WWW.DISS.SELUK.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА
(Авторефераты, диссертации, методички, учебные программы, монографии)

 

На правах рукописи

РОМАНОВА СВЕТЛАНА ГЕННАДЬЕВНА

СИНТЕЗ БЕСФОСФОРНЫХ АЛКИЛЬНЫХ ГЛИЦЕРОЛИПИДОВ

ПОТЕНЦИАЛЬНЫХ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫХ СОЕДИНЕНИЙ

Специальность 02.00.10 Биоорганическая химия

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание учёной степени кандидата химических наук

МОСКВА – 2008 2

Работа выполнена на кафедре Химии и технологии биологически активных соединений им. Н.А. Преображенского Московской государственной академии тонкой химической технологии им. М.В. Ломоносова

Научный руководитель:

доктор химических наук, профессор Серебренникова Галина Андреевна

Официальные оппоненты:

доктор химических наук, профессор Рудакова Инна Павловна доктор биологических наук, профессор Богуш Татьяна Анатольевна

Ведущая организация: Институт биоорганической химии им. М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН

Защита состоится «22» декабря 2008 г. в 15 часов на заседании Диссертационного совета Д 212.120.01 при Московской государственной академии тонкой химической технологии им. М. В. Ломоносова по адресу: 119571, Москва, пр.

Вернадского, 86.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке МИТХТ им. М. В. Ломоносова по адресу: 119571, Москва, пр. Вернадского, 86. С авторефератом диссертации можно ознакомиться на сайте www.mitht.ru

Автореферат разослан «_» ноября 2008 г.

Ученый секретарь Диссертационного совета кандидат химических наук, старший научный сотрудник Лютик А. И.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Создание новых химических соединений с расширенным спектром биологического действия является актуальной задачей биоорганической химии. В последние годы предметом интенсивных исследований стали катионные бесфосфорные глицеролипиды алкильного типа – потенциальные противоопухолевые агенты. Этот класс веществ получен химической модификацией высокоактивного фосфорсодержащего глицеролипида – эдельфозина (1-октадецил-2метил-sn-глицеро-3-фосфохолин, Et-18-OMe), известного избирательным цитотоксическим действием по отношению к различным линиям раковых клеток.

Благодаря наличию широкого спектра биологической активности синтетические бесфосфорные положительно заряженные глицеролипиды с простой эфирной связью привлекают всё большее внимание исследователей. В соответствии с уже установленными требованиями, предъявляемыми к структуре соединений показано, что наличие длинноцепного алкильного заместителя (С18-С20) в положении С(1) и короткоцепного заместителя (С1-С4) в С(2) положении глицеринового скелета необходимо для того, чтобы соединение обладало антинеопластической активностью.

В то же время, влияние других компонентов структуры (спейсерного участка, катионной «головки» и противоиона) на биологические свойства соединения в настоящее время изучено недостаточно. Поэтому на сегодняшний день актуальным представляется синтез новых бесфосфорных положительно заряженных глицеролипидов алкильного типа – возможных агентов противоопухолевой терапии, модифицированных по спейсерному участку и гидрофильному домену.

Так, создание соединений с различными катионными «головками», представленными аминами алифатического и гетероциклического рядов, отделёнными от глицеринового скелета спейсерами различной длины позволит выявить закономерности проявления цитотоксической активности соединениями в зависимости от их структурных особенностей.

Настоящая работа выполнена в соответствии с планом научных исследований кафедры ХТБАС МИТХТ им. М. В. Ломоносова по теме № 1Б-4-355 «Разработка химических и биотехнологических методов модификации биологически активных соединений с целью моделирования жизненно важных процессов в природе и создания новых лекарственных препаратов» и при поддержке грантов РФФИ, проекты № 04-03а и 07-03-00632.# В руководстве работой принимал участие д.м.н. Штиль А.А.

Цели работы.

1. Синтез бесфосфорных алкильных глицеролипидов с полярными «головками», представленными основаниями алифатического и гетероциклического ряда с целью изучения их биологической активности.

2. Создание модификационных рядов положительно заряженных глицеролипидов со спейсерами различной длины.

3. Синтез флуоресцентно меченых катионных глицеролипидов с простой эфирной связью для оценки типа клеточной гибели, изучения динамики накопления в неопластических клетках и выявления мест их внутриклеточной локализации.

4. Проведение биологических испытаний in vitro синтезированных соединений.

Изучение мутагенных свойств и оценка цитотоксической и гемолитической активности.

Научная новизна работы. В результате проведённых исследований нами синтезированы новые представители класса катионных алкильных глицеролипидов, бесфосфорных аналогов эдельфозина, отличающихся отдельными структурными фрагментами: длиной спейсерного участка и природой полярной «головки», представленной алифатическими и гетероциклическими основаниями. Получены катионные глицеролипиды, содержащие флуоресцентную метку в гидрофильной части молекулы, представляющие собой удобную модель для исследования биологической активности синтезированных веществ и изучения противоопухолевого механизма их действия.

Проведены биологические испытания in vitro. Изучена цитотоксическая и гемолитическая активности полученных соединений, а также представлены данные о динамике накопления глицеролипидов в клетке. Показано влияние синтезированных веществ на клеточный цикл клетки, а также установлены места их наиболее вероятной локализации во внутриклеточных компартментах.

Практическая значимость работы. Созданы новые ряды бесфосфорных положительно заряженных глицеролипидов с простой эфирной связью. Соединения отличаются длиной спейсерного участка (два-четыре) метиленовых звена и пять (в случае глицеролипида, содержащего остаток 6-аминокапроновой кислоты), а также природой и типом катионного домена, представленного основаниями как алифатического ряда: N,N-диметиламиноэтанол; N,N,N’,N’-тетраметилэтилендиамин, N,N,N-триэтаноламин так и гетероциклического: пиридин; N,N-диметиламинопиридин;

N-метил-имидазол; N-метилморфолин; N-метилпиперидин; 4-гидрокси-Nметилпиперидин.

Направленная модификация молекулы катионного липида по определённым доменам создаёт возможность проведения структурно-функциональных исследований по выявлению зависимости биологической активности этих соединений от строения каждой структурной единицы.

В результате проведённых исследований значительно расширен класс катионных липидов, которые могут быть рекомендованы для использования в качестве потенциальных противоопухолевых агентов в химиотерапии рака. Получены первоначальные данные о типе клеточной гибели, к которому приводит действие синтезированных веществ и изучены основы антинеопластического механизма действия класса бесфосфорных алкильных глицеролипидов.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Создание модификационных рядов бесфосфорных положительно заряженных алкильных глицеролипидов, содержащих спейсерные фрагменты различной длины и разные типы катионных «головок».

2. Получение алкильных глицеролипидов с аминами алифатического ряда в полярном домене.

3. Синтез катионных глицеролипидов с простой эфирной связью, содержащих гетероциклические основания в качестве катионной «головки».

4. Получение положительно заряженных алкильных глицеролипидов с флуоресцентной меткой, присоединённой к полярному домену.

5. Исследование противоопухолевой и гемолитической активности полученных соединений.

6. Проверка мутагенных свойств и изучение динамики накопления катионных глицеролипидов в неопластических клетках.

7. Выявление взаимосвязи структура/биологическая активность в ряду синтезированных соединений.

Апробация работы. Основные результаты работы доложены на Первой научнотехнической конференции молодых ученых «Наукоемкие химические технологии»

(2005, Москва), на V Всероссийской научно-практической конференции «Отечественные противоопухолевые препараты» (2006, Москва), на Международной конференции «Биотехнология и медицина» (2006, Москва), на Международной конференции молодых ученых по фундаментальным наукам “Ломоносов-2006” (2006, Москва), на Международном симпозиуме «Advanced Science in Organic Chemistry»

(2006, Судак), на Юбилейных Научных Чтениях, посвященных 110-летию со дня рождения проф. Н.А. Преображенского (2006, Москва), на Международной конференции по органической химии «Органическая химия от Бутлерова и Бейльштейна до современности» (2006, Санкт-Петербург), на ХI Международной научно-технической конференции “Наукоемкие химические технологии - 2006” (2006, Самара), на XVIII Менделеевском съезде по общей и прикладной химии (2007, Москва), на VII Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Отечественные противоопухолевые препараты» (2008, Москва), на Международной конференции молодых ученых по фундаментальным наукам “Ломоносов-2008” (2008, Москва), на IV Съезде Российского общества биохимиков и молекулярных биологов (2008, Новосибирск), на ХII Международной научнотехнической конференции “Наукоемкие химические технологии - 2008” (2008, Волгоград).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 3 статьи и 13 тезисов докладов.

Объём и структура работы.

Диссертационная работа изложена на _ страницах машинописного текста и состоит из введения, литературного обзора, обсуждения полученных результатов, экспериментальной части, выводов и списка цитируемой литературы, включающего _ источника. Работа иллюстрирована _ рисунками и содержит _ схем и таблиц.

РЕЗУЛЬТАТЫ РАБОТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

При проведении предварительного скрининга глицеролипидных соединений на выявление среди них веществ, обладающих биологической активностью в ряду катионных бесфосфорных глицеролипидов с простой эфирной связью были обнаружены потенциальные противоопухолевые агенты.

Установлено, что данные соединения способны накапливаться в неопластических клетках, ингибировать их рост и пролиферацию, а также действие некоторых клеточных ферментов. Проявляя высокую биологическую активность, они могут быть рассмотрены в качестве возможных агентов для химиотерапии. Известно, что антибактериальной, противогрибковой, и высокой противооопухолевой активностью обладает их структурный аналог - алкильный глицерофосфолипид эдельфозин (рис.1).

O-P-O-CH2CH2N+(CH3) O OРис.1 Структурная формула эдельфозина.

На сегодняшний день он известен как коммерческий противоопухолевый препарат, успешно прошедший первую и вторую фазы доклинических и клинических испытаний. В качестве контроля биологической активности вновь синтезированных глицеролипидов эдельфозин видится адекватной оценочной моделью. В отличие от других известных препаратов он не обладает мутагенностью и, следовательно, не вызывает изменений в структуре клеточной ДНК.

Несмотря на многочисленные исследования, механизм действия алкильных глицеролипидов до конца не изучен, однако, известно, что, связываясь на поверхности неопластических клеток с определённого рода рецепторами, они выступают инициаторами процесса запрограммированной клеточной гибели, приводя к апоптозу.

Рис.2 Направления модификации структуры алкильных глицеролипидов, предпринятые в работе.

Также известно, что проявляемая биологическая активность соединений связана с особенностями их строения, поэтому синтез новых модификационных рядов алкильных катионных глицеролипидов, отличающихся отдельными структурными фрагментами, является перспективным направлением в химии глицеролипидов (рис.2). Это даст возможность проследить закономерность изменения свойств соединений, а также поможет в изучении основных элементов механизма их антинеопластического действия.

1. ПОЛУЧЕНИЕ АЛКИЛЬНЫХ ГЛИЦЕРОЛИПИДОВ С ПОЛЯРНЫМИ

«ГОЛОВКАМИ» АЛИФАТИЧЕСКОГО И ГЕТЕРОЦИКЛИЧЕСКОГО РЯДА

Для создания новых представителей класса катионных липидов был проведен синтез положительно заряженных глицеролипидов с октадецильным и метильным заместителями при С(1) и С(2) положениях глицерина и различными полярными «головками», присоединенными к глицериновому скелету через спейсерные группы, представленные остатками валериановой, масляной и пропионовой кислот.

1.1 Создание глицеролипидов с различной длиной спейсерного фрагмента и структурой алифатической катионной «головки»

Для получения положительно заряженных липидов, отличающихся длиной спейсера и строением полярного домена был проведён синтез соединений, где в качестве катионных «головок» использовались N,N-диметиламиноэтанол и N,N,N1,N1тетраметилэтилендиамин, а спейсерная группа представляла собой остатки масляной, валериановой и пропионовой кислот (схема 1).

Введение в молекулу липида катионной «головки» проводилось по реакции кватернизации третичного атома азота соответствующих аминов бромидами 2а-c, синтез проводили в присутствии NaI в среде диметилсульфоксида (DMSO).

Ключевыми соединениями в синтезе липидов 3a-с и 4a, b явились rac-1октадецил-2-метил-3-(4-бромбутаноил)глицерин 2а, rac-1-октадецил-2-метил-3-(5бромпентаноил)глицерин 2b и rac-1-октадецил-2-метил-3-(3-хлорпропаноил)- глицерин 2с, которые были получены с выходами порядка 90% при ацилировании в присутствии пиридина (Ру) исходного диглицерида 1 хлорангидридами 5-бромвалериановой и 4броммасляной кислот и выходом 46% при ацилировании соединения хлорангидридом 3-хлорпропионовой кислоты в присутствии пиридина (Ру) и карбоната калия.

Из литературных источников известно, что реакция кватернизации обычно протекает довольно медленно (20–70 ч.) при нагревании с избытком аминокомпоненты.

В нашем случае время проведения реакции колебалось от 3 до 5 ч. Замена брома в условиях реакции Финкельштейна на более реакционноспособный йод позволила сократить продолжительность и смягчить температурный режим процесса и, следовательно, избежать осмоления продуктов реакции, повысить выходы целевых соединений. Так, были получены липиды 3a-c, 4a, b с катионными группами алифатического ряда. После хроматографической очистки на силикагеле и последующей перекристаллизации из безводного диэтилового эфира выходы соединений составили 60-80%.

Данные 1Н-ЯМР-спектроскопии и масс-спектрометрии подтвердили структуру полученных катионных глицеролипидов (таблица 1).

Соедиm/z нение В случае липида 5а, где катионная «головка», образованная N,N,Nтриэтаноламином отделена от глицеринового скелета спейсерной группой, представленной остатком 5-броммасляной кислоты во избежание осмоления реакционной массы синтез проводили при температуре не выше 55 оС. Выход целевого продукта при этом составил 29.2%.

Полученное соединение стало продолжением создаваемого модификационного ряда, затрагивая строение полярного домена (схема 1).

6-аминокапроновой кислоты Для дальнейших исследований в области химии катионных глицеролипидов алкильного типа был также получен глицеролипид 7, содержащий остаток 6аминокапроновой кислоты при С(3) атоме глицерина. В случае соединения 6 решается вопрос присоединения спейсерной группы длиной в пять метиленовых звеньев, а при снятии Вос-защитной группировки под воздействием трифторуксусной кислоты в хлороформе возникает положительный заряд на атоме азота, образуя целевое соединение схемы – липид 7 с выходом 87%.

Ацилирование rac-1-октадецил-2-метилглицерина (1) проводили N-Вос-6аминогексановой кислотой, взятой в 1,5-кратном избытке, в среде безводного пиридина в присутствии DCC (схема 2). После хроматографической очистки выход целевого продукта 7 составил 62%. В спектре ЯМР 1Н этого соединения присутствовал сигнал, относящийся к протонам нововведенного элемента: синглет ( = 1.42 м.д.) But-группы.

Последующее удаление Вос-защитной группы действием трифторуксусной кислоты в хлороформе приводило к образованию rac-1-октадецил-2-метил-3-(6аммониогексаноил)глицерина 7 в виде трифторацетатной соли с выходом 87%.

Отсутствие сигнала протонов But-группы при 1.42 м.д. в 1Н-ЯМР-спектре данного соединения свидетельствует о полном удалении защитной группировки.

1.1.2 Создание катионных глицеролипидов с флуоресцентной меткой в полярном домене С целью диагностики проникновения вещества в клетку, изучения динамики его накопления и распределения во внутриклеточной среде и компартментах был осуществлён синтез катионных липидов 3b-dh и 8b-dh, содержащих флуоресцентную метку (схема 3). В качестве вводимого флуорофора выступал дансилхлорид. Как известно из литературных источников, его использование при получении меченых производных эдельфозина не приводило к статистически различимому снижению показателей биологической активности соединений.

В качестве исходных соединений для получения флуоресцентных меченых производных взяты катионные глицеролипиды 3b и 8b. Соединение 8b было получено в нашей лаборатории ранее. Оно, как было установлено, обладает высокой цитотоксической активностью по отношению к опухолевым клеткам К562. Катионный глицеролипид 3b был выбран как структурный аналог 8b, отличающийся лишь метильным заместителем вместо этильного во втором положении глицеринового скелета.

Катионные глицеролипиды 3b и 8b вводили во взаимодействие с дансилхлоридом (dh) в среде безводного ацетона в присутствии триэтиламина. Синтез завершался за 10 часов при 18-20 оС. Выход целевых соединений схемы, содержащих флуоресцентную метку, составил 58% (3b-dh) и 54% (8b-dh).

спектроскопии и масс-спектрометрии.

1.2 Получение глицеролипидов с различной длиной спейсерного фрагмента и структурой гетероциклической катионной «головки»

Наряду с алкильными глицеролипидами, содержащими в полярном домене алифатические амины известно, что высокой биологической активностью обладают также липиды, содержащие гетероциклические основания в полярном домене. С целью расширения области поиска эффективных соединений, проявляющих цитотоксические свойства по отношению к неопластическим клеткам, представлялось актуальным синтезировать новые алкильные глицеролипиды с гетероциклическими катионными «головками», присоединёнными к глицериновому остову посредством спейсерных участков.

1.2.1 Синтез бесфосфорных пиридинсодержащих глицеролипидов с простой эфирной связью Известно, что многие пиридинсодержащие соединения оказывают сильное цитотоксическое действие in vitro и in vivo. Проводя соответствующую модификацию полярного домена, нами были получены липиды 9а и 9b с катионной «головкой»

представленной пиридином, присоединенным к гидрофобному остатку через ацильные спейсерные группы длиной в три и четыре метиленовых звена.

Помимо самого пиридина осуществлялось также введение и других гетероциклических оснований. Так, в синтезе положительно заряженных глицеролипидов 10а и 10b в качестве гидрофильной составляющей использован замещённый пиридин – 4-N,N-диметиламинопиридин (DMAP), (схема 4).

Введение в молекулу катионной «головки» проводили по реакции кватернизации гетероциклических оснований полученными ранее бромсодержащими производными 2а, b. В случае липидов 9a и 9b синтез проводили в пиридине в течение 4.5 ч при 80 оC. Для получения глицеролипидов 10a и 10b реакцию проводили в среде безводного метилэтилкетона. Выход целевых соединений составил порядка 80-85%.

Соединения охарактеризованы данными масс-спектрометрии и 1Н-ЯМР спектроскопии (таблица 2).

Физико-химические характеристики глицеролипидов 9а, b и 10а, b Соедиm/z нение 1.2.2 Синтез катионных глицеролипидов с полярной головкой, представленной метилпиперидином и 4-гидрокси-N-метилпиперидином Для выяснения влияния отдельных структурообразующих элементов полярного домена на биологическую активность соединения нами были получены положительно заряженные алкильные глицеролипиды с такими гетероциклическими аминами как N-метилпиперидин (MePip) и 4-гидрокси-N-метилпиперидин (OHMePip), присоединёнными к глицериновому скелету при помощи линкеров, состоящих из трёх и четырёх метиленовых групп. Кватернизацией третичного атома азота N-метилпиперидина и 4-гидрокси-N-метилпиперидина бромпроизводными 2а, b были получены целевые соединения синтеза 11а, b и 12а, b (схема 5).

1.2.3 Синтез катионных глицеролипидов, содержащих N-метилимидазол и N-метилморфолин в полярном домене Синтез алкильных глицеролипидов с катионными «головками» в виде N-метилимидазола (MeIm) и N-метилморфолина (MeMo) осуществляли двояким образом (схема 6).

Через стадию А получали незаряженные имидазольные и морфолиновые липидные производные 13а, b и 15a, b. Их получение может быть рассмотренно как удобная основа для создания алкильных глицеролипидов с функциональными группами в полярном домене. Последующая кватернизация 13а, b и 15a, b иодистым метилом в среде безводного метилэтилкетона приводила к образованию целевых продуктов схемы 14а, b и 16a, b. При проведении синтеза по однастадийному варианту (через стадию С) третичные атомы азота N-метилимидазола и N-метилморфолина подвергались непосредственной кватернизации бромпроизводными 2а, b (схема 6). В обоих случаях выход продуктов составлял 77-85%.

Физико-химические характеристики синтезированных липидов Спектры 1Н-ЯМР соединений с противоионами различной природы были идентичны (таблица 4).

2. ИЗУЧЕНИЕ БИОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ СИНТЕЗИРОВАННЫХ ЛИПИДОВ

В рамках изучения биологических свойств синтезированных соединений была дана оценка их цитотоксического действия, гемолитической активности и мутагенности.

Кроме того, при помощи флуоресцентномеченных соединений, полученных в работе, была изучена динамика накопления катионных глицеролипидов в клетке, установлено их влияние на клеточный цикл и выявлены общие черты механизма антинеопластического действия.

Для оценки цитоксического показателя катионных глицеролипидов в тест-системе в качестве контроля использовался эдельфозин (Ef).

2.1 Исследование цитотоксического действия синтезированных соединений Изучение цитотоксичности полученных положительно заряженных алкильных глицеролипидов проводили на различных линиях опухолевых клеток лейкоза человека К562, K562/4, U937, а также на клетках рака толстой кишки HCT116. Результаты по биологической активности соединений оценивали при помощи колориметрического МТТ-теста.

Экспериментальная работа по оценке цитотоксичности соединений выполнена в лаборатории механизмов клеточной гибели НИИ канцерогенеза ГУ РОНЦ им.Н.Н.Блохина РАМН, под руководством д.м.н. Штиля А.А.

Водорастворимый витальный краситель – 3-(4,5-диметил-тиазол-2-ил)-2,5-дифенилтетразолиний бромид (МТТ) – под действием митохондриальной дегидрогеназы живых клеток превращается в темносиний формазан, растворимый только в органических растворителях. Фотометрическое измерение оптической плотности окрашенного раствора формазана позволяет определить количество живых клеток после инкубации с препаратом. Этот тест учитывает позднюю (конечную) стадию клеточной гибели, к которой сводится многообразие отдельных механизмов смерти.

2.1.1 Алифатические производные глицеролипидов Данные по цитотоксическому эффекту для синтезированных соединений 3а, b; 4a, b и 5а приведены ниже (таблица 5).

Для более детального изучения антинеопластической активности представленные модификационные линии соединений были дополнены ещё одним катионным глицеролипидом 8b, полученным в нашей лаборатории ранее. Поскольку он отличается от синтезированного в работе катионного глицеролипида 3b лишь длиной короткоцепного алкильного заместителя в С(2) положении глицеринового скелета виделось целесообразным включить данный катионный глицеролипид в эксперимент по изучению цитотоксических свойств синтезированных соединений.

Общая структурная формула O P O CH2CH2N+(CH3) Исходя из полученных данных по биологическим испытаниям (таблица 5) можно заключить, что наиболее токсичными для клеток лейкоза оказались липиды 3a, 3b и 8b (IC50 3.9±1.2; 3.6±1.0 мкМ; 4.2±0.8 мкМ, соответственно). Cоединения 4a и 4b оказались не активными по отношению к клеткам К562. Полученные результаты позволяют сделать выводы о влиянии отдельных структурных единиц глицеролипида на его биологические характеристики. Так, замена этильного заместителя метильным в С(2) положении глицерина несколько повышает противоопухолевую активность соединения:

IC50, ммоль 8b (4.2±0,8) и 3а (3.9±1,2), 3b (3.6±1,2). Можно сказать и о влиянии длины спейсера: его уменьшение на одну метиленовую группу (бутаноильный остаток вместо пентаноильного) приводит к некоторому уменьшению цитотоксического действия, 3а, b.

Для оценки биологической активности в отношении резистентных клеток лейкоза человека К562/4 был выбран глицеролипид 3b как одно из синтезированных в данной работе соединений с высоким показателем цитотоксичности для обычных клеток К (рис.3).

Невосприимчивость опухолевых клеток к действию различных препаратов обусловлена их способностью к быстрому становлению множественной лекарственной устойчивости (МЛУ). Одним из способов её предотвращения является снижение чувствительности опухолевых клеток к стрессу, что в свою очередь будет препятствовать активации дополнительных систем защиты опухолевых клеток и повысит эффективность противораковой терапии. Так, устойчивость можно преодолеть с использованием определённого рода соединений, воздействующих на специфические клеточные рецепторы. В частности, известно, что верапамил (альфа-/3диметоксифенил)этил/метил-амино/пропил/-3,4-диметокси-альфа-(1-метил-этил )-бензолацетонитрил) – инертное соединение для клеток в отношении проявления цитотоксических свойств активно снимает действие МЛУ, ослабляя защитные функции клеток.

Рис.3 Цитотоксичность глицеролипида 3b по отношению к клеткам К562 и К562/4 в присутствии и отсутствии верапамила При обработке клеточной культуры К562/4 липидом 3b клетки остаются нечувствительными к воздействию препарата (IC50 24.8 ммоль). В качестве контроля показано действие того же соединения на клетках К562 (IC50 4.5 ммоль). Совместная обработка резистентных клеток липидом 3b и верапамилом приводит к снижению устойчивости опухолевых клеток К562/4, (IC50 12.3 ммоль).

Полученные результаты хорошо согласуются с литературными данными для эдельфозина:

резистентные клетки К562/4 – 31.1 ммоль (Ef);

резистентные клетки К562/4 – 17.4 ммоль (Ef+верапамил);

не резистентные клетки К562 – 2.3 ммоль (Ef).

Изучение цитотоксических свойств соединения 3b-dh (катионного глицеролипида, содержащего флуоресцентную метку в виде дансильной группы в полярном домене) показало сопоставимую цитотоксическую активность с глицеролипидом 3b. Так, данные по IC50 (К562) получены соответственно: 4.8 ммоль 3b и 9.3 ммоль 3b-dh (рис.4).

Рис. 4 Цитотоксичность глицеролипида 3b и его флуоресцентного аналога 3b-dh.

Аналогичные результаты были получены для пары 8b и 8-dh (5.5 ммоль и 10.0 ммоль соответственно).

2.1.2 Гетероциклические производные глицеролипидов При изучении цитотоксической активности гетероциклических производных глицеролипидов, в частности, пиридинсодержащих соединений, внимание уделялось различию длины спейсерного участка, а также заместителя при атоме С(2) глицеринового скелета. Изменение отдельных структурных элементов позволит проследить их влияние на противоопухолевые свойства.

С целью расширения представлений о влиянии структурной модификации на биологические свойства в работе также исследованы пиридинсодержащие соединения 9с-h, синтезированные в нашей лаборатории ранее,. Изучение цитотоксической активности проводили на клетках лейкоза человека К562 и раковых клетках толстой кишки НСТ116 (таблица 6).

Таким образом, можно отметить, что в зависимости от типа тестируемой клеточной линии результаты, полученные по цитотоксичности соединений неодинаковы. В большей мере пиридинсодержащие глицеролипиды оказались цитотоксичными по отношению к клеткам НСТ116, в то время как контрольный препарат эдельфозин оказался малоактивен для данной клеточной линии ( ммоль), однако, для клеток К562 значение IC50 эдельфозина составило 3.2 ммоль.

При изучении цитотоксической активности других представителей катионных глицеролипидов с гетероциклическими катионными «головками» были получены данные, позволяющие выявить соединения с высокой антинеопластической активностью. Результаты биологических испытаний, проводимых на клеточных линиях лейкоза человека К562 и НСТ116, представлены в таблице 7.

2.1.3 Исследование гемолитической активности соединений Часто при высоких показателях цитотоксической активности по отношению к опухолевым клеткам соединения могут обладать и гемолитической активностью.

При изучении синтезированных катионных глицеролипидов 3а,b; 4а,b и 9 на гемолитическую активность было показано, что процент гибели клеток для исследуемых соединений достоверно не превышает таковой для растворителя (33.2%, ДМСО). Полученные данные сопоставимы с данными по контрольному препарату (рис.5). Таким образом, открывается возможность использования синтезированных веществ в экспериментах in vivo.

Рис. 5 Гемолитическая активность алифатических производных Была изучена гемолитическая активность в ряду пиридинсодержащих соединений. Оказалось, что наибольшей гемолитической активностью отличается липид 9g, соединения 9а-d также превышают %-ый предел по растворителю, являясь гемолитически активными.

Рис. 6 Гемолитическая активность пиридинсодержащих соединений Что касается остальных синтезированных соединений, в частности, алкильных глицеролипидов с другими гетероциклическими основаниями, было показано, что, обладая высокой цитотоксической активностью по отношению к клеткам К562 и НСТ116, они не проявляли гемолитической активности.

Экспериментальная работа по оценке гемолитической активности соединений выполнена на кафедре органической химии Самарского Государственного Университета под руководством В.А Ерохина и Н.А. Клёновой.

2.3 Изучение мутагенных свойств синтезированных соединений Первичную оценку мутагенной активности и учет генных мутаций вновь синтезированных глицеролипидов проводили при помощи теста Эймса. Для соединения 3b, согласно протоколу исследований показано, что оно не обладает мутагенными свойствами и в связи с этим наличие у него канцерогенной активности, связанной с генотоксичностью, маловероятно.

2.4 Исследование изменений клеточного цикла под влиянием синтезированных катионных глицеролипидов Уникальным инструментом, позволяющим проследить за ходом инициируемых изменений в клетке является проточная цитометрия. При попытке выявить тип клеточной гибели, к которому сводится цитототоксическое действие агентов, принадлежащих классу бесфосфорных катионных глицеролипидов, а также оценить изменения клеточного цикла была проведена серия соответствующих экспериментов.

Для анализа были выбраны схожие линии лейкозных клеток человека К562 и U937. В качестве тестируемого препарата выступал катионный глицеролипид 3b.

На рис.7 и рис.8 приведены развёртки клеточного цикла для клеток, подвергшихся обработке препаратом в различных концентрациях.

Рис.7 Культура К562.

Рис.8 Культура U937.

а) контроль; b) 3.1 ммоль; c) 6.3 ммоль; d) 12.5 ммоль липида.

Экспериментальная работа по изучению мутагенной активности соединения 3b выполнена в лаборатории методов скрининга канцерогенов НИИ канцерогенеза ГУ РОНЦ им.Н.Н.Блохина РАМН, под руководством проф. Белицкого Г.А.

В работе использовались индикаторные штаммы Salmonella typhimurium TA100 и TA98.

Экспериментальная работа выполнена в институте Иммунологии РАМН, под руководством Литвиной М.В.

перераспределения клеточной плотности: возрастает доля клеток, находящихся в состоянии апоптоза. При этом клеток, подвергшихся некротической гибели даже при критических концентрациях препарата (выше IC50, ммоль) зафиксировано не было.

Выводы справедливы для обоих типов рассматриваемых клеточных линий.

2.5 Изучение динамики накопления катионных глицеролипидов в клетке Для липида 3b при помощи проточной цитофлуорометрии на клеточной культуре К562 было показано, что соединение проникает в клетки, и, более того, при конечной концентрации 6.3 ммоль - накапливается в них.

Рис. 9 Временная зависимость динамики накопления препарата в клетках К562.

Время накопления соединения в клетке до достижения своего максимального значения составляет 40 минут, при этом величина среднего концентрационного канала флуоресценции (MCF) равна 30% от исходного (рис.9).

2.6 Установление типа клеточной гибели под воздействием катионных глицеролипидов С целью установления типа клеточной гибели проводили исследование синтезированных соединений при помощи электронной микроскопии. На рис.10 и рис.11 для катионного глицеролипида 3b представлены электронные фотографии клеток контроля и клеток, обработанных препаратом в концентрации 6.3 ммоль.

Снимки электронной микроскопии показали, что под воздействием препарата – для обработанных клеток наблюдаются характерные признаки, присущие апоптозу:

выраженная конденсация маргинального хроматина и фрагментация ядра при хорошо сохранённой цитоплазме клеток (рис. 10b).

Экспериментальная работа выполнена в институте Иммунологии РАМН.

Экспериментальная работа выполнена в лаборатории гистохимии и электронной микроскопии отдела патологической анатомии опухолей человека на базе института РОНЦ им. Н.Н. Блохина при участии сотр. Филипповой Н.А.

Аналогичная картина наблюдается для обработанных клеток линии НСТ116.

Образование в цитозоле клеток многочисленных вакуолей, расширенные цистерны ГЭР (гладкого эндоплазматического ретикулума), увеличение периферического гетерохроматина в ядрах свидетельствуют о том, что клетки явно находятся в состоянии апоптоза, при этом чётко видна фрагментация ядра (рис. 11b).

Рис.10 Увеличение 2500. Культура К562; а) контроль, b) препарат.

Рис.11 Увеличение 5000. Культура НСТ116; а) контроль; b) препарат.

2.7 Изучение распределения катионных глицеролипидов клетке, установление мест их наиболее вероятной локализации Было установлено, что бесфосфорные алкильные катионные глицеролипиды, наряду с эдельфозином, способны проникать в опухолевые клетки, накапливаться в них и вызывать апоптическую гибель. Для препарата 3b-dh при помощи микроскопа с освещением поддерживаемым ртутной лампой были получены снимки клеток контроля и обработанных препаратом в концентрации 3.1 ммоль (рис. 12а, b клеточная культура НСТ116).

При помощи конфокальной микроскопии было показано распределение исследуемого липида в клетке (рис. 12c-е).

Установлено, что распределение катионного глицеролипида 3b-dh отличается от мест локализации эдельфозина для той же культуры клеток. Конденсация Ef нередко наблюдается в лизосомах. Однако, в случае синтезированного бесфосфорного липида 3b-dh зафиксировано его полное отсутствие в лизосомальных тельцах клетки, а Экспериментальная работа выполнена на кафедре инструментального анализа биологического факультета МГУ им. М.В. Ломоносова.

именно: при одновременном введении в клетку лизотреккера и катионного липида, содержащего флуоресцентную метку, места локализации препарата и лизосомной метки не совпадали. Выдвинуто предположение, что локусом накопления для бесфосфорных катионных глицеролипидов в клетке могут служить митохондрии.

Общим же местом локализации для исследуемого липида и Ef является цитоплазматическая мембрана.

a)фазовый контраст, b)свечение липида в клетках c) клетки до обработки, d) контрастирование, е) свечение липида;

Рис. 12 Распределение катионного глицеролипида 3b-dh в клетках НСТ116.

Являясь по своей природе не мутагенными селективными соединениями, обладающими антинеопластическими свойствами и характеризующиеся отсутствием гемолитической активности, катионные глицеролипиды с простой эфирной связью зарекомендовали себя в качестве потенциальных агентов противоопухолевой терапии.

ВЫВОДЫ

1. Синтезированы новые бесфосфорные глицеролипиды с набором аммониевых катионных «головок» гетероциклического и алифатического ряда.

2. Получены модификационные ряды алкильных глицеролипидов, в которых гидрофильный домен отделён от гидрофобного участка спейсерными группами различной длины.

3. Синтезированы флуоресцентномеченые катионные глицеролипиды с простой эфирной связью для изучения динамики накопления в раковых клетках и выявления мест их наиболее вероятной внутриклеточной локализации.

4. Проведены биологические испытания in vitro полученных в работе соединений.

Дана оценка цитотоксической и гемолитической активности, изучены мутагенные свойства. Показана корреляция структуры липидов с их активностью. По результатам исследований могут быть рекомендованы определённые соединения для дальнейших биологических испытаний.

5. Выявлен тип гибели опухолевых клеток под воздействием катионных алкильных глицеролипидов.

Основные результаты работы изложены в следующих публикациях:

1. Романова С.Г., Штиль А.А., Серебренникова Г.А. Синтез новых бесфосфорных аналогов эдельфозина и их цитотоксичность. // Биоорган. Химия.

– 2008. – Т. 34. – №6. – С. 827-830.

2. Романова С.Г., Романов В.Г., Плявник Н.В., Серебренникова Г.А., Штиль А.А. Синтез бесфосфорных пиридинсодержащих глицеролипидов с простой эфирной связью. // Вестник МИТХТ. – 2008. – Вып. 3. – №4. – С. 53-57.

3. Романова С.Г., Серебренникова Г.А., Штиль А.А. Синтез, изучение цитотоксических свойств и гемолитической активности катионных глицеролипидов алкильного типа. // Вестник МИТХТ. - 2008. – Т. 3. - №5. – С.

101-105.

4. Плявник Н.В., Романова С.Г., Серебренникова Г.А. Синтез физиологически активных глицеролипидов алкильного типа. // Тезисы докладов Первой научно-технической конференции молодых ученых «Наукоемкие химические технологии». – Москва – 2005 – Т. 1 – С. 36-37.

5. Романова С.Г., Плявник Н.В., Маслов М.А., Штиль А.А., Серебренникова Г.А. Бесфосфорные глицеролипиды алкильного типа – новый класс противоопухолевых соединений. // Тезисы докладов (Российский Биотерапевтический Журнал) V Всероссийской научно-практической конференции «Отечественные противоопухолевые препараты». – Москва – – Т. 5 – №1 – С.19.

6. Плявник Н.В., Романова С.Г., Штиль А.А., Серебренникова Г.А.

противоопухолевые агенты. // Тезисы докладов Международной конференции «Биотехнология и медицина». – Москва – 2006 – С. 107.

7. Романова С.Г., Плявник Н.В., Серебренникова Г.А. Синтез катионных глицеролипидов с простой эфирной связью. // Тезисы докладов Международной конференции молодых ученых по фундаментальным наукам “Ломоносов-2006”. – Москва – 2006 – Т.2 – С.42.

8. Плявник Н.В., Романова С.Г., Никитин Н.А., Серебренникова Г.А.

Амфифильные производные алифатических и гетероциклических аминов и их биологическая активность. // Тезисы докладов Международного симпозиума «Advanced Science in Organic Chemistry».–Судак – 2006 – С.134.

9. Романова С.Г., Плявник Н.В., Серебренникова Г.А. Синтез бесфосфорных алкильных глицеролипидов с катионными «головками»

гетероциклического ряда. // Тезисы докладов Юбилейных Научных Чтений, посвященных 110-летию со дня рождения проф. Н.А. Преображенского. – Москва–2006 - С.22.

10. Романова С.Г., Плявник Н.В., Штиль А.А., Серебренникова Г.А. Синтез и исследование биологической активности бесфосфорных катионных глицеролипидов алкильного типа. // Тезисы докладов V Международной конференции по органической химии «Органическая химия от Бутлерова и Бейльштейна до современности». – Санкт-Петербург – 2006 – С.469-470.

11. Романова С.Г., Плявник Н.В., Серебренникова Г.А. Разработка методов синтеза новых бесфосфорных катионных глицеролипидов алкильного типа. // Тезисы докладов ХI Международной научно-технической конференции “Наукоемкие химические технологии - 2006”. – Самара – 2006 – Т.1 – С.161-162.

12. Романова С.Г., Серебренникова Г.А. Синтез бесфосфорных алкильных глицеролипидов с катионными головками гетероциклического ряда. // Тезисы докладов XVIII Менделеевского съезда по общей и прикладной химии. – Москва – 2007 – Т.4 – С.573.

13. Романова С.Г., Серебренникова Г.А., Штиль А.А. Антинеопластические свойства бесфосфорного аналога эдельфозина - катионного глицеролипида с простой эфирной связью. // Тезисы докладов VII Всероссийской научнопрактической конференции с международным участием «Отечественные противоопухолевые препараты». (Российский Биотерапевтический Журнал) – Москва – 2008 – Т. 7 – №1 – С.51.

14. Романова С.Г., Серебренникова Г.А. Синтез бесфосфорных алкильных глицеролипидов с катионными головками гетероциклического ряда. // Тезисы докладов Международной конференции молодых ученых по фундаментальным наукам “Ломоносов-2008”. – Москва – 2008 – С.44.

15. Романова С.Г., Серебренникова Г.А., Штиль А.А. Катионные бесфосфорные алкильные глицеролипиды – потенциальные агенты противоопухолевой терапии. // Тезисы докладов IV Съезда Российского общества биохимиков и молекулярных биологов. – Новосибирск – 2008 – С. 232.

16. Романова С.Г., Серебренникова Г.А. Создание алкильных глицеролипидов с пиридиниевыми полярными «головками». // Тезисы докладов ХII Международной научно-технической конференции “Наукоемкие химические технологии - 2008”. – Волгоград – 2008 – Т.1 – С.53.



 


Похожие работы:

«КОНДРАТЬЕВА ОКСАНА ВИКТОРОВНА РЕАКЦИИ ФУНКЦИОНАЛЬНО ЗАМЕЩЕННЫХ ЦИКЛОПРОПАНОВ С ПРОИЗВОДНЫМИ КИСЛОТ ФОСФОРА И БОРА 02.00.03 – Органическая химия АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук Казань – 2009 2 Работа выполнена на кафедре химии ГОУ ВПО Чувашский государственный педагогический университет им. И. Я. Яковлева. доктор химических наук, профессор Научный руководитель : Митрасов Юрий Никитич Официальные оппоненты : доктор химических...»

«Кондратенко Михаил Сергеевич Влияние полибензимидазолов на структуру трехфазной границы, протонную проводимость и механизмы деградации поверхности платины в активных слоях электродов фосфорнокислотных топливных элементов Специальности: 02.00.06 – высокомолекулярные соединения 02.00.05 – электрохимия АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата физико-математических наук Москва – 2013 Работа выполнена на кафедре физики полимеров и кристаллов физического...»

«Николенко Любовь Михайловна Сборка органических и гибридных наноструктур в обратных микроэмульсиях. 02.00.04 – физическая химия АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук Черноголовка – 2009 3 Работа выполнена в Институте проблем химической физики РАН кандидат физико-математических наук Научный руководитель : Бричкин Сергей Борисович Официальные оппоненты : доктор химических наук, член-корреспондент РАН, профессор Чибисов Александр...»

«Сальников Денис Сергеевич КИСЛОТНО-ОСНОВНЫЕ СВОЙСТВА СУЛЬФОКСИЛОВОЙ КИСЛОТЫ И ДИОКСИДОВ ТИОМОЧЕВИН И ИХ РЕАКЦИОННАЯ СПОСОБНОСТЬ В РЕДОКС-ПРОЦЕССАХ 02.00.04 – физическая химия Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук Иваново 2008 Работа выполнена на кафедре технологии пищевых продуктов и биотехнологии ГОУ ВПО государственный химикоИвановский технологический университет. Научный руководитель : доктор химических наук, профессор Макаров Сергей...»

«ЗАХАРОВ ОЛЕГ ВЛАДИМИРОВИЧ КИНЕТИКА ЖИДКОФАЗНОЙ ГИДРОГЕНИЗАЦИИ 4–НИТРОТОЛУОЛА В БИНАРНЫХ РАСТВОРИТЕЛЯХ 2–ПРОПАНОЛ–ВОДА Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук по специальности 02.00.04 – Физическая химия Иваново, 2011 Работа выполнена на кафедре физической и коллоидной химии государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования Ивановский государственный химико-технологический университет. Научный руководитель...»

«МЕЛЬНИКОВ Игорь Олегович РАЗРАБОТКА МИКРОМЕТОДОВ АНАЛИЗА АМИНОКИСЛОТ, КОРОТКИХ ПЕПТИДОВ И ОЛИГОНУКЛЕОТИДОВ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ОФ ВЭЖХ И КАПИЛЛЯРНОГО ЭЛЕКТРОФОРЕЗА Специальность: 02.00.02 – Аналитическая химия АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук МОСКВА 2006 Диссертационная работа выполнена на кафедре аналитической химии Московской государственной академии тонкой химической технологии им. М.В. Ломоносова и в группе аналитической химии...»

«ТИТЕЕВ РУСТАМ АНВАРОВИЧ СИНТЕЗ И СВОЙСТВА ПРОИЗВОДНЫХ ДИ- И ТЕТРАГИДРОПОРФИРИНОВ С ПОЛИЭДРИЧЕСКИМИ СОЕДИНЕНИЯМИ БОРА 02.00.10 – Биоорганическая химия АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук Москва – 2010 1 Работа выполнена на кафедре химии и технологии биологически активных соединений им. Н.А. Преображенского Московской государственной академии тонкой химической технологии им. М.В. Ломоносова. Научный руководитель : Доктор химических...»

«Чуракова Марина Васильевна СИНТЕЗ, СТРУКТУРА И КОМПЛЕКСООБРАЗОВАНИЕ БЕНЗОАЗА-, БЕНЗОТИААЗАИ ДИБЕНЗОДИАЗАКРАУН-ЭФИРОВ (02.00.03 – Органическая химия) АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учёной степени кандидата химических наук Москва – 2008 Работа выполнена в лаборатории синтеза и супрамолекулярной химии фотоактивных соединений Центра фотохимии Российской академии наук (ЦФ РАН, г. Москва) 2 Научный руководитель : доктор химических наук, профессор Громов Сергей...»

«Тягливый Александр Сергеевич ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ ЕНДИИНОВ, орто-ДИАЛКИНИЛ(ГЕТ)АРЕНОВ И ИХ НИТРИЛЬНЫХ АНАЛОГОВ С N-НУКЛЕОФИЛАМИ 02.00.03 – Органическая химия АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук Ростов-на-Дону - 2013 Работа выполнена на кафедре органической химии химического факультета федерального государственного автономного образовательного учреждения высшего профессионального образования Южный федеральный университет. Научный...»

«Болгов Алексей Александрович ПОЛУЧЕНИЕ ГОМОЛОГОВ ХИТОЗАНА И ЕГО ПОЛИМЕРАНАЛОГИЧНЫЕ ПРЕВРАЩЕНИЯ 02.00.06 – высокомолекулярные соединения АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук Москва 2009 www.sp-department.ru Работа выполнена в Воронежском государственном университете На кафедре высокомолекулярных соединений и коллоидов Научный руководитель : доктор химических наук, доцент Кузнецов Вячеслав Алексеевич Официальные оппоненты : доктор...»

«БАРДИНА Надежда Владимировна CРАВНИТЕЛЬНОЕ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ИЗУЧЕНИЕ МЕХАНИЗМА ВОССТАНОВЛЕНИЯ СУБСТРАТОВ НИТРОГЕНАЗЫ ПРИ КАТАЛИЗЕ МОДЕЛЬНЫМ MgMo КОМПЛЕКСОМ И ПРИРОДНЫМ КЛАСТЕРОМ FeMoco, ВЫДЕЛЕННЫМ ИЗ ФЕРМЕНТА 02.00.15 – катализ АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук Черноголовка – 2008 Работа выполнена в Институте проблем химической физики РАН кандидат химических наук Научный руководитель : Баженова Тамара Александровна доктор...»

«АБХАЛИМОВ ЕВГЕНИЙ ВЛАДИЛЕНОВИЧ МЕХАНИЗМ ФОРМИРОВАНИЯ КЛАСТЕРОВ И НАНОЧАСТИЦ СЕРЕБРА ПРИ ВОССТАНОВЛЕНИИ ЕГО ИОНОВ В ВОДНЫХ РАСТВОРАХ В ПРИСУТСТВИИ ПОЛИЭЛЕКТРОЛИТОВ Специальность 02.00.04 - физическая химия АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук Москва 2008 Работа выполнена в Учреждении Российской академии наук Институте физической химии и электрохимии имени А.Н. Фрумкина РАН Научный руководитель : член-корреспондент РАН, доктор химических...»

«Путилов Лев Петрович ДЕФЕКТООБРАЗОВАНИЕ И РАСТВОРЕНИЕ ВОДОРОДА В АКЦЕПТОРНО-ДОПИРОВАННЫХ ПРОТОНПРОВОДЯЩИХ ОКСИДАХ Специальность: 02.00.04 – Физическая химия АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук Екатеринбург – 2014 Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении науки Институте высокотемпературной электрохимии Уральского отделения РАН (ИВТЭ УрО РАН), г. Екатеринбург. Научный руководитель : Цидильковский Владислав...»

«Галлямов Марат Олегович СКАНИРУЮЩАЯ СИЛОВАЯ МИКРОСКОПИЯ ПОЛИМЕРНЫХ СТРУКТУР НА ПОДЛОЖКЕ Специальность 02.00.06 Высокомолекулярные соединения АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора физико-математических наук Москва 2009 г. Работа выполнена на кафедре физики полимеров и кристаллов физического факультета Московского государственного университета им. М. В. Ломоносова. Официальные оппоненты : доктор химических наук, академик РАН Бучаченко Анатолий Леонидович...»

«Жукова Наталия Сергеевна Уреидоалкилирование С-нуклеофилов N-тозилметил- и N,N'-бис(тозилметил)(тио)мочевинами. Синтез полифункционализированных (тио)мочевин. 02.00.03 – органическая химия АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук Москва 2010 Работа выполнена на кафедре органической химии имени И.Н.Назарова Московской государственной академии тонкой химической технологии имени М.В. Ломоносова Научный руководитель : Доктор химических наук,...»

«БАЯНОВА НАДЕЖДА ВИТАЛЬЕВНА СИНТЕЗ ГОМО- И ГЕТЕРОДЕНДРИМЕРОВ НА ОСНОВЕ АМИНОКИСЛОТ Специальность 02.00.06 – высокомолекулярные соединения АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук Санкт-Петербург 2007 2 Работа выполнена в ордена Трудового Красного Знамени Институте высокомолекулярных соединений Российской академии наук Научный руководитель : доктор химических наук, профессор Г.П. Власов Официальные оппоненты : доктор химических наук, старший...»

«          ФАН ХУНЦЭ Новые органические внутрикомплексные соединения кремния и германия на основе альфа-амино- и альфа-гидроксикислот 02.00.03 органическая химия 02.00.08 химия элементоорганических соединений АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук Москва – 2012 Работа выполнена на кафедре общей и биоорганической химии Российского национального исследовательского медицинского университета имени Н. И. Пирогова Научные руководители: д.х.н.,...»

«Томилина Александра Вадимовна РЕОЛОГИЧЕСКИЕ И КОЛЛОИДНЫЕ СВОЙСТВА ВОДНЫХ РАСТВОРОВ АССОЦИИРУЮЩИХ АКРИЛОВЫХ ПОЛИЭЛЕКТРОЛИТОВ 02.00.06 – высокомолекулярные соединения Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук Нижний Новгород – 2013 Работа выполнена на кафедре высокомолекулярных соединений и коллоидной химии химического факультета Федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования...»

«Соловьева Анна Алексеевна ОКИСЛИТЕЛЬНАЯ ДЕСТРУКЦИЯ НИТРОЗАМЕЩЕННЫХ ФЕНОЛОВ 02.00.04 – Физическая химия АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук Иваново 2009 Работа выполнена на кафедре общей химии ГОУ ВПО Белгородский государственный университет. Научный руководитель : доктор химических наук, профессор Лебедева Ольга Евгеньевна Официальные оппоненты : доктор химических наук, Макаров Сергей Васильевич профессор Ивановский государственный...»

«ТРОФИМОВ Евгений Алексеевич ТЕРМОДИНАМИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ ФАЗОВЫХ РАВНОВЕСИЙ В МНОГОКОМПОНЕНТНЫХ СИСТЕМАХ, ВКЛЮЧАЮЩИХ МЕТАЛЛИЧЕСКИЕ РАСПЛАВЫ Специальность 02.00.04 –– Физическая химия Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора химических наук Челябинск – 2014 Диссертация выполнена на кафедре Физическая химия ФГБОУ ВПО Южно-Уральский государственный университет (НИУ). Научный консультант – Михайлов Геннадий Георгиевич, доктор технических наук, профессор....»








 
© 2013 www.diss.seluk.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Авторефераты, Диссертации, Монографии, Методички, учебные программы»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.