WWW.DISS.SELUK.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА
(Авторефераты, диссертации, методички, учебные программы, монографии)

 

На правах рукописи

Шутикова Анна Леонидовна

ИММУНОМОДУЛИРУЮЩИЕ И АНТИОКСИДАНТНЫЕ СВОЙСТВА

БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ ИЗ МОРСКИХ

ГИДРОБИОНТОВ И ИХ ИСПОЛЬЗОВАНИЕ В ГЕРИАТРИЧЕСКОЙ

ПРАКТИКЕ

14.00.36 – Аллергология и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Владивосток – 2009

Работа выполнена в Государственном учреждении научно-исследовательском институте эпидемиологии и микробиологии Сибирского отделения Российской академии медицинских наук

Научный руководитель:

доктор медицинских наук Запорожец Татьяна Станиславовна

Научный консультант:

доктор биологических наук Пивненко Татьяна Николаевна

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор Авдеева Жанна Ильдаровна доктор медицинских наук Селькова Евгения Петровна Ведущее учреждение:

Государственное учреждение Санкт-Петербургский институт биорегуляции и геронтологии северо-западного отделения Российской академии медицинских наук

Защита диссертации состоится « » 2009 г. в часов на заседании Диссертационного совета Д 208.046.02 при Федеральном государственном учреждении науки «Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им.Г.Н. Габричевского» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, по адресу: 125212, г.Москва, ул. Адмирала Макарова,

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Федерального государственного учреждения науки «Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им.Г.Н. Габричевского» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, по адресу:

125212, г.Москва, ул. Адмирала Макарова,

Автореферат разослан « » 2009 г.

Ученый секретарь Диссертационного совета Д 208.046. кандидат медицинских наук Л.И. Новикова



ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы Старение населения - объективный общемировой процесс, обусловленный сложным комплексом факторов, включающих особенности воспроизводства населения, интенсивность и направленность миграции, санитарно-демографические последствия войн и др. Доля пожилых, старых и очень старых людей в общей популяции населения неуклонно увеличивается (Шабалин В.Н., 2001). Темп прироста лиц пожилого возраста значительно опережает темп прироста всего населения. В России формирование существенной прослойки пожилых людей, прежде всего, связано со снижением рождаемости и сокращением доли детей в общей численности населения, а также с высокой смертностью людей трудоспособного возраста. Увеличению численности пожилых людей также способствуют внедрение достижений медико-биологических исследований, эффективное лечение онкологических заболеваний, более действенная, чем ранее профилактика инфаркта и инсульта. За период с 1959 г по 2000 г численность лиц старше 60 лет в России увеличилась более чем в два раза и составила в 2000 году 30,18 млн. человек (18,5%), из них лица старше 65 лет - 67,6%, старше 75 лет - 22,3%, старше 80 лет - 10,9%, старше 100 лет - 0,05% (Шабалин В.Н., 2001). По прогнозам Государственного комитета Российской Федерации по статистике, население страны к году сократится по сравнению с началом 2001 года на 10,4 млн. человек, а численность лиц пожилого возраста возрастет и почти в два раза превысит численность детей.

В то же время физиологическое старение, не сопровождаемое развитием каких-либо хронических заболеваний, определяется лишь у 3-6% людей пожилого и старческого возраста. Снижение резервных, адаптационных возможностей организма пожилых людей, обусловленные постепенно нарастающими сдвигами в структуре и функции клеток, органов и систем, создают условия для возникновения множества различных болезней.

Значительную роль в процессе старения играют иммунологические механизмы и свободнорадикальное окисление. Для пожилого и старческого возраста характерно снижение противомикробного иммунитета, противовирусной и противоопухолевой защиты (Mysliwska J., 2000; Solana R., 2000), Т-клеточного звена иммунитета (Кишов М.Г. с соавт., 1996; Ярилин, А.А., 2003; Effros R.В et al., 1994, Haynes L. et al., 1999), гуморального иммунного ответа как на аутологичные, так и на экзогенные антигены (Макинодан Т.,1980), изменение рецепторного аппарата иммунокомпетентных клеток и соотношения клеточных субпопуляций (Хаитов Р.М., 1995; Effros R.В et al., 1994; Herndon F.J., 1997; Chen J.J., 2000;

Schindowski К., 2002). Одной из основных причин ослабления пролиферации и дифференцировки Т-лимфоцитов является снижение секреции IL-2 (Rea I.M. et al, 1996; J. Mysliwska et al., 2000).

Накопление повреждений в клетках и скорость старения зависят также от соотношения процессов образования активных форм кислорода и их обезвреживания ферментативной системой антиоксидантной защиты (Гусев В.А., 2000). Повреждение макромолекул АФК приводит к мутациям, нестабильности генома в целом и развитию ряда возрастных патологий, таких как онкологические и сердечно-сосудистые заболевания, возрастная иммунодепрессия, дисфункция мозга, развитие катаракты и многие др. (Пескин А.В, 1997; Гусев В.А., 2000; Ланкин В.З., 2001).





В этой связи применение иммунокорректоров и антиоксидантов является одной из наиболее актуальных и в то же время наиболее дискутабельных проблем современной геронтологии. Использование таких препаратов может способствовать разрыву патологической цепи в структуре старение — болезнь, что, в свою очередь, позволит уменьшить предпосылки к развитию патологии в старости и тем самым уменьшить вероятность развития заболеваний. Включение иммунокорректоров и антиоксидантов в базисную терапию при различных заболеваниях у лиц старших возрастных групп способствует расширению адаптационных возможностей организма и профилактике преждевременного старения, обусловленного влиянием болезней старости (Чеботарев Д.Ф., 2001).

В настоящее время наиболее предпочтительным представляется применение у лиц пожилого возраста препаратов, в том числе БАД, природного происхождения, оказывающих мягкое иммуномодулирующее и антиоксидантное действие и имеющих минимум побочных эффектов.

К числу таких препаратов относятся БАД «ДНКаС» и «Моллюскам», разработанные в ФГУП «ТИНРО-центр». Исследованию антиоксидантного и иммуномодулирующего действия этих БАД у пожилых людей и посвящена настоящая работа.

Экспериментальное и клинико-иммунологическое обоснование применения БАВ из морских гидробионтов н-ДНК и моллюскама для коррекции иммунных нарушений, свободнорадикальных процессов и профилактики заболеваний органов дыхания у людей пожилого возраста.

Задачи исследования:

1. Исследовать антиоксидантные свойства н-ДНК и моллюскама и их воздействие на фагоцитарную активность нейтрофилов периферической крови здоровых доноров в экспериментах in vitro.

2. Изучить морфофункциональную структуру эпителия слизистой оболочки трахеи крыс при прямом холодовом воздействии и на фоне введения н-ДНК и моллюскама.

3. Исследовать действие БАД «ДНКаС» и «Моллюскам» на популяционный и субпопуляционный состав лимфоцитов (CD3+-, CD4+-, CD8+-, CD20+-, CD16+лимфоциты) периферической крови пожилых людей.

4. Изучить влияние БАД «ДНКаС» и «Моллюскам» на уровень иммуноглобулинов (IgG, IgM, IgA) в сыворотке крови, на фагоцитарную активность и кислородзависимую цитотоксичность нейтрофилов периферической крови у пожилых людей.

5. Исследовать влияние БАД «ДНКаС» и «Моллюскам» на показатели перекисного окисления липидов и антиоксидантной защиты у пожилых людей.

Научная новизна.

Экспериментально доказано, что моллюскам обладает антиоксидантным действием, которое проявляется в прямых реакциях нейтрализации свободных радикалов и в опосредованных реакциях накопления вторичных продуктов перекисного окисления липидов in vitro.

Экспериментально обоснована возможность применения БАД «Моллюскам» для профилактики и в комплексном лечении заболеваний органов дыхания.

Доказано, что моллюскам защищает слизистую оболочку трахеи экспериментальных животных при общем охлаждении.

В результате комплексной оценки состояния факторов врожденного и адаптивного иммунитета у пожилых людей показана эффективность применения БАД «ДНКаС» и «Моллюскам» для коррекции иммунных нарушений. Установлена направленность действия БАД, зависящая от исходных значений показателей.

Установлено, что БАД «Моллюскам» оказывает антиоксидантное действие, снижая в эритроцитах уровень МДА и повышая АОА плазмы крови у пожилых людей, смещая баланс между процессами перекисного окисления липидов и механизмами антиоксидантной защиты клетки в сторону последней.

Установлено, что БАД «ДНКаС» оказывает регулирующее действие на процессы липопероксидации у пожилых людей, восстанавливая баланс между процессами перекисного окисления липидов и механизмами антиоксидантной защиты клетки.

Практическая значимость.

Обоснована целесообразность применения биологически активных добавок к пище «ДНКаС» и «Моллюскам», обладающих иммуномодулирующим действием, для коррекции возрастных иммунных нарушений.

Установлена эффективность применения «Моллюскама» в качестве БАД, обладающей антиоксидантным действием. Рекомендовано ее применение при гиперактивации системы перекисного окисления липидов у пожилых людей.

Установлена эффективность «ДНКаС» в качестве БАД, оказывающей регулирующее действие на процессы липопероксидации. Рекомендовано ее применение для коррекции свободнорадикальных процессов у пожилых людей.

Внедрение результатов работы.

Подготовлены и утверждены Департаментом здравоохранения администрации Приморского края методические рекомендации «Использование биологически активных добавок к пище «ДНКаС» и «Моллюскам» для коррекции нарушений иммунной и антиоксидантной систем у пожилых людей» (г. Владивосток, 2007) (Авторы: Шутикова А.Л., Запорожец Т.С. и др.).

БАД «ДНКаС» и «Моллюскам» используются в отделении Седанкинского дома-интерната для ветеранов для профилактики и коррекции расстройств иммунной и оксидантной систем (акт внедрения от 07.11.2008 г).

Полученные новые данные по применению в геронтологической практике биологически активных веществ из морских гидробионтов используются при обучении студентов медицинских ВУЗов и факультетов, а также на курсах ФПК (акт внедрения от 10.11.2008 г).

Отчеты об экспериментальном исследовании моллюскама и БАД на его основе были включены в пакет документов для регистрации в Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, по результатам экспертизы получено свидетельство № 77.99.11.3.У.4071.10.04 от 08.10.04 г.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Моллюскам обладает прямым антиоксидантным действием.

2. Моллюскам защищает слизистую оболочку трахеи экспериментальных животных при общем охлаждении.

3. БАД «ДНКаС» и «Моллюскам» оказывают модулирующее действие на факторы врожденного и адаптивного иммунитета у пожилых людей, зависящее от исходного уровня показателей.

4. БАД «Моллюскам» оказывает антиоксидантное действие на систему ПОЛАОЗ у пожилых людей, смещая баланс между процессами перекисного окисления липидов и механизмами антиоксидантной защиты клетки в сторону последней. БАД «ДНКаС» оказывает регулирующее действие на процессы липопероксидации.

Апробация результатов диссертационной работы:

Диссертация апробирована на заседании Ученого Совета ГУ НИИЭМ СО РАМН (протокол №5 от16.05.2007г.).

Материалы диссертации представлены на Дальневосточном региональном конгрессе «Человек и лекарство» с международным участием (Владивосток, 2005), Итоговой научно-практической конференции с международным участием:

«Вопросы сохранения и развития здоровья населения Севера и Сибири» (Красноярск, 2005), Международной научно-технической конференции молодых ученых: «Актуальные проблемы технологии живых систем» (Владивосток, 2005), региональной научной конференции «Исследования в области физикохимической биологии и биотехнологии» (Владивосток, 2006), V Всемирном конгрессе по иммунопатологии и аллергии (Москва, 2007), V Европейском конгрессе по астме (Москва, 2007).

По материалам диссертации опубликовано 9 работ.

Объем и структура диссертации Диссертация изложена на 148 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, главы «материалы и методы исследования», глав результатов собственных исследований, заключения, выводов, указателя литературы, включающего 294 источника, из них 91 отечественный и 203 иностранных. Работа иллюстрирована 20 таблицами и 14 рисунками.

СОДЕРЖАНИЕ ДИССЕРТАЦИИ

Материалы и методы исследования Экспериментальные и клинические исследования проведены в лаборатории иммунологии ГУ НИИЭМ СО РАМН, а также совместно с сотрудниками Седанкинского дома-интерната для ветеранов (г. Владивосток). Отдельные разделы работы выполнены совместно с лабораторией прикладной биохимии ФГУП «ТИНРО-центр» и кафедрой гистологии, цитологии и клеточной биологии ГУ ВПО «Амурская государственная медицинская академия Росздрава». Все экспериментальные и клинические исследования проведены с разрешения Комитета по биомедицинской этике ГУ НИИЭМ СО РАМН (протокол № 3/2 от 14.07.2004 г.).

1.Исследуемые препараты Низкомолекулярная ДНК (н-ДНК) – выделена из молок лососевых рыб в ФГУП «ТИНРО-центр» (патент РФ № 2122856 от 10.12.98). Химический состав:

массовая доля ДНК - 79,02%, содержание белка - 7,8%, липидов – 2,1%, воды – 10,68%, нуклеиновых кислот - 70-80%, м.м. 270-500 кДа. Метод выделения - солевая экстракция с последующим осаждением конечного вещества из раствора этиловым спиртом и удалением жира и влаги сушкой на воздухе при комнатной температуре.

На основе н-ДНК разработана БАД «ДНКаС» (н-ДНК+ витамин С) (регистрационное удостоверение МЗ РФ №004978.Р.643.10.2002 от 30.10.2002, свидетельство Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека № 77.99.23.3.У.8747.10.08 от 13.10.2008).

Моллюскам – комплекс свободных аминокислот, низкомолекулярных белков и пептидов, выделенный в ФГУП «ТИНРО-центр» методом ферментативного гидролиза из двустворчатых и головоногих моллюсков (патент РФ № 2171066 от 22.03.2000). Химический состав: свободные аминокислоты (таурин, аспарагиновая кислота, треонин, глутаминовая кислота, пролин, глицин, аланин, цистеин, валин, метионин, изолейцин, лейцин, тирозин, фенилаланин, -аланин, орнитин, лизин, гистидин, аргинин) – 56-71%, липиды – менее 1%, белки – 19-25%, углеводы – менее 1%, минеральные вещества – 7,9-8,5 %, гистидинсодержащие дипептиды – 2-14,3 %.

На основе моллюскама разработана БАД «Моллюскам», зарегистрирована в Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (свидетельство № 77.99.11.3.У.4071.10.04 от 08.10.2004).

2. Лабораторные животные Экспериментальные исследования выполнены на 80 крысах массой 200 г., находившихся на стандартной диете в боксированных помещениях с соблюдением всех правил и международных рекомендаций Европейской конвенции по защите позвоночных животных, используемых в экспериментальных работах (1986).

Разброс животных в группе по массе тела не превышал ±10%. Контрольные и опытные группы составили животные одного пола (самцы) и возраста (6 месяцев).

3. Клинический материал В соответствии с протоколом исследования (протокол № 3/2 от 14.07. г.) клинические и лабораторные данные были проанализированы у 57 пожилых людей Седанкинского дома-интерната для ветеранов - 42 женщины и 15 мужчин в возрасте от 67 до 93 лет.

Исследование было рандомизированным, обеспечивающим случайное распределение пожилых людей в 2 группы (для оценки эффективности применения БАД «ДНКаС» и «Моллюскам»).

1 группа - 30 пожилых людей (20 женщин и 10 мужчин в возрасте от 67 до 87 лет, их средний возраст составил 77±10 лет), которые получали БАД «ДНКаС»

по 2 таблетки, содержащие по 50 мг ДНК, 1 раз в день в течение 30 дней.

2 группа - 27 пожилых людей (22 женщины и 5 мужчин в возрасте от 69 до 93 лет, их средний возраст составил 81±12 лет), которые получали БАД «Моллюскам» по 1 капсуле, содержащей 250 мг моллюскама, 1 раз в день в течение дней.

Для исследования иммунного статуса и показателей системы ПОЛ-АОЗ использовали венозную кровь. Забор крови проводили в равных условиях (утром, натощак, в количестве 12-15 мл).

Исследование иммунного статуса и показателей системы ПОЛ-АОЗ проводили дважды – до и после окончания приема БАД.

4. Микроорганизмы Staphylococcus aureus (штамм 209) (музей культур микроорганизмов ГУ НИИЭМ СО РАМН) выращивали при температуре 37°С в течение 18-24 часов на мясопептонном агаре (ph 7,2), после чего культуру микроорганизмов смывали 0,85% раствором NaCl и готовили взвесь микробов нужной концентрации по оптическому стандарту мутности.

Все направления, методы и объем проведенных исследований представлены в табл. 1.

1 Исследование 1.Исследование фагоцитарной активности нейтрофилов влияния БАВ н- крови здоровых доноров in vitro (Лебедев К.А., 1990) 80 проб ДНК и моллюскам на функциональную активность нейтрофилов 2 Оценка антиокси- Определение антиоксидантной активности моллюскама дантной активно- и н-ДНК сти БАВ н-ДНК и 1.Прямые методы:

моллюскам. - Образование хлораминовых комплексов при взаимодействии антиоксиданта с гипохлорит-анионом (Формазюк В.Е. с соавт., 2003) 3 пробы - Ингибирование скорости образования свободных радикалов антиоксидантами методом обесцвечивания 3 Исследование 1.Определение популяционного и субпопуляционного влияния БАД CD4+, CD8+, CD20+, CD16+-лимфоциты) методом непряДНКаС» и «Моллюскам» на гумо- мой иммунофлюоресценции с использованием моноклоральный и клеточ- нальных ФИТЦ-меченных антител (Лебедев К.

А., 1990) 114 проб ный иммунитет 2.Определение основных классов иммуноглобулинов в пожилых людей сыворотке крови (IgG, IgA, IgM) методом радиальной 4 Исследование 1.Определение малонового диальдегида (МДА) в эритвлияния БАД роцитах крови спектрофотометрическим методом (НовДНКаС» и «Мол- городцева Т.П. с соавт., 2003) 114 проб люскам» на 2.Определение общей антиокислительной активности параметры систе- плазмы крови спектрофотометрическим методом (Новмы ПОЛ-АОЗ у городцева Т.П. с соавт., 2003) 114 проб пожилых людей 5 Исследование 1.Исследование морфологических изменений слизистой 80 неинвлияние моллю- оболочки трахеи под действием БАВ: бредных скама и н-ДНК на - Трансмиссионная электронная микроскопия (Уикли крыс систему воздухо- - Сканирующая электронная микроскопия (Ровенский носного отдела Ю.А., 1969) легких, показатели 2. Определение содержания МДА в плазме крови крыс перекисного окис- (Бородин Е.А. с соавт., 1987) ления липидов и 3. Определение содержания витамина Е в липидных эксантиоксидантной трактах из крови (Кисилевич Р.Ш. с соавт., 1972) системы при общем охлаждении Статистический Статистическую обработку полученных данных проводили с помоанализ щью пакета программы «Биостат» и «Excel». Использовались следующие методы статистического анализа: проверка нормальности распределения количественных признаков при малом числе наблюдений, t-критерий Стьюдента (для независимых выборок и для двух связанных между собой вариационных рядов), W-критерий Уилкоксона. Выборочные параметры, приводимые далее в таблицах, имеют следующие обозначения: средняя арифметическая (М), средняя ошибка средней арифметической (m), объем анализируемой подгруппы (n), Уровень доверительной вероятности был задан равным

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

I. Исследование антиоксидантной активности моллюскама и н-ДНК с использованием прямых и непрямых методов в экспериментах in vitro В результате проведенных исследований было установлено, что моллюскам обладает прямым антиоксидантным действием в реакциях нейтрализации активных форм кислорода и свободных радикалов.

1.1. Регистрация хлораминового комплекса, появляющегося при добавлении моллюскама к раствору гипохлорита натрия (NaClO) Моллюскам в концентрации 0,2 мг/мл связывал гипохлорит натрия в концентрации 5 мМ в течение 15 мин, образуя стабильное соединение (т.н. хлораминовый комплекс). При этом оптическая плотность, регистрируемая при = 265нм, характерная для гипохлорита натрия изменялась: регистрировался пик с максимумом поглощения при =255нм, свидетельствующий об образовании хлораминового комплекса (рис. 1). Образование хлораминового комплекса свидетельствует об инактивации гипохлорит аниона в реакционной смеси, демонстрируя способность моллюскама связывать активные формы кислорода.

Оптическая плотность Рис.1. Спектры поглощения гипохлорита натрия и комплекса гипохлоритмоллюскам.

Для н-ДНК таких исследований не проводили, т.к образование хлораминовых комплексов характерно только для некоторых аминокислот и пептидов.

1.2. Ингибирование образования свободных радикалов моллюскамом и нДНК методом обесцвечивания АВТS (2,2 азинобис-3-этил-бензотиадолин-6сульфоновой кислоты) Моллюскам ингибировал свободнорадикальный катион АВТS+, изменяя величину оптической плотности реакционной смеси. Величину антиоксидантной активности выражали в виде тролоксового эквивалента антиоксидантной емкости ТЕАС (trolox equivalent antioxidant capacity) (тролокс – синтетический аналог природного антиоксиданта токоферола). При этом моллюскам в количестве мг обеспечивал антиоксидантную активность, эквивалентную 45 мг тролокса.

Величины ТЕАС для различных готовых форм БАД «Моллюскам» (таблетки, капсулы) коррелировали с содержанием вещества моллюскам в этих формах (табл.2). В таблетированной форме БАД «Моллюскам» в антиоксидантную активность также вносит свой вклад аскорбиновая кислота.

Н-ДНК прямым антиоксидантным действием, обеспечивающим инактивацию радикала АВТS+, практически не обладала. Проявление слабой антиоксидантной активности в случае БАД «ДНКаС», наиболее вероятно, является результатом действия, входящей в ее состав аскорбиновой кислоты (табл.2).

Антиоксидантная активность моллюскама и н-ДНК БАД «Моллюскам» (таб- МКЦ – 35,5%; аскорбиновая кислота– сулы) аскорбиновая кислота – 12,5%; ДНК Умеренное антиоксидантное действие моллюскама позволяет использовать его в достаточно больших дозировках, необходимых для обеспечения включения в метаболизм различных тканей и органов. Умеренность антиоксидантного действия предпочтительна с точки зрения предотвращения дальнейшего окисления биологических субстратов, имеющего место при использовании мощных антиоксидантов, которые в высоких концентрациях становятся прооксидантами.

1.3 Определение накопления малонового диальдегида (вторичный продукт перекисного окисления липидов) в модельной системе in vitro Этот метод позволяет оценить антиоксидантные свойства веществ в условиях, наиболее приближенных к живому организму.

В результате проведенных исследований установлено статистически значимое снижение уровня МДА в сыворотке крови после добавления моллюскама, БАД «Моллюскам». Низкомолекулярная ДНК влияния на уровень МДА в системе in vitro не оказывала (табл.3).

Антиоксидантный эффект моллюскама и н-ДНК Контроль (сыворотка крови + катализатор окисления) 0,070±0, Сыворотка крови + катализатор окисления + БАВ 0,021±0, моллюскам Сыворотка крови + катализатор окисления + БАД 0,032±0, «Моллюскам» (таблетки) Сыворотка крови + катализатор окисления + БАВ н- 0,068±0, Примечание: p – значимость различий при сравнении с контролем; использован параметрический t-критерий Стьюдента для двух попарно несвязанных между собой вариационных рядов.

Таким образом, защитный эффект моллюскама проявляется в том, что он препятствует накоплению в сыворотке крови МДА – вторичного продукта перекисного окисления липидов.

II. Действие биологически активных веществ н-ДНК и моллюскама на функциональную активность нейтрофилов Фагоцитарную активность нейтрофилов исследовали в модельной системе in vitro, позволяющей оценить прямое действие веществ на фагоцитирующие клетки (нейтрофилы крови здоровых доноров инкубировали с исследуемыми БАВ в течение 60 минут при 37C в конечной концентрации – 1 мкг/мл, 10 мкг/мл, мкг/мл с последующим внесением в клеточную суспензию S. аureus и дальнейшей инкубацией в течении 30 и 120 минут).

Инкубирование нейтрофилов крови здоровых доноров с н-ДНК и моллюскамом в течение 30 минут приводило к увеличению количества клеток, участвующих в фагоцитозе, и усилению их способности поглощать S. аureus по сравнению с контролем (нейтрофилы крови здоровых доноров, инкубированные с S.

аureus).

Через 120 минут в контроле изменения фагоцитарной активности нейтрофилов не обнаружено (по сравнению с показателями, зарегистрированными через 30 минут инкубации). Динамика изменений показателей фагоцитарной активности нейтрофилов, инкубированных с исследуемыми БАВ представлена на рис. 2,3.

Рис.2. Влияние БАВ н-ДНК на функциональную активность нейтрофилов крови здоровых доноров.

Рис.3. Влияние БАВ моллюскам на функциональную активность нейтрофилов крови здоровых доноров.

Инкубирование нейтрофилов с н-ДНК в концентрации 1 мкг/мл способствует усилению поглощения микроорганизмов (ФЧ30 10,75±0,63 и ФЧ 11,77±0,66; р=0,004); при инкубировании нейтрофилов с н-ДНК в концентрации 10 мкг/мл и 100 мкг/мл значения ФЧ снижаются, что может расцениваться как усиление процессов переваривания микроорганизмов (ФЧ30 11,43±1,22 и ФЧ 9,36±1,29; р=0,001 и ФЧ30 10,84±0,42 и ФЧ120 8,04±0,58; р=0,027 соответственно);

при инкубации нейтрофилов с моллюскамом в концентрации 1 мкг/мл и 10 мкг/мл наблюдалась аналогичная динамика изменений показателей фагоцитоза (ФЧ 12,19±0,68 и ФЧ120 10,08±0,41; р=0,020 и ФЧ30 10,69±0,10 и ФЧ120 7,13±0,10;

р=0,003 соответственно).

Таким образом, н-ДНК в конечной концентрации 1мкг/мл, 10мкг/мл, 100мкг/мл и моллюскам в конечной концентрации 1мкг/мл, 10мкг/мл увеличивают количество клеток, участвующих в фагоцитозе, и усиливают их способность поглощать и переваривать S. aureus.

III. Влияние моллюскама и н-ДНК на мукоциллиарную систему воздухоносного отдела легких, показатели перекисного окисления липидов и антиоксидантной системы при общем охлаждении Выполнение данного фрагмента работы обосновано тем, что в структуре заболеваемости людей пожилого возраста значительный удельный вес занимают хронические неспецифические заболевания легких и пневмонии (Коркушко О.В., 1993; Чеботарев Д.Ф., 1997; Фещенко Ю.И., 2002). Заболевания бронхов и легких у пожилых людей характеризуются склонностью к раннему возникновению функциональной недостаточности дыхательной системы в результате истощения физиологических механизмов защиты, что определяет необходимость особых подходов к профилактике и лечению заболеваний органов дыхания у пожилых людей Экспериментальная часть работы по исследованию изменений, возникающих в эпителии слизистой оболочки трахеи и в системе ПОЛ-АОЗ при длительном холодовом воздействии выполнена на крысах (самцах) массой 200 г., которых разделили на группы:

контрольная группа (К) – интактные животные, которые содержались в стандартных условиях вивария при температуре +18 – +20°С.

контрольная группа холод (Х) - животные, подвергнутые холодовому воздействию, охлаждались в течение 28 дней по 3 часа ежедневно при температуре С.

опытные группы (ХМ) и (ХД) - животные, которые ежедневно в течение дней получали перорально моллюскам (ХМ) и н-ДНК (ХД) в дозе 10 мг/кг, после чего охлаждались в течение 28 дней по 3 часа ежедневно при температуре -15 С на фоне введения БАВ (за 30 минут до охлаждения).

В эксперименте изучали морфологическую структуру эпителия слизистой оболочки трахеи крыс. При действии холода слизистая оболочка трахеи подвергалась значительной перестройке: снижался регенерационный потенциал эпителия за счет уменьшения промежуточных и базальных клеток, увеличивалось содержание бокаловидных и мигрирующих тучных клеток, приводящее к гиперсекреции слизи (табл.4), нарушалось регулярное расположение ресничек. Вследствие этих процессов нарушался мукоциллиарный транспорт (рис.4 Б, В).

Пероральное введение крысам моллюскама оказывало выраженное защитное действие на эпителий слизистой оболочки трахеи экспериментальных животных, предупреждая изменения, характерные для холодового воздействия (нарушение регулярности расположения ресничек, исчезновение поперечных волн движения ресничек, гиперсекрецию слизи). Реснитчатый покров сохранял характерный волнообразный рельеф (рис.4 Г).

Рис.4. Поверхность слизистой оболочки трахеи крыс (сканирующая электронная микроскопия) А - интактные крысы (увеличение х 2000). На боковой поверхности трахеи обнаруживаются островки, состоящие из 5 - 15 бокаловидных клеток Б, В - крысы, подвергнутые охлаждению (увеличение х 3500). Нарушение мукоциллиарного транспорта в результате скопление слизи на поверхности ресничек (В) и их «склеивания» (Б).

Г - крысы, подвергнутые охлаждению на фоне введения моллюскама (увеличение х 5000) Сохраняется нормальный рельеф реснитчатого покрова слизистой оболочки. Между ресничками выделяются апикальные полюса бокаловидных клеток с большим количеством микроворсинок.

Слизистая оболочка животных, получавших моллюскам, как по морфологическому строению, так и по клеточному составу фактически не отличалась от таковой интактных крыс (табл.4.).

Сравнительная характеристика морфометрических показателей слизистой оболочки трахеи экспериментальных животных ста Примечание: К- контрольная группа; Х - животные, подвергнутые охлаждению; ХМ - животные, подвергнутые охлаждению на фоне введения моллюскама; p – значимость различий при сравнении с контролем (К), использован параметрический t-критерий Стьюдента для двух попарно не связанных между собой вариационных рядов.

Низкомолекулярная ДНК оказывала слабое защитное действие на эпителий слизистой оболочки трахеи экспериментальных животных, уменьшая лишь выраженность изменений, характерных для холодового воздействия.

У этих же животных были исследованы показатели перекисного окисления липидов и антиоксидантной системы в плазме крови при действии холода. Установлено, что длительное охлаждение животных сопровождается повышением содержания вторичного продукта перекисного окисления липидов - малонового диальдегида в плазме крови и снижением уровня витамина Е, являющегося природным антиоксидантом, по сравнению с интактными животными. Введение крысам, подвергнутым охлаждению, моллюскама и н-ДНК в дозе 10 мг/кг предупреждало увеличение уровня МДА, и снижение уровня витамина Е (табл. 5).

Таким образом, предварительное (перед холодовым воздействием) и последующее введение крысам моллюскама и н-ДНК предупреждает как изменения слизистой оболочки трахеи, характерные для холодового воздействия, так и усиление процесса липопероксидации, снижая расход природных антиоксидантов, в частности, витамина Е.

Показатели перекисного окисления липидов и антиоксидантной системы в плазме крови крыс Группы жи- Количество жи- Малоновый диальдегид Витамин Е (мкг/мл) Примечание: К- контрольная группа; Х - животные, подвергнутые охлаждению; ХМ - животные, подвергнутые охлаждению на фоне введения моллюскама; ХД - животные, подвергнутые охлаждению на фоне введения н-ДНК; p – значимость различий при сравнении с контролем;

использован параметрический t-критерий Стьюдента для двух попарно не связанных между собой вариационных рядов.

Моллюскам целесообразно использовать как средство защиты органов дыхания от повреждающего действия холода и с целью профилактики заболеваний органов дыхания, особенно в холодное время года.

IV.Влияние БАД «ДНКаС» и «Моллюскам» на факторы врожденного и адаптивного иммунитета у пожилых людей У обследованных пожилых людей до приема БАД «ДНКаС» и «Моллюскам» установлено снижение относительного содержания CD3+, CD4+, CD8+лимфоцитов, показателей спонтанного НСТ-теста, повышение уровня IgA в сыворотке крови и относительного содержания CD20+- лимфоцитов по сравнению с возрастными нормами. После приема БАД «Моллюскам» и «ДНКаС» в этих группах выявлено увеличение относительного содержания CD3+-, CD4+-, CD8+лимфоцитов (табл. 6). При анализе изменений показателей иммунного статуса после приема БАД «ДНКаС» и БАД «Моллюскам с учетом исходного уровня показателей были выделены три подгруппы пожилых людей:

1. с высокими показателями иммунного статуса (значения показателей, находящиеся в пределах верхней границы нормы и/или выше границ нормальных значений);

2. со средне-нормальными значениями (показатели, находящиеся на уровне средних значений физиологической возрастной нормы);

3. со сниженными показателями иммунного статуса (значения показателей, находящиеся в пределах нижней границы нормы и/или ниже границ средненормальных значений физиологической возрастной нормы).

После приема БАД «ДНКаС» и «Моллюскам» были выявлены следующие закономерности: в группе пожилых людей с высокими показателями клеточного иммунитета наблюдалась нормализация до средне-нормальных значений; у пожилых людей со средними значениями показатели не изменялись; при сниженных значениях показателей отмечалось их повышение до уровня средненормальных значений.

Относительное содержание CD3+-лимфоцитов в группе пожилых людей с высокими показателями после приема БАД «ДНКаС» и «Моллюскам» незначительно снижалось (с 67,1±0,9% до 62,7±1,6%; р=0,039 и с 66,8±0,7 % до 62,1±1,6 %; р=0,066 соответственно), оставаясь в границах физиологической возрастной нормы. В том случае, когда показатели были снижены, относительное содержание CD3+-лимфоцитов повышалось (с 47,7±1,1% до 61,6±1,3%; р=0,0001 и с 46,4±1,2 % до 60±1,3 %; р=0,0001 соответственно).

Относительное содержание CD4+-лимфоцитов практически у всех пожилых находилось на уровне нижней границы физиологической нормы, либо было ниже ее. После приема БАД «ДНКаС» и «Моллюскам» содержание СD4+лимфоцитов увеличивалось (с 28,9±0,72% до 34,1±0,58%; р=0,0001 и с 28,1±0,9% до 34,8±0,9%; р=0,0001 соответственно).

Относительное содержание субпопуляции CD8+ цитотоксических лимфоцитов/ супрессоров после приема БАД «ДНКаС» и «Моллюскам» у пожилых людей в группе со средне-нормальными значениями показателей незначительно снижалось или не изменялось. В том случае, когда показатели были снижены, относительное содержание этих клеток увеличивалось (с 19,5±0,84% до 27,6±0,61%;

р=0,0001 и с 18,9±0,9% до 23,8±0,8%; р=0,0001 соответственно).

Для пожилого возраста характерно снижение не только противомикробного иммунитета, но и противовирусной и противоопухолевой защиты, в которой принимают участие натуральные киллеры (NК-клетки). В наших исследованиях после приема БАД «ДНКаС» и «Моллюскам» у лиц с низкими показателями содержание CD16+-лимфоцитов увеличивалось (с 8,4±0,35% до 13,9±2,4%; р=0,05 и с 8,4±0,7% до 14,6±3,1%; р=0,065 соответственно). У пожилых людей с высокими показателями CD16+-лимфоцитов после приема БАД «Моллюскам» наблюдалась нормализация данного показателя до уровня средне-нормальных значений (с 22,9±1,6% до 11,5±1,7% р=0,0001). В группе обследуемых со средними показателями значимых изменений не выявлено.

Абсолютное количество В-клеток у пожилых людей, по данным литературы, не изменяется, однако относительное содержание может возрастать с возрастом, как следствие усиления поликлональной активации, связанной со снижением содержания Т-лимфоцитов, а также супрессорной функции CD8+ - лимфоцитов (Макинодан Т., 1980; Хаитов Р.М. с соавт., 1995). В результате проведенных исследований мы также установили, что у большинства пожилых относительное содержание этих клеток находилось на уровне верхней границы физиологической нормы, либо было выше ее. После приема БАД «Моллюскам» у людей с высокими показателями относительного содержания В-лимфоцитов выявлена тенденция к его снижению (с 25,2±1,5 % до 21,4±1,6 %; р=0,055). На фоне приема БАД «ДНКаС» у всех обследуемых пожилых людей независимо от исходного уровня показателя относительное содержание В-лимфоцитов увеличивалось (с 21,1±2,3% до 31,2±2,0%; р=0,001). При этом, чем ниже был исходный уровень Влимфоцитов, тем более выраженной была стимуляция.

С возрастом часто наблюдается развитие дисбаланса основных классов иммуноглобулинов: в периферической крови уменьшается концентрация IgM, Показатели иммунного статуса у пожилых людей до и после приема БАД «ДНКаС» и «Моллюскам»

Показатели Единицы Возрастные До приема БАД После приема БАД До приема БАД После приема БАД НСТ-тест НСТ-тест Примечание: *p – значимость различий при сравнении с показателями, полученными до приема БАД (использован параметрический t-критерий Стьюдента для двух попарно связанных между собой вариационных рядов); p – значимость различий при сравнении с показателями, полученными до приема БАД (использован непараметрический W-критерий Уилкоксона).

уровень IgA и IgG увеличивается (Кишов М.Г.с соавт.,1996). Такое соотношение иммуноглобулинов, отражающее доминирование Th2 - иммунного ответа у людей пожилого возраста, приводит к снижению противомикробной защиты и повышению восприимчивости к инфекциям (Петров Р.В., 1984; Сепиашвили Р.И., 2003).

В наших исследованиях у большинства пожилых людей выявлена подобная закономерность, а также установлено модулирующее действие БАД «ДНКаС» и «Моллюскам», зависящее от исходного уровня иммуногобулинов.

При оценке фагоцитарной активности нейтрофилов периферической крови было установлено, что у пожилых людей со сниженными значениями показателей фагоцитарной активности после приема БАД «ДНКаС» наблюдалось увеличение ФП (с 63±1,9% до 79±4,7%; р=0,022), поглотительная способность нейтрофилов при этом не изменялась. После приема БАД «Моллюскам» увеличивался как ФП (с 53,6±2,4% до 67,2±3,6%; р=0,031), так и ФЧ (с 2,42±0,23 до 2,76±0,17;

р=0,01). У обследованных лиц с высокими значениями фагоцитоза (что может быть отражением максимального уровня напряжения резервных способностей) показатели не изменялись.

Основой кислородзависимого механизма цитотоксичности нейтрофилов, ответственного за разрушение бактерий, является способность к продукции активных форм кислорода (т.н. респираторный взрыв) (Фрейдлин И.С., 1998). Сравнительное изучение спонтанного и индуцированного НСТ-теста позволяет судить о функциональной активности и потенциальных ресурсах бактерицидной системы нейтрофилов.

В результате проведенных исследований было установлено, что показатели спонтанного и индуцированного НСТ-теста у пожилых людей были значительно снижены. После приема БАД «ДНКаС» показатели спонтанного НСТ-теста снижались (с 37,5±4,51 до 22,1±4,35; р=0,013), а индуцированного НСТ-теста - повышались (с 108,2±14,2 до 188,6±10,5; р=0,0001), что свидетельствует об увеличении резервного потенциала нейтрофилов (табл. 6).

Полученные результаты позволяют предположить, что даже сниженные (по отношению к лицам среднего возраста) показатели спонтанного НСТ-теста у пожилых людей могут свидетельствовать о напряжении бактерицидной системы, что в свою очередь может быть связано с наличием в органах и тканях у лиц данной возрастной группы персистирующих бактерий и вирусов. Прием БАД «ДНКаС» приводит систему генерации АФК нейтрофилов в спокойное состояние, что соответственно влечет за собой увеличение резервных возможностей фагоцита. После приема БАД «Моллюскам» значимых изменений со стороны бактерицидной системы нейтрофилов выявлено не было.

Анализируя полученные данные после применения БАД «Моллюскам» и «ДНКаС», мы установили, что влияние данных БАД на организм пожилого человека неоднозначно и зависит от исходного уровня показателей иммунной системы: повышает – если показатели были снижены, снижает – если показатели были высокими и не изменяет - если они были в пределах средне-нормальных значений.

Таким образом, БАД «ДНКаС» оказывает модулирующее действие на клеточный и гуморальный иммунитет у пожилых людей, оказывает умеренное стимулирующее влияние на В-лимфоциты и увеличивает функциональнометаболические резервы нейтрофилов. БАД «Моллюскам» оказывает модулирующее влияние на показатели клеточного и гуморального иммунитета, зависящее от исходных значений и не влияет на активность кислородзависимого метаболизма нейтрофилов.

V. Влияние БАД «ДНКаС» и «Моллюскам» на показатели системы перекисного окисления липидов и антиоксидантной защиты (ПОЛ-АОЗ) у пожилых людей Исследование системы перекисного окисления липидов и антиоксидантной защиты (ПОЛ-АОЗ) у пожилых людей показало, что у четверти обследуемых показатели находились на уровне нормальных значений. В 20% случаев наблюдалось повышенное содержание МДА в эритроцитах, при этом уровень АОА был также повышен. Эти факты свидетельствуют о том, что у этих людей компенсаторные возможности функционирования системы ПОЛ-АОЗ сохранены, что выражается в повышении антиокислительной активности плазмы крови в ответ на высокий уровень МДА. В то же время большая часть обследованных пожилых людей имела сниженные значения МДА, показатель АОА при этом незначительно превышал верхнюю границу нормальных значений. Сниженный уровень МДА является неблагоприятным показателем перекисного гомеостаза и отражает снижение обменных процессов в мембране клетки (Банкова В.В., 1990).

Анализ изучаемых показателей системы ПОЛ-АОЗ после приема БАД «ДНКаС» выявил повышение уровня МДА в эритроцитах у лиц с исходным низким уровнем этого показателя (с 5,6 ±0,31 до 7,4±0,31 мкмоль/гНв, р=0,001). Показатели АОА плазмы значимо не изменялись, соотношение МДА/АОА, свидетельствующее об уровне липопероксидации, нормализовалось (табл. 7).

У пожилых людей с исходными высокими и нормальными значениями уровня МДА в эритроцитах значимые изменения после приема БАД «ДНКаС» не выявлены, интегральный показатель АОА также значимо не изменялся, соотношение МДА/АОА соответствовало нормальным значениям.

Состояние системы ПОЛ-АОЗ у пожилых людей после приема БАД « ДНКаС»

Показатель Возрастные значения показателей Примечание: в числителе – значения показателей до приема БАД, в знаменателе - значения показателей после приема БАД; p – значимость различий при сравнении с показателями, полученными до приема БАД; использован параметрический t-критерий Стьюдента для двух попарно связанных между собой вариационных рядов.

После приема БАД «Моллюскам» независимо от исходного состояния системы ПОЛ-АОЗ отмечено повышение интегрального показателя АОА крови (с 64,9±2,28 до 71,3±9,27%, р=0,005) и снижение содержания конечного продукта пероксидации МДА (с 6,62±0,16 до 5,56±0,27 мкмоль/гНв, р=0,014), при этом показатель МДА/АОА также снижался (табл. 8).

Состояние системы ПОЛ-АОЗ у пожилых людей после приема БАД «Моллюскам»


МДА/АОА Примечание: p – значимость различий при сравнении с показателями, полученными до приема БАД; использован параметрический t-критерий Стьюдента для двух попарно связанных между собой вариационных рядов.

Таким образом, БАД «ДНКаС» оказывает регулирующее действие на процессы липопероксидации (восстанавливает баланс между процессами перекисного окисления липидов и механизмами антиоксидантной защиты клетки). БАД «Моллюскам» обладает антиоксидантным действием, снижая в эритроцитах уровень МДА и повышая АОА плазмы крови, при этом баланс между процессами перекисного окисления липидов и механизмами антиоксидантной защиты клетки смещается в сторону последней.

Полученные результаты позволяют рекомендовать применение БАД «ДНКаС» для коррекции возрастного иммунодефицита и восстановления баланса между процессами перекисного окисления липидов и механизмами антиоксидантной защиты у лиц пожилого возраста. БАД «Моллюскам» также может быть рекомендована для нормализации показателей иммунной системы и профилактики состояний, сопровождающихся интенсификацией свободнорадикальных процессов.

Представленные в настоящей работе данные, являются экспериментальным и клиническим обоснованием возможного создания на основе биологически активных веществ н-ДНК и моллюскама новых эффективных лекарственных препаратов.

ВЫВОДЫ

1. Моллюскам обладает прямым антиоксидантным действием: связывает и инактивирует гипохлорит анион, ингибирует свободнорадикальный катион АВТS+, снижает уровень МДА в реакционной смеси. Моллюскам и н-ДНК стимулируют in vitro функциональную активность нейтрофилов крови здоровых доноров, увеличивая количество клеток, участвующих в фагоцитозе и усиливая их способность поглощать и переваривать S. aureus.

2. Моллюскам предупреждает изменения слизистой оболочки трахеи при холодовом стрессе у экспериментальных животных.

3. БАД «ДНКаС» у пожилых людей оказывает иммуномодулирующее действие на клеточный (CD3+-, CD4+-,CD8+-,СD16+- лимфоциты) и гуморальный иммунитет (IgG, IgА, IgМ), стимулирует пролиферацию В-лимфоцитов и фагоцитарную активность нейтрофилов, увеличивает функционально-метаболические резервы нейтрофилов.

4. БАД «Моллюскам» у пожилых людей оказывает иммуномодулирующее влияние на показатели клеточного (CD3+-, CD4+-,CD8+-,СD16+-,СD20+- лимфоциты) и гуморального иммунитета (IgG, IgА, IgМ), стимулирует фагоцитарную активность нейтрофилов.

5. БАД «ДНКаС» у пожилых людей оказывает регулирующее действие на процессы липопероксидации: восстанавливает баланс между процессами перекисного окисления липидов и механизмами антиоксидантной защиты клетки.

БАД « Моллюскам» оказывает антиоксидантное действие, снижая в эритроцитах уровень МДА и повышая АОА плазмы крови.

Список опубликованных научных работ по теме диссертации 1. Шутикова А.Л., Запорожец Т.С., Эпштейн Л.М., Серебрякова М.Ф., Корнеева Н.А. Влияние БАД «ДНКаС» на показатели клеточного и гуморального иммунитета у лиц пожилого и старческого возраста// Бюллетень ВСНЦ СО РАМН. 2005.

№4. С.101-102.

2. Шутикова А.Л., Серебрякова М.Ф. Влияние БАД «ДНКаС» на иммунный статус лиц пожилого возраста// Материалы итоговой научно-практической конференции с международным участием «Вопросы сохранения и развития здоровья населения Севера и Сибири». Красноярск, 2005. вып.4. С.445.

3. Шутикова А.Л. Коррекция иммунных нарушений БАД «Моллюскам» в геронтологии // Актуальные проблемы технологии живых систем: материалы международной научно-технической конференции молодых ученых. ТГЭУ, Владивосток, 2005. С.443.

4. Шутикова А.Л., Запорожец Т.С., Серебрякова М.Ф., Корнеева Н.А.,. Эпштейн Л.М Влияние БАД «ДНКаС» на показатели клеточного и гуморального иммунитета у лиц пожилого возраста // ЖМЭИ. 2006. №3. С.68-71.

5. Шутикова А.Л., Запорожец Т.С., Пивненко Т.Н., Эпштейн Л.М. Антиоксидантная активность БАВ «Моллюскам» в экспериментах in vitro // Материалы региональной научной конференции «Исследования в области физикохимической биологии и биотехнологии». ТИБОХ ДВО РАН, Владивосток, 2006.

С.138.

6. Шутикова А.Л., Т.С. Запорожец, Эпштейн Л.М. Влияние БАД «Моллюскам»

на показатели клеточного и гуморального иммунитета у лиц пожилого возраста // Дальневосточный медицинский журнал. 2006. №3. С.48-50.

7. Давидович В.В., Пивненко Т.Н., Шутикова А.Л., Аюшин Н.Б. Содержание свободных аминокислот и гистидинсодержащих дипептидов в двустворчатых и головоногих моллюсках – перспективных источниках получения биологически активных добавок // Известия ТИНРО-центра. 2006. Т.147. С.333-339.

8. Шутикова А.Л., Запорожец Т.С. Влияние БАВ «Моллюскам» на мукоциллиарную систему при холодовом воздействии // Аллергология и иммунология. 2007.

Т.8, №1. С.156 (Материалы V Всемирного конгресса по иммунопатологии и аллергии, V Европейского конгресса по астме, Москва, 2007).

9. Шутикова А.Л., Запорожец Т.С., Серебрякова М.Ф., Корнеева Н.А., Беседнова Н.Н., Эпштейн Л.М. Использование биологически активных добавок к пище «ДНКаС» и «Моллюскам» для коррекции нарушений иммунной и антиоксидантной систем у пожилых людей (методические рекомендации). Владивосток: ГУ НИИЭМ СО РАМН, 2007. 35 с.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

АФК – активные формы кислорода АОА – антиокислительная активность БАВ – биологически активное вещество БАД – биологически активная добавка к пище МДА – малоновый диальдегид н-ДНК – низкомолекулярная дезоксирибонуклеиновая кислота НСТ-тест – тест восстановления нитросинего тетразолия ПОЛ-АОЗ – перекисное окисление липидов - антиоксидантная защита ФП – фагоцитарный показатель ФЧ – фагоцитарное число АВТS –2,2 азинобис-3-этил-бензотиадолин-6-сульфоновая кислота CD – cell differentiation antigen или claster definition – антигены кластеров дифференцировки клеток Ig G, M, A – иммуноглобулины G, M, A NK-клетки – натуральные киллерные клетки ТЕАС – trolox equivalent antioxidant capacity

 


Похожие работы:

«Шавырин Дмитрий Александрович ДИАГНОСТИКА И ХИРУРГИЧЕСКОЕ ЛЕЧЕНИЕ ОПУХОЛЕЙ И ОПУХОЛЕПОДОБНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ КОСТЕЙ, ОБРАЗУЮЩИХ КОЛЕННЫЙ СУСТАВ, У ВЗРОСЛЫХ 14.01.15 – травматология и ортопедия Автореферат на соискание ученой степени доктора медицинских наук Москва – 2014 Работа выполнена в ФГБУ Центральный научно-исследовательский институт травматологии и ортопедии имени Н.Н. Приорова Минздрава России. Научный консультант : Доктор медицинских наук, профессор Балберкин Александр...»

«КИСЕЛЕВ Александр Владимирович МЕСТНООБЕЗБОЛИВАЮЩАЯ АКТИВНОСТЬ ПРОИЗВОДНЫХ ИНДОЛА И ИМИДАЗО[1,2-а]БЕНЗИМИДАЗОЛА В СОЧЕТАНИИ С ВИСКОЭЛАСТИКОМ ВИЗИТОНОМ-ПЭГ ПРИ ЭПИБУЛЬБАРНОЙ И ВНУТРИКАМЕРНОЙ АНЕСТЕЗИИ ГЛАЗА 14.03.06 – фармакология, клиническая фармакология Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Старая Купавна – 2014 2 Работа выполнена на кафедре фармакологии Государственного бюджетного образовательного учреждения высшего...»

«Озорнина Ольга Сергеевна ПАТОФИЗИОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ ПРИМЕНЕНИЯ МАТЕРИАЛОВ НА ОСНОВЕ КСЕНОКОЛЛАГЕНА ПРИ ХИРУРГИЧЕСКОМ ЛЕЧЕНИИ ПРОГРЕССИРУЮЩЕЙ БЛИЗОРУКОСТИ (экспериментально – клиническое исследование) 14.03.03. – патологическая физиология 14.01.07. – глазные болезни АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Москва 2010 г. Работа выполнена на кафедре общей патологии и патологической физиологии Российского Университета Дружбы Народов и...»

«. На Бокучава Татьяна Анатольевна Длительная вентиляция барабанной полости при хирургическом лечении больных с хроническим гнойным средним отитом 14.01.03 – болезни уха, горла и носа АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Санкт-Петербург - 2010 Работа выполнена в Государственном учреждении здравоохранения Мурманская областная клиническая больница им. П.А.Баяндина и ФГУ Санкт-Петербургский НИИ уха, горла, носа и речи Росмедтехнологий Научный...»

«Джорджикия Тамара Роиновна ЭЛЕКТРОФИЗИОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА И РЕЗУЛЬТАТЫ ИНТЕРВЕНЦИОННОГО ЛЕЧЕНИЯ ФИБРИЛЛЯЦИИ ПРЕДСЕРДИЙ У ПАЦИЕНТОВ МОЛОДОГО ВОЗРАСТА (14.00.06 – КАРДИОЛОГИЯ) АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Москва - 2009 г. 2 Работа выполнена в Научном Центре сердечно-сосудистой хирургии им. А.Н. Бакулева РАМН. Научный руководитель : Член-корреспондент РАМН, профессор, Ревишвили Амиран Шотаевич доктор медицинских наук...»

«Бен Эль Хафи Хассан Профилактика посттравматических контрактур локтевого сустава при лечении около- и внутрисуставных переломов дистального отдела плечевой кости 14.01.15 – травматология и ортопедия АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Ярославль 2010 Работа выполнена на кафедре травматологии, ортопедии и ВПХ Ярославской государственной медицинской академии Научный руководитель Заслуженный деятель науки РФ, доктор медицинских наук,...»

«. Ярбеков Рустам Раимкулович Современные подходы к хирургическому лечению больных ИБС в сочетании с атеросклеротическим поражением сонных артерий (14.00.44 – сердечно - сосудистая хирургия) Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Москва – 2009 г. Диссертационная работа выполнена в Научном Центре сердечно сосудистой хирургии им. А. Н. Бакулева РАМН. НАУЧНЫЙ РУКОВОДИТЕЛЬ: Доктор медицинских наук, профессор Пирцхалаишвили Зураб...»

«Глечян Ануш Михайловна Клиническая эффективность периндоприла и его влияние на диастолическую функцию и ремоделирование левого желудочка, жесткость магистральных артерий и эндотелий – зависимую вазодилатацию у пациентов с артериальной гипертонией и сердечной недостаточностью c сохраненной систолической функцией левого желудочка. 14.01.05– кардиология 14.01.13 - лучевая диагностика, лучевая терапия АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук...»

«ЛЕДНЕВ Олег Андреевич ОЦЕНКА ХРОНОФАРМАКОЛОГИЧЕСКОЙ ЭФФЕКТИВНОСТИ ФОЗИНОПРИЛА И ЕГО КОМБИНАЦИИ С МЕЛАТОНИНОМ У ПОЖИЛЫХ БОЛЬНЫХ ПРИ АРТЕРИАЛЬНОЙ ГИПЕРТЕНЗИИ И ИШЕМИЧЕСКОЙ БОЛЕЗНИ СЕРДЦА 14.03.06 – Фармакология, клиническая фармакология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Старая Купавна-2014 Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении Научный центр экспертизы средств медицинского применения Министерства...»

«Саидова Айна Салавдиновна ОПТИМИЗАЦИЯ ЛЕЧЕНИЯ СТРЕССОВОГО И СМЕШАННОГО ТИПОВ НЕДЕРЖАНИЯ МОЧИ У ЖЕНЩИН С ПОМОЩЬЮ ОБЪЕМООБРАЗУЮЩЕГО СРЕДСТВА ДЕКСТРАНОМЕР/ГИАЛУРОНОВОЙ КИСЛОТЫ 14.01.01 акушерство и гинекология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Москва-2011 Работа выполнена в гинекологическом отделении восстановительного лечения ФГБУ Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии им. академикаВ.И. Кулакова Минздравсоцразвития...»

«КУЗНЕЦОВА Елена Петровна РЕАБИЛИТАЦИЯ РЕПРОДУКТИВНОЙ ФУНКЦИИ ЖЕНЩИН ПРИ КИСТАХ И ДОБРОКАЧЕСТВЕННЫХ ОПУХОЛЯХ ЯИЧНИКОВ 14.01.01 – акушерство и гинекология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук Москва 2011 2 Работа выполнена на кафедре акушерства и гинекологии ФПК и ПП государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования Ижевская государственная медицинская академия Министерства здравоохранения и социального...»

«ПЕТРОВ АНДРЕЙ СЕРГЕЕВИЧ СРАВНИТЕЛЬНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАЗЛИЧНЫХ МЕТОДОВ ОЦЕНКИ ЛИМФОГЕННОГО МЕТАСТАЗИРОВАНИЯ НЕМЕЛКОКЛЕТОЧНОГО РАКА ЛЕГКОГО И ИХ РОЛЬ В ОПТИМИЗАЦИИ ТАКТИКИ ЛЕЧЕНИЯ 14.01.17 – хирургия, 14.01.12 – онкология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Санкт-Петербург 2011 г. Работа выполнена на кафедре госпитальной хирургии Медицинского факультета Федерального государственного...»

«Акимов Дмитрий Владимирович УЛЬТРАЗВУКОВОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ В КОМПЛЕКСНОЙ ДИАГНОСТИКЕ И ОЦЕНКЕ ЭФФЕКТИВНОСТИ ЛЕЧЕНИЯ БОЛЬНЫХ С ГИНЕКОМАСТИЕЙ 14.01.13 - лучевая диагностика, лучевая терапия АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Москва - 2014 Работа выполнена на кафедре ультразвуковой диагностики и хирургии ФПК МР ФГБОУ ВПО РУДН Минобрнауки России (ректор - академик РАО, профессор Филиппов В.М.). Научный руководитель : Доктор медицинских...»

«ЖАРОВСКИХ Олег Сергеевич ПРОГНОЗ И ПРОФИЛАКТИКА ГНОЙНЫХ ОСЛОЖНЕНИЙ ПРИ ЭНДОПРОТЕЗИРОВАНИИ ТАЗОБЕДРЕННОГО СУСТАВА У БОЛЬНЫХ ПОЖИЛОГО И СТАРЧЕСКОГО ВОЗРАСТА 14.01.17 - хирургия 14.01.15 – травматология и ортопедия Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Санкт-Петербург 2013 Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования Северо-Западный государственный медицинский университет им....»

«ИСАКАДЗЕ НАТАЛИА АМИРАНОВНА Сравнительная оценка результатов эндоваскулярного и открытого хирургического лечения дефекта межжелудочковой перегородки “Кардиология” (14.01.05) Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Москва 2010 г. 2 Диссертационная работа выполнена в Научном Центре сердечно - сосудистой хирургии имени А.Н.Бакулева Российской академии медицинских наук. Научны е руководители: Академик РАМН, профессор, доктор медицинских наук...»

«ГАСАНОВ Нуцалхан Гаджиевич ПРОФИЛАКТИКА СПАЕЧНОЙ БОЛЕЗНИ ПРИ ХИРУРГИЧЕСКОМ ЛЕЧЕНИИ ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫХ ОПУХОЛЕЙ ОРГАНОВ ЖИВОТА 14.01.17 – хирургия Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук Москва – 2012 1 Работа выполнена в Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования Московский государственный медико-стоматологический университет им. А.И. Евдокимова (ректор – Заслуженный врач РФ, доктор медицинских...»

«БЕКЯШЕВ АЛИ ХАСЬЯНОВИЧ КЛИНИКО-МОРФОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ИНФИЛЬТРАТИВНЫХ МЕНИНГИОМ ОСНОВАНИЯ ЧЕРЕПА С ИНТРА-, ЭКСТРАКРАНИАЛЬНЫМ РАСПРОСТРАНЕНИЕМ 14.00.28 – нейрохирургия 14.00.15 – патологическая анатомия АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук Москва-2009 Работа выполнена в ГУ НИИ нейрохирургии им. акад. Н.Н.Бурденко РАМН Научные консультанты: доктор медицинских наук, профессор ЧЕРЕКАЕВ Василий Алексеевич доктор медицинских наук,...»

«ЧЕЛНОКОВА Наталья Олеговна ПАТОМОРФОЛОГИЧЕСКОЕ ОБОСНОВАНИЕ ВЫБОРА ХИРУРГИЧЕСКОЙ ТАКТИКИ ОПЕРАЦИЙ В БАССЕЙНЕ ПРАВОЙ ВЕНЕЧНОЙ АРТЕРИИ НА ОСНОВЕ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ И МАТЕМАТИЧЕСКОГО МОДЕЛИРОВАНИЯ НАРУШЕНИЙ ГЕМОДИНАМИКИ 14.03.02 – патологическая анатомия 14.01.17 – хирургия АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Саратов – 2014 Работа выполнена в Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования...»

«ФАЙЗУЛЛАЕВ РАВШАН БАХОДЫРОВИЧ ГИГАНТСКИЕ АДЕНОМЫ ГИПОФИЗА (КЛИНИКА, ДИАГНОСТИКА, ХИРУРГИЧЕСКОЕ ЛЕЧЕНИЕ) 14.00.28 – нейрохирургия АВТОРЕФЕРАТ ДИССЕРТАЦИИ НА СОИСКАНИЕ УЧЕНОЙ СТЕПЕНИ ДОКТОРА МЕДИЦИНСКИХ НАУК Москва - 2009 Работа выполнена в ГУ Научно-исследовательский институт нейрохирургии им. акад. Н.Н. Бурденко РАМН Научный консультант : Доктор медицинских наук, профессор Кадашев Борис Александрович Официальные оппоненты : доктор медицинских наук Лазарев Валерий...»

«БАЗАРОВА НАДЕЖДА ЦЫРЕНОВНА НООТРОПНОЕ ДЕЙСТВИЕ РАСТИТЕЛЬНОГО СРЕДСТВА НООФИТ 14.03.06 – фармакология, клиническая фармакология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Улан-Удэ – 2013 Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении науки Институт общей и экспериментальной биологии Сибирского отделения Российской академии наук Научный руководитель : Николаев Сергей Матвеевич – доктор медицинских наук, профессор...»






 
© 2013 www.diss.seluk.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Авторефераты, Диссертации, Монографии, Методички, учебные программы»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.