WWW.DISS.SELUK.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА
(Авторефераты, диссертации, методички, учебные программы, монографии)

 

На правах рукописи

МЕЛЬНИКОВ Андрей Геннадьевич

ПЕРЕНОС ЭНЕРГИИ ЭЛЕКТРОННОГО ВОЗБУЖДЕНИЯ

МЕЖДУ ЛЮМИНЕСЦЕНТНЫМИ ЗОНДАМИ В ОПРЕДЕЛЕНИИ

СТРУКТУРНОЙ ПЕРЕСТРОЙКИ БЕЛКОВ

01.04.05 - Оптика

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата физико-математических наук

Саратов – 2011

Работа выполнена на кафедре оптики и биофотоники физического факультета Саратовского государственного университета им. Н.Г. Чернышевского

Научный руководитель: доктор физико-математических наук, профессор Кочубей Вячеслав Иванович

Официальные оппоненты: доктор физико-математических наук, профессор Летута Сергей Николаевич доктор физико-математических наук, профессор Мельников Леонид Аркадьевич

Ведущая организация: Московский государственный университет им. М.В. Ломоносова

Защита состоится « 12 » мая 2011 г. в 15 часов 30 мин на заседании диссертационного совета Д212.243.01 при Саратовском государственном университете им. Н.Г. Чернышевского по адресу: 410012, г. Саратов, ул. Университетская, 42, III корпус, ауд. 34.

С диссертацией можно ознакомиться в Зональной научной библиотеке имени В.А. Артисевич ГОУ ВПО «Саратовский государственный университет им. Н.Г. Чернышевского».

Автореферат разослан « 7 » апреля 2011 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор физ.-мат. наук, профессор В.М. Аникин

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Методы абсорбционной и Актуальность исследований.

люминесцентной спектроскопии находят широкое применение в биофизике [1].

Оптические методы, являющиеся неразрушающими методами исследования биосистем, позволяют получить сведения, как о структурной организации биологических объектов, так и о процессах, происходящих в них. Значительно расширить круг задач, решаемых оптическими методами, и получить дополнительные данные о биосистемах позволяет применение люминесцентнокинетических методов исследования.





Для определения структурных изменений в белках с успехом применяются люминесцентные методы, основанные на наблюдении флуоресценции [2] и фосфоресценции [3] хромофоров белков. Однако число люминесцирующих хромофоров белков ограничено и квантовый выход люминесценции незначителен, поэтому для исследования структурных перестроек в белках применяются флуоресцентные зонды [4, 5], обладающие высоким квантовым выходом свечения и способностью сорбироваться в определенных местах глобулы белка.

Перспективным является метод, основанный на флуоресцентном синглетсинглетном переносе энергии электронного возбуждения между хромофорами белка. Флуоресцентный перенос энергии, протекающий по индуктивнорезонансному механизму, осуществляется на расстоянии до 100. Применение метода флуоресцентного переноса энергии электронного возбуждения между хромофорами белка и люминесцентными зондами [6, 7] позволяет получить информацию о локализации и взаимодействии молекул люминесцентных зондов с белками, а также применяется для изучения трансмембранного движения белков. Внутримолекулярные структурные изменения регистрировать этим методом затруднительно, так как расстояние переноса энергии соизмеримо с размерами белка, поэтому незначительные смещения участков полипептидной цепи в глобуле белка могут быть не обнаружены.

Кроме того, время жизни флуоресцентных состояний хромофоров и люминесцентных зондов составляет несколько наносекунд. Вследствие этого изучение медленных внутримолекулярных перестроек в белках становится невозможным.

Уникальные возможности исследования медленной внутримолекулярной структурной динамики белка представляет рассмотренный в данной работе метод триплет-триплетного (Т-Т) переноса энергии электронного фотовозбуждения между люминесцентными зондами, связанными с белками.

Преимущество Т-Т переноса энергии по сравнению с синглет-синглетным состоит в том, что перенос энергии по обменно-резонансному механизму осуществляется на незначительном расстоянии порядка несколько ангстрем.

Вероятность Т-Т переноса энергии экспоненциально убывает с увеличением расстояния между партнерами, вследствие этого возможно определение незначительных внутримолекулярных структурных изменений в белках.

Цель работы заключается в установлении закономерностей изменений спектрально-кинетических характеристик излучательных внутримолекулярных переходов в люминесцентных зондах и параметров межмолекулярного безызлучательного переноса энергии электронного возбуждения между зондами, связанными с белками, при переходе от нативных белков к денатурированным.

Для достижения поставленной цели решались следующие задачи:

1. Исследовать процессы взаимодействия полярных и неполярных люминесцентных зондов с белками люминесцентно-кинетическими методами, а также методами абсорбционной и люминесцентной спектроскопии.

2. Методами флуоресцентной спектроскопии, по перераспределению интенсивности первого и третьего максимума флуоресценции пирена, определить чувствительность колебательной структуры спектров флуоресценции пирена к структурной перестройки белков.





3. Методом фосфоресценции при комнатной температуре (ФКТ) люминесцентного зонда – эозина, относящегося к красителям ксантенового ряда, определить влияние структурных перестроек в белках на излучательные и безызлучательные процессы дезактивации энергии электронного возбуждения триплетных состояний люминесцентного зонда.

4. Определить радиус синглет-синглетного переноса энергии между хромофором белка - триптофанилом и люминесцентным зондом эозином.

5. Доказать возможность существования межглобулярной диффузии молекул донора энергии – эозина в процессе триплет-триплетного переноса энергии между полярным и неполярным зондами, связанными с белками.

6. Определить константу скорости триплет-триплетного переноса энергии между полярными и неполярным люминесцентными зондами, связанными с белками: сывороточным альбумином человека (САЧ) и бычьим сывороточным альбумином (БСА).

7. Определить зависимость константы скорости триплет-триплетного переноса энергии электронного возбуждения от концентрации поверхностноактивных веществ в белках.

8. Установить особенности моно- и бимолекулярных процессов деактивации энергии электронного возбуждения люминесцентных зондов в системе БСА-глюкоза.

Научная новизна работы состоит в следующем:

Детально изучены процессы триплет-триплетного переноса энергии между связанными с белками полярным донором энергии электронного возбуждения – эозином и неполярным зондом – антраценом. Определены радиусы триплет-триплетного переноса энергии электронного возбуждения для исследованной системы. Обнаружена чувствительность константы скорости триплет-триплетного переноса энергии и радиусов переноса к структурным изменениям в белках.

По результатам исследования синглет-синглетного переноса энергии между остатками триптофана САЧ и связанным с САЧ эозином, установлено, что эозин сорбируется на белок вблизи триптофанила белка.

Обнаружена чувствительность спектров поглощения и флуоресценции эозина и пирена к структурным изменениям белков. Определены коэффициенты экстинкции и сила осциллятора синглет-синглетного поглощения молекул люминесцентных зондов (эозин и антрацен), связанных с САЧ.

Определено влияние структурной перестройки белков на колебательную структуру спектров флуоресценции связанных с белками молекул пирена.

Показана возможность применения спектрального параметра «индекс полярности микроокружения пирена» для определения изменения микроокружения неполярного люминесцентного зонда в процессе структурной перестройки белков.

Установлено существование межглобулярной диффузии молекул эозина донора энергии в процессе Т-Т переноса энергии между связанными с САЧ эозином и антраценом.

Предложен метод определения наличия структурных изменений белков плазмы крови человека и гликированных белков, основанный на применении триплет-триплетного переноса энергии между люминесцентными зондами, связанными с белками.

Научно-практическая значимость работы заключается в следующем:

Показано, что интенсивность фосфоресценции и время жизни триплетных состояний люминесцентного зонда эозина, колебательная структура спектра флуоресценции пирена, а также константа скорости Т-Т переноса энергии могут быть использованы для регистрации структурных изменений в белках.

Результаты исследований переноса энергии между люминесцентными зондами могут найти применение в медицине при определении белковых молекул с измененной структурой, а также для аналитического определения полициклических ароматических углеводородов в плазме крови.

На защиту выносятся следующие положения:

1. Экспериментально наблюдаемый процесс Т-Т переноса энергии между донором энергии эозином и акцептором антраценом свидетельствует о том, что полярный эозин может приближаться к молекуле неполярного антрацена в глобуле белка на расстояние перекрывания электронных облаков этих молекул.

Уменьшение радиуса сферы тушения фосфоресценции донора, в результате триплет-триплетного переноса энергии, от 10 до 7, при незначительных добавках додецилсульфата натрия (ДСН), концентрацией 0,410–3 М, связано с увеличением расстояния между донором и акцептором вследствие структурных изменений белка под действием ДСН.

2. Возрастание силы осциллятора синглет-синглетного поглощения зонда – эозина при переходе от водных растворов ( =(14820 ± 270) М-1см-1, = 514 нм) к САЧ (M = (19410 ± 2020)М-1см-1, =530 нм), свидетельствует об эффективном связывании эозина с глобулой белка. Уменьшение интенсивности свечения САЧ на длине волны 360 нм и возрастание максимума флуоресценции эозина в области 530-545 нм обусловлено синглет-синглетным переносом энергии с донора - триптофанил белка на акцептор - эозин, находящийся в глобуле белка.

Полученное значение радиуса переноса энергии (Ro (9 ± 2) ) меньше размера глобулы белка (~100), следовательно, синглет-синглетный перенос энергии между триптофанилом и эозином осуществляется в условиях локализации гидрофильного эозина вблизи гидрофобного триптофанила.

3. Уменьшение индекса полярности микроокружения пирена, которое определялось по отношению интенсивностей первого максимума флуоресценции (I1) к интенсивности третьего максимума (I3), при переходе от водного раствора (I1/I3 =1,74) к плазме крови человека (I1/I3=1,03) свидетельствует о связывании гидрофобных люминесцентных зондов с белками плазмы. Возрастание интенсивности флуоресценции пирена и увеличение индекса полярности микроокружения пирена, при добавлении в плазму крови человека ДСН концентрацией от С=0,210–3М до 0,610-3М обусловлено локализацией молекул пирена на границе раздела гидрофобной и гидрофильной области глобулы белка плазмы вследствие изменения структуры белка под действием ДСН, встраивающегося в глобулу белка.

4. Возрастание интенсивности фосфоресценции зонда эозина в 1,24 раза, при переходе от БСА, содержащего глюкозу к БСА гликированному в течение 90 мин и неизменность константы скорости затухания фосфоресценции (430с-1) после импульсного возбуждения, связано с проникновением люминесцентного зонда в гидрофобные области белка. В этом случае глюкоза не подавляет связывания зонда с этими новыми областями. Подтверждением этого является длинноволновое смещение максимума флуоресценции эозина на 8 нм при переходе к гликированным белкам, что указывает на уменьшение полярности микроокружения молекул эозина, в глобулах белка с большей степенью гликирования.

5. Возрастание константы скорости переноса энергии от 3,1106 М-1с-1 до 15,1106 М-1с-1 при уменьшении концентрации САЧ от 10 мг/мл до 1 мг/мл, связано с увеличением вероятности встреч молекул донора и акцептора вследствие выхода гидрофильных молекул донора энергии эозина из глобулы белка и проникновением их в другую глобулу, содержащую молекулу акцептора – антрацена, где и осуществляется перенос энергии.

Подтверждением межглобулярной диффузии эозина является уменьшение интенсивности фосфоресценции эозина, а также возрастание константы скорости затухания фосфоресценции эозина от 260 с-1 (ССАЧ=10мг/мл) до 340 с- (ССАЧ=1мг/мл), вследствие увеличения вероятности тушения триплетных состояний молекул эозина, вышедших из глобул белка в водную макрофазу раствора белка, остаточным кислородом, растворенным в воде.

Апробация работы. Результаты работы докладывались и обсуждались на International School for Young Scientists and Students on Optics. Laser Physics and Biophysics. (Saratov, 2004-2010 г.г.); Международной конференции студентов, аспирантов и молодых ученых по фундаментальным наукам «Ломоносов». (Москва.

Московский государственный университет им. М.В. Ломоносова, Физический факультет. 2004-2009 г.г.); Международной научной конференции “Молекулярные, мембранные и клеточные основы функционирования биосистем”. (Минск, Беларусь.

2004); XXIII Съезде по спектроскопии, (Звенигород, Московская обл. 2005); IV съезд фотобиологов России (Саратов, 2005); International Memorial Symposium «Molecular Photonics» dedicated to academician A.N. Terenin. (St. Petersburg, 2006); VII съезд Белорусского общественного объединения фотобиологов и биофизиков. (Минск, Беларусь. 2006); VII International Young Scientists Conference. Optics and High Technology Material. Science SPO. Scientific Works. (Kyiv, Ukraine. 2006); Симпозиум "Нанофотоника". (Черноголовка. 2007); XXI Международной научной конференции «Математические методы в технике и технологиях», (Саратов. 2008); V съезде Российского фотобиологического общества, (Пущино. 2008); XXII Международной научной конференции Математические методы в технике и технологиях, (Псков.

2009); International conference “Organic nanophotonics” (ICON – RUSSIA 2009), (СанктПетербург. 2009); Международном Форуме по Нанотехнологиям. «Сенсорные наноматериалы», (Москва, 2009); International conference «Dynamics and Fluctuations in Biomedical Photonics», (San-Francisco. 2010).

Достоверность результатов обеспечивается:

1. Использованием в экспериментах стандартной современной научной аппаратуры;

2. Воспроизводимостью полученных экспериментальных результатов;

3. Применением современных методов компьютерной обработки экспериментальных данных;

4. Совпадением результатов, полученных на специально созданном импульсном флуориметре, с известными литературными данными.

Личный вклад автора заключается в том, что автор совместно с научным руководителем участвовал в постановке задач исследований, анализе и обсуждении полученных результатов, теоретических моделей, а также подготовке к опубликованию печатных работ. Автором самостоятельно проведены экспериментальные исследования. Для определения времени жизни люминесцентных зондов в возбужденном состоянии им создана экспериментальная установка - импульсный флуориметр.

Участие в научных проектах. Научная работа автора по теме диссертации выполнена при финансовой поддержке американского фонда гражданских исследований и развития, тема проекта: «Кинетика фосфоресценции люминесцентных зондов в исследовании структурной динамики белков в плазме крови человека» (персональный грант N REC-006, 2005 год), и Фонда содействия развитию малого бизнеса и предпринимательства в науке и технике госконтракт № 6232р/8706 от 19.09.2008 в рамках Программы У.М.Н.И.К. 2009-2010г.г. Наименование НИОКР «Моделирование процессов тушения фотовозбужденных состояний люминесцентных зондов в белках».

Автор являлся исполнителем следующих научных проектов, результаты которых частично вошли в материалы диссертации: «Исследование структурнодинамического состояния сывороточного альбумина человека в буферном растворе и в составе плазмы крови методами собственной и зондовой фосфоресценции при комнатной температуре» (РФФИ проект №06-04-81006Бел_а, 2006-2007г.г.); «Исследование триплет-триплетного переноса энергии электронного возбуждения между люминесцентными зондами, связанными с биополимерами» (РФФИ проект №10 – 02 – 00159_а, 2010-2011г.г.);

"Разработка оптических методов исследования и мониторинга изменений параметров биологических тканей и цельной крови при изменении содержания глюкозы в тканях организма человека и животных" ФЦП "Научные и научнопедагогические кадры инновационной России" на 2009-2013 гг., госконтракт 02.740.11.0770.

Публикации. Основные результаты исследований опубликованы в печатных работах, включающих в себя 17 тезисов докладов, 7 статей в изданиях, рекомендованных ВАК для соискателей ученых степеней.

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, пяти глав, заключения и списка цитируемой литературы. Диссертация содержит 164 страницы, включая 52 рисунка и 6 таблиц. Список литературы включает 171 наименование.

КРАТКОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Во введении обоснована актуальность исследований, показана новизна работы, ее практическая и научная значимость, поставлены цели и задачи исследования и определены выносимые на защиту положения.

В первой главе приведен краткий литературный обзор исследований процессов переноса энергии по индуктивно-резонансному и обменнорезонансному механизмам. Основное внимание уделено анализу результатов теоретических и экспериментальных исследований процессов трансформации энергии электронного возбуждения в микрогетерогенных средах биологического происхождения. Подробно рассмотрены теории Ферстера, Декстера, Ермолаева переноса энергии между люминофорами в жидких средах.

Отмечены особенности протекания этих процессов в микрогетерогенных средах при их структурной перестройке.

Во второй главе описаны люминесцентно-кинетические способы определения структурных изменений в белках с использованием сывороточного альбумина человека (САЧ), бычьего сывороточного альбумина (БСА), с которыми нековалентно связаны люминесцентные зонды, в качестве которых были выбран люминофор ксантенового ряда-эозин и полициклические ароматические углеводороды (ПАУ) антрацен и пирен.

Выбор эозина обусловлен применением его в фотодинамической терапии онкологических заболеваний, а выбор ПАУ определяется тем, что некоторые из этих соединений проявляют канцерогенные и мутагенные свойства, поэтому исследования взаимодействия ПАУ с транспортными белками являются актуальными для медицины. Даны способы определения коэффициента экстинкции синглет-синглетного поглощения молекул полярного зонда эозина и неполярного – антрацена связанных с САЧ. Полученные значения коэффициентов экстинкции для эозина в воде и САЧ даны в таблице. В работе представлено описание специально созданного импульсного флуориметра, позволяющего получать спектры, а также кинетические зависимости, характеризующие затухание замедленной флуоресценции (ЗФ) и фосфоресценции зондов.

В третьей главе приведены результаты исследований взаимодействия люминесцентного зонда эозина с САЧ. Люминесцентные зонды, введенные в водный раствор белка, который является микрогетерогенной средой, могут находиться как в связанном с белком состоянии, так и в водной среде, поэтому были получены спектрально-кинетические характеристики люминесцентного зонда эозина отдельно в водной среде и в САЧ, результаты представлены в таблице.

Таблица. Спектрально-кинетические характеристики эозина в 0.15 М фосфатном буфере рН 7.4. погл, фл – длина волны максимума в спектре поглощения и флуоресценции эозина соответственно; - коэффициент экстинкции синглет-синглетного поглощения; k, – константа скорости дезактивации и время жизни ( = 1/k) триплетных состояний эозина При возбуждении обескислороженных растворов эозина в САЧ были получены спектры ЗФ и фосфоресценции эозина (рис. 1). Значительное возрастание интенсивности ЗФ и фосфоресценции эозина в САЧ по сравнению с водными растворами, а также возрастание времени жизни () свидетельствует о том, что вероятности излучательных и безызлучательных переходов в молекуле эозина перераспределяются при связывании его с белком.

Возрастание интенсивности люминесценции эозина при увеличении концентрации САЧ (рис. 1) свидетельствует о том, что эозин из водной среды переходит в белковую микрофазу и с увеличением объема белковой микрофазы большую часть своего времени жизни в возбужденном триплетном состоянии проводит в глобулах белка. Возрастание коэффициента экстинкции эозина, длинноволновое смещение максимумов спектров поглощения и флуоресценции, а также увеличение интенсивности фосфоресценции эозина и времени жизни триплетных состояний эозина при переходе от водного раствора к САЧ (таблица) можно объяснить сорбцией эозина на глобулах белка.

В работе приведены результаты исследований взаимодействия полициклических ароматических углеводородов (ПАУ) антрацена и пирена с белками.

Рис. 1. Спектры замедленной Рис. 2. Спектры поглощения антрацена в флуоресценции (max = 560 нм) и САЧ (ССАЧ = 10 мг/мл). Концентрация фосфоресценции (max=690 нм) эозина (С = 410 М) в растворе фосфатного буфера рН 7.4 САЧ концентрацией: 1- 10 мг/мл; 2 – 1 мг/мл Увеличение оптической плотности с увеличением концентрации антрацена (рис.2) свидетельствует о том, что антрацен эффективно связывается с САЧ. По линейной зависимости оптической плотности антрацена от концентрации антрацена в растворе САЧ был определен коэффициент экстинкции антрацена равный (2355±132) М-1см-1 на длине волны = 360 нм.

Таким образом, и полярный зонд - эозин и неполярный - антрацен преимущественно связаны с глобулой белка, что позволяет осуществить процесс переноса энергии между этими зондами.

В четвертой главе приведены результаты исследований процессов переноса энергии электронного возбуждения между люминесцентными зондами, связанными с белками. Триплет-триплетный перенос энергии исследован между полярными молекулами люминесцентного зонда эозина - донора энергии и неполярными молекулами акцептора – антрацена, связанными нековалентными связями с альбуминами сыворотки крови человека. С увеличением концентрации антрацена наблюдалось линейное возрастание константы скорости затухания фосфоресценции донора – эозина (рис. зависимости 1 и 2). Эти зависимости позволили определить эффективную константу скорости Т-Т переноса энергии ( k T T ) в САЧ согласно уравнению Штерна-Фольмера, примененного для константы скорости затухания фосфоресценции донора эозина [8] где k и (k)о – константы скорости затухания фосфоресценции эозина при наличии акцептора – антрацена и в его отсутствии, соответственно; [Cантр]– концентрация антрацена в САЧ.

затухания фосфоресценции эозина (С=410-6 М) раствора, вследствие того, что и от концентрации антрацена. Концентрация эозин и антрацен локализованы САЧ константа скорости затухания фосфоресценции уменьшается, то есть уменьшается вероятность встреч молекул эозина и антрацена в одной глобуле белка, вследствие распределения молекул антрацена по большему числу глобул САЧ.

Процессы дезактивации энергии триплетных состояний донора эозина были представлены следующими уравнениями:

а) для молекул эозина связанных с глобулой белка где m D, D, m A - концентрации донора в триплетном состоянии в белковой микрофазе и водной макрофазе, а также акцептора в основном синглетном состоянии в белковой микрофазе соответственно; k 1, k 1 - константы скорости входа и выхода молекул донора из глобул белка; k 2, k 3 - константы скорости дезактивации энергии триплетных состояний донора в белках и водной макрофазе соответственно; k T T - константа скорости триплет-триплетного переноса энергии в белковой микрофазе. Для наблюдаемой константы скорости затухания фосфоресценции донора – эозина (k) из (2) и (3) было получено выражение:

Отрезок, отсекаемый прямой (1) и (2) рис. 3 на оси ординат, представляет собой значение константы скорости затухания фосфоресценции (суммарная псевдомономолекулярная константа скорости дезактивации триплетных состояний) в отсутствии акцептора энергии - (k)о и определяется из (4) Из (5) следует, что значения суммарной псевдомономолекулярной константы скорости дезактивации триплетных состояний должны зависеть от концентрации глобул белка [M] в растворе САЧ, что и наблюдается в эксперименте (рис. 3, зависимости 1 и 2). Из уравнения (4) следует, что угловой коэффициент ( k п ) этой линейной зависимости, определяемый соотношением:

также должен зависеть от концентрации глобул белка. Полученные результаты (рис. 3, зависимости 1 и 2) подтверждают это. Сравнивая (1) и (4) можно заключить, что k п в формуле (6) является константой скорости Т-Т переноса энергии. При подстановки в (6) определенных в работе значений константы скорости выхода молекул донора – эозина из глобул белка (k-1=430 с-1) и значений константы скорости дезактивации энергии триплетных состояний донора (k2=320 с-1) при концентрации глобул белка [M] = 25 мкМ получена константа скорости Т-Т переноса энергии равная k п 30106 М-1с-1, то есть одного порядка с константой скорости переноса энергии, определенной из эксперимента по формуле (1). Следовательно, константа скорости Т-Т переноса лимитируется не только константой скорости дезактивации триплетных состояний эозина, но и константой скорости выхода молекул донора эозина из глобулы белка. Это подтверждает предположение о межглобулярной диффузии донора – эозина за время жизни его в триплетном состоянии, и в итоге можно предположить возможность реализации межглобулярного Т-Т переноса энергии.

При добавлении акцептора энергии - антрацена в раствор донора - эозина в САЧ наблюдалось уменьшение интенсивности ЗФ и фосфоресценции эозина.

Уменьшение интенсивности фосфоресценции эозина, измеренной спустя 0,2 мс после вспышки импульсной лампы также несет информацию о диффузионном характере тушения триплетных состояний донора в результате Т-Т переноса энергии на акцептор - антрацен. Для описания тушения люминесценции донора в результате переноса энергии по обменно-резонансному механизму [9], можно использовать модель Ф. Перрена [10]. Автором диссертационной работы показано, что для малых концентраций донора энергии (4·10-6 М) можно заменить отношения квантовых выходов свечения донора в формуле Ф.

Перрена на отношение интенсивностей фосфоресценции донора – эозина в процессе Т-Т переноса на акцептор – антрацен. В этом случае для отношения интенсивностей фосфоресценции донора – эозина получено:

присутствии акцептора - антрацена и без него соответственно; NA – постоянная Авогадро; C А – концентрация акцептора, выраженная в моль/л; – объем сферы действия тушения в литрах. Зависимость логарифма отношения интенсивности фосфоресценции эозина (ln Io/I) от концентрации антрацена в диапазоне от 210-5 М до 610-5 М (рис.4, зависимость 1) представляет прямую линию, которая не проходит через начало координат. Последнее может быть связано как с нелинейностью шкалы концентраций акцептора в области менее Рис.4. Зависимость логарифма отношения интенсивности фосфоресценции эозина без акцептора (Io) к интенсивности фосфоресценции с акцептором (I) от зависимость 1). При добавлении концентрации антрацена в САЧ (С=1 мг/мл) ДСН радиус тушения без ДСН (1) и в САЧ, содержащим 0.410-3М уменьшился до 7 (рис. 4, уменьшение значения углового коэффициента зависимости 2, рис. 4 и рассчитанного значения объема сферы тушения триплетных состояний донора при добавлении ДСН свидетельствует о том, что уменьшается вероятность переноса энергии между эозином и антраценом в глобуле белка. Это возможно при внутримолекулярной структурной перестройке белков. С дальнейшим увеличением содержания ДСН наблюдается разрушение гидрофобных связей в белках под действием ДСН, белок денатурирует, увеличивается расстояние между донором и акцептором и Т-Т перенос не наблюдается.

Для изучения процесса синглет-синглетного переноса энергии между хромофорами белка и люминесцентными зондами нековалентно связанными с белками автором был выбран сывороточный альбумин человека и акцептор энергии эозин. Донором энергии в системе САЧ-эозин являлся триптофанил белка. Спектр флуоресценции САЧ (рис.5, спектр 2) обусловлен преимущественно свечением триптофанила. Уменьшение интенсивности свечения САЧ на длине волны 350 нм и возрастание максимума флуоресценции эозина в области 530-545 нм (рис. 5, спектр 3) обусловлено синглет-синглетным переносом энергии с донора (триптофанил) на акцептор эозин, находящийся в глобуле белка.

Рис. 5. Спектр флуоресценции эозина в воде (1), флуоресценция САЧ в буфере pH образом, полученные результаты 7.4 (2) и комплекса САЧ-эозин (3).

и антраценом необходимого для осуществления Т-Т переноса в белках.

В пятой главе предложена люминесцентно-кинетическая методика Рис. 6. Спектры флуоресценции пирена в САЧ (а) и плазме крови человека (б). Спектры нормированы к первому максимуму (I1/I3=1,03) меньше, чем в буферном растворе САЧ (I1/I3=1,25). Вероятно, это связано с тем, что в плазме крови пирен может содержаться, как в белках, так и в липидах. Для ряда растворителей по полученным в работе спектрам флуоресценции пирена были определены индексы полярности, которые хорошо согласуются с литературными данными для этанола, гексана, гептана и ДСН. По этим данным было получено следующее соотношение между диэлектрической проницаемостью микроокружения (м) и индексом полярности (I1/I3) микроокружения молекул пирена м = 78,1 (I1/I3) – 56,3.

Рис. 7. Зависимость интенсивности флуоресценции = 395 нм (1) и индекса полярности (2) микроокружения пирена в плазме крови от концентрации ДСН характеристик зонда – пирена от концентрации ДСН представлены на рис. 7.

Возрастание интенсивности флуоресценции и индекса полярности микроокружения пирена с увеличением содержания ДСН до 0,610-3 М можно объяснить тем, что в белках содержащих ДСН, пирен локализуется на границе раздела гидрофильной и гидрофобной фаз глобулы. Это приводит к потере подвижности молекул пирена и увеличению интенсивности его флуоресценции.

На границе раздела фаз в микроокружении пирена увеличивается содержание молекул воды, что и приводит к увеличению индекса полярности.

Уменьшение интенсивности флуоресценции и индекса полярности микроокружения пирена при увеличении содержания ДСН выше 0,610-3 М можно объяснить денатурацией белка под действием ДСН и солюбилизацией молекул пирена в гидрофобном ядре мицелл ДСН окружающих глобулу белка.

В результате индекс полярности микроокружения пирена уменьшается до значения 1,15, которое незначительно отличается от индекса полярности микроокружения пирена в водно-мицеллярном растворе ДСН (I1/I3=1,12).

В работе были проведены исследования влияния структурных изменений в белках под действием глюкозы на люминесцентно-кинетические характеристики зонда эозина и на триплет-триплетный перенос энергии между эозином и антраценом, сорбированными глобулой бычьего сывороточного альбумина (БСА).

При переходе от водных растворов эозина к растворам БСА, гликированного в течение 60 минут, наблюдалось длинноволновое смещение положения максимума спектров флуоресценции эозина от 542 нм до 550 нм.

Также возрастала интенсивность ЗФ (макс=550 нм) и фосфоресценции (макс=680 нм) эозина, и увеличивалось время жизни триплетных состояний эозина от 0,77 мс до 2,4 мс по сравнению с водными растворами. Эти результаты свидетельствуют о том, что люминесцентный зонд эозин связывается с глобулами БСА. С увеличением времени гликирования до 90 мин наблюдалось уменьшение интенсивности и длинноволновое смещение максимума флуоресценции эозина на 8 нм, при этом фосфоресценция эозина возросла в 1,24 раза. Длинноволновое смещение максимума флуоресценции эозина указывает на уменьшение полярности микроокружения молекул эозина, в глобулах белка с большей степенью гликирования. Это может быть связано с тем, что по мере ковалентного присоединения глюкозы к полипептидной нити конформация глобулы в растворе изменяется таким образом, что для эозина становятся доступными гидрофобные области, скрытые внутри нативной глобулы, при этом глюкоза не подавляет связывания зонда с этими новыми областями. Этим объясняется возрастание интенсивности фосфоресценции.

Структурные изменения в белковых глобулах, связанные с гликированием, детектировались в работе путем исследования процессов переноса энергии электронного возбуждения между люминесцентными зондами: эозином и антраценом, связанными с белками. Значение эффективной константы скорости Т-Т переноса энергии в растворе БСА без гликирования составило k Tэф T =(25±2)105 М-1с-1. В случае гликирования в течение 90 мин константа скорости переноса энергии уменьшилась до (8±2)105 М-1с-1. Предположено, что уменьшение константы скорости Т-Т переноса энергии связано с увеличением расстояния между донором и акцептором энергии вследствие изменения геометрии самой гидрофобной области белка.

ОСНОВНЫЕ ВЫВОДЫ И РЕЗУЛЬТАТЫ РАБОТЫ

1. В результате анализа полученных спектров поглощения и флуоресценции люминесцентного зонда эозина, а также, определяемого в работе, времени жизни триплетных состояний молекул эозина в воде, буфере сывороточного альбумина человека (САЧ) и плазме крови человека можно сделать вывод о том, что в плазме крови человека полярный эозин преимущественно связан нековалентными связями с белками плазмы крови.

Установлено, что интенсивность и время жизни фосфоресценции люминесцентного зонда - эозина чувствительны к структурной перестройке альбуминов плазмы крови под действием поверхностно-активного вещества (ПАВ) додецилсульфата натрия (ДСН).

2. Анализ изменений колебательной структуры спектров флуоресценции пирена в воде, плазме крови человека и в буферном растворе САЧ позволил установить, что полициклические ароматические углеводороды (ПАУ), такие как пирен, а, следовательно, и антрацен в плазме крови локализованы в гидрофобной микрофазе белков и липидах плазмы. Денатурация белков плазмы крови под действием ДСН отслеживается по зависимости индекса полярности микроокружения пирена от концентрации ДСН. Установлено, что ДСН способствует выведению ПАУ из глобулы белка.

3. В работе обнаружен и детально исследован процесс триплеттриплетного (Т-Т) переноса энергии электронного возбуждения между полярным эозином – донором энергии и неполярным антраценом – акцептором связанными нековалентными связями с глобулами альбумина сыворотки и плазмы крови. Определены радиусы переноса энергии и объем сферы тушения триплетных состояний донора в результате переноса энергии. Установлено, что при добавлении ДСН наблюдается уменьшение радиуса переноса и объема сферы тушения триплетных состояний донора. Предположено, что это связано с увеличением расстояния между донором и акцептором вследствие изменения структуры белков под действием ДСН. Таким образом, Т-Т перенос энергии является чувствительным индикатором структурных перестроек в белках под действием ПАВ - додецилсульфата натрия.

4. Обнаружен синглет-синглетный перенос энергии между триптофановым остатком САЧ и эозином. Согласно теории Фёрстера определен радиус синглет-синглетного переноса, который составил ~9. Это позволило предположить, что гидрофильный эозин может локализоваться вблизи гидрофобного триптофанила белка.

5. Исследования процесса Т-Т переноса энергии в системе эозинантрацен при разных концентрациях САЧ позволили обнаружить Т-Т перенос, который может осуществляться в результате межглобулярной диффузии донора энергии эозина за время жизни его в триплетном состоянии.

Установлено, что Т-Т перенос энергии между эозином и антраценом осуществляется в белковой микрофазе.

6. Исследованиями воздействия гликирования белков на процессы дезактивации энергии электронного возбуждения молекул зонда - эозина установлено, что характеристики флуоресценции и фосфоресценции эозина, а также константа скорости Т-Т переноса энергии между люминесцентными зондами эозином и антраценом, связанными с БСА, чувствительны к структурным изменениям БСА на ранних стадиях неферментативного термического гликирования.

ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ ДИССЕРТАЦИИ ОПУБЛИКОВАНЫ В

СЛЕДУЮЩИХ ОСНОВНЫХ РАБОТАХ (из общего количества публикации):

Публикации в изданиях, рекомендованных ВАК РФ 1. Салецкий А.М., Мельников А.Г., Правдин А.Б., Кочубей В.И., Мельников Г.В. Кинетика фосфоресценции люминесцентных зондов при комнатной температуре в изучении структурных изменений в белках под действием додецилсульфата натрия//Журнал Прикладной Спектроскопии. 2005. Т. 72., № 5. С.660-663.

2. Салецкий А.М., Мельников А.Г., Правдин А.Б., Кочубей В.И.

Комплексообразование пирена и антрацена с плазмой крови человека// Журнал Прикладной Спектроскопии. 2008. Т. 75, № 3. С.379-382.

3. Мельников А.Г., Салецкий А.М., Кочубей В.И., Правдин А.Б., Курчатов И.С., Мельников Г.В. Триплет-триплетный перенос энергии между люминесцентными зондами, связанными с альбуминами//Оптика и спектроскопия.

Биомедицинская оптика и спектроскопия. 2010. Т. 109, № 2. С.1272-1277.

4. Правдин А.Б., Кочубей В.И., Мельников А.Г. Фосфоресцентный зонд – эозин в исследовании структурных изменений в гликированных белках// Оптика и спектроскопия. Биомедицинская оптика и спектроскопия. 2010. Т. 109, № 2. С.1278Prawdin A. B., Kochubeiy W. I., Melnikov A.G. Room temperature phosphorescence of eosine in study of structural dynamics of proteins// Proceedings of SPIE. 2004. Vol. 5474. P.348-351.

6. Melnikov A.G., Pravdin A.B., Kochubey V.I. Luminescent probe in the study of surfactant-induced structural changes in serum albumin in human blood plasma//Proceedings of SPIE. 2005. Vol. 5771. P.332-335.

7. Melnikov A.G., Prawdin A. B., Kochubey V. I. Spectral studies of polycyclic aromatic hydrocarbons interaction with human blood plasma//Proceedings of SPIE. 2006.

Vol. 6163. P. 1H-1 – 1H-5.

Публикации в других изданиях 8. Мажуль В.М., Мельников А.Г. Анализ структурно-динамического состояния белков методом зондовой фосфоресценции при комнатной “Молекулярные, мембранные и клеточные основы функционирования биосистем”.

Минск, Беларусь, 2004. С. 27-29.

9. Салецкий А.М., Мельников А.Г., Правдин А.Б., Кочубей В.И. Триплеттриплетный перенос энергии электронного возбуждения между люминесцентными зондами, связанными с белками// XXIII Съезд по спектроскопии. Звенигород, Московская обл., 2005. С. 214.

10. Melnikov A.G. Triplet-triplet energy transfer of the electronic excitation between the hydrophobic and hydrophilic luminescent probes, connected with the proteins//Book of abstracts International Memorial Symposium «Molecular Photonics» dedicated to academician A.N. Terenin St. Petersburg, Russia, 2006. Р. 138-139.

11. Melnikov A.G. Transfer of electronic photoexcitation energy in the study of protein structural dynamics//VII International Young Scientists Conference. Optics and High Technology Material. Science SPO 2006. Scientific Works. Kyiv, Ukraine, 2006. P.

184.

12. Мельников А.Г. Перенос энергии между триплетными состояниями люминесцентных зондов, сорбированных на организованные супрамолекулярные наносистемы// Сборник тезисов докладов Симпозиума "Нанофотоника".

Черноголовка, Московская область, Россия, 2007. С. 125.

13. Melnikov A.G., Kochubey V.I., Pravdin A.B. Probe phosphorescence and triplet-triplet energy transfer in the study of conformation changes in the proteins//Book of

Abstract

International conference “Organic nanophotonics” (ICON – RUSSIA 2009) СанктПетербург, 2009. С. 143.

внутримолекулярных структурных изменений в белках//Сборник тезисов докладов Международного Форума по Нанотехнологиям. Секция Сенсорные наноматериалы.

Москва, 2009. С. 560-561.

15. Melnikov A.G. Study of the structural dynamics of proteins by the method of energy transfer//Proceedings of SPIE. Vol. 7563. Dynamics and Fluctuations in Biomedical Photonics VII, edited by Valery V. Tuchin, (SPIE, Bellingham, WA, 2010). San Francisco, California, USA, 2010. Vol. 7563. Р. 24.

ЦИТИРУЕМАЯ ЛИТЕРАТУРА

1. Лакович Дж. Основы флуоресцентной спектроскопии. М. : Мир, 1986. 496 c.

2. Демченко А.П. Люминесценция и динамика структуры белков. Киев. :

Наукова думка, 1988. 280 c.

3. Мажуль В.М., Зайцева Е.М., Щербин Д.Г. Внутримолекулярная динамика и функциональная активность белков // Биофизика. 2000. Т. 45, № 6. С. 965-989.

4. Добрецов Г.Е. Флуоресцентные зонды в исследовании клеток, мембран и липопротеинов. М. : Наука, 1989. 277 c.

5. Баранов А.Н., Власова И.М., Микрин В.Е., и Салецкий А.М. Лазерная корреляционная спектроскопия процессов денатурации сывороточного альбумина // Журнал Прикладной Спектроскопии. 2004. Т. 71, № 6. С. 831-835.

6. Алфимова Е.Я., Лихтенштейн Г.И. Флуоресцентное исследование переноса энергии, как метод изучения структуры белков // Итоги науки и техники.Молекулярная биология. М. : ВИНИТИ. 1976. Т. 8, ч. 2. С. 127-179.

7. Miller J.N. Fluorescence energy transfer methods in bioanalysis // Analyst. 2005.

Vol. 130, P. 265-270.

8. Ермолаев В.Л., Бодунов Е.Н., Свешникова Е.Б., и Шахвердов Т.А.

Безызлучательный перенос энергии электронного возбуждения. М. : Наука, 1977.

311 c.

9. Inokuti M., Hirayama F. Influence of Energy Transfer by the Exchange Mechanism on Donor Luminescence // Journal of Chemical Physics. 1965. Vol. 43(6), P.

1978-1989.

10. Perrin F. Radiationless intermolecular energy transfer // Comptes Rendus De L'academie Des Sciences. 1924. Vol. 178, P. 1978-1980.



 
Похожие работы:

«Бурмистрова Ангелина Владимировна Теоретический анализ транспорта зарядов и тепла в контактах с высокотемпературными железосодержащими сверхпроводниками Специальность 01.04.04 - физическая электроника Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата физико-математических наук Москва - 2013 Работа выполнена на кафедре атомной физики, физики плазмы и микроэлектроники физического факультета Московского государственного университета имени М.В. Ломоносова. Научный...»

«БАРИНОВ ВАЛЕРИЙ ЮРЬЕВИЧ ГОРЕНИЕ СВС-СОСТАВОВ В УСЛОВИЯХ КВАЗИСТАТИЧЕСКОГО СЖАТИЯ Специальность 01.04.17 – химическая физика, горение и взрыв, физика экстремальных состояний вещества. АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата физико-математических наук Черноголовка – 2013 Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении науки Институте структурной макрокинетики и проблем материаловедения РАН Научный руководитель Доктор...»

«Смехова Алевтина Геннадьевна РАЗВИТИЕ МЕТОДА РЕЗОНАНСНОГО РЕНТГЕНОВСКОГО ОТРАЖЕНИЯ ВБЛИЗИ L2,3 КРАЕВ ПОГЛОЩЕНИЯ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ МАГНИТНЫХ МУЛЬТИСЛОЕВ Специальность 01.04.07 – физика конденсированного состояния АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата физико-математических наук Москва – 2006 –2– Работа выполнена на кафедре физики твердого тела физического факультета...»

«ГАВАШЕЛИ ДАВИД ШОТАЕВИЧ ТЕПЛОФИЗИЧЕСКИЕ ЯВЛЕНИЯ В ДИЭЛЕКТРИКАХ С ФРАКТАЛЬНОЙ СТРУКТУРОЙ ПРИ ВОЗДЕЙСТВИИ ЛАЗЕРНОГО ИЗЛУЧЕНИЯ 01.04.14 – Теплофизика и теоретическая теплотехника АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата физико-математических наук НАЛЬЧИК 2012 Работа выполнена на кафедре теоретической физики ФГБОУ ВПО Кабардино-Балкарский государственный университет имени Х.М. Бербекова доктор физико-математических наук Научный руководитель : Рехвиашвили...»

«НЕМЫТОВ Петр Иванович СИСТЕМЫ ПИТАНИЯ И УПРАВЛЕНИЯ СЕРИИ ВЫСОКОВОЛЬТНЫХ ПРОМЫШЛЕННЫХ УСКОРИТЕЛЕЙ ЭЛЕКТРОНОВ С МОЩНОСТЬЮ ВЫВЕДЕННОГО ПУЧКА СОТНИ КИЛОВАТТ 01.04.20 – физика пучков заряженных частиц и ускорительная техника АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора технических наук НОВОСИБИРСК - 2010 Работа выполнена в Учреждении Российской академии наук Институте ядерной физики им. Г.И. Будкера Сибирского отделения РАН. НАУЧНЫЙ КОНСУЛЬТАНТ: КУКСАНОВ – доктор...»

«ГОЛЫШЕВ АНДРЕЙ АНАТОЛЬЕВИЧ КОЭФФИЦИЕНТ ТЕПЛОПРОВОДНОСТИ МЕТАЛЛОВ И ДИЭЛЕКТРИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ ПРИ ВЫСОКИХ ДАВЛЕНИЯХ И ТЕМПЕРАТУРАХ 01.04.17 – Химическая физика, в том числе физика горения и взрыва АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата физико-математических наук Черноголовка 2008 Работа выполнена в Институте проблем химической физики РАН. Научный руководитель : доктор физико-математических наук, Молодец Александр Михайлович Официальные оппоненты :...»

«Левчук Сергей Александрович Свойства осаждённых из лазерной плазмы разбавленных магнитных полупроводников на основе GaSb, Si и Ge, легированных Mn или Fe 01.04.10 – Физика полупроводников Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата физико-математических наук Нижний Новгород – 2011 Работа выполнена на кафедре электроники твердого тела физического факультета Нижегородского государственного университета им. Н.И. Лобачевского Научный руководитель : доктор...»

«Ушакова Елена Владимировна ОСОБЕННОСТИ ЭВОЛЮЦИИ ФОТОВОЗБУЖДЕНИЙ В КВАНТОВЫХ ТОЧКАХ ХАЛЬКОГЕНИДОВ КАДМИЯ И СВИНЦА Специальность: 01.04.05 – Оптика АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата физико-математических наук Санкт-Петербург – 2012 Работа выполнена в федеральном государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования Санкт-Петербургский национальный исследовательский университет информационных технологий, механики и...»

«АВДОНИН ВЛАДИМИР ВЛАДИМИРОВИЧ ЭЛЕКТРОФИЗИЧЕСКИЕ И ТЕРМОДИНАМИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ФУЛЛЕРИТОВ С60 И С70 ПРИ ВЫСОКИХ ДАВЛЕНИЯХ УДАРНОГО СЖАТИЯ 01.04.17 – химическая физика, в том числе физика горения и взрыва АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата физико-математических наук Черноголовка 2008 Работа выполнена в Институте проблем химической физики РАН. Научный руководитель : кандидат физико-математических наук, Постнов Виктор Иванович доктор...»

«ДМИТРИЕВ Алексей Иванович СПИНОВАЯ ДИНАМИКА В НАНОСТРУКТУРАХ МАГНИТНЫХ ПОЛУПРОВОДНИКОВ 01.04.17 – химическая физика, в том числе физика горения и взрыва АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата физико-математических наук Черноголовка - 2008 Работа выполнена в Институте проблем химической физики Российской Академии Наук Научный руководитель : доктор физико-математических наук Моргунов Р.Б. Официальные оппоненты : доктор физико-математических наук,...»

«ЗАХАРОВА Людмила Николаевна МЕТОДЫ РАДИОЛОКАЦИОННОЙ ИНТЕРФЕРОМЕТРИИ В ИССЛЕДОВАНИИ ХАРАКТЕРИСТИК ЗЕМНЫХ ПОКРОВОВ Специальность 01.04.03 — Радиофизика АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учной степени кандидата физико-математических наук Фрязино – 2011 2 Работа выполнена в Учреждении Российской академии наук Институте радиотехники и электроники им. В. А. Котельникова РАН (Фрязинский филиал) Научный руководитель : кандидат технических наук Захаров Александр Иванович...»

«Костенко Светлана Сергеевна МОДЕЛИРОВАНИЕ ФИЛЬТРАЦИОННЫХ РЕЖИМОВ ОКИСЛЕНИЯ СМЕСЕЙ МЕТАНА В ПРИСУТСТВИИ ПАРОВ ВОДЫ 01.04.17 – Химическая физика, в том числе физика горения и взрыва АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата физико-математических наук Черноголовка – 2010 Работа выполнена в Институте проблем химической физики РАН Научный руководитель : доктор физико-математических наук Иванова Авигея Николаевна Научный консультант : кандидат...»

«Бобылёв Юрий Владимирович АНАЛИТИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ В НЕЛИНЕЙНОЙ ТЕОРИИ ПУЧКОВО-ПЛАЗМЕННЫХ НЕУСТОЙЧИВОСТЕЙ Специальность 01.04.08 – физика плазмы Автореферат диссертация на соискание учёной степени доктора физико–математических наук Москва – 2007 Работа выполнена на физическом факультете Тульского государственного педагогического университета им. Л.Н. Толстого Научный консультант : доктор физико-математических наук, профессор Кузелев Михаил Викторович Официальные оппоненты : член...»

«Поликарпов Дмитрий Игоревич ОСОБЕННОСТИ ЭЛЕКТРОННО-ЭНЕРГЕТИЧЕСКОГО СТРОЕНИЯ И СВОЙСТВ НЕКОТОРЫХ ВИДОВ БОРОСОДЕРЖАЩИХ НАНОТРУБОК РАЗЛИЧНОЙ МОДИФИКАЦИИ Специальность: 01.04.10 Физика полупроводников Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата физико-математических наук Москва – 2014 Работа выполнена в федеральном государственном автономном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования Волгоградский государственный университет...»

«ЛЫСОВА ОЛЬГА АЛЕКСАНДРОВНА Атомно-силовая микроскопия сегнетоэлектрических микро- и нанодоменных структур 01.04.18 – Кристаллография, физика кристаллов АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учёной степени кандидата физико-математических наук МОСКВА 2011 2 Работа выполнена в Учреждении Российской академии наук Институте кристаллографии им. А.В. Шубникова РАН. Научный руководитель : Кандидат физико-математических наук Гайнутдинов Радмир Вильевич Официальные оппоненты : Доктор...»

«Леонов Михаил Юрьевич НЕСТАЦИОНАРНАЯ ОПТИЧЕСКАЯ СПЕКТРОСКОПИЯ ПРОЦЕССОВ РЕЛАКСАЦИИ ЭЛЕКТРОННОЙ ПОДСИСТЕМЫ ПОЛУПРОВОДНИКОВЫХ КВАНТОВЫХ ТОЧЕК Специальность: 01.04.05 – Оптика АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата физико-математических наук Санкт-Петербург – 2012 Работа выполнена в Санкт-Петербургском национальном исследовательском университете...»

«Андреев Степан Николаевич МОДЕЛИРОВАНИЕ И ОПТИМИЗАЦИЯ ЛАЗЕРНО-ПЛАЗМЕННЫХ ИСТОЧНИКОВ КОРПУСКУЛЯРНОГО И ЭЛЕКТРОМАГНИТНОГО ИЗЛУЧЕНИЯ 01.04.21 - Лазерная физика Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора физико-математических наук Москва – 2013 Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении науки Институте общей физики им. А.М. Прохорова Российской академии наук Научный консультант : Рухадзе Анри Амвросиевич доктор физико-математических наук,...»






 
© 2013 www.diss.seluk.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Авторефераты, Диссертации, Монографии, Методички, учебные программы»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.