс с хроническим экспериментальным поражением печени имеет место нарушение процесса фолликулогенеза, проявляющееся в снижении суммарного содержания фолликулов с одной стороны и усиленной активации роста фолликулов и образования жёлтых тел с другой.

Характеристика процесса атрезии фолликулов. Одним из показателей интенсивности фолликулогенеза в яичниках экспериментальных животных является содержание атретических фолликулов (рис. 14, 15). У крысят первой подопытной группы число атретических фолликулов в яичнике после рождения постепенно увеличивается и достигает максимального значения к концу периода полового созревания, после чего к периоду половой зрелости исследуемый показатель несколько снижается. У крысят второй подопытной группы наблюдается иная закономерность, проявляющаяся в снижении числа атретических фолликулов к 30-му дню и увеличению их к периоду полового созревания и зрелости. При оценке относительного содержания атретических фолликулов у животных первой опытной группы, отмечается снижение относительного содержания фолликулов на 30-й день жизни. У животных второй опытной группы, напротив, отмечается увеличение относительного содержания фолликулов на 45-й и 60-й день жизни.

экспериментальных животных.

*–результаты статистически достоверны (p0.05) Рис. 15. Относительное содержание атретических фолликулов в яичниках экспериментальных животных (%).

*–результаты статистически достоверны (p0.05) Анализ полученных результатов позволяет выявить связь увеличения суммарного числа фолликулов с увеличением атрезии и наоборот уменьшения процесса атрезии с уменьшением суммарного числа фолликулов. Данная закономерность вероятно обусловлена изменением активности про- и антиапоптических сигналов в фолликулах.

экспериментальных животных. Одной из важных функций яичника является эндокринная функция. Общепризнанно, что исходным материалом для синтеза биологически активных соединений эндокринными клетками гонад являются холестерин и аскорбиновая кислота (рис. 16, табл. 1, 2).

Рис. 16. Содержание гранул аскорбиновой кислоты в фолликулярных клетках яичника (103 мкм2) *–результаты статистически достоверны (p0.05) Показано, что на большинстве сроков исследования содержание гранул аскорбиновой кислоты у подопытных животных не изменено относительно контроля. Исключение составили крысята первой опытной группы на 60-й день, у которых исследуемый показатель оказался снижен и крысята второй опытной группы на 45-й день, у которых исследуемый показатель оказался снижен.

Для оценки содержания холестерина, нами были использованы два критерия: число светящихся клеток в единице условной площади и индекс насыщения клеток холестерином. У животных первой опытной группы отмечается увеличение содержания светящихся клеток на 15-й и 30-й дни. У животных второй опытной группы на 45-й и 60-й дни наблюдается значительное увеличение клеток, содержащих холестерин. У животных второй опытной группы показано увеличение содержания холестерина в жёлтых телах. Для оценки связи числа клеток и степени их свечения, нами был введён индекс насыщения клеток холестерином. У животных второй опытной группы исследуемый индекс оказался выше на 30-й и 45-й дни. Так же, были исследованы индексы свечения клеток жёлтого тела. У животных обеих опытных групп показано увеличение индекса свечения клеток холестерином в жёлтых телах.

Количество клеток, содержащих холестерин на 103 мкм 15 дней 20,2±2,04 (n=10) 26,4±1,93* (n=10) 21,3±4,10 (n=10) 30 дней 20,6±1,73 (n=11) 29,7±2,73* (n=10) 23,4±2,62 (n=10) Индекс насыщения клеток холестерином 15 дней 1,99±0,06 (n=10) 1,91±0,09 (n=10) 2,04±0,08 (n=10) 30 дней 2,01±0,05 (n=11) 1,98±0,06 (n=10) 2,13±0,03* (n=10) 45 дней 1,85±0,04 (n=11) 1,83±0,05 (n=10) 2,07±0,04* (n=11) 60 дней 1,78± 0,03 (n=12) 1,74±0,08 (n=13) 1,73± 0,07 (n=14) Таким образом, анализ полученных результатов позволяет констатировать, что у потомства самок крыс с хроническим поражением печени различной этиологии имеет место изменение содержания холестерина и аскорбиновой кислоты в клетках яичников, что нашло своё проявление в снижении в период становления половой зрелости количества аскорбиновой кислоты, увеличении числа клеток содержащих холестерин.

Об эндокринной функции яичников 45 и 70 дневных крысят от самок крыс с хроническим экспериментальным поражением печени судили на основании концентрации в сыворотке крови эстрогенов (Е2) и прогестерона (PRG). Кроме того, производился анализ концентрации в сыворотке крови экспериментальных животных фолликулостимулирующего (FSH) и лютеинизирующего (LH) гормонов гипофиза (табл. 3).

К 70 дню у животных первой опытной группы наблюдается увеличение концентрации LH, FSH, E2 и снижение концентрации PRG. Обращает на себя внимание тот факт, что на 45 день концентрация E2 и FSH снижена, а концентрация PRG увеличена относительно контроля. На 70 день концентрация PRG и E2 у этих животных оказалась уменьшена, тогда как концентрация FSH оказалась повышена.

Концентрация половых гормонов в сыворотке крови экспериментальных животных (пг./мл.).

FSH 0,15±0,004 0,30±0,014 0,10 0,40±0,049 0,10 0,13±0, PRG 3,45±0,82 90,64±7,09 5,77±1,366 2,51±1,26 10,37±2,14 22,7±2, 86,5±12,47 9,35±2,39 65,0±11,37 86,6±13,71 75,4±11,14 46,8±3, У экспериментальных животных второй опытной группы концентрация всех гормонов претерпевает изменения в процессе роста животного. У животных второй опытной группы к 70 дню наблюдается увеличение концентрации FSH, PRG, и снижение концентрации E2. Нами установлено, что у этих животных на 45 день концентрация E2 и FSH снижена, а концентрация PRG увеличена относительно контроля. На 70 день концентрация FSH и E2 оказалась снижена, тогда как концентрация PRG, оказалась повышена относительно контроля.

Таким образом, анализ данной серии исследования, позволяет констатировать, что у подопытных животных обеих групп отмечается изменения в концентрациях гормонов гипофиза, регулирующих функцию яичника, так и собственных гормонов женских половых желёз.

Характеристика тучных клеток яичников экспериментальных животных. Тучные клетки широко распространены во многих тканях и органах, включая яичники человека, коров, мышей, крыс и хомяков. Тучные клетки способны секретировать множество факторов роста и цитокинов и играть важную роль в процессах фолликулогенеза, фолликулярной атрезии, овуляции, формировании жёлтых тел. При оценке морфофункционального состояния тучных клеток производился многофакторный анализ, включающий в себя оценку количества мастоцитов, а так же их секреторной активности по общепринятой методике.

Обращает на себя внимание, что на большинстве сроков исследования количество тучных клеток в единице условной площади увеличено по сравнению с контролем (рис. 20). Исключение составили 15-ти и 60-ти дневные крысята первой подопытной группы, у которых данный показатель оказался сниженным по сравнению контроля. Увеличение числа клеток может быть связано с усиленной миграцией клеток-предшественников из периферической крови или их перераспределением из других компартментов.

Рис. 20 Содержание тучных клеток в яичнике экспериментальных животных в различные сроки постнатального периода Известно, что секреторный процесс любой клетки включает в себя две стадии: стадию секреции и накопления секретируемого вещества и стадию выделения секретируемого вещества во внеклеточный матрикс. Начальная (секреторная) стадия секреторного процесса оценивалась нами путём анализа субпопуляционного состава тучных клеток по степени гранулярного насыщения. При этом производился подсчёт числа тучных клеток с малой, умеренной, сильной и очень сильной степенью гранулярного насыщения (ОТ, Т, С, ОС) и определение индекса гранулярного насыщения.

Установлено, что у экспериментальных крысят контрольной и опытной групп на всех сроках исследования преобладают тучные клетки с высокой и очень высокой степенью гранулярного насыщения. Анализ субпопуляционного состава тучных клеток яичников экспериментальных животных контрольной и опытной групп позволяет сделать вывод, что у подопытных животных происходит изменение субпопуляционного состава в сторону увеличения количества мастоцитов с высокой и очень высокой степенью гранулярного насыщения, что обусловило изменение индекса гранулярного насыщения (рис. 21).

Рис. 21 Индекс гранулярного насыщения тучных клеток яичника экспериментальных животных У подопытных крысят первой экспериментальной группы в период половой зрелости исследуемый показатель повышается. У подопытных крысят второй экспериментальной группы также после рождения индекс гранулярного насыщения тучных клеток яичника до начала полового созревания не изменяется, а затем увеличивается и достигает максимального значения в период половой зрелости. Обращает на себя внимание тот факт, что в период новорождённости и в период половой зрелости индекс гранулярного насыщения тучных клеток яичников подопытных крысят обеих экспериментальных групп превышает таковой в контроле, а в подсосный период и в период половой зрелости, напротив, снижен.

Анализ субпопуляционного состава тучных клеток по степени дегрануляции позволяет оценить выделительную фазу секреторного процесса тучных клеток. С этой целью нами производился анализ субпопуляционного состава тучных клеток по уровню их дегрануляции. У подопытных животных происходит изменение субпопуляционного состава в сторону увеличения количества мастоцитов с умеренной и сильной степенью дегрануляции, что обусловило изменение индекса дегрануляции (рис. 22).

На 15-й, 30-й дни в обеих группах и на 60-й день в первой группе исследования индекс дегрануляции тучных клеток у потомства самок крыс с хроническим экспериментальным D-галактозаминовым поражением гепатобилиарной системы увеличен по сравнению с контролем, что свидетельствует об усилении выделительной функции мастоцитов.

Рис. 52 Индекс дегрануляции тучных клеток яичника Таким образом, анализ результатов данной серии исследований позволяет констатировать, что у потомства самок крыс с хроническим экспериментальным поражением печени имеет место активация функционального состояния тучных клеток яичников (увеличение числа тучных клеток, а так же увеличение числа клеток с высоким уровнем гранулярного насыщения и с усиленной дегрануляцией), что отразилось на активности фолликулогенеза.

Метод ранжирования. Метод ранжирования использовался нами для сравнительного анализа степени выраженности морфофункциональных изменений репродуктивной системы экспериментальных животных в различные сроки постнатального онтогенеза. После стандартизации и преобразования данных были составлены соответствующие таблицы.

При анализе сроков постнатального онтогенеза, на которых наблюдаются наиболее значительные изменения по всем исследуемым критериям, были получены следующие результаты. У подопытных животных опытной группы 1 наиболее существенные изменения (14 баллов) происходят на 60-й день, в то время как наименьшие изменения (1 балл) отмечаются в период новорождённости. У подопытных животных опытной группы 2 максимальные изменения исследуемых показателей (15 баллов) достигают на 45-й день постнатальной жизни, а наименьшие изменения выявлены в период новорождённости (1 балл). При этом обращает на себя внимание, что на ранних стадиях постнатального онтогенеза у подопытных животных наибольшие изменения касаются содержания фолликулов, а на поздних стадиях концентрации гормонов, в том числе прогестерона.

Биологические показатели второго поколения самок крыс с экспериментальным поражением печени. При анализе биологических показателей показано, что у потомства подопытных крысят обеих групп беременность наступала в 49% случаев, в то время как у интактных крысят беременность наступала в 99% случаев. Установлено, что при развивающейся беременности у подопытных животных показатели внутриутробной смертности существенно превышали таковые в контроле в среднем в два раза. У подопытных животных выявлено снижение числа животных в помёте, увеличение числа мертворождённых, снижение веса новорождённых. Выживаемость потомства к исходу 2-х и 15-ти суток после рождения оказалась сниженной по сравнению с контролем.

В целом, полученные в ходе данной серии исследований результаты свидетельствуют о нарушении структурно-функционального становления яичников потомства самок крыс с хроническим экспериментальным поражением гепатобилиарной системы. Генез выявленных морфофункциональных изменений нам представляется следующим образом.

Введение токсина E. coli и D(+)-галактозамина вызывает у самки нарушение основных функций печени, в том числе дезинтоксикационной, белково-синтетической и поглотительно-экскреторной [Golding P.L. et al., 1973; Colin-Jones D.G., 1991; Серов В.В., Лапиш К., 1989; Сугробова Н.П. с соавт., 1992; Подымова С.Д., 2004]. Вследствие нарушения данных функции печени, особенно дезинтоксикационной, в крови самок крыс накапливаются токсические соединения метаболизма (остаточный азот, креатинин и др.), которые могут вызывать структурно-функциональные нарушения различных органов и систем организма матери, в том числе нервной, иммунной, сердечно-сосудистой, эндокринной, репродуктивной, что приводит к изменениям межклеточных, межтканевых, межорганных и межсистемных взаимоотношений органов [Анохина В.А., 2002; Махмудов О.С. с соавт., 1987; Михайленко Е.Т., 1983; Михайленко Е.Т., 1990; Фарбер Н.А., 1990]. В условиях эксперимента показано, что хроническое поражение гепатобилиарной системы самок крыс сопровождается усилением проницаемости гематоплацентарного барьера для конечных и промежуточных продуктов обмена, специфических органных аутоантител, циркулирующих иммунных комплексов, сенсибилизированных цитотоксических лимфоцитов и других клеточных и гуморальных факторов иммунной системы, активацией процессов перекисного окисления липидов, дисбалансом гормонов, активацией свертывающей и противосвертывающей систем крови [Крыжановский Г.Н. с соавт., 1997; Савченков Ю.И., Лобынцев К.С., 1980; Аверкина Р.Ф., 1985]. В результате наблюдается массированное проникновение данных соединений через фетоплацентарный барьер из материнского организма к плоду, что обусловливает нарушение условий внутриутробного развития плода, приводящее к изменению процессов гисто-, органо- и системогенеза. Развивающийся дисморфогенез, в свою очередь, обусловливает нарушение функций различных систем организма развивающегося потомства, что усугубляет его состояние.

Согласно современным представлениям, любой патологический процесс включает в себя две патологические детерминанты: стрессорные повреждения (первичные) и аутоиммунные (вторичные) процессы [Крыжановский Г.Н., 1985]. В связи с этим, нам представляется, что антитела, проникающие из материнского организма в ответ на повреждение клеточных и тканевых структур, обусловливают, в конечном итоге, развитие аутоиммунных реакций у потомства и приводит к истощению компенсаторно-приспособительных реакций организма. Помимо этого, в организме плода могут синтезироваться собственные аутоантитела, вносящие вклад в общее повреждение органов, в том числе яичников.

Наряду с этим, согласно данным литературы, патология того или иного органа у беременной нередко сопровождается отклонениями в развитии и функционировании одноименного органа у плода [Аверкина Р.Ф., 1985;

Алексеева И.Н. с соавт., 1991]. Так, исследованиями Брюхина Г.В. [1994], Евченко Е.В. [2004] и Тухтаева К.Р. с соавт. [2006] в условиях эксперимента убедительно показано, что у самок крыс с хроническим поражением печени токсического и аутоиммунного генеза рождается потомство с морфофункциональным нарушением одноименного органа. Следовательно, морфофункциональные нарушения печени потомства экспериментальных животных вызывают аналогичные материнскому организму повреждения различных систем организма, в том числе яичников, являющихся одними из самых чувствительных органов, особенно на ранних стадиях эмбрионального развития.

Под влиянием стрессорного повреждения и аутоимунного процесса в антенатальном периоде яичники могут подвергаться изменению кровоснабжения, гормонального фона, гипоксии. Кроме того, возможно изменение экспрессии множества генов отвечающих за митотический потенциал первичных половых клеток, формирование гнезда половых клеток, осуществление событий профазы мейоза (образование хиазм, синаптонемного комплекса, осуществление процесса рекомбинации), эпигенетическую перестройку генома, подготовку к разрушению гнезда половых клеток и формированию пула примордиальных фолликулов [Pepling and Spradling, 2001; Pepling, 2006]. Подобные механизмы раскрывают одну из возможных причин нарушения репродуктивной способности самок с хроническим поражением печени [Вторушина Е.В., 2003], а также объясняют возможность изменения репродуктивной функции у потомства.

Репродуктивная функция, регулирует многоуровневую систему «гипоталамус – гипофиз - гонады», звенья которой тесно взаимосвязаны механизмами положительных и отрицательных обратных связей [Волкова О.В., 1999]. Нарушение последних приводит к развитию патологического процесса, как в регулируемой системе, так и в организме в целом. При этом изменения репродуктивной функции проявляются как у данного организма, так и сказываются на жизнеспособности последующих поколений.

Таким образом, в результате данных нарушений у самок крыс с хроническим экспериментальным поражением печени, вызванным введением токсинов E.Coli и D(+)-галактозамина рождается физиологически незрелое потомство, для которого характерно нарушение структурнофункционального состояния систем жизнеобеспечения, в том числе и репродуктивной.

ВЫВОДЫ

1. Хроническое экспериментальное поражение печени самок крыс, обусловленное введением супернатанта E. coli и D(+)–галактозамина, приводит к морфофункциональным нарушениям становления яичников потомства в постнатальном периоде.

2. Хроническое экспериментальное поражение печени самок крыс приводит к нарушению становления полового гнезда, что проявляется в усиленной элиминации клеток преоогоний.

3. У потомства самок крыс с хроническим экспериментальным поражением печени различного генеза наблюдается нарушение процесса фолликулогенеза, что нашло свое проявление в снижении суммарного числа фолликулов и изменении их популяционного состава: уменьшение числа малых и средних фолликулов и увеличение числа больших фолликулов.

4. Изменения в популяционном составе фолликулов потомства самок крыс с хроническим экспериментальным поражением печени различной этиологии сопровождаются формированием синдрома “преждевременного истощения яичников”, что нашло своё отражение в уменьшении концентрации прогестерона и эстрогена, протекающее на фоне увеличения концентрации гонадотропных гормонов (FSH и LH).

5. Экспериментальное поражение печени самок крыс различного генеза приводит к повышению числа и функциональной активности тучных клеток яичников потомства, что проявляется в увеличении уровня гранулярного насыщения и повышении степени их дегрануляции.

6. У самок крыс с экспериментальным поражение печени рождается потомство с нарушенной фертильностью, о чём свидетельствует низкий процент наступления беременности и высокий показатель мёртворождаемости.

СПИСОК ПУБЛИКАЦИЙ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Зубарев И. В. Характеристика тучных клеток яичника потомства самок крыс с хроническим экспериментальным поражением печени. [Текст] / Зубарев И. В., Брюхин Г. В.// «Роль патологии печени матери в нарушении развития реактивности и резистентности потомства в условиях эксперимента»: сб. научных трудов / под ред. Г. В. Брюхина. – Челябинск:

ЧГМА, 2009. – Вып. 2. – С. 83-88.

2. Зубарев И. В. Динамика массы тела потомства самок крыс с хроническим экспериментальным поражением печени в постнатальном периоде развития [Текст] / Зубарев И. В., Смекалина О.Ю., Солянникова Д.Р.// «Роль патологии печени матери в нарушении развития реактивности и резистентности потомства в условиях эксперимента»: сб. научных трудов / под ред. Г. В. Брюхина. – Челябинск: ЧГМА, 2009. – Вып. 2. – С. 17 – 22.

3. Зубарев И. В. Характеристика тучных клеток яичника потомства самок крыс с хроническим экспериментальным поражением печени [Текст] / Зубарев И. В., Брюхин Г. В.// Актуальные проблемы биологии и ветеринарной медицины мелких домашних животных: материалы международной научно-практической конференции, посвящённой 80-летию кафедры анатомии и гистологии с.-х. животных, 110-летию со дня рождения профессора Н.И. Акаевского и 15-летию кинологического центра С.54–58.

4. Зубарев И. В. Роль экспериментального поражения гепатобилиарной системы матери различного генеза в процессе фолликулогенеза потомства [Текст] / Зубарев И. В.// Материалы I международной (VIII итоговой) научнопрактической конференции молодых ученых. – Челябинск: Изд-во «Челябинская государственная медицинская академия», 2010. – С. 76 –78.

5. Зубарев И. В. Роль экспериментального поражения морфофункциональное становление яичников потомства в различные сроки постнатального развития [Текст] / Зубарев И. В., Брюхин Г. В.// Вестник Южноуральского государственного университета. Серия образование, здравоохранение, физическая культура, 2010. – № 37 (213).

– С. 83 –88.

6. Зубарев И. В. Роль экспериментального поражения гепатобилиарной системы матери различного генеза на содержание холестерина и аскорбиновой кислоты в яичниках потомства [Текст] / Зубарев И. В.// Материалы II международной (IX итоговой) научно-практической конференции молодых ученых. – Челябинск: Изд-во «Челябинская государственная медицинская академия», 2011. – С. 72- 7. Зубарев И. В. Влияние экспериментального поражения печени матери различного генеза на лютеогенез в яичниках потомства [Текст] / Зубарев И.

В.// Морфология, 2011.-№5.-С.64.

8. Зубарев И. В. Характеристика тучных клеток яичника потомства самок крыс с хроническим экспериментальным поражением печени различного генеза [Текст] / Зубарев И. В., Брюхин Г. В.// Проблемы репродукции, 2011.-№6.-С.14- гепатобилиарной системы матери различного генеза на морфофункциональное становление яичников потомства [Текст] / Зубарев И.

В., Брюхин Г. В.// Вестник международной академии наук и безопасности жизнедеятельности, 2011.- том 16.-№3.- С. 124-127.

10. Зубарев И. В. Роль хронического экспериментального поражения печени матери в нарушении генеративной функции потомства [Текст] / Зубарев И. В., Брюхин Г. В., Сизоненко М.Л, Романов А.С., Ласьков Д.С.// Вестник Южноуральского государственного университета Образование, здравоохранение, физическая культура, 2012. – № 8 (267). – С. 98 –102.

11. Зубарев И. В. Влияние супернатанта фибробластов потомства самок крыс с хроническим поражением печени различного генеза на морфофункциональное состояние перитонеальных макрофагов в условиях культивирования [Текст] / Зубарев И. В., Брюхин Г. В.// Бюллетень экспериментальной биологии и медицины, 2012.-том 154.- №10.-С. 511-513.



 
Похожие работы:

«ЕРЕМЕЕВА Ольга Васильевна ФИЗИОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ ЭФФЕКТОВ БИОУПРАВЛЕНИЯ ПОТЕНЦИАЛАМИ МОЗГА У СПОРТСМЕНОВ С ДОМИНИРОВАНИЕМ МЕТАБОЛИЧЕСКОГО МОДУЛЯТОРА СЕРДЕЧНОГО РИТМА 03.03.01 – Физиология Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Архангельск – 2012 2 Работа выполнена в Федеральном бюджетном государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования Сибирский государственный университет физической культуры и...»

«Ван Вэньчжу РОЛЬ ЦИТОСКЕЛЕТА В УПОРЯДОЧЕННОЙ ЛОКАЛИЗАЦИИ И РАСПРЕДЕЛЕНИИ ОРГАНЕЛЛ КЛЕТОК ВЫСШИХ РАСТЕНИЙ 03.03.04 – клеточная биология, цитология, гистология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Москва 2012 Работа выполнена на кафедре клеточной биологии и гистологии Биологического факультета Московского государственного университета имени М.В. Ломоносова Научный руководитель : Доктор биологических наук Смирнова Елена Александровна...»

«ЗАМЧИЙ Татьяна Петровна ОСОБЕННОСТИ СИСТЕМЫ КРОВООБРАЩЕНИЯ, МОРФОЛОГИЧЕСКОГО И ПСИХОФИЗИОЛОГИЧЕСКОГО СТАТУСА ЖЕНЩИН, ЗАНИМАЮЩИХСЯ СИЛОВЫМИ ВИДАМИ СПОРТА 03.03.01 – физиология Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук Томск – 2011 Работа выполнена на кафедре анатомии, физиологии, спортивной медицины и гигиены ФГБОУ ВПО Сибирский государственный университет физической культуры и спорта. Научный руководитель : доктор биологических наук, доцент Корягина...»

«СОКОЛОВА Анастасия Владимировна ДИФФЕРЕНЦИРОВКА И РЕГЕНЕРАЦИЯ СКЕЛЕТНЫХ МЫШЦ МЫШЕЙ mdx ПОСЛЕ КЛЕТОЧНОЙ ТЕРАПИИ СТВОЛОВЫМИ КЛЕТКАМИ КОСТНОГО МОЗГА 03.03.04 клеточная биология, цитология, гистология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Санкт-Петербург 2010 Работа выполнена в Учреждении Российской академии наук Институт цитологии РАН Научный руководитель : доктор биологических наук, профессор Михайлов Вячеслав Михайлович, Институт...»

«КОПТЕВА Юлия Сергеевна ОБМЕН ВЕЩЕСТВ И ПРОДУКТИВНОСТЬ МОЛОДНЯКА СВИНЕЙ ПРИ ПРИМЕНЕНИИ КОМПЛЕКСА ПРОБИОТИКОВ В УСЛОВИЯХ ПРОМЫШЛЕННОЙ ТЕХНОЛОГИИ 03.03.01 – физиология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Боровск – 2011 Диссертационная работа выполнена на кафедре химии ФГОУ ВПО Брянская государственная сельскохозяйственная академия Научный руководитель : доктор биологических наук Талызина Татьяна Леонидовна Официальные оппоненты :...»

«ТАТАРИНОВА НАТАЛЬЯ ВАСИЛЬЕВНА ПСИХОФИЗИОЛОГИЧЕСКАЯ И ГЕМАТОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА СОСТОЯНИЯ ЗДОРОВЬЯ И АДАПТАЦИИ СТУДЕНТОВ К УЧЕБНОЙ ДЕЯТЕЛЬНОСТИ Специальность 03.03.01. - физиология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Москва 2012 1 Работа выполнена на кафедре анатомии, физиологии, гигиены и экологии человека ФГБОУ ВПО Орловский государственный университет Научный руководитель : кандидат биологический наук, профессор Овсянникова...»

«Якунина Елена Николаевна ОСОБЕННОСТИ АДАПТАЦИИ СТУДЕНТОВ К УЧЕБНОЙ ДЕЯТЕЛЬНОСТИ ПРИ ЗАНЯТИЯХ ПАРНЫМ КОЛЛЕКТИВНЫМ ТАНЦЕМ Специальность 03.03.01 – физиология Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Томск – 2011 Работа выполнена на кафедре спортивно-оздоровительного туризма, спортивной физиологии и медицины федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования Национальный...»

«ПЕТРОВ Николай Сергеевич Взаимодействие р130 – белка семейства pRb, и -катенина – передатчика сигналов Wnt, в ходе дифференцировки и трансформации мезенхимных стволовых клеток мыши 03.03.04 – клеточная биология, цитология, гистология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Санкт-Петербург 2012 Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении науки Институт цитологии Российской академии наук (Санкт-Петербург) Научный...»

«ШИТИКОВА Жанна Валерьевна ОТВЕТ УСТОЙЧИВЫХ К АПОПТОЗУ ТРАНСФОРМИРОВАННЫХ КЛЕТОК НА ДЕЙСТВИЕ РЕНТГЕНОВСКОГО ИЗЛУЧЕНИЯ 03.03.04 – клеточная биология, цитология, гистология Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Санкт-Петербург 2014 Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении науки Институт цитологии Российской академии наук, Санкт-Петербург Научный руководитель : кандидат биологических наук Поспелова Татьяна...»

«Тыртышникова Анна Владимировна NO-ЗАВИСИМЫЕ МЕХАНИЗМЫ ФАРМАКОЛОГИЧЕСКОЙ РЕГУЛЯЦИИ АРТЕРИАЛЬНОГО ДАВЛЕНИЯ В ЭКСПЕРИМЕНТЕ 14.03.06 – фармакология, клиническая фармакология 03.03.04 – клеточная биология, цитология, гистология Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Владивосток – 2011 Диссертация выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования Владивостокский государственный медицинский...»

«САВЕЛЬЕВА Анна Владимировна УЛЬТРАСТРУКТУРНЫЕ АСПЕКТЫ ГАМЕТОГЕНЕЗА И ЛИЧИНОЧНОГО РАЗВИТИЯ АППЕНДИКУЛЯРИИ OIKOPLEURA GRACILIS (CHORDATA, TUNICATA) 03.03.05 – биология развития, эмбриология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Владивосток – 2013 Работа выполнена в лаборатории эмбриологии Федерального государственного бюджетного учреждения науки Институт биологии моря им. А.В. Жирмунского Дальневосточного отделения Российской академии...»

«Хаджинова Екатерина Павловна АДАПТАЦИЯ МЛАДШИХ ШКОЛЬНИКОВ С РАЗНЫМИ ПРОФИЛЯМИ МЕЖПОЛУШАРНОЙ ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ АСИММЕТРИИ К УЧЕБНЫМ НАГРУЗКАМ 03.03.01 – физиология Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Москва - 2013 Работа выполнена в Федеральном государственном автономном образовательном учреждении высшего профессионального образования государственный национальный исследовательский Белгородский университет Научный руководитель...»

«Мальцева Елена Александровна ОСОБЕННОСТИ ВНЕШНЕГО ДЫХАНИЯ И СОСТОЯНИЯ СЕРДЕЧНО-СОСУДИСТОЙ СИСТЕМЫ У ЗДОРОВЫХ ЛИЦ ЮНОШЕСКОГО ВОЗРАСТА 03.03.01 – физиология Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Красноярск - 2011 Работа выполнена в Государственном общеобразовательном учреждении высшего профессионального образования Красноярский государственный медицинский университет имени профессора В.Ф.Войно-Ясенецкого Министерства здравоохранения и...»

«Краюшкина Наталья Геннадьевна ЗАКОНОМЕРНОСТИ ДИНАМИКИ МОРФОМЕТРИЧЕСКИХ ПАРАМЕТРОВ ЛИМФАТИЧЕСКИХ УЗЛОВ ПРИ ВОЗДЕЙСТВИИ ПЕРЕМЕННОГО ЭЛЕКТРОМАГНИТНОГО ПОЛЯ ПРОМЫШЛЕННОЙ ЧАСТОТЫ (ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНО–МОРФОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ) 14.03.01 – анатомия человека 03.03.04 – клеточная биология, цитология, гистология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Волгоград, 2013 Работа выполнена в Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего...»

«ЗЛОБИНА Мария Владимировна ГОМОТИПИЧЕСКИЕ СЛИЯНИЯ РАННИХ ЭНДОСОМ: РОЛЬ БЕЛКА СЛИЯНИЙ ЕЕА1 И ЦИТОСКЕЛЕТА 03.03.04 – Клеточная биология, цитология, гистология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Санкт-Петербург 2013 Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении науки Институте цитологии Российской академии наук Научный руководитель : доктор биологических наук, профессор Корнилова Елена Сергеевна Институт...»

«РОМАНОВ Василий Сергеевич РЕГУЛЯТОР КЛЕТОЧНОГО ЦИКЛА p21Waf1: РОЛЬ В ОНКОГЕН-ИНДУЦИРОВАННОЙ ТРАНСФОРМАЦИИ И КЛЕТОЧНОМ СТАРЕНИИ специальность 03.03.04 – Клеточная биология, цитология, гистология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Санкт-Петербург 2011 г. Работа выполнена в Учреждении Российской академии наук Институт цитологии РАН, Санкт-Петербург Научный руководитель : кандидат биологических наук Поспелова Татьяна Викторовна...»

«ТРИФОНОВА Елена Борисовна МОЛЕКУЛЯРНО-КЛЕТОЧНЫЕ МЕХАНИЗМЫ РЕГУЛЯЦИИ КОСТНОГО РЕМОДЕЛИРОВАНИЯ ПРИ ИММОБИЛИЗАЦИИ (экспериментально-клиническое исследование) 03.03.01– физиология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учёной степени доктора биологических наук Челябинск - 2011 Работа выполнена в Федеральном государственном учреждении Уральский научно-исследовательский институт травматологии и ортопедии им. В.Д. Чаклина Министерства здравоохранения и социального развития Российской...»

«ЧЕРЕМИСИН Алексей Евгеньевич СТРУКТУРНО-ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ИЗМЕНЕНИЯ ХОРИАЛЬНЫХ ВОРСИН ФЕТОПЛАЦЕНТАРНОГО КОМПЛЕКСА ПРИ ЗАДЕРЖКЕ РОСТА ПЛОДА 03.03.04 - клеточная биология, цитология, гистология. 14.01.01 – акушерство и гинекология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Оренбург - 2011 Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования Оренбургская государственная медицинская академия...»

«ФИРСАНОВ Денис Владимирович ДИНАМИКА ОБРАЗОВАНИЯ И ЭЛИМИНАЦИИ ФОСФОРИЛИРОВАННОГО ГИСТОНА Н2АХ В КЛЕТКАХ МЛЕКОПИТАЮЩИХ ПОСЛЕ РЕНТГЕНОВСКОГО ОБЛУЧЕНИЯ 03.03.04 — Клеточная биология, цитология, гистология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Санкт-Петербург 2012 Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении науки Институт цитологии Российской академии наук Научные руководители: кандидат биологических наук Кропотов...»

«КИПРЮШИНА Юлия Олеговна ФАКТОРЫ РОСТА ИЗ СЕМЕЙСТВ ФАКТОРОВ РОСТА ЭНДОТЕЛИЯ СОСУДОВ И ФАКТОРОВ РОСТА ФИБРОБЛАСТОВ, Si-VEGF2 И Si-FGF, И ИХ РЕЦЕПТОРЫ В ОНТОГЕНЕЗЕ МОРСКОГО ЕЖА STRONGYLOCENTROTUS INTERMEDIUS 03.03.04 – клеточная биология, цитология, гистология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук ВЛАДИВОСТОК – 2013 2 Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении науки Институт биологии моря им. А.В. Жирмунского...»






 
© 2013 www.diss.seluk.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Авторефераты, Диссертации, Монографии, Методички, учебные программы»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.