WWW.DISS.SELUK.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА
(Авторефераты, диссертации, методички, учебные программы, монографии)

 

На правах рукописи

Беликов Николай Евгеньевич

РАЗРАБОТКА МЕТОДОВ ПОЛУЧЕНИЯ И ИССЛЕДОВАНИЕ

СВОЙСТВ НОВЫХ ФОТОХРОМНЫХ МЕТОК

(02.00.10 – Биоорганическая химия)

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени

кандидата химических наук

Москва – 2011

Работа выполнена на кафедре биотехнологии и бионанотехнологии Московской государственной академии тонкой химической технологии им. М.В.Ломоносова.

Научный руководитель:

доктор химических наук Ходонов Андрей Александрович

Официальные оппоненты:

доктор химических наук, профессор Федорова Ольга Анатольевна доктор биологических наук, профессор Складнев Дмитрий Анатольевич

Ведущая организация: Институт проблем химической физики РАН, Черноголовка

Защита состоится 06 июня 2011 года в 15-00 часов на заседании Диссертационного Совета Д 212.120.01 при Московской государственной академии тонкой химической технологии им.

М.В. Ломоносова по адресу: 119571, Москва, пр. Вернадского, д. 86.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке МИТХТ им. М.В.Ломоносова (119571, Москва, пр. Вернадского, д. 86).

С авторефератом можно ознакомиться на сайте www.mitht.ru.

Автореферат разослан мая 2011 года

Ученый секретарь Диссертационного Совета, кандидат химических наук, старший научный сотрудник Лютик А.И.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. В настоящее время проводятся интенсивные поисковые исследования, направленные на разработку фундаментальных научных основ создания современных технологий получения и последующего производства новых фотоактивных наноразмерных материалов для широкого спектра применений в технике, медицине, фармацевтической промышленности и оптике, при создании новых методов визуализации биообъектов, для решения проблем в области информационной безопасности, биосенсорных технологий и др. Особое место среди них занимают фундаментальные исследования, направленные на изучение детальных механизмов взаимодействия света с модельными или природными биологическими наноразмерными объектами, как на уровне единичных молекул, так и в составе ансамблей.





Дизайн новых гибридных молекулярных структур, содержащих фотохромные фрагменты в качестве активного рабочего элемента и обладающих рядом полезных свойств, а также разработка новых эффективных методов их получения, представляют особый интерес для развития исследований в бионанотехнологии, бионанофотонике и наномедицине в связи с возможностью реализации обратимого фотоуправления биологическими процессами. Основная цель настоящей работы была сфокусирована на дизайне и разработке способов получения, включая комплексное исследование свойств и фотохромного поведения, новых гибридных фотоактивных материалов на основе биологических, органических и неорганических наноразмерных компонентов.

Для получения фотохромных систем с упорядоченными и заданными свойствами возможно использование нескольких подходов:

использование кристаллов фотохромных соединений;

получение моно- и полимолекулярных слоев с упорядочной структурой с помощью технологии Langmuir-Blodgett;

получение агрегатов и конъюгатов с поверхностно-активными веществами в виде мицелл, везикул и липосом;

допирование полимерной матрицы;

получение супрамолекулярных организованных структур и ансамблей за счет процессов самоорганизации и молекулярного распознавания.

Наиболее перспективный вариант, с точки зрения возможности технического и коммерческого использования, заключается в модификации разнообразных по природе субстратов при помощи известных методов ковалентной иммобилизации. Такая процедура маркирования путем ковалентной «посадки» фотохромных лигандов через линкеры различного размера и природы с терминальной реакционноспособной функциональной В руководстве отдельных этапов работы, связанных с изучением спектрально-кинетических характеристик диарилэтенов, принимал участие зав. лаб., к.ф.-м.н. Барачевский В.А. (Центр фотохимии РАН) группой позволяет получать новые целевые гибридные фотоактивные/фотоуправляемые системы и материалы. Для ее реализации необходимо было создать новое поколение фотохромных меток, имеющих спейсеры с реакционноспособными функциональными группами и сохраняющих заданный спектр фотохромных и спектральных характеристик и параметров. Структура возможных субстратов определяет природу спейсера и необходимый тип реакционноспособной функциональной группы.

В ходе выполнения настоящей работы впервые был получен ряд новых гибридных фотоактивных систем на основе ковалентных конъюгатов фотохромных лигандов, для которых характерно сочетание фотохромной компоненты с неорганическими флуорофорами (квантовыми точками) или бинарный набор двух различных по природе фотохромов. В качестве целевой биологической мишени был выбран уникальный биофотохром — светозависимая протонная транслоказа — бактериородопсин из экстремально галофильной бактерии Halobacterium salinarum. В качестве органических лигандов были выбраны серия фотохромных производных ряда спиропирана (1) и две серии производных ряда фторированных (8) и нефторированных (9) диарилэтиленов. Необходимо отметить, что у диарилэтиленов, в отличие от спиропиранов, отсутствует самопроизвольная термохимическая реакция обесцвечивания фотоиндуцированной формы, что делает фотохромы этого класса наиболее перспективными кандидатами для создания прототипов различных технических устройств, в частности, трехмерной оптической памяти большой емкости.





Впервые были разработаны новые методы синтеза и проведено комплексное изучение полифункциональных свойств органических и гибридных фотохромных соединений и материалов на основе спиропиранов или диарилэтиленов и/или бактериородопсина.

Для придания способности к ковалентному взаимодействию с мишенью молекулы фотохромных лигандов необходимо было модифицировать путем введения в определенное положение исходного фотохрома ненасыщенных линкеров различной природы, степени ненасыщенности и размера, содержащих реакционноспособные терминальные группы (-SH или -CHO).

Работа является частью плановых научных исследований, проводимых на кафедре биотехнологии и бионанотехнологии МИТХТ им. М.В. Ломоносова в рамках госбюджетной темы 1Б-5-356 ”Исследования липидов, нуклеозидов, пептидов, ретиноидов методами биотехнологии и химического синтеза с целью создания препаратов медицинского назначения (онкологические и вирусные болезни, возрастные патологии)”, по грантам президента РФ по поддержке ведущих научных школ за 2008-2010 гг. (тема НИР 1Р-5-356), гранту РФФИ 09-03-00565 (2009-2011 гг.), гранту президента РФ по поддержке молодых кандидатов наук МК-2598.2010.4 (2010-2011 гг., тема НИР 1Р-45-356), государственных контрактов № 02.512.11.2250 (2008-2009 гг. тема НИР 2Б-52-356), №16.740.11.0177 (2010гг., тема НИР 2Б-78-356).

1. Дизайн структуры и разработка методов получения новой фотохромной метки на основе спиропиранов для маркирования наноразмерного неорганического флуорофора — квантовых точек (CdSe):

1.1. получение исходного 5-формилпроизводного 6'-нитроспиропирана (1);

1.2. детальное исследование оптимальных вариантов получения ключевых промежуточных фотохромных лигандов (2, 3) путем введения спейсера с использованием процедуры олефинирования карбонильного предшественника по Виттигу, Хорнеру-Эммонсу или Кневенагелю-Дебнеру;

1.3. подбор и апробация условий активации карбоксильной группы в фотохромном лиганде 1.4. исследование ряда вариантов синтеза целевого фотохромного лиганда с терминальной меркапто-группой;

1.5. получение и исследование спектральных и фотохимических свойств конъюгатов квантовой точки, меченной фотохромной меткой.

2. Дизайн структур молекул и разработка методов получения новых фотохромных лигандов для маркирования биологического объекта — бактериородопсина:

2.1. разработка методики получения исходного 2-формильного производного циклопентенового дитиенилэтена (9);

2.2. разработка синтетической процедуры получения двух серий новых фотохромных меток ряда диарилэтенов;

2.3. исследование процесса олефинирования по Хорнеру-Эммонсу карбонильных предшественников в ряду диарилэтенов;

2.4. анализ и доказательство строения фотохромных меток ряда диарилэтенов.

Исследование фотохимических характеристик синтезированных фотохромных лигандов.

4. Изучение процесса взаимодействия синтезированных фотохромных меток с бактериоопсином в составе апомембран Halobacterium salinarum.

В данной работе были оптимизированы методы синтеза ряда исходных соединений.

Впервые был предложен и реализован эффективный синтетический подход для прямой модификации спиропиранового ядра путем введения в С5-положение молекулы фотохрома спейсеров различной природы и размера, степени ненасыщенности и содержащих реакционноспособные терминальные группы.

Впервые был получен конъюгат квантовых точек, меченных фотохромной меткой на 5-замещенного 6'-нитроспиропирана, фотохимические свойства.

Впервые было проведено детальное исследование и анализ особенностей процедуры олефинирования по Хорнеру-Эммонсу в ряду новых производных спиропиранов и дитиенилэтенов.

Впервые были получены две серии аналогов ретиналя на основе дитиенилэтенов и проведены детальные исследования их спектральных свойств и фотохромного поведения.

Проведенное спектрально-кинетическое исследование характеристик фотохромных меток в полярном и малополярном растворителе (этанол и толуол) показало, что замена атомов фтора на водород в циклопентеновом кольце диарилэтена приводит к полной потере фотохромных свойств у аналогов ретиноидов (20, 22, 24).

дитиенилэтенов c бактериоопсином в составе апомембран из H. salinarum, и спектральные свойства новых аналогов бактериородопсина. Была показана возможность фотоуправления результатом процесса распознавания белковой матрицей бактериородопсина одной и той же структуры аналога хромофорной группы - открытой и циклизованной форм полиеналя (23).

диарилэтена (9).

Разработаны методы введения линкера с терминальной карбоксильной группой в молекулу 5-формильного производного 6’-нитроспиропирана (1) и с осуществлен синтез ключевого карбоксильного производного спиропирана (3). Разработан метод синтеза конъюгата квантовых точек и исследованы его фотохимические свойства. Была показана принципиальная возможность фотоуправления флуоресценцией квантовых точек, меченных фотохромной меткой на основе С5-замещенного 6’-нитроспиропирана.

Был разработан и осуществлен синтез 2 серий полиеналей на основе производных дитиенилэтенов. Проведено исследование влияния условий проведения реакций олефинирования по Хорнеру-Эммонсу и Виттигу в ряду производных спиропиранов и дитиенилэтенов на выход и стереохимию процесса.

Результаты фундаментальных исследований, полученные в настоящей работе, могут быть использованы как для дальнейшего углубленного изучения явления фотохромизма, так и для прикладных исследований в области информационных технологий, биосенсорики и бионаноэлектроники и медицины для решения целого ряда важнейших практических задач.

Публикации и апробация работы. По материалам диссертации опубликовано статьи в отечественном и международном научных журналах. Получен 1 патент РФ.

Результаты, полученные в диссертационной работе, неоднократно были доложены и представлены на следующих международных научных конференциях: XXIst IUPAC Symposium on Photochemistry, Kyoto, Japan, 2006; International Symposium on Molecular Photonics devoted to the memory of academician A.N. Terenin, St. Petersburg, Russia, 2006;

International Symposium “Advanced Science in Organic Chemistry”, Sudak, Crimea, 2006; XVIII Mendeleev Congress on General and Applied Chemistry, Moscow, Russia, 2007; International Conference “Molecular and nanoscale system for energy conversion”, Moscow, Russia, 2007;

Международной конференции «Нанофотоника», Черноголовка, Россия, 2007; International Symposium on Photochromism, Vancouver, British Columbia, Canada, 2007; XXIII International Conference on Photochemistry, Cologne, Germany, 2007; XII Международной научнотехнической конференции Наукоемкие химические технологии-2008, Волгоград, 2008;

XXIInd IUPAC International Symposium on Photochemistry, Gothenburg, Sweden, 2008, Международном симпозиуме «Нанофотоника», Ужгород, Украина, 2008, III Молодежной конференции ИОХ РАН, Москва, 2009, конференции «Биологически активные вещества:

фундаментальные и прикладные вопросы получения и применения», Новый Свет, АР Крым, Украина, 2009, Международной конференции «Органическая нанофотоника» С-Петербург, 2009, 16th European Symposium on Organic Chemistry, Prague, Czech Republic, 2009, Международной научной конференции по биоорганической химии, биотехнологии и бионанотехнологии, посвященной 75-летию со дня рождения академика Ю.А. Овчинникова, Москва, 2009, 9-й молодежной конференции ИБХФ РАН «Биохимическая физика», Москва, 2009, Международном симпозиуме «Advanced Science in Organic Chemistry», Мисхор, Крым, 2010, 4 International Conference on Optical Optоelectronic and Photonic Materials and Application, Budapest, Hungary, 2010, Московской международной научно-практической конференции «Биотехнология: экология крупных городов», Москва, 2010.

Дизайн структуры молекулы и метод получения новой фотохромной метки на основе спиропиранов для маркирования квантовых точек.

Дизайн структур молекул и метод получения новых фотохромных лигандов для маркирования биологического объекта — бактериородопсина.

Результаты спектрально-кинетических исследований характеристик синтезированных фотохромных лигандов.

Результаты изучения процесса взаимодействия синтезированных фотохромных меток с бактериоопсином в составе апомембран Halobacterium salinarum.

Структура и объем работы.

литературного обзора, изложения и обсуждения результатов, экспериментальной части,

ОСНОВНЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ РАБОТЫ

В настоящее время достигнут существенный прогресс в синтезе и изучении свойств полифункциональных фотохромных органических материалов классов спиропиранов, спирооксазинов, хроменов, диарилэтиленов, фульгидов и др.

При выполнении настоящей работы в качестве исходных фотохромных структур нами необходимо было модифицировать для придания им способности к ковалентному взаимодействию с различными типами наноразмерных объектов путем введения в определенное положение спейсеров различной природы, степени ненасыщенности и размера, содержащих разнообразные реакционноспособные терминальные группы.

Окрашивание комплекса и Природа и структура спейсера определялась выбором конкретной мишени, которую планировалось модифицировать: для бактериородопсина - фрагмент полиеновой цепи ретиноида (содержащий систему 4 С=С-связей с Е-конфигурацией и с 2 метильными группами, сопряженную с терминальной формильной группой, которая обеспечивает эффективное взаимодействие фотохромного лиганда с -аминогруппой остатка Lys216); для других субстратов — спейсер, содержащий 1 или 2 двойные связи и оканчивающийся терминальной реакционноспособной группой (CHO, COOH, её активированной формой или SH).

Для спиропиранов ранее были известны работы по модификации уже готового исходного фотохромного звена, но структурное разнообразие молекул было ограничено и создавалось, в основном, введением соответствующего амфифильного спейсера по атому азота индолинового фрагмента путем его кватернизации соответствующим галогенпроизводным. Известны две основные стратегии создания новых структур на основе производных спиропирана: а) полный синтез из замещенных производных индоленина и салицилового альдегида, б) модификация уже готового спиропиранового скелета.

При дизайне молекул фотохромных меток с заданными спектральными и фотохимическими параметрами на основе производных спиропиранов необходимо было ввести дополнительный электроноакцепторный заместитель (EWG) - нитро-группу, при сохранении комбинации заместителей - якорная функция по 5-, а EWG-группа по 6’положениям молекулы.

В ходе настоящей работы были предложены препаративные методы получения модифицированных фотохромных лигандов, содержащих непредельный линкер с терминальной реакционноспособной группой по С5-положению индолинового фрагмента молекулы для обеспечения возможности иммобилизации на поверхности квантовых точек и других субстратов. Были разработаны и успешно применены методики трансформации якорной формильной функции по С5-положению молекулы спиропирана в терминальную активированные формы фотохромного лиганда были протестированы в реакции ацилирования цистеамина с образованием целевого реагента, необходимого для модификации поверхности неорганических наноразмерных компонентов — квантовых точек.

Для маркирования биологического объекта — бактериородопсина была использована разработанная ранее на кафедре биотехнологии и бионанотехнологии МИТХТ им.

М.В.Ломоносова методология получения искусственных пигментов, содержащих вместо природного хромофора — ретиналя, его аналоги.

1. Синтез фотохромного лиганда для маркирования квантовых точек на основе системы CdSe Синтез исходного соединения для получения фотохромного лиганда проводили при использовании ранее разработанного и запатентованного метода селективного формилирования молекулы спиропирана по 5-положению индоленинового фрагмента (выход 86%). Для выбора наиболее оптимального варианта введения линкера с терминальной карбоксильной группой были исследованы 3 пути модификации формильной группы 5формилпроизводного 6’-нитроспиропирана: с помощью реакций олефинирования по Виттигу или Хорнеру-Эммонсу и по Кневенагелю-Дебнеру (схема 1). Первые два варианта включали по две стадии (олефинирование и последующее омыление), в то время как третий — одностадийную конденсацию по Кневенагелю-Дебнеру.

Этиловый эфир 3-[6’-нитро-1,3,3-триметилспиро(индолино-2,2’-2[H]-хромен-5ил)]пропеновой кислоты (2), полученный по реакциям Виттига и Хорнера-Эммонса, омыляли с получением целевого карбоксильного производного. Наиболее перспективным, из трех изученных вариантов оказался метод, включающий двухступенчатую процедуру олефинирования по Хорнеру-Эммонсу с последующим омылением сложного эфира суммарный выход 54%.

N SP C SH

SP C SH SP C

Схема 2. Схема синтеза целевого лиганда — N-(2-меркаптоэтил)амида 3-[6’-нитротриметилспиро(индолино-2,2’-2[H]-хромен-5-ил)]пропеновой кислоты (4).

Стереохимия вновь образованной С=С-связи спейсера имела Е-конфигурацию (до 95% по данным 1Н-ЯМР-спектроскопии: J2’’Н,3’’Н 15.9 Гц) во всех случаях.

Были исследованы и отработаны процедуры активации карбоксильной группы у полученного фотохромного лиганда - 3-[6’-нитро-1,3,3-триметилспиро(индолино-2,2’-2[H]хромен-5-ил)]пропеновой кислоты (3) путем ее трансформации в: 1) в имидазолидное производное (6) действием N,N-карбонилдиимидазола; 2) в смешанный ангидрид (7) с этилхлорформиатом или изобутилхлорформиатом; 3) активация in situ с использованием водорастворимого производного карбодиимида.

Рис. 2. 1Н-ЯМР-спектр N-(2-меркаптоэтил)амида 3-[6’-нитро-1,3,3триметилспиро(индолино-2,2’-2[H]-хромен-5-ил)]-пропеновой кислоты (4) (CDCl3).

протестированы в реакции ацилирования цистеамина с образованием целевого реагента (4), необходимого для модификации поверхности неорганических наноразмерных компонентов — квантовых точек. Наибольший выход целевого N-(2-меркаптоэтил)амида (4) (30-40%) наблюдали при проведении процесса активации по методу смешанных ангидридов с использованием алкилхлорформиата в присутствии катализатора - 4-диметиламинопиридина (схема 2). Реакция осложнялась образованием симметричного дисульфида, что отрицательно влияло на выход целевого продукта. Реагент (4) для модификации поверхности квантовых точек был наработан в количествах, достаточных для проведения последующих экспериментов. Структура всех синтезированных соединений была доказана при помощи набора физико-химических методов анализа (УФ-, Н-ЯМР-спектроскопия и массспектрометрии).

2. Исследование спектральных и фотохимических характеристик фотохромного лиганда (4) для маркирования квантовых точек CdSe.

поведения лиганда (4), содержащего спейсер с терминальной меркапто-группой по С5положению индолинового фрагмента молекулы, и его предшественников (1), (3) в различных растворителях и определены параметры флуоресценции гибридных фотохромных материалов на основе его конъюгатов с квантовыми точками CdSe.

Сравнение cпектрально-кинетических характеристик фотохромного поведения лиганда (4) и его предшественников (1), (3) в различных растворителях Таблица 1.

* - не наблюдалось при освещении более 10 мин Среди возможных вариантов полупроводниковых квантовых точек элементов II-IV групп была выбрана наиболее перспективная система на основе нанокристаллов CdSe (3, нм). Она имеет приемлемые величины диапазона ширины запрещенной зоны (1.74 эВ) и радиуса экситона Бора (5.6 нм), позволяющие получать широкий диапазон флуоресцентных материалов с узкими полосами спектров эмиссии в зависимости от размеров наночастиц.

После процедуры высокотемпературного синтеза поверхность квантовых точек CdSe покрыта молекулами триоктилфосфиноксида, которые в слабополярном растворителе можно заменить на фотохромный лиганд с терминальной меркаптогруппой. Отработаны экспериментальные процедуры получения ковалентных конъюгатов из синтезированного фотохромного лиганда (4) с квантовыми точками на основе системы CdSe.

Квантовые точки CdSe диаметром 3,5 нм в растворе хлороформа поглощали в видимой области, с максимумом поглощения 585 нм. Флуоресценция нанокристаллов CdSe возбуждалась при облучении светом с длиной волны от 200 до 590 нм. Максимум флуоресценции раствора квантовых точек CdSe (3,5 нм) в хлороформе приходился на 598 нм, ширина пика на полувысоте составила 30 нм. Было обнаружено, что, модификация поверхности квантовых точек CdSe фотохромной меткой (4) вызывает тушение их спиропиранового фрагмента лиганда при освещении образца.

Рис. 3. А) Спектр поглощения (синяя кр.) и флуоресценции (красная кр.) квантовых точек CdSe (3,5 нм) в хлороформе. Б) Повторяющиеся циклы индукции и гашения флуоресценции при периодическом освещении УФ-светом (313 нм) конъюгата лиганда с квантовыми точками (CdSe, 3.5 nm) (5) в хлороформе. Измерения проводили при двух значениях длин волн: 670 нм (синяя кр.) и 598 нм (красная кр.).

На рис. 3 (Б) представлены результаты изучения процесса индукции и гашения флуоресценции при периодическом освещении УФ-светом (313 нм) конъюгата лиганда с квантовыми точками (CdSe, 3.5 nm) (5) в хлороформе. При этом было показано, что данный процесс может быть реализован в управляемом циклическом режиме с достаточно большим количеством повторений цикла индукции-гашения флуоресценции образца.

CdSe/спиропирановый лиганд» можно использовать для изучения процесса резонансного переноса энергии флуоресценции (FRET), а индуцированное светом изменение спектральных флуоресценцией нанокристаллов CdSe.

3. Дизайн структур и разработка методов получения новых фотохромных лигандов для маркирования биологического объекта — бактериородопсина.

Как было показано ранее в нашей лаборатории, для образования ковалентной связи между аналогом ретиналя и бактериоопсином необходимо наличие в молекуле аналога ретиналя фрагмента полиеновой цепи, содержащей от двух до четырех сопряженных триметилциклогексеновое кольцо может быть легко заменено на более массивный остаток фотохрома.

В качестве исходных фотохромов были выбраны производные двух серий диарилэтенов, содержащих перфторциклопентеновый и циклопентеновый фрагменты.

Варьирование природы заместителей позволило оценить влияние изостерической замены атомов водорода на фтор в фотохромном звене на спектральные свойства, фотохромное поведение и свойства аналогов ретиналя и бактериородопсина на их основе. Окончательный дизайн молекул целевых аналогов ретиналя был сделан на основе анализа результатов компьютерного моделирования топографии хромофорной полости бактериородопсина (код файла в базе PDB — 1M0L) (http://www.ebi.ac.uk/thornton-srv/databases/cgi-bin/pdbsum/) в bin/lpccsu) пространственным строением.

Образец исходного моноформильного производного (8) для получения серии фторированных диарилэтенов был любезно предоставлен проф. Краюшкиным М.М. (зав.

лаб. химии гетероциклических соединений Института органической химии им. Н.Д.

Зелинского РАН) в рамках совместных исследований.

В последние годы получил развитие новый альтернативный принцип построения молекул фотохромных дитиенилэтенов, основанный на получении ключевого симметрично бис-замещенного исходного соединения, в котором два одинаковых по структуре внутримолекулярной циклизацией по МакМурри с образованием исходного фотохрома, несущего заданный тип якорной функциональной группы. В нашем случае потребовалось несимметрично замещенного моноформильного производного (9) (схема 3).

Схема 3. Схема синтеза исходного моноформильного производного диарилэтена (9).

производного (9) состояла из следующих этапов: хлорирование 2-метилтиофена (10) с помощью N-хлорсукцинимида, стадия ацилирования по Фриделю-Крафтсу полученного 2метил-5-хлортиофена (11) хлорангидридом глутаровой кислоты приводила к 1,5-дикетону (12), который циклизовался в условиях реакции МакМурри в 1,2-бис(2-метил-5-хлортиен-3ил)циклопентен (13). В дальнейшем, для получения несимметричного формильного производного, соединение подвергали металлированию и последующему формилированию с образованием смеси бис-формильного производного и моноформильного производного (14), формильную группу в котором восстанавливали до метильной по Кижнеру-Вольфу (в модификации Хуанг-Мелона), после чего повторением стадий металлирования и формилирования получали целевое соединение (9) с суммарным выходом 27% на исходный 2-метилтиофен.

5. Исследование процесса олефинирования по Хорнеру-Эммонсу карбонильных Из анализа литературы известны лишь 2-3 публикации по химии дитиенилэтенов, в которых для синтеза их ненасыщенных производных был использован метод олефинирования по Хорнеру-Эммонсу или Виттигу карбонильных предшественников. Таким образом, при проведении синтетической процедуры получения двух серий новых фотохромных меток ряда диарилэтенов, на предварительном этапе работы необходимо было отработать методику наращивания полиеновой цепи молекулы аналога ретиноида и условия проведения процесса олефинирования.

Схема 4. Универсальная схема наращивания полиеновой цепи для двух серий фотохромных меток.

В результате, для получения 2-х серий новых фотохромных производных ретиноидов (17-24), была успешно использована универсальная синтетическая последовательность, изображенная на схеме 4, ключевой стадией которой является реакция олефинирования по Хорнеру-Эммонсу соответствующих карбонильных предшественников анионом С5фосфонатного реагента (25), содержащего терминальную нитрильную группу. Последующая стадия восстановления промежуточных полиеновых нитрилов (17, 18, 21, 22) при помощи диизобутилалюмогидрида при –70°С давала промежуточные или целевые гибридные полиенали (19, 20, 23, 24), содержащие разное количество кратных связей в цепи сопряжения.

Сравнение выходов стадий олефинирования и восстановления в двух сериях Олефинирование соединений (8, 9, 19, 20) проводили С5-фосфонатом (25) в виде смеси E- и Z-изомеров с соотношением 60 : 40 (по данным 1Н-ЯМР). Для генерации аниона фосфоната были использованы следующие условия: NaH/TГФ/0°C и соотношение реагентов альдегидный компонент–фосфонат–гидрид натрия 1 : 1.2 : 1.5.

На данной схеме для наглядности использовалась нумерация атомов полиеновой цепи all-Eретиналя Рис. 5. Изменение химического сдвига сигналов протонов аналогов ретиналя (23, 24) относительно all-E-изомера ретиналя.

Проведение процедуры олефинирования в ТГФ при 0°С с применением NaH в качестве основания позволило исключить образование побочных продуктов и добиться высокого выхода реакции (см. табл. 2). Доля all-E-изомера в продукте реакции олефинирования составляла 85-91% (по данным 1Н-ЯМР спектроскопии). Восстановление нитрилов (17, 18, 21, 22) диизобутилалюмогидридом в толуоле при –70°С приводило к промежуточным и целевым полиеналям (19, 20, 23, 24). Индивидуальные all-E-изомеры целевых соединений (23, 24) были получены с помощью препаративной ВЭЖХ.

Структура всех синтезированных соединений была доказана при помощи набора физико-химических методов анализа (УФ-, 1Н-ЯМР-спектроскопия и масс-спектрометрии).

Таким образом, была продемонстрирована эффективность предложенной схемы синтеза для получения 2 серий новых гибридных фотохромных соединений, сочетающих в одной молекуле дитиенилэтеновый и полиеновый фрагменты.

6. Исследования спектральных и фотохимических характеристик На этом этапе работы были исследованы спектрально-кинетические характеристики синтезированных соединений (8, 9, 17–20, 23, 24) в полярном и малополярном растворителях (этанол и толуол). В качестве примера, на рис. 6 представлены спектры поглощения открытой (кр. 1) и циклической (кр. 2-7) форм соединений (8, 17) в процессе облучения УФсветом (фильтр УФС-2 313 нм). Видно, что в процессе УФ-облучения коротковолновая полоса исчезает. Одновременно появляется новая полоса поглощения при 580 нм, обусловленная образованием циклизованной формы. Было показано, что удлинение полиеновой цепи, а также замена альдегидной группы на нитрильную в ряду производных двух серий диарилэтенов приводит к батохромному сдвигу максимума основной полосы поглощения «открытой» формы, в то время как положение полосы поглощения циклизованной фотоокрашенной формы слабо зависит от длины полиеновой цепи и природы терминальной группы.

Рис. 6. Спектры поглощения соединений (8, 17) в растворе толуола (С 1.5х10-5М): до (кр. 1) и в процессе (кр. 2-7 и кр. 2-6) облучения УФ-светом (313 нм) (А,В) и кинетика процессов фотоокрашивания и фотообесцвечивания (Б,Г), измеренные на длине волны максимума полосы поглощения фотоиндуцированной циклизованной формы диарилэтена (8, 17).

В результате сравнительного спектрально-кинетического исследования двух серий диарилэтенов была установлена взаимосвязь между структурой этих соединений и их спектральными и кинетическими параметрами. Было показано, что все соединения ряда фторированных диарилэтенов (8, 17, 19, 23) обладают выраженным фотохромизмом и являются термически необратимыми. Анализ соотношения констант фотоокрашивания и фотообесцвечивания показал, что, в отличие от исходного альдегида (8), соединения (17, 19, 23), содержащие полиеновый фрагмент, характеризуются более высокой скоростью фотоокрашивания, но она снижается с увеличением длины полиеновой цепочки. Из сравнения данных по фотодеградации (табл. 3) видно, что нитрил (17) обладает наибольшей устойчивостью к необратимым фотопревращениям. Однако дальнейшее увеличение длины полиеновой цепочки приводит к повышению скорости фотодеградации образца в ряду фторированных дитиенилэтенов.

1, 1, 1, 1, 0, 0, 0, 0, Рис. 7. Спектры поглощения соединения (18) в толуоле до и после облучения УФ и видимым светом (А); кинетика процессов фотоокрашивания и фотообесцвечивания (Б), измеренные на длине волны максимума полосы поглощения фотоиндуцированной и фотообесцвеченной форм диарилэтена (18) Спектрально-кинетические характеристики синтезированных дитиенилэтенов (8, 9, 17–20, 23, 24).

соед.

(17) (19) (23) (18) в толуоле; при 580 нм; отсутствие выраженной реакции фотообесцвечивания циклизованной формы Результаты спектрально-кинетического исследования синтезированных фотохромных меток (8, 9, 17–20, 23, 24) представлены в таблице 3.

фотоокрашивания/фотообесцвечивания С5-нитрила (18). Как видно из этих данных, при облучении УФ-светом происходит однократное образование фотоокрашенной формы, при дальнейшем последовательном облучении видимым и УФ-светом интенсивность полосы поглощения циклизованной формы меняется незначительно.

В отличие от серии аналогичных фторсодержащих производных (8, 17, 19, 23), обладающих выраженным фотохромизмом, при замене атомов фтора на водород в фотохромном звене молекулы диарилэтенов в ряду соединений (9, 18, 20, 24) впервые были зафиксированы следующие результаты (см. табл. 3): 1) замещение атомов фтора на водород приводит к батохромному сдвигу максимума основной полосы поглощения «открытой»

формы; 2) эффективность обратной фотоиндуцированной фотохромной реакции С5-нитрила (18) резко снижена; 3) С5-альдегид (20) и С10-альдегид (24) вообще не проявляют фотохромизма, облучение их УФ-светом даже низкой интенсивности вызывало полную необратимую деградацию образца.

При сравнении свойств соединений из фторированных (8, 17, 19, 23) и нефторированных (9, 18, 20, 24) серий диарилэтенов было обнаружено значительное снижение стабильности у образцов соединений (18, 20, 24).

7. Изучение процесса взаимодействия двух серий диарилэтеновых фотохромных меток с бактериоопсином в составе апомембран H. salinarum и их спектральных Изучено взаимодействие синтезированных аналогов ретиналя на основе дитиенилэтенов (19, 20, 23, 24) с БО в составе апомембран Halobacterium salinarum (штамм ET1001). Препарат апобелка — бактериоопсина был получен при гидроксиламинолизе препарата пурпурных мембран (pH 6.5, 12°C) при освещении в течение 24 ч. Аналоги бактериородопсина получали добавлением к суспензии апомембран в стандартном буфере (100мМ NaCl, 5 мМ MES, рН 6.0) стехиометрических количеств полиеналей (19, 20, 23, 24) в виде метанольного раствора. Спектрофотометрический контроль процесса взаимодействия аналогов ретиналя с бактериоопсином в составе апомембран H. salinarum показал, что образование ковалентного комплекса возможно для аналогов (19, 20) и (23, 24) с максимумами поглощения в районе 430-450 нм, 510 и 535 нм соответственно. Кинетика данного процесса очень замедлена по сравнению с реконструкцией бактериородопсина из природного хромофора и апобелка. Полоса пигмента регистрировалась через 10-30 мин после добавления альдегидов к апомембранам. Образование пигмента заканчивалось лишь в течение нескольких суток. При этом, даже длительная (в течение 2-х месяцев) инкубация полиеналя (23) с апомембранами в темноте не выявила образования пигмента (рис. 8).

Таким образом, впервые за более чем 25-летнее время изучения факторов и условий, накладываемых белковой матрицей на структуру аналогов ретиналя (для всего массива из более 350 соединений нашей базы данных), обнаружен и доказан факт фотоуправляемого регулирования процесса молекулярного распознавания исходной и фотоокрашенной структур одного и того же аналога ретиналя (ср. данные табл. 4 для открытой и циклизованной форм полиеналя (23)).

0, 0, Рис. 8. Спектрофотометрический контроль за процессом взаимодействия альдегида (23) и апобелка из апомембран H. salinarum. А – открытая форма, Б – фотоокрашенная форма.

В таблице 4 представлены сравнительные спектральные характеристики двух серий полиеналей и их комплексов с апомембранами из H. salinarum и модельных соединений – альдиминов полиеналей (19), (20), (23) и (24) с н-бутиламином.

Сравнительные спектральные характеристики полиеновых дитиенилэтенов, их альдиминов c н-бутиламином и пигментов с апобелком из H. salinarum. Таблица 4.

ВЫВОДЫ

1. Разработан метод синтеза новой фотохромной метки на основе замещенных 6’нитроспиропиранов для маркирования поверхности квантовых точек. Успешно «фотохромная метка – квантовые точки CdSe» путем индуцированного светом изменения структуры и спектральных характеристик спиропирана.

2. Разработан оригинальный подход к получению исходного моноформильного производного дитиенилциклопентена (9).

3. Предложен и осуществлен синтез двух серий фотохромных меток на основе дитиенилэтенов. Универсальная синтетическая процедура заключалась в двукратном восстановлением нитрильной функции DIBAH в промежуточных нитрилах.

4. Исследованы спектрально-кинетические характеристики новых фотохромных меток.

Показано, что замена атомов фтора на водород в циклопентеновом кольце дитиенилэтена приводит к потере фотохромных свойств у длинноцепочечных аналогов ретиналя.

5. Исследован процесс взаимодействия двух серий фотохромных аналогов ретиналя с апобелком - бактериоопсином. Впервые показана принципиальная возможность исходной и фотоциклизованной структур одного и того же фотохрома.

Основное содержание диссертации изложено в следующих публикациях:

1. Belikov N., Lukin A., Laptev A., Shvets V., Barachevsky V., Strokach Yu., Valova T., Krayushkin M., Demina O., Varfolomeev S., Khodonov A. Photochromic Behavior of Retinal Analogs. // J. Photochem. Photobiol. A:

Chemistry, 2008, V. 196, N 2-3, P. 262-267.

Лаптев А.В., Лукин А.Ю., Беликов Н.Е., Земцов Р.В., Швец В.И., Демина О.В., Варфоломеев С.Д., Барачевский В.А., Ходонов А.А. Синтез и изучение фотохромного поведения 3-[6'-нитро-1,3,3триметилспиро(индолино-2,2'-[2H]-хромен-5-ил)]пропеновой кислоты и ее этилового эфира. // Химия высоких энергий. - 2010, Т. 44, №3, C. 239-243.

Лаптев А.В., Лукин А.Ю., Беликов Н.Е., Земцов Р.В., Швец В.И., Демина О.В., Варфоломеев С.Д., Барачевский В.А., Ходонов А.А. Синтез и изучение фотохромного поведения 3-[6'-нитро-1,3,3триметилспиро(индолино-2,2'-[2H]-хромен-5-ил)]пропеновой кислоты и ее этилового эфира. // Труды Международной конференции «Органическая нанофотоника 2009», 21-28 июня 2009, С-Петербург, 2010, C.

228-237.

Лаптев А.В., Лукин А.Ю., Беликов Н.Е., Швец В.И., Демина О.В., Барачевский В.А., Ходонов А.А. 5Формил-замещенные индолиновые спиробензопираны и способ их получения. // Патент РФ № 2358977, Заявка на изобретение № 2008112485 от 02.04.2008. Опубликовано 20.06.2009, Б.И. 2009, № 17.

5. Khodonov A.A., Lukin A.Yu., Belikov N.E., Laptev A.V., Shvets V.I., Barachevsky V.A., Strokach Yu.P., Krayushkin M.M., Shorunov S.V., Demina O.V. Photochromic retinal analogs: synthesis and study of their spectral properties. // Abstracts Book of XXIst IUPAC Symposium on Photochemistry, Kyoto, Japan, April 2-7, 2006, 6. Khodonov A.A., Lukin A.Yu., Belikov N.E., Laptev A.V., Shvets V.I., Barachevsky V.A., Strokach Yu.P., Krayushkin M.M., Demina O.V. Photochromic retinal analogs: synthesis and study of their spectral properties.

//Abstracts of International Symposium on Molecular Photonics devoted to the memory of academician A.N.

Terenin, St. Petersburg, June 28-July 2, 2006, P. 77.

7. Demina O.V., Khodonov A.A., Lukin A.Yu., Belikov N.E., Laptev A.V., Shvets V.I., Barachevsky V.A., Strokach Yu.P. Design and Synthesis of Photochromic Labels for Covalent modification of different targets. // Abstracts of International Symposium on Molecular Photonics devoted to the memory of academician A.N. Terenin, St.

Petersburg, June 28-July 2, 2006, P. 76-77.

Лукин А.Ю., Лаптев А.В., Беликов Н.Е., Барачевский В.А., Строкач Ю.П., Ходонов А.А., Демина О.В., Краюшкин М.М., Швец В.И. Синтез фотохромных аналогов ретиналя. // Материалы международной конференции ”Advanced Science in Organic Chemistry”, Судак, Крым, 2006, С-098.

9. Laptev A.V., Lukin A.Yu., Belikov N.E., Barachevsky V.A., Demina O.V., Varfolomeev S.D., Shvets V.I., Khodonov A.A. Synthesis of photochromic retinal analogs. // Abstracts of XVIII Mendeleev Congress on General and Applied Chemistry. Russia, Moscow, September 23–28, 2007, part 4, P. 546.

10. Laptev A.V., Lukin A.Yu., Belikov N.E., Barachevsky V.A., Demina O.V., Shvets V.I., Khodonov A.A.

Investigation of spectral properties of photochromic retinoid analogs. // Abstracts of the International Conference “Molecular and nanoscale system for energy conversion”. October 1-3, Moscow, Russia, 2007, P. 85.

11. Belikov N.E., Laptev A.V., Lukin A.Yu., Barachevsky V.A., Demina O.V., Shvets V.I., Khodonov A.A., Krayushkin M.M. Vinylogs of the bis-dihetarylethenes as new thermoirreversible photochromic materials. // Abstracts of the International Conference “Molecular and nanoscale system for energy conversion”. October 1-3, Moscow, Russia, 2007, P. 89.

Ходонов А.А., Лаптев А.В., Лукин А.Ю., Беликов Н.Е., Барачевский В.А., Демина О.В., Варфоломеев С.Д., 12.

Швец В.И., Краюшкин М.М. Фотохромные аналоги ретиналя: синтез и свойства. Материалы международной конференции “Нанофотоника”. Россия, Черноголовка, 18-22 сентября, 2007, C. 164.

Беликов Н.Е., Демина О.В., Варфоломеев С.Д., Швец В.И., Ходонов А.А. Изучение процесса 13.

фотоизомеризации ретиналя. Материалы международной конференции “Нанофотоника”. Россия, Черноголовка, 18-22 сентября, 2007, C. 47.

14. Belikov N., Lukin A., Laptev A., Shvets V, Barachevsky V., Strokach Yu., Valova T., Krayushkin M., Demina O., Varfolomeev S., Khodonov A. / Photochromic Behavior of Retinal Analogs //

Abstract

Book of International Symposium on Photochromism, Vancouver, British Columbia, Canada, October 7-10, 2007. P. 28.

15. Barachevsky V.A., Strokach Yu.P., Kobeleva O.I., Valova T.M., Krayushkin M.M., Demina O.V., Lukin A.Yu., Belikov N.E., Laptev A.V., Shvets V.I., Khodonov A.A. Photochromic Retinal Analogs: Synthesis and Properties.

// Abstracts of XXIII International Conference on Photochemistry, Cologne, Germany, 29 July – 3 August 2007. P.

16. Barachevsky V.A., Belikov N.E., Lukin A.Yu., Laptev A.V., Shvets V.I., Valova T.M., Krayushkin M.M., Demina O.V., Varfolomeev S.D., Khodonov A.A. Photochromic Behavior of Retinal Analogs. // Abstract Book of XXIInd IUPAC International Symposium on Photochemistry, Gothenburg, Sweden, 28 July – 01 August 2008, P150, P.

Беликов Н.Е., Лаптев А.В., Лукин А.Ю., Барачевский В.А., Демина О.В., Швец В.И., Ходонов А.А., 17.

Краюшкин М.М. Аналоги бис-гетероарилэтенов как новые термически необратимые фотохромные материалы. // Тезисы докладов XII Международной научно-технической конференции Наукоемкие химические технологии-2008. Волгоград, 9-11 сентября 2008 г. C. 131-132.

Ходонов А.А., Демина О.В., Беликов Н.Е., Звездин К.В., Лаптев А.В., Лукин А.Ю., Варфоломеев С.Д., 18.

Швец В.И., Барачевский В.А. Синтез и спектральные свойства фотохромных производных витамина А. // Сборник тезисов Международной конференции «Нанофотоника», Ужгород, Украина, 28 сентября – октября 2008 г., C-2.

Демина О.В., Беликов Н.Е., Звездин К.В., Лаптев А.В., Лукин А.Ю., Варфоломеев С.Д., Швец В.И., 19.

Ходонов А.А. Исследование процесса фотоизомеризации производных витамина А. // Сборник тезисов Международной конференции «Нанофотоника», Ужгород, Украина, 28 сентября – 3 октября 2008 г., C-13.

20. Demina O.V., Laptev A.V., Lukin A.Yu., Belikov N.E., Shvets V.I., Varfolomeev S.D., Khodonov A.A.

Investigation of synthetic routes for the 11Z-retinal Preparation. // Materials of International Symposium “Defense Mechanisms of the Retina: New Perspectives.” Erevan 26-29 October 2008, P. 24.

21. Khodonov A.A., Demina O.V., Laptev A.V., Lukin A.Yu., Belikov N.E., Shvets V.I., Varfolomeev S.D. Retinoids and Retinal Proteins – Structure and Function. // Materials of International Symposium “Defense Mechanisms of the Retina: New Perspectives.” Erevan 26-29 October 2008, P. 22.

Беликов Н.Е., Лаптев А.В., Земцов Р.В., Лукин А.Ю., Демина О.В., Барачевский В.А., Краюшкин М.М., 22.

Швец В.И., Ходонов А.А. Синтез и исследование спектральных свойств диарилэтеновых аналогов ретиналя // Материалы III Молодежной конференции ИОХ РАН, Москва, 2009, С. 70-72.

Лаптев А.В., Лукин А.Ю., Беликов Н.Е., Земцов Р.В., Ходонов А.А., Швец В.И., Барачевский В.А., Демина 23.

О.В. / Синтез и фотохромные свойства полиеновых производных спиропиранов // Материалы III Молодежной конференции ИОХ РАН, Москва, 2009, С. 92-94.

Лаптев А.В., Лукин А.Ю., Беликов Н.Е., Земцов Р.В., Звездин К.В., Ходонов А.А., Швец В.И., Барачевский 24.

В.А., Варфоломеев С.Д., Демина О.В. Синтез и свойства фотохромных аналогов витамина А // Материалы конференции «Биологически активные вещества: фундаментальные и прикладные вопросы получения и применения», Новый Свет, АР Крым, Украина, 2009, С. 107-108.

Ходонов А.А., Лаптев А.В., Лукин А.Ю., Беликов Н.Е., Земцов Р.В., Звездин К.В., Швец В.И., Барачевский 25.

В.А., Варфоломеев С.Д., Демина О.В. Исследование фотохромного поведения модельных хромофоров ретиналь-содержащих белков. // Материалы Международной конференции «Органическая нанофотоника 2009», 21-28 июня 2009, С-Петербург, 2009, С. 136.

26. Khodonov A.A., Laptev A.V., Lukin A.Yu., Belikov N.E., Zemtsov R.V., Zvezdin K.V., Shvets V.I., Barachevsky V.A., Varfolomeev S.D., Demina O.V. Synthesis and Properties of Photochromic Retinal Analogs. // Materials of 16th European Symposium on Organic Chemistry, 12-16 July 2009, Prague, Czech Republic, P1.244, P. 311.

27. Беликов Н.Е., Лаптев А.В., Земцов Р.В., Лукин А.Ю., Демина О.В., Барачевский В.А., Краюшкин М.М., Швец В.И., Ходонов А.А. Синтез и спектральные свойства диарилэтеновых аналогов ретиналя // Материалы Международной научной конференции по биоорганической химии, биотехнологии и бионанотехнологии, посвященной 75-летию со дня рождения академика Юрия Анатольевича Овчинникова, 28 сентября – 1 октября 2009 г., Москва, 2009, Т. 2, С. 21.

28. Лаптев А.В., Лукин А.Ю., Беликов Н.Е., Земцов Р.В., Ходонов А.А., Швец В.И., Барачевский В.А., Демина О.В. Синтез и фотохромные свойства полиеновых производных спиропиранов. // Материалы Международной научной конференции по биоорганической химии, биотехнологии и бионанотехнологии, посвященной 75-летию со дня рождения академика Юрия Анатольевича Овчинникова, 28 сентября – октября 2009 г., Москва, 2009, Т. 2, С. 126.

29. Беликов Н.Е., Лаптев А.В., Земцов Р.В., Лукин А.Ю., Демина О.В., Барачевский В.А., Краюшкин М.М., Швец В.И., Ходонов А.А. Изучение спектральных характеристик диарилэтеновых аналогов ретиналя. // Материалы IX ежегодной международной молодежной конференции ИБХФ РАН - ВУЗы «Биохимическая физика», 9-11 ноября 2009 г., Москва, С. 28.

30. Лаптев А.В., Лукин А.Ю., Беликов Н.Е., Земцов Р.В., Звездин К.В., Ходонов А.А., Швец В.И., Барачевский, В.А. Демина О.В. Исследование фотохромных свойств полиеновых производных спиропиранов. // Материалы IX ежегодной международной молодежной конференции ИБХФ РАН - ВУЗы «Биохимическая физика», 9-11 ноября 2009 г., Москва, C. 132.

31. Лаптев А.В., Лукин А.Ю., Беликов Н.Е., Швец В.И., Демина О.В., Варфоломеев С.Д., Бричкин С.Б., Николенко Д.Ю., Разумов В.Ф., Ходонов А.А. Новые модели фотосинтетических систем: методы получения и свойства. // Материалы Международного симпозиума «Advanced Science in Organic Chemistry», 21-25 июня 2010, Мисхор, Крым, С-125, C. 217.

32. Лукин А.Ю., Лаптев А.В., Беликов Н.Е., Фомин М.А., Звездин К.В., Демина О.В., Швец В.И., Ходонов А.А.

Разработка методов синтеза фотохромных аналогов ретиналя. // Материалы Международного симпозиума «Advanced Science in Organic Chemistry», 21-25 июня 2010, Мисхор, Крым, С-133, C. 225.

33. Khodonov A.A., Laptev A.V., Zvezdin K.V., Lukin A.Yu., Belikov N.E., Fomin M.A., Shvets V.I., Brichkin S.B., Nikolenko D.Yu., Razumov V.F., Barachevsky V.A., Varfolomeev S.D., Demina O.V. New hybrid photochromic materials for optical switching. // Abstracts of 4 International Conference on Optical Optоelectronic and Photonic Materials and Application. Hungary, Budapest, August 15-20, 2010, A-0098, P.110-111.

34. Беликов Н.Е., Лаптев А.В., Лукин А.Ю., Демина О.В., Барачевский В.А., Краюшкин М.М., Швец В.И., Ходонов А.А. Синтез и спектральные характеристики диарилэтеновых производных ретиналя. // Материалы Московской международной научно-практической конференции "Биотехнология: экология крупных городов" Москва, 15-17 марта 2010, 2010, C. 480.



 
Похожие работы:

«КОЗЛОВСКИЙ Анатолий Анатольевич СВОБОДНОРАДИКАЛЬНЫЕ ПРОЦЕССЫ НИЗКОТЕМПЕРАТУРНОГО ХЛОРИРОВАНИЯ И ПОЛИМЕРИЗАЦИИ МОНОМЕРОВ. ОСОБЕННОСТИ КИНЕТИКИ ТВЕРДОФАЗНОГО ХЛОРИРОВАНИЯ 02.00.04 – физическая химия АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук Черноголовка – 2010 Работа выполнена в Учреждении Российской академии наук Институте проблем химической физики РАН доктор химических наук, профессор Научный руководитель : Михайлов Альфа Иванович доктор...»

«Авдеева Надежда Михайловна Пробоподготовка QuEChERS и дисперсионная жидкостно-жидкостная микроэкстракция при одновременном определении микотоксинов различных классов хроматографическими методами 02.00.02 – аналитическая химия АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук Саратов 2013 2 Работа выполнена на кафедре химии ФГБОУ ВПО Владимирский государственный университет имени Александра Григорьевича и Николая Григорьевича Столетовых доктор...»

«Краснова Татьяна Александровна Масс-спектрометрия с матрично(поверхностью)активированной лазерной десорбцией/ионизацией при идентификации и определении олигомеров полисульфоновых, поликарбоновых кислот и антибиотиков 02.00.02 – аналитическая химия АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук Саратов – 2013 Работа выполнена на кафедре химии Владимирского государственного университета имени Александра Григорьевича и Николая Григорьевича...»

«РУДЕНКО АНДРЕЙ ОЛЕГОВИЧ Лигандообменное сорбционное концентрирование на сверхсшитых полистиролах при ВЭЖХ определении антибиотиков, аминокислот и витаминов Специальность 02.00.02 – аналитическая химия АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учёной степени кандидата химических наук Санкт-Петербург 2011 Работа выполнена на кафедре органической химии химического факультета СанктПетербургского государственного университета. Научный руководитель : Доктор химических наук, профессор...»

«Савчук Сергей Александрович Новые методические подходы к контролю качества алкогольной продукции и к выявлению наркотических веществ в биологических средах хроматографическими и хромато-масс-спектрометрическими методами Специальность 02.00.02 – Аналитическая химия АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора химических наук Санкт-Петербург 2012 г. Работа выполнена в лаборатории токсикологии Национального научного...»

«Мостович Евгений Алексеевич СИНТЕЗ АЗОТИСТЫХ ГЕТЕРОЦИКЛОВ РЯДА ДИАЗЕПИНА, ИЗОКСАЗОЛА, ИМИДАЗОЛИДИНА И НИТРОНИЛНИТРОКСИЛЬНЫХ РАДИКАЛОВ 2-ИМИДАЗОЛИНА В РЕАКЦИЯХ 1,2-БИСГИДРОКСИЛАМИНОВ И 1,2-БИСАЛКОКСИАМИНОВ С КАРБОНИЛЬНЫМИ СОЕДИНЕНИЯМИ (02.00.03 – органическая химия) АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук НОВОСИБИРСК – 2012 2 Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении науки Новосибирском институте органической...»






 
© 2013 www.diss.seluk.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Авторефераты, Диссертации, Монографии, Методички, учебные программы»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.