WWW.DISS.SELUK.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА
(Авторефераты, диссертации, методички, учебные программы, монографии)

 

На правах рукописи

КРИВЦОВ АЛЕКСЕЙ ОЛЕГОВИЧ

ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ ЛЕЦИТИНА С КОМПЛЕКСАМИ ДНК:

ФАЗОВЫЕ РАВНОВЕСИЯ И МОЛЕКУЛЯРНАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ

02.00.04 – Физическая химия

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата

химических наук

Казань - 2013

Работа выполнена в федеральном государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Казанский национальный исследовательский технологический университет»

Научный руководитель: доктор химических наук, доцент Билалов Азат Вагизович

Официальные оппоненты: Соломонов Борис Николаевич доктор химических наук, профессор, ФГАОУ ВПО «Казанский (Приволжский) федеральный университет», заведующий кафедрой физической химии Бакеева Роза Фаридовна доктор химических наук, профессор, ФГБОУ ВПО «Казанский национальный исследовательский технологический университет», профессор кафедры аналитической химии, сертификации и менеджмента качества,

Ведущая организация: Федеральное государственное бюджетное образовательное учереждение высшего профессионального образования «Российский химико-техно- логический университет им. Д.И.

Менделеева»

Защита состоится «17» декабря 2013 г. в 10 часов на заседании диссертационного совета Д 212.080.03 на базе Казанского национального исследовательского технологического университета по адресу: 420015, Казань, ул. К.Маркса, 68 (зал заседаний Ученого совета, А-330).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Казанского национального исследовательского технологического университета Автореферат разослан ” ” ноября 2013 г.

Ученый секретарь диссертационного совета А.Я. Третьякова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Системы содержащие ДНК, многозарядные катионы и фосфолипиды имеют важное биологическое и биотехнологическое значение. В клеточных ядрах эукариотик наблюдаются сложные взаимодействия между ДНК, катионными белками и липидами, самоассоциирущимися друг с другом с образованием сложных структур. Эта самоорганизация все еще далека от детального понимания, в частности это касается и взаимодействия с липидами. Кроме того, выявление закономерностей взаимодействия цвиттерионных липидов и ДНК помогло бы усовершенствовать физико-химическую основу создания липоплексов для невиральной генной терапии. Липоплексы представляют собой невиральные векторы доставки генной информации в клетку, они содержат специальным образом упакованную и защищенную ДНК в капсуле липидной мембраны.




Интерес со стороны физиков, химиков и биологов к системам ПАВ-ДНК обусловлен еще и тем, что небольшая пертурбация состава системы, незначительное изменение температуры, давления или концентрации может оказаться достаточной, чтобы вызвать существенные структурные изменения.

Современный уровень развития методов анализа, прежде всего спектроскопии, позволяет получать количественные данные о таких свойствах, как подвижность молекулярных ансамблей, упаковка ДНК, ее транспортировка через мембрану, самоассоциация в вирусах и т.д.

Цели и задачи работы. Целью настоящей работы являлось установление морфологии систем на основе лецитина и комплексов катионное ПАВ-ДНК и полиамин-ДНК, выявление механизма самоорганизации и закономерностей ДНК-липидных взаимодействий в этих системах, а также оптимизация рецептуры получения микродисперсий на основе лецитина и комплекса катионное ПАВ-ДНК.

Для достижения поставленной цели в работе решались следующие задачи:

1) Синтез 1:1 (стехиометрическое отношение зарядов) комплексов ДНК с катионными ПАВ и полиаминами.

2) Установление изобарно-изотермических фазовых диаграмм и структуры фаз трехкомпонентных систем комплекс ДНК-лецитин-вода.

3) Оценка влияния различных факторов (строения молекулы противоиона, соотношения между компонентами, молекулярной массы ДНК) на взаимодействие лецитина с комплексом ДНК.

4) Получение агрегативно-устойчивой ДНК-липидной дисперсии, пригодной для использования при in vivo исследованиях.

Научная новизна и практическая значимость работы заключается в обнаружении новых закономерностей, имеющих важное значение, как для теоретических положений о фазовых переходах и процессах самоассоциации в ДНК-липидных системах, так и для практических способов их использования.

Впервые экспериментально получены фазовые диаграммы лиотропных систем дидодецилдиметиламмонийный комплекс ДНК (ДДА-ДНК)-лецитинвода, сперминовый комплекс ДНК (Спм-ДНК)-лецитин-вода и спермидиновый комплекс ДНК (Спд-ДНК)-лецитин-вода; на основании анализа микроструктуры и физико-химических свойств фаз установлен механизм влияния структуры противоиона ДНК на морфологию систем.

Оптимизирован способ диспергирования амфифильных комплексов ДНК.

Впервые предложено использование этанольного раствора комплекса катионное ПАВ-ДНК в качестве «инжекторного» и раствора цвиттерионного фосфолипида в качестве «стабилизирующего» для получения липоплекса методом «solvent shifting»; подобраны составы растворов.





Работа выполнена на кафедре физической и коллоидной химии технологический университет».

комплексы ДНК, проводилось автором в лаборатории кафедры Физическая химия университета г. Лунда (Швеция) под руководством профессора Ульфа Олссона в соавторстве с профессором Бъёрном Линдманом.

В университете города Лунд состоялось три стажировки, первая стажировка проходила весной 2011 года и финансировалась из средств гранта профессора Ульфа Олссона, вторая стажировка была оплачена из личных средств, а третья была осуществлена при поддержке системы грантов РТ «Алгарыш».

проведенных им (лично или при непосредственном участии) исследований всеми использованными в работе методами. Автору принадлежит решающая роль в обобщении и интерпретации представленных результатов.

Автор выражает свою искреннюю признательность всем коллегам, внесшим тот или иной вклад в реализацию настоящей работы, и глубочайше благодарен своим учителям и соавторам: А.В.Билалову, У.Олссону и Б.Линдману.

Апробация работы. Результаты диссертационной работы докладывались и обсуждались на IV международной конференции по коллоидной химии и физико-химической механике, проходившей в Москве в июле 2013 года, на Всероссийской молодежной конференции «Химия поверхности и нанотехнология», проходившей в Казани в октябре 2012 года, а также на научных сессиях КНИТУ в 2012 и 2013 годах.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 4 работы, в том числе статьи в журналах, входящих в перечень ВАК РФ, и 2 тезиса по докладам на конференциях всероссийского и международного уровня.

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 134 страницах, содержит 51 рисунок, 1 таблицу. Диссертация состоит из введения, 4-х глав, выводов, библиографии, включающей 110 ссылок Введение отражает актуальность выбранной темы диссертации, цели исследования и задачи, научную новизну и практическую значимость.

Первая глава (литературный обзор) включает четыре подраздела. В первом подразделе приведены основные положения о состоянии ПАВ в разбавленных и концентрированных растворах. Во втором подразделе обосновывается выбор полимера и излагаются некоторые особенности физикохимических свойств ДНК в растворе. В третьем подразделе изложены современные представления об основных закономерностях взаимодействия ДНК-ПАВ в разбавленных и концентрированных растворах. Четвертый подраздел посвящен практическому применению ДНК-липидных систем.

Во второй главе приведены физико-химические свойства объектов исследования, описаны методы приготовления образцов, а также обоснованы применяемые методы исследования и приведены методы расчетов некоторых параметров.

Третья глава посвящена обсуждению результатов исследования трехкомпонентных систем комплекс катионное ПАВ-ДНК:лецитин:вода В четвертой главе обсуждаются закономерности, выявленные при изучении систем комплекс полиамин-ДНК:лецитин:вода.

Пятая глава фокусирует внимание на трактовке закономерностей, додецилтриметиламмонийного комплекса ДНК (ДТА-ДНК).

На защиту выносятся следующие положения:

Структура гидратированных агрегатов ПАВ-ДНК. Влияние молекулярной массы и полидиспесрности ДНК на структуру агрегатов.

Фазовые равновесия и структуры фаз в трехкомпонентных системах ДДАДНК/лецитин/вода и ДТА-ДНК/лецитин/вода. Особенности взаимодействия лецитина с двух-цепочечными амфифильными противоионами ДНК в сравнении с одно-цепочечными. Расчет теоретической фазовой диаграммы на основании простых геометрических моделей ЖК фаз.

Фазовые равновесия в системах Спм-ДНК/лецитин/вода и СпдДНК/лецитин/вода. Влияние строения многозарядного противоиона на солюбилизацию ДНК липидной мембраной.

Двух-стадийный способ диспергирования комплекса ДТА-ДНК в водной среде при помощи лецитина.

определенном типе комплексов ДНК, (1:1) стехиометрических в терминах соотношения противоположных зарядов ДНК и противоиона, например, фосфатная группа ДНК: аммонийная группа ДДА (ДТА) или фосфатная группа ДНК: аминогруппа Спм (Спд). Была использована относительно короткая двухспиральная ДНК (В-форма, 700 пар-оснований), свойства разбавленных растворов которой в смесях с ПАВ хорошо известны, а также с длиной пар-оснований для оценки влияния молекулярной массы ДНК на структуру фаз.

Объектом исследования, хорошо моделирующим поведение нейтральных мембранных фосфолипидов, являлся цвиттерионный фосфолипид, 1,2-диацилsn-3-фосфатидилхолин или, по-просту, лецитин. Исследование проводилось в водных растворах В основном изучались водные растворы (для ЯМР в качестве растворителя использовали D2О) Применялся ряд комплементарных методов:

- поляризационная оптическая микроскопия, H ЯМР спектроскопия, малоугловое рентгеновское рассеяние (МРР) – для изучения фазовых равновесий и структуры фаз;

микроэлектрофорез, реометрия – для характеристики растворов комплексов ДНК;

- циркулярный дихроизм (ЦД), УФ-спектроскопия и некоторые другие – для оценки конформационного состояния ДНК.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Ключевым хорошо известным явлением в поведении систем полиэлектролит – противоположно заряженное ПАВ является ассоциативное взаимодействие, приводящее к образованию комплекса полимер-ПАВ, при формировании которого неорганические противоионы уходят в объем раствора. При определенных концентрациях (рис. 1 а) комплекс можно легко отделить.

Нейтральный комплекс виртуально не растворим в воде (рис. 1 б) и может рассматриваться как отдельный компонент системы, назовем его комплексной солью.

Рисунок 1. Условные фазовые диаграммы: (а) полиэлектролит ассоциирует с противоположнозаряженным ПАВ образуя комплексную соль ПАВ-полиэлектролит, например ДДА-ДНК. Ассоциация приводит к нейтрализации поверхносного заряда и при определенных соотношениях между компонентами (2-х фазная область) сопровождается агрегацией и макрофазным расслоением; (б) нейтральный (1:1 по соотношению зарядов) комплекс практически не растворим в воде в широкой области концентраций добавляемых солей (ионной силы раствора).

Рисунок 2. Фазовая диаграмма смеси полиэлектролита и ПАВ в воде при постоянном давлении и температуре может быть представлена в виде пирамиды. Смесь полиэлектролита и ПАВ в воде дает 4 возможных комбинации нейтральных ионных пар: полиэлектролит, ПАВ, комплексную соль и простую соль.

полиэлектролита, противоположно заряженного ПАВ и воды при постоянных давлении и температуре, представляет собой пирамиду (рис. 2). Фазовое поведение системы, состоящей из комплексной соли, воды и какой-либо добавки при постоянных давлении и температуре, можно описывать с помощью треугольника Гиббса.

Итак, мы смешали эквимольные растворы ДНК и катионного ПАВ, дидодецилдиметиламмоний бромида (ДДАБ), отделили выделившийся в осадок нейтральный комплекс ДДА-ДНК от неорганических ионов. После очистки и сушки ДДА-ДНК смешали с лецитином и водой в необходимых пропорциях и после достижения равновесия в системе (после завершения многократного перемешивания образцы хранили 2 месяца при Т= 25 °С) преступили к анализу образцов. Сперва проводился визуальный анализ образцов с поляризационным тестированием, затем получали 2Н ЯМР спектры образцов, после чего ампулы вскрывались и определялась структура фаз с помощью МРР, а также текстура с помощью поляризационной микроскопии.

Структура гидратированного комплекса. Спектр МРР полностью соотношением 1:3:2, которое может быть индексировано как (hk) = (10), (11) и (20) гексагональной решетки с пиком первого порядка при q10 = 0.22 -1. Двухцепочечные ПАВ обычно образуют обратные цилиндрические мицеллы, как показано на рис. 3 б.

С ДНК и гидратирующей водой содержащейся в каналах с радиусом Rпол., для пика первого порядка мы можем записать – объемная фракция i-го компонента, RДНК – радиус сечения молекулы где двух-спиральной ДНК.

С RДНК= 10 из уравнения

ДНК ДНК

где LДНК – суммарная контурная длина ДНК, AДНК – площадь сечения ДНК, мы получим ДНК = 0.33. Поскольку для сухого (чистого) ДДА-ДНК ДНК = 0.40, то вод. = 0.17. С суммой (ДНК + вод.) = 0.50, вторично используя уравнение (2) мы получим Rпол. = 12.

Рисунок 3. МРР спектр гидратированного ДДАДНК (а) и схематическое представление его структуры (б). Относительное соотношение Брэгговских пиков 1:3:4 соотносится с двумерной гексагональной решеткой. Кратчайшее расстояние между соседними стержнями, a, может быть получено на основании спектра МРР, где для гексагональной структуры Брэгговские пики наблюдаются при qhk = (4(h2 + k +hk)1/2)/(a3).

Для обратной гексагональной фазы Rпол. можно расчитать также с помощью уравнения

ДНК ДДА

где для полностью гидратированного комплекса, ДДА = 0.60(1 вод.) = 0.50.

Объем молекулы ДДА, ДДА уравнение (3) относительно площади, занимаемой головной группой ПАВ на межфазной поверхности, AПАВ, получая таким образом AПАВ = 130 2.

Предполагаемая обратная гексагональная стркутура может быть рассмотрена, как 1:1 (встроенные) комплексы между гидратированными ДНК и обратными цилиндрическими мицеллами. Тогда, линейная плотность заряда обратных мицелл, mic = 2Rпол./AПАВ, должна быть эквивалентна линейной плотности заряда двухспиральной ДНК, ДНК= 0.6 e/. Используя значения Rпол. = 12 и AПАВ = 130 2, мы получаем миц. = 0.58 e/, что является достаточно строгим доказательством правильности выбора обратной гексагональной структуры.

Совершенно иная ситуация наблюдается в случае одно-цепочечного амфифильного противоиона, додецилтриметиламмония (ДТА). ДТА образует агрегаты с более высокой кривизной поверхности, поэтому ничего удивительного, что комплексная соль ДТА-ДНК в гидратированном состоянии имеет нормальную тетрагональную структуру с четырьмя молекулами ДНК вокруг каждой цилиндрической мицеллы ПАВ (рис. 4).

Рисунок 4. МРР спектр гидратированного ДТА-ДНК (а) и схематическое представление его структуры (б). Относительное соотношение Брэгговских пиков 1:2 соотносится с двумерной тетрагональной решеткой.

структуру агрегатов. Сравнение двух систем, 700 и 2000 пар-оснований, с различной полидисперсностью показало, что структурные характеристики жидкокристаллических (ЖК) фаз в обеих системах одинаковы. Однако измерения МРР гидратированных комплексов в отсутствии лецитина показали разницу в плотности упаковки ДНК в бинарной системе ДТА-ДНК:вода.

Образцы с большей молекулярной массой (2000 пар-оснований) и более низкой полидисперсностью дают более плотную упаковку квадратично упорядоченных молекул ДНК в нормальной тетрагональной структуре.

Тройная фазовая диаграмма при 25°C для системы ДДА-ДНК:лецитин:

вода приведена на рис. 5 а в сравнении с ранее изученной системой ДТАДНК:

лецитин:вода (рис. 5 б, взятый из A. V. Bilalov, U. Olsson, B. Lindman // Soft Matter – 2011 – V. 7 – P. 730–742.). В системе ДДА-ДНК:лецитин:вода можно различить две различные однофазные области: ламеллярную (Л.), растянувшуюся со стороны лецитин/вода и гексагональную фазу (Г.).

Рисунок 5. Экспериментальные фазовые диаграммы трехкомпонентных систем:

ДДА-ДНК/лецитин/вода (а), ДТА-ДНК/лецитин/вода (б) и Спм-ДНК/лецитин/вода (в). Обозначения: Л.- ламеллярная ЖК фаза, Г. – гексагональная ЖК фаза, К. – кубическая ЖК фаза. На фазовой диаграмме системы Спм-ДНК/лецитин/вода: 1 – трехфазная область: вода+гидратированный Спм-ДНК + ламеллярная фаза; 2 – двухфазная область: ламеллярная фаза + гидратированный Спм-ДНК; 3 – трехфазная область: кристаллический лецитин + Спм-ДНК + ламеллярная фаза. Трехфазные области выделены темно-серым, белым выделены двухфазные области.

Лецитин образует ламеллярную фазу в воде в которую может встраиваться комплекс ПАВ-ДНК. Из сравнения рисунков 5а и 5б видно, что ламеллярная фаза лецитина может солюбилизировать до 55 вес.% ДДА-ДНК, и лишь 25 вес.% ДТА-ДНК. Кроме того, в системе ДДА-ДНК не обнаружена кубическая фаза, которая образуется в системе ДТА-ДНК. Данная бинепрерывная кубическая фаза, образуемая нормальными «червеобразными»

мицеллами ДТА не может быть образована в системе с ДДА из-за различия в кривизне поверхности ассоциатов, диктуемой различием параметров упаковки двух амфифильных противоионов.

Данные МРР измерений (рис. 6) позволяют установить структуру фаз и построить предполагаемую геометрическую модель. На основании моделей гексагональной (рис. 3 б) и ламеллярной (рис. 7) фаз, мы рассчитали теоретическую фазовую диаграмму системы ДДА-ДНК/лецитин/вода (рис. 8).

Рисунок 6. МРР пики от ламеллярной фазы (a), образца состава 33:33:34 (ДДАДНК/лецитин/вода, вес. %), и гексагональной фазы (б), образца состава 22:51: (ДДА-ДНК/лецитин/вода, вес. %). Широкие размытые пики, расположенные между первым и вторым, и между вторым и третьим Брэгговскими пиками от ламеллярной структуры связаны с повторяющимся расстоянием ДНК-ДНК, dДНК, полученное на основании позиции пика, dДНК = 2/qДНК коррелирует с dДНК расчитанным по уравнению AДНК/(dДНК dвод) = VДНК/(VДНК + Vвод.), где AДНК – площадь сечения цилиндра ДНК, dвод. является толщиной водного слоя, VДНК – общий исключенный объем молекул ДНК, и Vвод. – общий объем воды в образце.

Рисунок 7. Структурная модель ламеллярной фазы системы ДДА-ДНК/лецитин/вода:

dвод. – толщина слоя, вкючающего воду и ДНК; dПАВ - толщина слоя, включающего молекулы ПАВ; d - повторяющаяся дистанция между двойными слоями; dДНК дистанция между молекулами ДНК; lПАВ - средняя длина молекул ПАВ (lПАВ 0.5 d) ;

AДНК - площадь сечения цилиндра ДНК. Повторяющаяся дистанция между слоями может быть полученя на основании данных МРР (она соответствует размерности ламеллярной фазы d = 2h/qm, с индексами Миллера [h] = [1], [2], [3], и т.д.). Толщина двойного слоя ПАВ может быть оценена на основании данных МРР по наклону зависимости в координатах уравнения d = dПАВ /ПАВ.

Рисунок 8. Модельная фазовая диаграмма системы ДДА-ДНК/лецитин/вода.

Рисунок 9. Схематическая иллюстрация фазовых переходов ЖК структур, обнаруженных в системах ДДА-ДНК и ДТА-ДНК. С увеличением кривизны межфазной поверхности при замене двух-цепочечного амфифильного противоиона на одно-цепочечный, комплекс переходит от обратной к нормальной (прямой) структуре.

При этом для гексагональной фазы, помимо уравнения 2, мы должны учитывать основное требование геометрической модели которое легко преобразуется в уравнение (детальный вывод дан в тексте диссертации)

АДНК ПАВ

В случае ламеллярной фазы, модель которой представлена на рис. 7, учитывается что молекулы ДНК расположены внутри тонкого водного слоя, с толщиной Расположение ЖК фаз на расчетной фазовой диаграмме (рис. 8) четко совпадает с их расположением на экспериментальной фазовой диаграмме (рис.

5 а).

Обобщая фазовое поведение двух систем ДДА-ДНК и ДТА-ДНК, можно придти к заключению, что при увеличении гидрофобной части ПАВ путем замены одно-цепочечного ПАВ на двух-цепочечное, комплекс ПАВ-ДНК гидрофобной части ПАВ ведет к образованию обратных структур, таких как обратная гексагональная фаза (рис. 9).

СпдДНК/лецитин/вода. Замена амфифильного противоиона на многозарядный противоион полиамина, спермин (Спм) или спермидин (Спд), кардинально изменяет фазовое поведение системы. Молекулы Спм или Спд не могут образовывать межфазные разделенные гидрофобные и гидрофильные слои, но ожидалось, что в смеси с ПАВ (лецитином) они смогут встраиваться в полярный слой, оказывая незначительное влияние на структуру слоев ПАВ и слегка изменяя кривизну поверхности. Однако, на основании проведенных исследований были построены фазовые диаграммы систем СпмДНК/лецитин/вода (рис. 5 в) и Спд-ДНК/лецитин/вода и сделан вывод о том, комплексы ДНК со спермином (СпмДНК) или спермидином (Спд-ДНК).

Другими словами, нейтрализация заряда ДНК и ее компактизация не являются достаточным условием для ее переноса через липидную мембрану. Очевидно, углеводородный радикал у амфифильного противоиона играет двойную роль: во-первых, он ответственен за многозарядность противоиона (мицеллообразование), что обеспечивает прочную ассоциацию ДНК с противоионами (стабильность комплекса); во-вторых, встраиваясь в углеводородный слой липидного бислоя, по-всей видимости, он играет роль якоря, удерживающего противоион, а вместе с ним и ДНК внутри фосфолипидной мембраны.

Двух-стадийный способ диспергирования комплекса ДТА-ДНК в водной среде при помощи лецитина. Мы инжектировали 100 мкл. 1 %-ного по весу этанольного раствора ДТА-ДНК в 900 мкл. водного раствора лецитина и через определенные промежутки времени начиная с момента впрыска методом СРС измеряли средний размер частиц дисперсной фазы. Мольное соотношение ДТА/лецитин варьировали от 1.5 до 0.2. Кинетические кривые представлены на рис. 10.

Можно выделить три области на кинетических зависимостях. Начальный период, где размер частиц имеет минимальные значения и не изменяется или очень слабо растет со временем; период агрегации, где размеры агрегатов интенсивно растут в течение примерно 2-х часов от 1 до 11-14 мкм;

заключительный период, где частицы достигают максимальных размеров и в дальнейшем средний диаметр либо перестает менятся, либо изменяетя очень медленно. Учитывая, что наблюдается увеличение продолжительности начального периода с увеличением содержания лецитина, можно полагать, что агрегативная устойчивость коллоидов ДТА-ДНК увеличивается с уменьшением мольного соотношения ДТА/лецитин. При мольном соотношении ДТА/лецитин выше 1, начальный период очень короток (несколько секунд), в то время как при избытке лецитина этот период может длиться часами и сутками.

Начальный период становится больше 24 часов (что уже приемлемо для липоплексов), начиная с весового соотношения ДТА/лецитин = 1/6.

Таким образом, мы оптимизировали метод получения коллоидных частиц ДНК встроенной в ламеллярные ассоциаты ДТА/лецитин и получили агрегаты размерами в переделах 1-го микрометра, агрегативноустойчивые по-крайней мере в течение суток, что является хорошим условием для рецептуры приготовления липоплексов.

ВЫВОДЫ

Установлено, что:

1. гидратированный комплекс ДДА-ДНК имеет 2-мерную гексагональную ЖК структуру, обратного типа, в то время как гидратированный комплекс ДТА-ДНК имеет тетрагональную ЖК структуру нормального типа.

2. образцы ДНК с большим молекулярным весом и более низкой полидисперсностью дают более плотную упаковку квадратично упорядоченных молекул ДНК в нормальной тетрагональной структуре гидратированного комплекса.

адаптируется в ламеллярную фазу. Дальнейшее увеличение гидрофобной части ведет к образованию обратных структур, таких как обратная гексагональная фаза.

4. ламеллярная фаза лецитина не солюбилизирует нейтральные комплексы ДНК со спермином или спермидином, т.е. углеводородный радикал у амфифильного противоиона играет двойную роль: во-первых, он ответственен за многозарядность противоиона (мицеллообразование), что обеспечивает прочную ассоциацию ДНК с противоионами (стабильность комплекса); вовторых, встраиваясь в углеводородный слой липидного бислоя, он играет роль якоря, удерживающего противоион, а вместе с ним и ДНК внутри фосфолипидной мембраны.

5. с увеличением соотношения лецитин/ДТА увеличивается устойчивость микродисперсий, полученных путем быстрого впрыскивания этанольного разбавленного раствора ДТА-ДНК в везикулярный водный раствор лецитина.

Это позволяет получить агрегаты размерами в переделах 1-го микрометра, агрегативно-устойчивые в течение суток и более, что является хорошим условием для рецептуры приготовления липоплексов.

Основное содержание диссертации изложено в следующих публикациях:

1. Krivtsov A.O., Bilalov A.V., Olsson U., Lindman B. / DNA with doublechained amphiphilic counterions and its interaction with lecithin // Langmuir – – V. 28 – P. 1369813704.

2. Кривцов А.О., Влияние природы многозарядного противоиона на солюбилизацию ДНК липидной мембраной/ А. О. Кривцов, А. В. Билалов, У.

Олссон, Б. Линдман // Вестник Казанского технологического университета – 2013 - Т. 16. - № 18. - С. 43-47.

3. Krivtsov A.O., Bilalov A.V., Olsson U., Lindman B. Dispersion of DTA-DNA in water using «solvent shiftinng» technique // Book of abstracts, V International conference on colloid chemistry and physicochemical mechanics, 2013, Moscow P.

447-448.

4. Кривцов А.О. ДНК с двухцепочечными амфифильными противоионами и их взаимодействия с лецитином. // Сборник материалов Всероссийской молодежной конференции «Химия поверхности и нанотехнология», 2012, Казань, С. 119.

Казанского национального исследовательского технологического университета

 
Похожие работы:

«Поливанова Анна Геннадьевна Синтез азотсодержащих гетероциклических соединений на основе 1,1-дифторазидов 02.00.03 – органическая химия АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук Москва 2010 Работа выполнена на кафедре химии и технологии биомедицинских препаратов в Российском химико-технологическом университете имени Д. И. Менделеева Научный руководитель : кандидат...»

«БАКЛАНОВА Наталья Ивановна ИНТЕРФЕЙСНЫЕ ПОКРЫТИЯ НА АРМИРУЮЩИХ УГЛЕРОДНЫХ И КАРБИДОКРЕМНИЕВЫХ ВОЛОКНАХ ДЛЯ КОМПОЗИТОВ С КЕРАМИЧЕСКОЙ МАТРИЦЕЙ 02.00.21 – химия твердого тела АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора химических наук Новосибирск – 2010 Работа выполнена в Учреждении Российской академии наук Институте химии твердого тела и механохимии Сибирского отделения РАН Официальные оппоненты : Доктор химических наук, старший научный сотрудник Бохонов Борис...»

«ЕЛИСЕЕВА ЕКАТЕРИНА АЛЕКСАНДРОВНА ПОЛИМЕРАНАЛОГИЧНЫЕ ПРЕВРАЩЕНИЯ, КАТАЛИЗИРУЕМЫЕ В ПОЛИ – N - ВИНИЛПИРРОЛИДОНЕ НАНОЧАСТИЦАМИ МЕДИ Специальности: 02.00.06 – высокомолекулярные соединения по химическим наук ам 02.00.11 – коллоидная химия и физико-химическая механика АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук Москва 2008 www.sp-department.ru Работа выполнена в Московском автомобильно-дорожном институте (государственном техническом университете)...»

«Самойлова Ольга Владимировна ТЕРМОДИНАМИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ ФАЗОВЫХ РАВНОВЕСИЙ В СИСТЕМЕ Cu–Si–Ni–O Специальность 02.00.04 – Физическая химия Автореферат диссертации на соискание учёной степени кандидата химических наук Челябинск 2013 Диссертация выполнена на кафедре Физическая химия ФГБОУ ВПО Южно-Уральский государственный университет (НИУ). Научный руководитель : доктор технических наук, профессор, Михайлов Геннадий Георгиевич....»

«СОФРОНОВ Артём Владимирович ДИТИОФОСФОРИЛЬНЫЕ ПРОИЗВОДНЫЕ ЦИКЛИЧЕСКИХ МОНОТЕРПЕНОВ 02.00.08 - химия элементоорганических соединений Автореферат диссертации на соискание учёной степени кандидата химических наук Казань - 2010 Работа выполнена на кафедре высокомолекулярных и элементоорганических соединений Химического института им. А.М. Бутлерова федерального государственного автономного образовательного учреждения высшего профессионального образования Казанский (Приволжский)...»

«Певная Ольга Сергеевна ВНУТРИМОЛЕКУЛЯРНОЕ СТРУКТУРИРОВАНИЕ В РАСТВОРАХ МАКРОМОЛЕКУЛ СЛОЖНОГО СТРОЕНИЯ Специальность 02.00.06 – Высокомолекулярные соединения АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата физико-математических наук Москва – 2008 Работа выполнена на физическом факультете Московского государственного университета имени М.В. Ломоносова Научный руководитель : кандидат физико-математических наук Крамаренко Елена Юльевна Официальные оппоненты : доктор...»

«Королева Ольга Николаевна Термодинамическое моделирование и спектроскопия комбинационного рассеяния силикатных расплавов Специальность 02.00.04 – Физическая химия Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук Екатеринбург – 2009 Работа выполнена в Институте минералогии УрО РАН Научный руководитель доктор химических наук Быков Вадим Николаевич Официальные оппоненты : доктор химических наук Хохряков Александр Александрович, кандидат...»

«КАРАМЫШЕВ Алексей Владимирович ФЕРМЕНТАТИВНЫЙ СИНТЕЗ ПОЛИАНИЛИНА, КАТАЛИЗИРУЕМЫЙ ОКСИДОРЕДУКТАЗАМИ 02.00.15 - катализ 03.00.23 - биотехнология Автореферат диссертации на соискание учёной степени кандидата химических наук Москва – 2007 Работа выполнена на кафедре химической энзимологии Химического факультета Московского государственного университета имени М.В.Ломоносова Научный руководитель : ведущий научный сотрудник, доктор химических наук, профессор Сахаров Иван Юрьевич...»

«Самохин Андрей Сергеевич НОВЫЙ ПОДХОД К ИДЕНТИФИКАЦИИ КОМПОНЕНТОВ СЛОЖНЫХ СМЕСЕЙ ОРГАНИЧЕСКИХ СОЕДИНЕНИЙ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ГАЗОВОЙ ХРОМАТОГРАФИИ/МАСССПЕКТРОМЕТРИИ 02.00.02 – Аналитическая химия Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук Москва – 2013 Работа выполнена на кафедре аналитической химии Химического факультета Московского государственного университета им. М.В. Ломоносова Научный руководитель : Доктор химических наук, профессор...»

«МАРКЕЛОВА МАРИЯ НИКОЛАЕВНА СИНТЕЗ И ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ДИСПЕРСНЫХ ПОРОШКОВ НА ОСНОВЕ La1-xAgyMnO3+ ДЛЯ ПРИМЕНЕНИЯ В МАГНИТНОЙ ГИПЕРТЕРМИИ Специальность 02.00.21 – химия твердого тела АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук Москва – 2011 1 Работа выполнена на Факультете наук о материалах и кафедре неорганической химии Химического факультета Московского государственного университета имени М.В. Ломоносова. Научный руководитель :...»

«ПОДЛИПСКАЯ Татьяна Юрьевна СТРУКТУРА МИЦЕЛЛЯРНЫХ НАНОРЕАКТОРОВ TRITON N-42 ПО ДАННЫМ ИК-ФУРЬЕ И ФОТОН-КОРРЕЛЯЦИОННОЙ СПЕКТРОСКОПИИ 02.00.04 физическая химия АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук Новосибирск 2011 Работа выполнена в Учреждении Российской академии наук Институте неорганической химии им. А.В. Николаева СО РАН Научный руководитель : доктор химических наук Булавченко Александр Иванович Официальные оппоненты : доктор...»

«КОШЕЛЕВА Екатерина Валентиновна ТВЕРДЫЕ ЭЛЕКТРОЛИТЫ В СИСТЕМАХ CaY2S4-Yb2S3 и CaYb2S4-Y2S3 Специальность: 02.00.05 – Электрохимия АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук Екатеринбург - 2014 2 Работа выполнена на кафедре неорганической и физической химии ФГБОУ ВПО Вятский государственный университет, г. Киров Калинина Людмила Алексеевна, Научный руководитель : кандидат химических наук, доцент ФГБОУ ВПО Вятский государственный университет,...»

«КОРШУН Владимир Аркадьевич МОДИФИЦИРОВАННЫЕ ПИРИМИДИНОВЫЕ НУКЛЕОЗИДЫ И НЕНУКЛЕОЗИДНЫЕ РЕАГЕНТЫ В СИНТЕЗЕ ОЛИГОНУКЛЕОТИДНЫХ КОНЪЮГАТОВ, ИХ СВОЙСТВА И ПРИМЕНЕНИЕ 02.00.10 – Биоорганическая химия АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора химических наук Москва – 2012 Работа выполнена в Группе генетической инженерии интерлейкинов, Лаборатории механизмов экспрессии генов, Лаборатории химии нуклеиновых кислот, Лаборатории органического синтеза и Группе...»

«Белкова Наталия Викторовна ВОДОРОДНО-СВЯЗАННЫЕ ИНТЕРМЕДИАТЫ И МЕХАНИЗМЫ РЕАКЦИЙ С ПЕРЕНОСОМ ПРОТОНА В ХИМИИ ГИДРИДОВ ПЕРЕХОДНЫХ МЕТАЛЛОВ 02.00.08 - Химия элементоорганических соединений 02.00.04 - Физическая химия Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора химических наук Москва 2011 Работа выполнена в лаборатории Гидридов металлов Учреждения Российской...»

«Рудометова Ольга Викторовна ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ ПРОДУКТОВ ТЕРМИЧЕСКОЙ И ТЕРМООКИСЛИТЕЛЬНОЙ ДЕСТРУКЦИИ ПОЛИВИНИЛХЛОРИДА С ОКСИДАМИ И ГИДРОКСИДАМИ ЩЕЛОЧНОЗЕМЕЛЬНЫХ МЕТАЛЛОВ Специальность 02.00.04 – Физическая химия (химические наук и) АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук Пермь 2011 Работа выполнена в лаборатории окислительного катализа в расплавленных электролитах Института технической химии УрО РАН, г. Пермь. доктор химических наук,...»

«Быков Александр Юрьевич СИНТЕЗ, ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА И РЕАКЦИОННАЯ СПОСОБНОСТЬ НОНАГИДРО-клозо-НОНАБОРАТНОГО АНИОНА 02.00.01 – Неорганическая химия Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук Москва – 2013 Работа выполнена в лаборатории химии легких элементов и кластеров Федерального государственного бюджетного учреждения науки Института общей и неорганической химии им. Н.С.Курнакова Российской академии наук (ИОНХ РАН) и на кафедре...»

«Матвеев Евгений Юрьевич СИНТЕЗ, ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА И РЕАКЦИОННАЯ СПОСОБНОСТЬ ПРОИЗВОДНЫХ АНИОНА [B10H10]2- С ЗАМЕСТИТЕЛЯМИ ОКСОНИЕВОГО ТИПА 02.00.01 Неорганическая химия Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук Москва 2008 Работа выполнена на кафедре неорганической химии им. А.Н.Реформатского Московской государственной академии тонкой химической технологии им. М.В.Ломоносова (МИТХТ) кандидат химических наук, доцент Научный...»

«КРАСНОСЛОБОДЦЕВА ОЛЬГА ЮРЬЕВНА СИНТЕЗ МАТРИЦ ДЛЯ ЭЛЕУТЕЗИДОВ И ИХ АНАЛОГОВ НА ОСНОВЕ ЛЕВОГЛЮКОЗЕНОНА И (+)КАДИНОЛА. ФОРМАЛЬНЫЙ СИНТЕЗ ЭЛЕУТЕЗИДОВ 02.00.03 - Органическая химия АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук Уфа - 2006 2 Работа выполнена в Институте органической химии Уфимского научного центра РАН. Научный руководитель : доктор химических наук, профессор Валеев Ф.А. Официальные оппоненты : доктор химических наук, профессор...»

«БУРДУКОВСКИЙ ВИТАЛИЙ ФЕДОРОВИЧ СИНТЕЗ И ВНУТРИМОЛЕКУЛЯРНЫЕ ПРЕВРАЩЕНИЯ ПОЛИМЕРОВ С АЗОМЕТИНОВОЙ СВЯЗЬЮ 02.00.06 - Высокомолекулярные соединения АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора химических наук Иркутск – 2014 Работа выполнена в лаборатории химии полимеров Федерального государственного бюджетного учреждения науки Байкальский институт природопользования Сибирского отделения Российской академии наук. Научный консультант : доктор химических наук,...»

«ВАРЛАМОВА РЕГИНА МАРКОВНА ГРУППОВОЕ И ИНДИВИДУАЛЬНОЕ ИММУНОХИМИЧЕСКОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ НЕКОТОРЫХ БИОЛОГИЧЕСКИ ЗНАЧИМЫХ СОЕДИНЕНИЙ С АМПЕРОМЕТРИЧЕСКИМ ДЕТЕКТИРОВАНИЕМ 02.00.02 – аналитическая химия Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук Казань –2007 2 Работа выполнена на кафедре аналитической химии Химического института им. А.М. Бутлерова государственного образовательного учреждения высшего...»








 
© 2013 www.diss.seluk.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Авторефераты, Диссертации, Монографии, Методички, учебные программы»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.