WWW.DISS.SELUK.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА
(Авторефераты, диссертации, методички, учебные программы, монографии)

 

На правах рукописи

УТЕМБАЕВА НАЗЫМ ТАЛГАТОВНА

ОЦЕНКА ВЛИЯНИЯ ГЕННО-ИНЖЕНЕРНО-МОДИФИЦИРОВАННЫХ

ИСТОЧНИКОВ ПИЩИ НА РЕПРОДУКТИВНУЮ СИСТЕМУ КРЫС

И ИХ ПОТОМСТВО

14.02.01. – гигиена

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Москва – 2010

Работа выполнена в ГОУ ВПО Московской медицинской академии им. И.М. Сеченова Росздрава и Учреждении Российской академии медицинских наук Научно-исследовательском институте питания РАМН

Научный руководитель:

академик РАМН, доктор медицинских наук, профессор Тутельян Виктор Александрович

Официальные оппоненты:

академик РАМН, доктор медицинских наук, профессор Ракитский Валерий Николаевич доктор медицинских наук, профессор Королев Алексей Анатольевич

Ведущая организация:

ФГБУ «НИИ экологии человека и гигиены окружающей среды им. А.Н. Сысина»

Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации

Защита состоится 24 января 2011 года на заседании диссертационного совета Д001.002.01 в НИИ питания РАМН (Москва, Устьинский проезд, 2/14)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке НИИ питания РАМН Автореферат разослан 23 декабря 2010 года

Ученый секретарь диссертационного совета, Коденцова В.М.

доктор биологических наук, профессор

АКТУАЛЬНОСТЬ ТЕМЫ

Практическое применение новых способов трансформации генома растений повлекло за собой потребность в строгой регламентации процесса оценки безопасности генно-инженерно-модифицированных организмов (ГМО) растительного происхождения, предназначенных для использования в пищу. Разработка системы оценки безопасности ГМО, действующей в настоящее время в Российской Федерации, была начата в 1995-1996 г.г. Данная система не только аккумулирует весь отечественный и зарубежный опыт, но и включает новейшие научные подходы, основанные на достижениях современной фундаментальной науки [Тутельян В.А., 2007; Abbott A., 1999; WHO, 2000, 2001; Kuiper H.A. et al., 2003; Codex Alimentarius, 2003, 2004; Jaffe G., 2004; EFSA, 2008].



Оценка безопасности ГМО проводится на этапе государственной регистрации.

Государственной регистрации подлежат новые пищевые продукты, полученные из ГМО растительного происхождения, изготовленные в Российской Федерации, а также пищевые продукты, полученные из ГМО растительного происхождения, ввоз которых на территорию Российской Федерации осуществляется впервые [МУ 2.3.2.2306-07, СанПиН 2.3.2.2340-08]. В системе медико-биологических исследований безопасности ГМО, наряду с общетоксикологическими исследованиями, важное место принадлежит изучению специфических видов токсичности в экспериментах in vivo. В соответствии со сложившейся исследовательской практикой используется комплексный подход, предоставляющий наиболее полную и достоверную информацию о потенциальном генотоксическом, иммунотоксическом и аллергенном действии ГМО, а также позволяющий выявить возможные незаданные эффекты генетической модификации [Дурнев А.Д. и др., 1998; Онищенко Г.Г. и др., 1999; Хабриев Р.У., 2005; Тутельян В.А., 2007]. При необходимости, в случае выявления существенных изменений генома, протеома и метаболома ГМО, могут быть проведены дополнительные исследования:

влияние на репродуктивную функцию, гонадотоксическое, эмбриотоксическое, тератогенное действие; влияние на продолжительность жизни, и др.

[МУ 2.3.2.2306-07].

Анализ данных научной литературы показывает, что изучение репродуктивной токсичности является одним из интегральных критериев при гигиенической оценке факторов окружающей среды, так как сложность феномена репродукции делает его уязвимым для неблагоприятных воздействий на любом этапе реализации функции.

Серьезным ограничением использования методов оценки репродуктивной токсичности является их продолжительность и трудоемкость, поэтому в процедурах оценки безопасности пищевых веществ (пищевых добавок, новых источников пищи) [ВОЗ, 1991; Codex Alimentarius, 2003, 2004; EFSA, 2008] изучение репродуктивной токсичности относится к факультативным исследованиям, проводимым в случае доказанной необходимости. Однако, несмотря на 15-летний опыт использования ГМ источников пищи в питании людей и животных [James C., 2009], сохраняется необходимость пополнения доказательной базы безопасности ГМО для здоровья человека, что обусловливает важность проведения исследований репродуктивной функции и развития потомства в поколениях [Hodgson E., 2001; Howlett J. et al., 2003;

Paoletti C. et al., 2008].

ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ

Целью настоящей работы являлась, во-первых, разработка алгоритма оценки репродуктивной токсичности ГМО растительного происхождения и выбор методов исследования генеративной функции экспериментальных животных, пренатального и постнатального развития потомства; во-вторых – изучение влияния ГМ кукурузы, устойчивой к глюфосинату аммония, на генеративную функцию, пренатальное и постнатальное развитие потомства трех поколений крыс.

Для достижения данной цели были поставлены следующие задачи:





• на основании анализа литературных данных и результатов предварительных исследований определить порядок оценки репродуктивной токсичности ГМО растительного происхождения и набор методов исследования генеративной функции, пренатального и постнатального развития потомства экспериментальных животных;

• изучить влияние ГМ кукурузы, устойчивой к глюфосинату аммония, на генеративную функцию крыс поколений F0-F1 по фертильной способности, гормональному статусу и уровню гаметогенеза в половых железах самцов и самок в трех поколениях;

• изучить влияние ГМ кукурузы, устойчивой к глюфосинату аммония, на пренатальное развитие потомства поколений F1-F2 по пред- и постимплантационной смертности, зоометрическим параметрам плодов, состоянию внутренних органов и костной системы плодов;

• изучить влияние ГМ кукурузы, устойчивой к глюфосинату аммония, на постнатальное развитие потомства поколений F1-F2 по динамике зоометрических показателей, параметрам физического развития, выживаемости с 0 по 5-й и с 6-го по 25-й дни жизни.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА РАБОТЫ

Впервые разработан алгоритм оценки репродуктивной токсичности ГМО растительного происхождения и определен комплекс методов исследования репродуктивной функции крыс и их потомства.

Впервые изучено влияние ГМ кукурузы, устойчивой к глюфосинату аммония, на генеративную функцию, пренатальное и постнатальное развитие потомства трех поколений крыс. Результаты проведенных исследований могут быть расценены как прямые доказательства отсутствия какого-либо отрицательного влияния ГМ кукурузы на репродуктивную функцию экспериментальных животных и на развитие потомства.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ РАБОТЫ

Разработанный алгоритм оценки репродуктивной токсичности ГМО растительного происхождения может быть рекомендован для использования при гигиенической оценке биотехнологической пищевой продукции.

Результаты работы дополнили доказательную базу безопасности ГМО для здоровья последующих поколений, и могут быть использованы в качестве научного обоснования отсутствия негативного влияния ГМ кукурузы на репродуктивную функцию экспериментальных животных и на развитие потомства.

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ

Основные положения диссертационной работы доложены на 2-ой Всероссийской научно-практической конференции молодых ученых и специалистов «Окружающая среда и здоровье» (Рязань, 29 мая - 1 июня 2007 г.), на V Конференции молодых ученых России с международным участием «Фундаментальные науки и прогресс клинической медицины» (Москва, 19-22 мая 2008 г.), на X Всероссийском конгрессе диетологов и нутрициологов «Питание и здоровье» (Москва, 1-3 декабря 2008 г.), на V Московском международном конгрессе «Биотехнология: состояние и перспективы развития»

(Москва, 16-20 марта 2008 г.), на Международной научно-практической конференции «Питание и здоровье» (Алматы, 4 мая 2009 г.). Диссертация апробирована на научной конференции кафедры гигиены питания и токсикологии ММА им. И.М. Сеченова с участием лаборатории по изучению новых и генетически модифицированных источников пищи, лаборатории спортивного питания с группой алиментарной патологии НИИ питания РАМН 18 сентября 2009 г.

Работа выполнена в соответствии с планом НИР НИИ питания РАМН в рамках темы № 098.

ПУБЛИКАЦИИ

По материалам диссертации опубликовано 11 работ, в том числе 1 статья в научном журнале, рекомендованном ВАК Министерства образования и науки Российской Федерации, и 3 статьи в научных журналах, рекомендованных ВАК МОН Республики Казахстан.

СТРУКТУРА И ОБЪЕМ ДИССЕРТАЦИИ

Диссертация состоит из введения, главы обзора литературы, главы материалы и методы исследования, 4-х глав результатов собственных исследований, заключения, выводов, списка цитированной литературы, включающего 151 источник, из которых 110 – зарубежные. Диссертация изложена на 98 страницах машинописного текста, включает 26 рисунков, 1 схему, 47 таблиц.

ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ

Экспериментальные доказательства эффективности предложенного алгоритма оценки репродуктивной токсичности ГМО и целесообразности его использования в качестве этапа медико-биологических исследований биотехнологической пищевой продукции.

Экспериментальные доказательства отсутствия влияния ГМ кукурузы, устойчивой к глюфосинату аммония, на репродуктивную систему крыс и их потомство, основанные на результатах изучения генеративной функции, пренатального и постнатального развития потомства трех поколений крыс.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Для исследований использованы образцы ГМ кукурузы, устойчивой к глюфосинату аммония, и ее традиционного аналога, выращенные в идентичных условиях и прошедшие аналогичную технологическую обработку.

Устойчивость ГМ кукурузы к глюфосинату аммония обусловлена присутствием в ее геноме кассеты экспрессии гена pat, изолированного из Streptomyces viridochromogenes. Действующим веществом гербицидов на основе глюфосината аммония является фосфинотрицин, механизм действия которого обусловлен ингибированием фермента глутаминсинтетазы растительных клеток. В растениях глутаминсинтетаза превращает аммиак в глутамин. Блокирование глутаминсинтетазы глюфосинатом приводит к быстрому истощению запаса глутамина в растении, накоплению аммиака в фотосинтезирующих тканях и отравлению растения [Чумиков И.А., 2001; Cremer J., 2001]. Ген устойчивости к глюфосинату, принято обозначать pat или bar, в зависимости от того, был он выделен из Streptomyces viridochromogenes или Streptomyces hydroscopicus, вырабатывающих трипептидный антибиотик биалофос;

активной составляющей биалофоса является L-фосфинотрицин [Глик Б.Р., Пастернак Д.Д., 2002]. Ген pat/bar кодирует синтез фермента фосфинотрицин ацетилтрансферазы, ацетилирующего свободную NН2 группу фосфинотрицина. Растения, в которые введен этот ген, обладают способностью продуцировать фосфинотрицин ацетилтрансферазу, и, как следствие – устойчивостью к действию глюфосината [Сингер М., Берг П., 1998;

Dekker J., Duke S.O., 1995; Cremer J., 2001].

Содержание токсичных элементов, пестицидов и микотоксинов в образцах кукурузы не имело значимых различий и не превышало допустимых уровней, установленных СанПиН 2.3.2.1078-01 (п. 1.4.1.). Зерно кукурузы подвергали измельчению в микромельнице до равномерной крупяной массы с размером частиц 400мкм. Измельченное зерно кукурузы включали в состав корма из расчета ~8-10 г на крысу в сутки, заменяя ингредиенты рациона по принципу изокалорийности и идентичности химического состава [МУ 2.3.2.2306-07].

Исследования выполнены на трех поколениях крыс линии Вистар: родительском (F0), первом (F1) и втором (F2). Всего в работе было использовано 270 взрослых животных и 1142 крысенка (табл.1).

Состав экспериментальных групп и количество животных Исходная колония крыс линии Вистар (самцы и самки, возраст ~30-35 дней) получена из питомника лабораторных животных «Столбовая» РАМН. Животные были произвольно разделены на 2 группы и переведены на рационы с включением кукурузы:

крысы опытной группы получали с рационом ГМ кукурузу, крысы контрольной группы – традиционный аналог ГМ кукурузы. Экспериментальные рационы животные получали на протяжении всего срока исследований.

Для оплодотворения самок подсаживали к самцам в соотношении 2:1 сроком на эстральный цикл (5 сут.). В период спаривания возраст крыс составлял 100-120 дней.

Крысят отсаживали от материнских животных на 26-й день жизни, для продолжения эксперимента отбирали потомство от разных самок (с целью рандомизации исследований и исключения возможности инцеста). В течение эксперимента велись наблюдения за поедаемостью корма, массой тела и общим состоянием животных.

Для оценки состояния репродуктивной системы крыс были изучены генеративная функция гонад, пренатальное и постнатальное развитие потомства. Генеративную функцию гонад оценивали у половозрелых крыс (возраст 100-120 дней) по фертильности, синтезу половых гормонов – прогестерона, эстрадиола – яичниками и тестостерона – семенниками, уровню гаметогенеза в яичниках и семенниках – по концентрации ДНК.

Эффективность спаривания оценивали по способности к оплодотворению самок и самцов, выраженную в процентном соотношении забеременевших самок/оплодотворивших самцов к общему количеству ссаженных самок/самцов. Так как самок ссаживали с самцами в соотношении 2:1, беременность обеих или одной самки подтверждала фертильность самца, в случае, если ни одна из самок не забеременела, самец считался не фертильным, а обе самки – потенциально фертильными.

Для изучения пренатального развития потомства по 9-11 беременных самок из каждой группы подвергали эвтаназии на 20-й день беременности, подсчитывали количество желтых тел в яичниках, количество мест резорбции и мест имплантации, определяли число живых и мертвых плодов, вычисляли предимплантационную гибель (по разности между количеством желтых тел в яичниках и количеством мест имплантации в матке) и постимплантационную гибель (по разности между количеством мест имплантации в матке и количеством живых плодов). Плоды извлекали, проводили макроскопический осмотр, определяли массу и краниокаудальный размер [Хабриев Р.У., 2005]. После осмотра, измерения и взвешивания плоды каждого помета делили на три группы: у одной группы плодов выделяли и взвешивали внутренние органы (печень, почки, сердце, легкие), плоды второй группы фиксировали в жидкости Буэна и использовали для изучения внутренних органов по методу Wilson J.G. [Хабриев Р.У., 2005; Wilson J.G., 1965], плоды третьей группы фиксировали в 96 этаноле и использовали для изучения состояния скелета по методу Dawson A.B. [Хабриев Р.У., 2005; Dawson A.B., 1926].

Эвтаназию животных проводили в соответствии с Приказом Минздрава Российской Федерации № 267 от 19.06.2003 г. «Об утверждении правил лабораторной практики». За часов до эвтаназии животных лишали пищи. Отбор крови производили из сосудов шеи в пробирки «Vacuette». Цельную кровь центрифугировали 20 мин. при скорости 2500 об/мин на центрифуге «Опн-3М». Сыворотку разливали по 0,50 мл в пластиковые микропробирки «Eppendorf» и хранили при 20 С. Содержание эстрадиола и прогестерона в сыворотке крови беременных самок (20-й день беременности), тестостерона – в сыворотке крови половозрелых самцов, определяли методом иммуноферментного анализа с использованием тест-систем фирмы «Diagnostics Biochem Canada Inc.» (кат. №№ CAN-Е2-430; CAN-Р-305;

CAN-ТЕ-250). Исследования выполнены на иммуноферментном анализаторе «AnthosЯичники и семенники измельчали путем продавливания через перфорированную пластину из нержавеющей стали. Полученную массу переносили в стеклянный гомогенизатор Поттера-Эльвейема с тефлоновым пестиком и гомогенизировали при об/мин в течении 60 сек. В качестве среды выделения использовали 1-кратный фосфатносолевой буфер. Конечное разведение гомогенатов соответствовало 0,1 г : 1,5 мл.

Содержание ДНК в яичниках и семенниках крыс определяли по методу Burton K., 1956, основанным на способности входящей состав ДНК дезоксирибозы давать синее окрашивание при нагревании с дифениламином в присутствии сильных кислот.

Содержание ДНК в ткани рассчитывали по калибровочному графику. Для построения калибровочной кривой использовали стандарт ДНК фирмы «Sigma» (кат. № D3664).

Оптическую плотность измеряли на спектрофотометре «Biorad SmartSpec™ 3000».

Постнатальное развитие потомства F1 и F2 оценивали в течение первого месяца жизни по числу живых и мертвых новорожденных, динамике зоометрических показателей (массы тела и краниокаудального размера), общему физическому развитию (срокам отлипания ушных раковин, появления первичного волосяного покрова, прорезывания резцов, открытия глаз, опускания семенников, открытия влагалища).

Массу тела и краниокаудальный размер крысят измеряли на 2-е, 5-е, 10-е, 15-е, 20-е и 25-е сутки жизни. Также определяли среднюю величину помета, соотношение самцов и самок, вычисляли выживаемость с 0 по 5-й дни жизни (отношение числа крысят, доживших до 5-го дня, к числу родившихся живыми) и с 6-го по 25-й дни жизни (отношение числа крысят, доживших до 25-го дня, к числу доживших до 6-го дня).

Результаты приведены в виде М±m и min-max, где М – выборочное среднее измеряемых величин, m – стандартная ошибка, min и max – соответственно минимальное и максимальное значение измеряемой величины, а также долях (процентах) или абсолютных числах. В соответствии со структурой исследования проведено сравнение количественных признаков контрольной и опытной групп.

Статистическую обработку проводили с использованием пакета программ SPSS 17.0. Характер распределения количественных признаков определяли с помощью 2критерия, равенство дисперсий – с помощью критерия Левена. Оценку достоверности различий средних величин, удовлетворяющих условиям нормального распределения и равенству дисперсий, проводили методом однофакторного дисперсионного анализа (ANOVA). Для сравнения количественных признаков, не удовлетворяющих условиям нормального распределения и равенству дисперсий, использовали непараметрический аналог для независимых выборок – U-критерий Манна-Уитни. Критический уровень значимости нулевой статистической гипотезы (p) принимали равным 0,05 [Реброва О.Ю., 2006; Norusis M.J., 2009]

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Разработка алгоритма исследований репродуктивной токсичности Продолжительность исследований репродуктивной токсичности на нескольких поколениях животных обусловливает необходимость стандартизации фоновых воздействий в течение эксперимента, однако влияние сезонных факторов невозможно полностью нивелировать даже в условиях лаборатории. Содержание в режиме естественного освещения и соответствующий времени года фотопериодизм оказывают модифицирующее действие на функцию репродуктивной системы крыс [Виноградова И.А. и др., 2006; Hoffmann J.C., 1969, 1970; Drickamer L.C., 1977], поэтому данные, полученные в рамках одного эксперимента, могут изменяться в значимом диапазоне.

Для отработки модели изучения репродуктивной токсичности ГМО растительного происхождения были проведены предварительные исследования репродуктивной функции крыс в осенне-зимний, весенний и летний периоды.

На основании анализа данных литературы [Хабриев Р.У., 2005;

FDA/CFSAN/OFAS, 2004; OECD, 2004] и результатов предварительных исследований определен порядок оценки репродуктивной токсичности ГМО растительного происхождения (схема 1).

Первым этапом эксперимента является подготовительная стадия, предназначенная для выведения животных (поколение F0), получавших экспериментальные рационы на протяжении всего срока онтогенетического развития организма, включая периоды плацентарного питания и питания молоком матери, максимально стандартизованных для целей данного исследования; непосредственное изучение репродуктивной функции крыс проводится на животных поколений F0, F1, F2.

Схема 1. Этапы эксперимента

ПОДГОТОВИТЕЛЬНЫЙ ЭТАП

получавшее экспериментальные рационы на протяжении всего срока онтогенетического развития, включая периоды плацентарного питания и

ИЗУЧЕНИЕ РЕПРОДУКТИВНОЙ ФУНКЦИИ КРЫС F0, F1, F2, ПОЛУЧАВШИХ С

РАЦИОНОМ ГМ КУКУРУЗУ И ЕЕ ТРАДИЦИОННЫЙ АНАЛОГ

Животные F0, возраст 30 дней Возраст крыс 3-3,5 месяца - контрольная группа – 300 крысят; - контрольная группа – 242 крысенка;

- опытная группа – 354 крысенка. - опытная группа – 246 крысят.

Изучение влияния ГМ кукурузы, устойчивой к глюфосинату аммония, Общее состояние животных F0-F1 было удовлетворительным: по внешнему виду, качеству шерстного покрова, поведению и скорости роста животные опытной группы не отличались от животных контрольной группы. Еженедельный прирост массы тела крыс обеих групп в возрасте 30-93 дней (рис. 1-2) соответствовал уровню прироста, характерному для животных данного вида и возраста [Pullen A.H., 1976; Derelanko M.J.

et al., 2001; Hood R.D., 2006].

Рис. 1. Динамика массы тела крыс поколения F Рис. 2. Динамика массы тела крыс поколения F Интегральным показателем генеративной функции гонад является эффективность спаривания, подтверждающая фертильность экспериментальных животных. Согласно данным, представленным в табл. 2, эффективность спаривания у самок обеих групп поколения F0 составляла 79-80%, поколения F1 – 77-87%, эффективность спаривания у самцов – 89-95% и 100%, соответственно.

Эффективность спаривания соответствовала ожидаемой при данных условиях эксперимента: при продолжительности ссаживания 5 сут., соответствующей средней длительности эстрального цикла крысы [Хабриев Р.У., 2005], количество не забеременевших самок во всех группах поколений F0-F1 варьировало в пределах 13-23%. Поскольку, согласно [Mandl A.M., 1951], у 11-28% крыс эстральный цикл длится 5,5-10,0 сут., часть ссаженных самок не достигла фазы эструса в отведенном временнм периоде.

Поколение Группа Пол ссаженных забеременевших / Количество условно стерильных (неоплодотворивших) самцов поколений F0-F находилось в диапазоне физиологической нормы [Marty M.S. et al., 2009] и составляло 0-11%. Некоторые колебания эффективности спаривания животных в разных группах не имели определенной тенденции и, следовательно, являлись случайными, не связанными с влиянием каких-либо внешних факторов.

Таким образом, результаты исследований генеративной функции свидетельствуют об отсутствии различий между животными, получавшими с рационом ГМ кукурузу и ее традиционный аналог; при сравнении интегральных показателей, характеризующих общее состояние крыс контрольной и опытной групп, не выявлено различий скорости роста, динамики массы тела и поедаемости корма. Значения изученных показателей находились в пределах физиологических колебаний, характерных для крыс.

Осуществление эстрального цикла у крыс включает в себя координированное изменение активности гипоталамических структур, функции гипофиза, функции яичников, в которых под влиянием гонадотропинов происходит созревание фолликулов, овуляция и развитие желтого тела с соответствующим каждой фазе изменением гормональной активности [Остин К., Шорт Р., 1987]. Динамика гормональных изменений в течение репродуктивного эстрального цикла связана с различной длительностью его фаз (проэструс, эструс, диэструс) и регулярностью повторения цикла. Поскольку половой цикл крыс в среднем длится 5,5 суток (от 1,5 до 10 суток) [Mandl A.M., 1951], и оценка эндокринной функции гонад небеременных самок осложнена невозможностью синхронизации фаз цикла, в эксперименте изучена эндокринная функция гонад беременных самок (на 20-й день беременности). Нарушение баланса половых гормонов в организме приводит к патологии развития гамет и бесплодию, поэтому одним из доказательств нормальной эндокринной регуляции физиологических процессов, протекающих в организмах подопытных животных, является овуляция, оплодотворение и физиологическое протекание беременности.

Содержание эстрадиола и прогестерона в сыворотке крови беременных самок в норме составляет 71-158 пкг/мл и 25-68 нг/мл [Albrecht E.D., 1998; Mukaddam-Daher S., 2002; Roste L.S., 2003], таким образом, как видно из табл. 3, содержание данных гормонов в крови самок F0-F1 контрольной и опытной групп находилось в пределах нормы. Незначительные статистически недостоверные различия концентрации эстрадиола и прогестерона между группами не выходили за границы физиологических колебаний, что свидетельствует о нормальной эндокринной функции половых желез.

Эндокринная функция яичников крыс поколений F0-F Содержание эстрадиола, пкг/мл Min-Max 66,6-168,4 63,7-173,1 22,3-175,4 44,0-156, Содержание прогестерона, нг/мл Min-Max 26,9-60,0 28,0-60,0 27,6-60,0 35,7-60, У крыс, как и большинства видов животных, концентрация эстрогенов и прогестерона в крови и моче во время беременности повышается, что связано с усилением их секреции яичниками и фетоплацентарной системой [Остин К., Шорт Р., 1987; Krinke G.J., 2000]. Физиологическая адаптация материнского организма к беременности возможна лишь у здоровых особей, так как комплексные изменения гомеостаза, в том числе – эндокринной функции гонад, могут трансформировать компенсированный патологический процесс в декомпенсированный. В сущности, беременность является физиологической провокацией, нагрузкой, позволяющей выявить скрытый в стационарном состоянии гормональный дисбаланс, поэтому изучение эндокринной функции гонад у беременных самок представляет наибольшую диагностическую ценность для целей данного исследования.

Эндокринная функция яичников обеспечивает регулярное образование ооцитов, поэтому оогенная и эндокринная функции яичников тесно взаимосвязаны [Остин К., Шорт Р., 1987]. Яичник, не содержащий ооцитов, не может нормально функционировать в качестве эндокринной железы. У половозрелого животного строение и функция яичника постоянно меняются: гонадотропные гормоны передней доли гипофиза стимулируют рост граафовых пузырьков (фолликулогенез), овуляцию и образование желтых тел. Так, в работе [Tamura H. et al.,1987] выявлено 2-кратное повышение содержания ДНК на 13-14-й дни беременности; в работе [Nakamura Y. et al., 1978], продемонстрировано увеличение массы желтых тел и увеличение содержания ДНК в желтых телах крыс во время беременности: масса желтых тел увеличивалась в 3,4 раза, содержание ДНК – в 3,5 раза.

По данным [Tamura H. et al.,1987] содержание ДНК в яичниках беременных самок составляет 2,5-3,5 мг/г ткани; как видно из табл. 4, содержание ДНК в яичниках самок F0-F1 контрольной и опытной групп находилось в пределах сопоставимых значений. Масса яичников самок обеих групп также не имела статистически значимых различий как в поколении F0, так и в поколении F1 (табл. 5).

Содержание ДНК в яичниках крыс поколений F0-F Содержание ДНК, Абсолютная масса, г Относительная масса, г/100г массы тела Min-Max 0,03-0,06 0,03-0,07 0,02-0,06 0,03-0, Принимая во внимание, что уровень ДНК является косвенным критерием уровня оогенеза [Tamura H. et al.,1987], результаты исследований свидетельствуют о нормальной оогенной функции яичников крыс F0-F1 контрольной и опытной групп.

Гормональная функция половых желез самцов начинается во внутриутробном периоде развития, образующиеся андрогены обеспечивают половую дифференцировку гипоталамуса, а также формирование половых органов по мужскому типу [Остин К., Шорт Р., 1987]. Максимальная продукция андрогенов у самцов крыс наблюдается в возрасте 3-18 мес., при этом эндокринная активность гонад распределяется неравномерно. Например, на протяжении суток наблюдается от 5 до 12 пиков уровня тестостерона в плазме, с увеличением до 10 раз [Баранов В.Г., 1979; Witorsch R.J., 1995;

Krinke G.J., 2000]. При динамическом изучении уровня половых гормонов на протяжении длительного периода времени у самцов млекопитающих также отмечаются значительные колебания уровня гормонов. Таким образом, содержание тестостерона в сыворотке крови половозрелых самцов в норме варьирует в диапазоне 2,6-8,7 нг/мл [Tena-Sempere M., 1999; Souza S.D., 2004; Kuriyama S.N., 2005].

Как видно из табл. 6, содержание тестостерона в крови самцов F0-F соответствовало физиологической норме, статистически значимых различий между группами не выявлено.

Эндокринная функция семенников крыс поколений F0-F Содержание Рассматривая гормональную регуляцию функции семенников, следует помнить о том, что эндокринная функция семенников и процессы сперматогенеза тесно взаимосвязаны [Остин К., Шорт Р., 1987]. У крысы в канальце длиной 1 см в течение 12дневного цикла может образоваться 125000 сперматид; при общей протяженности канальцев 500 см в обоих семенниках образуется 10106 сперматозоидов в сутки [Рузен-Ранге Э., 1980].

Содержание ДНК в семенниках половозрелых самцов в норме составляет 1,8-5, мг/г ткани [Mills N.C., 1977], таким образом, как видно из табл. 7, содержание ДНК в семенниках самцов F0-F1 обеих групп находилось в пределах нормы. Масса семенников самцов обеих групп (возраст 100 дней) также не имела статистически значимых различий как в поколении F0, так и в поколении F1 (табл. 8).

Содержание ДНК, Абсолютная масса, г Относительная масса, г/100г массы тела Min-Max 0,68-0,99 0,73-0,97 0,60-0,97 0,65-0, Принимая во внимание, что уровень ДНК является косвенным критерием уровня сперматогенеза [Mills N.C., 1977], результаты исследований свидетельствуют о нормальной сперматогенной функции семенников крыс F0-F1 контрольной и опытной групп.

Таким образом, при изучении эндокринной функции гонад самцов и самок поколений F0-F1 не выявлено различий между животными, получавшими с рационом ГМ кукурузу и ее традиционный аналог. Содержание эстрадиола и прогестерона в крови беременных самок, тестостерона – в крови самцов обеих групп находилось в пределах нормы, что свидетельствует о нормальной эндокринной функции половых желез экспериментальных животных.

Изучение влияния ГМ кукурузы, устойчивой к глюфосинату аммония, При сравнении пренатального развития потомства самок опытной и контрольной групп (получавших с рационом ГМ кукурузу и традиционный аналог) поколений F0-F (табл. 10), не было выявлено значимых различий между группами: количество желтых тел и мест имплантации, количество живых и мертвых плодов, предимплантационная гибель эмбрионов находились в пределах физиологических колебаний, характерных для крыс линии Вистар (табл. 9). Спонтанная постимплантационная гибель зародышей у крыс F0-F1 контрольной и опытной групп была несколько ниже диапазона значений, обычно регистрируемого у крыс данной линии (по данным разных исследователей 3,6-9,2 %, табл. 9). У самок контрольной группы в поколении F0 данный показатель составлял 0%, в поколении F1 – 0,8±0,8%, у самок опытной группы – 0,9±0,9% и 3,7±3,0%, соответственно (табл. 10).

Зоометрические показатели плодов F1 и F2 варьировали в пределах физиологической нормы. Масса тела и краниокаудальный размер плодов опытной группы не имели значимых отличий от аналогичных показателей плодов контрольной группы (табл. 11). При сравнении массы внутренних органов плодов F1 и F2 также не выявлено статистически достоверных различий между контрольной и опытной группами, абсолютная и относительная массы печени, почек, сердца, легких соответствовали норме [Pullen A.H., 1976; Schneiderit M., 1985; Jurevics H.A. et al., 1997].

Пренатальное развитие потомства: данные литературы Регистрируемые Количество беременных самок Количество живых плодов Предимплантационная Постимплантационная гибель, % Регистрируемые показатели Контрольная Опытная Контрольная Опытная Количество беременных самок Количество желтых тел Количество мест имплантации Количество живых плодов Количество резорбций Предимплантационная гибель, % Постимплантационная гибель, % внематочная беременность Зоометрические показатели плодов F1-F2 на 20-й день пренатального развития Краниокаудальный размер, При обследовании плодов F1 и F2 по методу Wilson J.G. [Хабриев Р.У., 2005;

Wilson J.G., 1965] (в каждом поколении обследовано по 10 плодов контрольной и опытной групп) аномалий развития внутренних органов выявлено не было (рис. 3).

Формирование основных анатомических систем: нервной (головной, спинной мозг), сенсорной (глазные яблоки, обонятельные луковицы), сердечно-сосудистой (сердце), дыхательной (трахея, легкие, бронхи), пищеварительной (слюнные железы, язык, пищевод, желудок, кишечник, печень), мочевыделительной (почки, мочевой пузырь), половой (внутренние половые органы), локомоторной (лицевой череп, позвоночник, диафрагма), у плодов F1 и F2 контрольной и опытной групп протекало без особенностей.

Рис.3. Обследование внутренних органов плодов по методу Wilson J.G.

1-й разрез – нижняя челюсть, язык, передние       отделы твердого нёба и носовой полости; 2-й глазные яблоки и обонятельные луковицы; 3-й разрез – кора больших полушарий головного мозга, боковых и третьего желудочка; 4-й разрез – мозжечок, четвертый желудочек и продолговатый мозг; 5-й разрез – гортань, слюнные железы; 6-й разрез – пищевод, 9.                   трахея, спинной мозг; 7-й разрез – сердце, печень (а), диафрагма (б); 9-й разрез – почки, печень, кишечник, желудок (в), после удаления петель кишечника и печени – почки, мочеточники, мочевой пузырь, прямая кишка, внутренние половые органы (г).

Развитие скелета плодов оценивали по методу Dawson A.B. [Хабриев Р.У., 2005;

Dawson A.B., 1926]. Поскольку данный метод позволяет выявить врожденные аномалии скелета, незаметные при внешнем осмотре, а также оценить соответствие оссификации скелета стадии внутриутробного развития [Дыбан А.П., 1970; Акимова И.М., 1972], обследование каждого плода включало два последовательных этапа: обзорные исследования скелета, и остеометрические исследования нижней челюсти, плечевых, локтевых, лучевых, бедренных, большеберцовых и малоберцовых костей (рис. 4).

В каждом поколении обследовано по 5 плодов контрольной и опытной групп, аномалий развития скелета не выявлено. Длина участков оссификации в закладках костей конечностей и черепа плодов F1 и F2 не имела значительных различий между группами (табл. 12) и соответствовала нормальным значениям [Дыбан А.П., 1970;

Акимова И.М., 1972; Raouff A.R., 1999].

Таким образом, результаты исследований пренатального развития потомства F1-F свидетельствуют об отсутствии различий между животными, получавшими с рационом ГМ кукурузу и ее традиционный аналог. Значения изученных показателей не выходили за пределы физиологической нормы.

Длина участков оссификации в закладках костей плодов F1-F Длина костей, мкм Контрольная Опытная Контрольная Опытная Нижняя челюсть Плечевая кость Локтевая кость Лучевая кость Бедренная кость Большеберцовая M±m Малоберцовая M±m Изучение влияния ГМ кукурузы, устойчивой к глюфосинату аммония, Постнатальное развитие потомства в опытной и контрольной группах характеризуется высокой выживаемостью в поколениях F1 и F2 (табл. 13): в период с по 5-й дни жизни выживаемость потомства F1 контрольной группы составляла 98%, в период с 6-го по 25-й дни жизни – 96%, опытной группы – 99% и 95%, соответственно.

В поколении F2 выживаемость потомства в обеих группах в период с 0 по 5-й дни жизни была не ниже 98-99%, с 6-го по 25-й – не ниже 98%, значимых различий между группами не выявлено. Согласно данным [Marty M.S., 2009], линия Вистар в целом характеризуется относительной вариабельностью ряда показателей репродуктивной функции, в том числе – выживаемость потомства в первый месяц жизни может составлять не более 68% (табл.14), поэтому 95-99 %-ная выживаемость потомства соответствовала оптимальному уровню для крыс данной линии.

Средняя величина пометов у крыс контрольной и опытной групп находилась в пределах физиологических значений, достоверных различий между группами не выявлено (табл. 13, 14). Соотношение самцов и самок в группах несколько различалось в каждом поколении, однако отмеченные колебания не имели определенной тенденции и не выходили за пределы значений, характерных для данной линии крыс. Анализ физического развития потомства F1-F2 – сроков отлипания ушных раковин, появления волосяного покрова, прорезывания резцов и др. (табл. 15) не выявил каких-либо отклонений от нормы [Хабриев Р.У., 2005; Schneider S., 1985; Ema M., 1992; Noda T., 2001; Aoyama H., 2002; Ohi M., 2004].

Регистрируемые показатели Контрольная Опытная Контрольная Опытная Средняя величина помета (M±m) 11,54±0,60 11,80±0,27 9,68±0,77 10,70±0, Выживаемость с 1-го по 5-й дни жизни, % количество умерших Выживаемость с 6-го по 25-й дни жизни, % количество умерших Постнатальное развитие потомства: данные литературы Регистрируемые Выживаемость с 0 по 5-й дни жизни Выживаемость с 6 по 25-й дни жизни Общее состояние крысят F1 и F2 было удовлетворительным: по внешнему виду, поведению и скорости роста крысята опытной группы не отличались от животных контрольной группы (рис. 5-6). Прирост массы тела и роста крысят обеих групп в возрасте 2-25 дней соответствовал уровню прироста, характерному для животных данного вида и возраста [Pullen A.H., 1976; Derelanko M.J. et al., 2001; Hood R.D., 2006].

Таким образом, результаты исследований постнатального развития потомства F и F2 свидетельствуют об отсутствии различий между животными, получавшими с рационом ГМ кукурузу и ее традиционный аналог. Значения изученных показателей не выходили за пределы физиологической нормы.

Рис. 5. Динамика массы тела и роста крысят поколения F Рис. 6. Динамика массы тела и роста крысят поколения F Регистрируемый показатель Контрольная Опытная Контрольная Опытная Отлипание ушных раковин, день 2,81±0,05 2,95±0,04 2,86±0,08 2,89±0, Появление волосяного покрова, день 5,31±0,10 5,74±0,11* 5,98±0,07 5,76±0, Прорезывание резцов, день 9,25±0,14 9,72±0,12* 9,46±0,04 9,59±0, Открытие глаз, день 15,44±0,11 15,62±0,14 15,18±0,07 15,26±0, Опускание семенников, день 23,98±0,22 23,90±0,18 23,72±0,22 23,97±0, Открытие влагалища, день 28,73±0,26 28,29±0,17 28,70±0,12 28,83±0, По литературным данным [Хабриев Р.У., 2005; Aoyama H., 2002], нормальными показателями физического развития крысят линии Вистар является: отлипание ушных раковин – со 2 дня, появление волосяного покрова – с 5 дня, прорезывание резцов – с 6 дня, открытие глаз – с 12 дня, опускание семенников – с 18 дня, открытие влагалища – с 28 дня.

Результаты проведенных исследований могут быть расценены как прямые доказательства отсутствия какого-либо отрицательного влияния ГМ кукурузы на репродуктивную функцию крыс и на развитие потомства. При изучении влияния ГМ кукурузы на генеративную функцию самцов и самок поколений F0-F1, пренатальное и постнатальное развитие потомства F1-F2, не было выявлено какого-либо влияния ГМ кукурузы по сравнению с ее традиционным аналогом. Все показатели находились в пределах физиологических норм, характерных для крыс линии Вистар соответствующего возраста. В совокупности полученные данные пополняют доказательную базу безопасности ГМО, и могут быть использованы в качестве научнообоснованного стимула для дальнейшего развития современной биотехнологии в сфере производства продовольственного сырья.

Разработанный алгоритм оценки репродуктивной токсичности ГМО растительного происхождения и перечень методов исследования репродуктивной функции крыс и их потомства могут быть рекомендованы для использования при гигиенической оценке других видов биотехнологической пищевой продукции.

ВЫВОДЫ

1. Разработан алгоритм оценки репродуктивной токсичности ГМО растительного происхождения, включающий изучение генеративной функции, пренатального и постнатального развития потомства трех поколений крыс.

2. Определен комплекс методов оценки репродуктивной токсичности ГМО, включающий изучение генеративной функции по фертильной способности, гормональному статусу и уровню гаметогенеза в половых железах самцов и самок;

пренатального развития потомства по пред- и постимплантационной смертности, зоометрическим параметрам плодов, состоянию внутренних органов и костной системы плодов; постнатального развития потомства по динамике зоометрических показателей, параметрам физического развития, выживаемости с 0 по 5-й и с 6-го по 25-й дни жизни.

3. Получены экспериментальные доказательства отсутствия влияния ГМ кукурузы, устойчивой к глюфосинату аммония, на генеративную функцию крыс поколений F0-F1. Эффективность спаривания при данных условиях эксперимента составляла: у самок обеих групп поколения F0 – 79-80 %, поколения F1 – 77-87 %, у самцов F0 – 89-95 %, F1 – 100 %. Эндокринная функция гонад самцов и самок F0-F соответствовала физиологической норме, характерной для крыс линии Вистар.

4. Получены экспериментальные доказательства отсутствия влияния ГМ кукурузы, устойчивой к глюфосинату аммония, на пренатальное развитие потомства крыс поколений F1-F2. При сравнении показателей, характеризующих пренатальное развитие потомства, не было выявлено значимых различий между контрольной и опытной группами: количество живых и мертвых плодов, предимплантационная гибель эмбрионов, зоометрические параметры плодов, развитие внутренних органов и костной системы плодов находились в пределах физиологических колебаний, характерных для крыс линии Вистар. Спонтанная постимплантационная гибель плодов F1-F2 обеих групп была несколько ниже диапазона значений, обычно регистрируемого у крыс данной линии: в поколении F1 этот показатель составлял 0 % – в контрольной группе и 0,9±0,9 % – в опытной группе, в поколении F2 – 0,8±0,8 % и 3,7±3,0 %, соответственно.


5. Получены экспериментальные доказательства отсутствия влияния ГМ кукурузы, устойчивой к глюфосинату аммония, на постнатальное развитие потомства крыс поколений F1-F2. При сравнении показателей, характеризующих постнатальное развитие потомства, не было выявлено значимых различий между контрольной и опытной группами: физическое развитие потомства и динамика зоометрических параметров соответствовали физиологическим значениям, характерным для животных данного вида и возраста. Средняя величина пометов в поколении F составляла 11,54±060 – в контрольной группе и 11,80±0,27 – в опытной группе, в поколении F2 – 9,68±0,77 и 10,70±0,50, соответственно. Выживаемость потомства поколений F1-F2 контрольной и опытной групп составляла 95-99 %, что соответствует оптимальному уровню для крыс линии Вистар.

6. Завершены комплексные медико-биологические исследования ГМ кукурузы, устойчивой к глюфосинату аммония. На основании анализа результатов токсиколого-гигиенических исследований и результатов оценки репродуктивной токсичности на трех поколениях крыс подтверждена безопасность данной линии кукурузы и обоснованность разрешения ее использования на территории Российской Федерации, ввоза на территорию Российской Федерации и оборота (свидетельство о государственной регистрации № 77.99.26.11.У.803.2.07 от 06 февраля 2007 года).

СПИСОК ПЕЧАТНЫХ РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ:

Работы, опубликованные в ведущих рецензируемых журналах, рекомендуемых Высшей аттестационной комиссией Минобрнауки Российской Федерации:

1. Утембаева Н.Т., Пашорина В.А., Селяскин К.Е., Тышко Н.В. Разработка методических подходов к изучению влияния фактора сезонности на репродуктивную функцию крыс в экспериментальных исследованиях при алиментарных воздействиях // Вопросы питания. – 2009. – Т. 78, № 1. – С. 43-48.

Работы, опубликованные в ведущих рецензируемых журналах, рекомендуемых Высшим аттестационным комитетом МОН Республики Казахстан 2. Утембаева Н.Т. Оценка репродуктивной токсичности генно-инженерно-модифицированных организмов растительного происхождения в международной практике (Обзор литературы).

// Гигиена, эпидемиология и иммунобиология. – 2010. – Т. 43, №1. – С. 21-24.

3. Утембаева Н.Т. Генно-инженерно-модифицированные организмы (ГМО) растительного происхождения: оценка безопасности (Обзор литературы). // Здоровье и болезнь. – 2010. – Т. 86, №1. – С. 5-8.

4. Утембаева Н.Т. Генно-инженерно-модифицированные организмы растительного происхождения: мировое производство (Обзор литературы). // Здоровье и болезнь. – 2010. – Т. 87, №2. – С. 5-8.

5. Утембаева Н.Т., Тышко Н.В. Разработка методических подходов к оценке влияния генноинженерно-модифицированных источников пищи на репродуктивную систему крыс и их потомство // Материалы 2-ой всероссийской научно-практической конференции молодых ученых и специалистов «Окружающая среда и здоровье». – Рязань, 2007. – С. 197-198.

6. Тышко Н.В., Утембаева Н.Т. Изучение репродуктивной токсичности генно-инженерномодифицированной кукурузы в эксперименте на крысах // Тезисы V Конференции молодых ученых России с международным участием «Фундаментальные науки и прогресс клинической медицины». – М., 2008. – С. 442.

7. Тышко Н.В., Утембаева Н.Т., Жминченко В.М., Пашорина В.А., Селяскин К.Е., Сапрыкин В.П., Тутельян В.А. Оценка влияния генно-инженерно-модифицированой кукурузы на репродуктивную систему крыс и их потомство // Материалы X Всероссийского Конгресса диетологов и нутрициологов «Питание и здоровье». – М., 2008. – С. 109.

8. Тышко Н.В., Утембаева Н.Т., Пашорина В.А. Постнатальное развитие потомства трех поколений крыс, получавших генно-инженерно-модифицированную кукурузу // Материалы X Всероссийского Конгресса диетологов и нутрициологов «Питание и здоровье». – М., 2008. – С. 109-110.

9. Утембаева Н.Т., Тышко Н.В. Генеративная функция крыс, получавших с рационом генноинженерно-модифицированную кукурузу // Материалы X Всероссийского Конгресса диетологов и нутрициологов «Питание и здоровье». – М., 2008. – С. 112-113.

10. Тышко Н.В., Жминченко В.М., Пашорина В.А., Селяскин К.Е., Утембаева Н.Т. Изучение влияния генно-инженерно-модифицированной кукурузы, устойчивой к глюфосинату аммония, на репродуктивную систему крыс и их потомство // Материалы V Московского международного конгресса «Биотехнология: состояние и перспективы развития». – М., 2008. – С. 143-144.

11. Тышко Н.В., Утембаева Н.Т. Изучение репродуктивной токсичности генно-инженерномодифицированной кукурузы в эксперименте на трех поколениях крыс // Здоровье и болезнь. – 2009 г., №2 (78). Материалы Международной научно-практической конференции «Питание и здоровье». – Алматы, 2009. – С. 200-202.

ВНЕДРЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ В ПРАКТИКУ

Результаты настоящей диссертации внедрены в работу Казахской академии питания, а также в учебный процесс кафедры гигиены питания Казахского национального медицинского университета им. С. Д. Асфендиярова.



 


Похожие работы:

«Ермоленко Дмитрий Константинович ДВУХЭТАПНАЯ ТЕРАПИЯ ТЯЖЕЛЫХ ФОРМ ГЕНИТАЛЬНОГО ГЕРПЕСА С МОНОТОННЫМ ТИПОМ РЕЦИДИВИРОВАНИЯ 14.01.09 – инфекционные болезни Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Санкт-Петербург– 2011 2 Работа выполнена в Федеральном бюджетном учреждении науки СанктПетербургский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии имени Пастера Роспотребнадзора Научный руководитель : доктор медицинских наук,...»

«САЛАСЮК Алла Сергеевна ОСОБЕННОСТИ ТЕЧЕНИЯ И МЕДИКАМЕНТОЗНОЙ ТЕРАПИИ МЕТАБОЛИЧЕСКОГО СИНДРОМА У МУЖЧИН 14.01.04 Внутренние болезни Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Волгоград 2013 Работа выполнена в Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования Волгоградский государственный медицинский университет Министерства здравоохранения Российской Федерации доктор медицинских наук, профессор...»

«Озорнина Ольга Сергеевна ПАТОФИЗИОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ ПРИМЕНЕНИЯ МАТЕРИАЛОВ НА ОСНОВЕ КСЕНОКОЛЛАГЕНА ПРИ ХИРУРГИЧЕСКОМ ЛЕЧЕНИИ ПРОГРЕССИРУЮЩЕЙ БЛИЗОРУКОСТИ (экспериментально – клиническое исследование) 14.03.03. – патологическая физиология 14.01.07. – глазные болезни АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Москва 2010 г. Работа выполнена на кафедре общей патологии и патологической физиологии Российского Университета Дружбы Народов и...»

«ГРЕШНОВА Ирина Владимировна КЛИНИКО-ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА И ФАКТОРЫ РИСКА РАССЕЯННОГО СКЛЕРОЗА В УЛЬЯНОВСКОЙ ОБЛАСТИ 14.01.11 – нервные болезни Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Саратов – 2014 Работа выполнена в Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования Самарский государственный медицинский университет Министерства здравоохранения Российской Федерации. Научный...»

«ХОЛОДОВИЧ Ольга Владимировна ПРИМЕНЕНИЕ ЭНДОГЕРМЕТИКОВ НА ОСНОВЕ ПОЛИДИМЕТИЛСИЛОКСАНА В КОМПЛЕКСНОМ ЛЕЧЕНИИ БОЛЬНЫХ С ХРОНИЧЕСКИМИ ФОРМАМИ ПУЛЬПИТА 14.01.14 – Cтоматология Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Воронеж – 2011 2 Работа выполнена в Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования Воронежская государственная медицинская академия им. Н.Н. Бурденко Министерства здравоохранения и...»

«ГУСЕВ АЛЕКСАНДР ОЛЕГОВИЧ НАУЧНОЕ ОБОСНОВАНИЕ ОРГАНИЗАЦИИ ОТДЕЛЕНИЙ ВОССТАНОВИТЕЛЬНОГО ЛЕЧЕНИЯ БОЛЬНЫХ С ЗАБОЛЕВАНИЯМИ СИСТЕМЫ КРОВООБРАЩЕНИЯ В КРУПНОМ МНОГОПРОФИЛЬНОМ СТАЦИОНАРЕ Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук 14.02.03-общественное здоровье и здравоохранение Санкт - Петербург 2014 Работа выполнена на кафедре общественного здоровья и здравоохранения с курсом экономики и управления здравоохранением государственного бюджетного...»

«АЛИЕВ РОМАН ТОФИК-ОГЛЫ СОВРЕМЕННЫЕ КЛИНИКО-ОРГАНИЗАЦИОННЫЕ ТЕХНОЛОГИИ ДИАГНОСТИКИ И ЛЕЧЕНИЯ АНДРОЛОГИЧЕСКИХ ЗАБОЛЕВАНИЙ НА РЕГИОНАЛЬНОМ УРОВНЕ 14.01.23 – урология Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук Москва 2011 2 Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования Алтайский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию Научные...»

«Кустов Илья Анатольевич Хирургическая тактика при заболеваниях брюшной аорты и её ветвей у пациентов с высоким риском тромботических осложнений. 14.01.26 – сердечно-сосудистая хирургия АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Москва – 2010 2 Работа выполнена в Научном Центре сердечно-сосудистой хирургии им. А.Н. Бакулева РАМН. Научный руководитель : Доктор медицинских наук, Аракелян Валерий Сергеевич профессор Официальные оппоненты :...»

«Коростышевская Александра Михайловна Возможности магнитно-резонансной томографии в пренатальной диагностике патологии головного мозга и биометрии интракраниальных ликворных структур 14.01.13 - лучевая диагностика, лучевая терапия Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук Томск - 2010 Работа выполнена в Институте Международный томографический центр Сибирского отделения Российской Академии Наук Научный консультант : доктор медицинских наук,...»

«Гурджидзе Теймураз Юрьевич Результаты лечения пациентов с мягкотканными дефектами дистальных отделов конечностей свободными микрохирургическими аутотрансплантатами 14.01.17 – хирургия Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Диссертационный совет Д 001.027.02 Учреждение Российской академии медицинских наук Российский научный центр хирургий имени академика Б.В. Петровского РАМН 119991, г. Москва, ГСП 2, Абрикосовский переулок, д. 2....»

«Сирмайс Оксана Сергеевна КЛИНИКО-ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ КРИТЕРИИ И ПРИЧИНЫ РАЗВИТИЯ РЕФРАКТЕРНЫХ ФОРМ ЭНДОКРИННОЙ ОФТАЛЬМОПАТИИ 14.01.07 - глазные болезни Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Москва - 2013 Работа выполнена на кафедре глазных болезней факультета последипломного образования ГБОУ ВПО Московский государственный медикостоматологический университет им. А.И. Евдокимова Минздрава России (ректор - Заслуженный врач РФ, доктор...»

«ЗАВЬЯЛОВА Анжелика Витальевна МИКРОБИОЦЕНОЗ ЖЕЛУДКА И КОРРЕКЦИЯ ЕГО ОТКЛОНЕНИЙ У ДЕТЕЙ РАННЕГО ВОЗРАСТА С ФУНКЦИОНАЛЬНЫМИ И ВОСПАЛИТЕЛЬНЫМИ ЗАБОЛЕВАНИЯМИ ВЕРХНИХ ОТДЕЛОВ ПИЩЕВАРИТЕЛЬНОГО ТРАКТА 14.00.09 — педиатрия Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Иваново 2008 Работа выполнена на кафедре детских болезней педиатрического факультета Государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования Ивановская...»

«Чупрынова Мария Юрьевна ОСОБЕННОСТИ ТЕЧЕНИЯ HELICOBACTER PYLORIАССОЦИИРОВАННОГО ГАСТРИТА У ПОДРОСТКОВ ПРИ ИНФИЦИРОВАНИИ СЛИЗИСТОЙ ОБОЛОЧКИ ЖЕЛУДКА ВИРУСОМ ЭПШТЕЙНА-БАРР 14.01.08 – педиатрия АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Красноярск – 2014 Работа выполнена в государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования Омская государственная медицинская академия Министерства здравоохранения Российской...»

«КАЗИЕВА Ирина Эльбрусовна КЛИНИКО-ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ОБОСНОВАНИЕ К ИСПОЛЬЗОВАНИЮ ИНГИБИТОРА РЕЗОРБЦИИ КОСТНОЙ ТКАНИ НА ОСНОВЕ РАСТИТЕЛЬНЫХ ФЛАВОНОИДОВ ПРИ ДЕНТАЛЬНОЙ ИМПЛАНТАЦИИ 14.01.14 – Стоматология Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Волгоград, 2014 Работа выполнена в Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования Ставропольский государственный медицинский университет Министерства...»

«ШАМХАЛОВ МАГОМЕД МУРТАЗАЛИЕВИЧ ОСОБЕННОСТИ ЭПИДЕМИОЛОГИИ ОСТРЫХ КИШЕЧНЫХ ИНФЕКЦИЙ БАКТЕРИАЛЬНОЙ И ВИРУСНОЙ ЭТИОЛОГИИ И СОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ САНИТАРНО-ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКОГО НАДЗОРА 14.00.30 – эпидемиология Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Москва – 2006 г. Работа выполнена в Федеральном государственном учреждении науки Центральный научно-исследовательский институт эпидемиологии Роспотребнадзора Научный руководитель : доктор медицинских...»

«Мкртчян Гамлет Саркисович Рентгенэндоваскулярная эмболизация при злокачественных опухолях гепатопанкреатодуоденальной зоны 14.00.14 –онкология 14.00.19 –лучевая диагностика и лучевая терапия АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Москва – 2009 Работа выполнена в НИИ КО Российском онкологическом научном центре им. Н.Н. Блохина РАМН (директор-академик РАН и РАМН, профессор М.И. Давыдов) Научные руководители: Доктор медицинских наук,...»

«МУСАЕВА МЕХРИБАН ГУСЕЙН КЫЗЫ ОПТИМИЗАЦИЯ ПОДГОТОВКИ ПАЦИЕНТОКС БЕСПЛОДИЕМ ПРИ НЕУДАВШИХСЯ ПОПЫТКАХ ВСПОМОГАТЕЛЬНЫХ РЕПРОДУКТИВНЫХ ТЕХНОЛОГИЙ 14.00.01- Акушерство и гинекология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук МОСКВА 2009 2 Работа выполнена на кафедре акушерства, гинекологии, перинатологии и репродуктологии факультета первичной переподготовки врачей ГОУ ВПО Московская Медицинская Академия им. И.М. Сеченова Научный руководитель...»

«ЕВДОКИМОВА Татьяна Анатольевна КЛИНИЧЕСКАЯ И ПАТОГЕНЕТИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА БРОНХИАЛЬНОЙ АСТМЫ У ДЕТЕЙ, ПРОТЕКАЮЩЕЙ НА ФОНЕ ОПИСТОРХОЗНОЙ ИНВАЗИИ 14.00.09 – педиатрия Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Томск – 2002 2 Работа выполнена в Сибирском государственном медицинском университете и Центральной научно – исследовательской лаборатории Научный руководитель : доктор медицинских наук, профессор Огородова Л.М. Официальные оппоненты...»

«ВИЩИПАНОВ Артем Сергеевич Оценка отдаленных результатов хирургического лечения ИБС у лиц молодого возраста и выявление основных факторов, их определяющих. 14.01.26 – сердечно-сосудистая хирургия Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Москва 2009 2 Работа выполнена в Научном Центре сердечно-сосудистой хирургии им. А.Н. Бакулева Российской Академии медицинских наук. Научный руководитель : Доктор медицинских наук, профессор, академик...»

«ДАВЛЕТШИН Фарид Амирханович РОЛЬ СОЦИАЛЬНО-ЭКОНОМИЧЕСКИХ И ЭКОЛОГИЧЕСКИХ ФАКТОРОВ В УКРЕПЛЕНИИ ЗДОРОВЬЯ НАСЕЛЕНИЯ МУНИЦИПАЛЬНОГО ОБРАЗОВАНИЯ 14.02.03 Общественное здоровье и здравоохранение АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учёной степени кандидата медицинских наук Москва 2010 Работа выполнена в Национальном Научно-исследовательском институте общественного здоровья РАМН Научный руководитель доктор биологических наук ПЕТРУЧУК Олег Евгеньевич Официальные оппоненты : доктор...»






 
© 2013 www.diss.seluk.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Авторефераты, Диссертации, Монографии, Методички, учебные программы»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.