WWW.DISS.SELUK.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА
(Авторефераты, диссертации, методички, учебные программы, монографии)

 

На правах рукописи

КОРОВКИН

Алексей Сергеевич

СРАВНИТЕЛЬНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА СОВРЕМЕННЫХ

ИММУНОФЕРМЕНТНЫХ ТЕСТ-СИСТЕМ ДЛЯ

ОПРЕДЕЛЕНИЯ СПЕЦИФИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ

ВАКЦИН ПРОТИВ ГЕПАТИТА В

03.02.02 – Вирусология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Москва – 2011

Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении «Государственный научно-исследовательский институт стандартизации и контроля медицинских биологических препаратов им. Л.А. Тарасевича» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации

Научный руководитель:

доктор медицинских наук, зав. лабораторией трансфузионных вирусных гепатитов и контаминантов Шалунова Нина Васильевна

Официальные оппоненты:

Доктор медицинских наук, профессор Бочаров Евгений Федорович Доктор биологических наук, профессор Красильников Игорь Викторович

Ведущая организация: ГУ НИИВС им. И.И. Мечникова РАМН, г. Москва

Защита состоится «24» июня 2011 г. в 11 часов на заседании диссертационного совета Д 208.020.01 при ФГУН ГНЦ ВБ «Вектор» Роспотребнадзора (630559, р.п. Кольцово Новосибирского района Новосибирской области)

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке ФГУН ГНЦ ВБ «Вектор»

Роспотребнадзора (630559, р.п. Кольцово Новосибирского района Новосибирской области)

Автореферат разослан «_»_ 2011 г.

Ученый секретарь диссертационного совета Доктор биологических наук Г.П. Трошкова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы Вирусные гепатиты являются одной из наиболее значимых проблем здравоохранения во всем мире, а гепатит В (ГВ) по-прежнему остается глобально распространенной инфекцией, поражающей печень. По разным данным, в мире насчитывается до 2 миллиардов человек, в крови которых обнаруживаются серологические маркеры перенесенного заболевания, в том числе и HBsAg, а свыше 350 млн человек являются хроническими больными и носителями вируса ГВ [Lavanchy, 2004]. До 80% случаев гепатоцеллюлярной карциномы ассоциированы с хроническим ГВ [Lai et al, 2003]. Ежегодно по всему миру от гепатоцеллюлярной карциномы погибают от тыс до 1,2 млн человек [Lee, 1997, Mahoney, 1999, Bosch et al, 2005].





Ведущим мероприятием в борьбе с вирусным гепатитом В является вакцинопрофилактика, проводимая в рамках национального календаря профилактических прививок, календаря прививок по эпидпоказаниям и в ходе широкомасштабных программ дополнительной иммунизации населения. В Российской Федерации зарегистрирован ряд вакцин против гепатита В, как отечественного, так и зарубежного производства, производимых методом дрожжевого синтеза. Одним из показателей надлежащего качества вакцин против гепатита В является специфическая активность, определяемая методом ИФА. Для определения специфической активности вакцин в ИФА ранее применяли иммуноферментную тест-систему (ИФТС) «Abbott Auszyme Monoclonal» (фирма «Abbott»), однако в настоящее время выпуск ее прекращен [Giffroy et al, 2006]. В связи с этим возникла необходимость выбора отечественной тестсистемы для контроля специфической активности вакцин против гепатита В, содержащих HBsAg субтипов «ad» и «ay».

Цель исследования Изучить возможность применения отечественных коммерческих иммуноферментных тест-систем для выявления HBsAg с целью определения специфической активности вакцин против гепатита В.

Задачи исследования 1. Провести сравнительное изучение чувствительности и специфичности отечественных иммуноферментных тест-систем, в том числе и нового поколения, с использованием ОСО HBsAg и референс-панелей сывороток крови человека, содержащих ay и ad субтипы HBsAg.

2. Оценить возможность использования иммуноферментных тест-систем для выявления HBsAg с целью контроля специфической активности вакцин против гепатита В по показателям валидности получаемых результатов.

3. Применить в практической работе отечественные коммерческие иммуноферментные тест-системы для контроля специфической активности вакцин против гепатита В.

Научная новизна 1. Показана возможность применения отечественных коммерческих ИФТС для определения специфической активности вакцин против гепатита В.

2. Проведен сравнительный анализ вакцин против гепатита В, зарегистрированных на территории Российской Федерации, по показателю специфической активности вакцин в отечественных и зарубежных иммуноферментных тест-системах для выявления HBsAg.

3. Дана сравнительная характеристика коммерческих и вновь разработанных высокочувствительных иммуноферментных тест-систем по показателям чувствительности к различным субтипам и вариантам HBsAg с использованием референспанелей сывороток.

4. Показано, что отечественные коммерческие иммуноферментные тест-системы для выявления HBsAg способны выявлять его различные субтипы и варианты (как «ad», так и «ay» групп).

Практическая значимость 1. Установлено, что иммуноферментная тест-система «ГепаСтрип» (ООО «Ниармедик Плюс») полностью удовлетворяет требованиям валидности полученных результатов при изучении специфической активности вакцин против гепатита В.





2. Иммуноферментная тест-система «ГепаСтрип» производства ООО «Ниармедик Плюс» внедрена в практическое применение в ГИСК им. Л.А. Тарасевича, ЗАО «Биннофарм» и ФГУП «НПО «Микроген» для определения специфической активности вакцин против гепатита В.

3. Показано преимущество референс-панелей для контроля качества иммуноферментных тест-систем не только по показателям минимального предела обнаружения, но и по чувствительности к различным субтипам HBsAg.

4. Зарегистрированы иммуноферментные тест-системы нового поколения для выявления HBsAg с повышенной чувствительностью (0,01 МЕ/мл) – «ДС-ИФАHBsAg-0,01» (ООО «НПО «Диагностические системы», ТУ 9398-091-05941003и «HBsAg-ИФА-БЕСТ» (ЗАО «Вектор-Бест», ТУ 9398-058-235-481-72Основные положения, выносимые на защиту 1. Иммуноферментные отечественные тест-системы выявляют различные субтипы HBsAg, что позволяет применять их для определения специфической активности вакцин как отечественного (содержащих антиген субтипа «ay»), так и зарубежного производства (содержащих антиген субтипа «ad»).

2. Вакцины против гепатита В, зарегистрированные в Российской Федерации, различаются по показателям специфической активности, определяемой методом 3. Тест-система «ГепаСтрип» (производства ООО «Ниармедик Плюс») полностью отвечает требованиям, предъявляемым для определения специфической активности вакцин против гепатита В.

Апробация работы Материалы диссертации доложены на ряде научно-практических конференций:

XIV Международная конференция «Новые информационные технологии в медицине, биологии, фармакологии и экологии», 2006 год, Украина, Крым, Ялта-Гурзуф; II Всероссийская научно-практическая конференция с международным участием «Вакцинология 2006. Совершенствование иммунобиологических средств профилактики, диагностики и лечения инфекционных болезней», 2006 год, Москва; 7-я всероссийская научно-практическая конференция “Вирусные гепатиты – проблемы эпидемиологии, диагностики, лечения и профилактики”. Москва, 29 – 31 мая 2007 г.; Всероссийская научно-практическая конференция, посвященная 110-летию филиала ФГУП «НПО «Микроген» «Пермское научно-производственное объединение «Биомед» «Создание и перспективы применения медицинских иммунобиологических препаратов», 18 – июня 2008 года, Пермь; III Всероссийская научно-практическая конференция с международным участием «Вакцинология 2008. Совершенствование иммунобиологических средств профилактики, диагностики и лечения инфекционных болезней», год, Москва.

Публикации По материалам диссертации опубликовано 9 печатных работ, из них 1 в ведущем научном издании, рецензируемом ВАК РФ. 1 работа подана в печать в рецензируемый научный журнал.

Структура и объем диссертации Диссертационная работа в объёме 123 машинописных листа состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследований, собственных результатов и их обсуждения, заключения, выводов и списка литературы. Диссертация иллюстрирована 10 рисунками и 26 таблицами. Библиографический указатель включает 163 источника литературы (63 отечественных и 100 иностранных).

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Диссертационная работа была выполнена в лаборатории трансфузионных вирусных гепатитов и контаминантов ФГБУ «ГИСК им. Л.А. Тарасевича» Минздравсоцразвития России. Все представленные результаты получены лично автором.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Диагностические препараты для выявления HBsAg В ходе работы были использованы следующие коммерческие ИФТС для выявления HBsAg: «Вектогеп-В-HBs-антиген» (ЗАО «Вектор-Бест», п. Кольцово, Новосибирская область), «ДС-ИФА-HBsAg» (ООО НПО «Диагностические системы», г.

Нижний Новгород), «ЭКОлаб-HBsAg» (ЗАО «ЭКОлаб», г. Электрогорск, Московская область), «ИФА-HBsAg» (ФГУП НПО «Микроген», Нижегородский филиал «ИмБио»), «HBsAg-ИФА-ДС» (ЗАО «Медико-Биологический Союз», г. Новосибирск), «ГепаСтрип» (ООО «Ниармедик-Плюс», г. Москва), «ГепаСкан» (ЗАО «Биосервис», г. Боровск, Калужская область), «Abbott Auszyme Monoclonal» («Abbott Laboratories Ltd.», США). Постановка ИФА и учет результатов проводились в соответствии с инструкциями по применению тест-систем. Результаты исследований интерпретировали с использованием коэффициента позитивности (величина, равная отношению ОП исследуемого образца к критической ОП для данного опыта).

Стандартные образцы и референс-панели сывороток крови человека Отраслевой Стандартный Образец HBsAg (ОСО-HBsAg 42-28-311-06П). Для определения аналитической чувствительности исследованных ИФТС использовали Отраслевой стандартный образец (ОСО) HBsAg активностью 20 МЕ/мл, разработанный ООО «НПО «Диагностические системы» и аттестованный ГИСК им.

Л.А.Тарасевича по отношению ко 2-му международному референс-препарату HBsAg.

ОСО применяли в соответствии с инструкцией по применению.

Референс-панель сывороток крови человека производства ЗАО «Медицинский Центр «Авиценна» (ОСО 42-28-364-04П). Референс-панель сывороток крови человека производства ЗАО «Медицинский Центр «Авиценна», изготовленная на основе сывороток BBI («Boston Biomedica Institute», Массачусетс, США) - набор стандартных замороженных сывороток крови человека, разлитых в пластиковые флаконы в объеме мл с добавлением стабилизатора, содержащих и не содержащих HBsAg в известных концентрациях, субтипированных до 2-го знака. Сыворотки размораживали непосредственно перед выполнением исследования. Всего панель содержала 20 образцов сывороток, из которых 4 отрицательных,3 образца содержали HBsAg субтипа ad в концентрации от 0,2 МЕ/мл до 1,0 МЕ/мл, 6 образцов содержали HBsAg субтипа ay в концентрации от 0,1 МЕ/мл до 0,9 МЕ/мл, 7 образцов содержали HBsAg без определения субтипа в концентрации от 0,1 МЕ/мл до 3,0 МЕ/мл.

Референс-панель сывороток, содержащих и не содержащих HBsAg (ЗАО «Вектор-Бест»). В ходе работы использовали референс-панель сывороток, содержащих и не содержащих HBsAg, разработанную в ЗАО «Вектор-Бест». Данная панель представляла собой набор из 18 низкотитражных лиофильно высушенных сывороток объемом 500 мкл, разлитых в стеклянные флаконы, укупоренных резиновыми пробками под вакуумом и завальцованных алюминиевыми колпачками. Образцы сывороток панели содержали HBsAg 5 вариантов: ayw2, adw2, ayw3varA, ayw3varB, adr. Каждый образец HBsAg был представлен в 3х разведениях, в том числе ниже 0,1 МЕ/мл. Так же в состав панели входили 3 отрицательных сыворотки. Сыворотки восстанавливали в соответствии с инструкцией по применению стандартной панели сывороток - водой очищенной в объеме 500 мкл при соблюдении мер безопасности, принятых при работе с инфекционным материалом.

Стандартный образец предприятия «СОП №06-20» (ЗАО «Вектор-Бест»). СОП №06-20 представляла собой набор из 20 лиофилизированных сывороток крови человека, не содержащих HBsAg, предназначенный для оценки специфичности ИФТС для выявления поверхностного антигена вируса гепатита В.

Нативные сыворотки Для изучения диагностической чувствительности ИФТС использовали сыворотки крови пациентов с установленным диагнозом гепатита В (40 образцов), для изучения специфичности – отрицательные донорские сыворотки (320 образцов). Образцы сывороток были переданы в ГИСК из лаборатории Московского городского центра по профилактике и борьбе с синдромом приобретенного иммунодефицита (МГЦ СПИД). Обработку персональных данных доноров и пациентов не проводили.

Вакцины против гепатита В ДНК рекомбинантные С использованием вышеперечисленных ИФТС для выявления HBsAg были исследованы следующие вакцинные препараты: «Вакцина против гепатита В ДНК рекомбинантная дрожжевая» (ЗАО «НПК «Комбиотех», Россия), «Энджерикс В»

(«СмитКляйн Бичем - Биомед», Россия-Бельгия), «Эбербиовак НВ» («Эбербиотек», Куба), «Регевак В» (ЗАО «Биннофарм», Россия), «Вакцина гепатита В рекомбинантная (рДНК)» («Серум Инститьют Оф Индия, Лтд.», Индия), «Шанвак В» («Шанта Биотехникс ЛТД», Индия).

Пробоподготовка вакцин против гепатита В для оценки специфической активности (СА) методом ИФА. В качестве разбавителя использовали фосфатно-солевой буферный раствор с 0,2% раствором БСА, pH=7,4. Каждое разведение готовили в 2-х повторностях независимо от предыдущего для достижения конечных разведений:

1:1000, 1:2000, 1:4000, 1:8000, 1:16000, 1:32000, 1:64000 с соответствующим номинальным содержанием HBsAg – 20 нг/мл, 10 нг/мл, 5 нг/мл, 2,5 нг/мл, 1,25 нг/мл, 0,625 нг/мл, 0,3125 нг/мл.

При проведении ИФА все исследуемые пробы вносили в лунки иммуносорбента ИФТС для выявления HBsAg в случайном порядке. ИФА проводили в соответствии с инструкцией по применению тест-системы.

Статистические методы Обработка результатов определения специфической активности вакцин против гепатита В, полученных методом ИФА. Для обработки результатов исследований методом параллельных линий применяли компьютерную программу «Паралайн», разработанную главным метрологом ГИСК им. Л.А. Тарасевича В.Г. Петуховым. Программа зарегистрирована в Реестре программ для ЭВМ (номер свидетельства 2006612065, дата поступления заявки – 18 апреля 2006 года). Принцип работы программы основан на статистическом методе «параллельных линий», являющемся разновидностью дисперсионного анализа.

Общие статистические методы. В ходе работы определяли следующие статистические показатели: среднее (М), коэффициент корреляции Пирсона (r), который применялся для характеристики тесноты связи между получаемыми результатами.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

Изучение качества коммерческих ИФТС с использованием панели сывороток производства ЗАО «Медицинский центр «Авиценна». Образцы референс-панели сывороток исследовали в коммерческих ИФТС для выявления HBsAg в соответствии с инструкциями по их применению. Для интерпретации результатов использовали коэффициент позитивности (КП), рассчитываемый для каждого опыта (отношение ОП исследуемого образца к критической ОП (cut off), для данного опыта). Чувствительность ИФТС определяли с использованием ОСО HBsAg в соответствии с инструкцией по его применению.

Результаты, полученные нами при изучении референс-панели в разных ИФТС, представлены в таб.1. Порог чувствительности всех изученных ИФТС, определенный с помощью ОСО HBsAg, не превышал 0,1 МЕ/мл, что соответствовало требованиям приказа МЗ РФ №322 от 01.10.2002 г.

Как следует из анализа полученных данных, ИФТС «Диагностические системы» определила все позитивные образцы панели с наибольшим значением коэффициента позитивности, что может свидетельствовать о наибольшей чувствительности данной тест-системы при выявлении поверхностного антигена ВГВ.

В результате проведенной работы было показано, что отечественные коммерческие ИФТС для выявления HBsAg обладают разной чувствительностью к стандартным сывороткам, входящим в состав данной панели, и, кроме того, обладают разной чувствительностью к разным субтипам HBsAg. Некоторые ИФТС оказались неспособны выявить HBsAg в пороговой концентрации.

Очевидно, что для оценки специфичности ИФТС необходим расширенный набор образцов, то есть 4-х отрицательных образцов, входящих в состав референспанели, недостаточно для характеристики специфичности ИФТС.

Результаты изучения тест-систем с использованием референс-панели сывороток ЗАО «Медицинский центр «Авиценна»

Изучен- Всего изу- Число об- Число об- Не выявле- Число ложные тест- чено об- разцов, вы- разцов, вы- но положи- ноположисистемы разцов явленных с явленных с тельных тельных ВекторБест системы Ниармедик Плюс Изучение качества коммерческих ИФТС с использованием референс-панели сывороток ЗАО «Вектор-Бест». Образцы референс-панели сывороток исследовали в коммерческих ИФТС для выявления HBsAg в соответствии с инструкциями по применению данных ИФТС. Полученные результаты интерпретировали, используя КП.

Чувствительность ИФТС определяли с использованием ОСО HBsAg в соответствии с инструкцией по его применению.

Результаты, полученные нами при изучении референс-панели в разных ИФТС, представлены в таб. 2. Порог чувствительности всех изученных ИФТС, определенный с помощью ОСО HBsAg, не превышал 0,1 МЕ/мл, что соответствовало требованиям приказа МЗ РФ №322 от 01.10.2002 г.

Все ИФТС обладали удовлетворительной аналитической чувствительностью (минимальный порог выявления HBsAg составляет 0,1 МЕ/мл и ниже). Однако не все изученные ИФТС выявили позитивные образцы стандартной панели. Это связано с тем, что концентрация HBsAg была ниже пороговой чувствительности ИФТС. Специфичность всех изученных тест-систем составила 100%.

ИФТС «Диагностические системы» среди этих сывороток выявляла с наивысшими значениями ОП образцы, содержащие HBsAg серотипов группы «ad», в то время как ИФТС «Вектор-Бест» оказалась более чувствительной к образцам, содержащим HBsAg серотипов группы «ay». Остальные изученные ИФТС реагировали с этими сыворотками примерно с равными значениями ОП, что свидетельствовало об их одинаковой чувствительности к разным серотипам HBsAg.

Результаты изучения тест-систем с использованием референс-панели сывороток ЗАО «Вектор-Бест»

Ниармедик При анализе полученных данных можно отметить следующие факты:

ИФТС «Диагностические системы» более чувствительна к субтипам HBsAg группы «ad», а ИФТС «Вектор-Бест» – к субтипам группы «ay» (аналогичная ситуация наблюдалась и при изучении ИФТС с использованием референспанели «Авиценна»);

Чувствительность ИФТС, выраженная в величине значений коэффициента позитивности, тем выше, чем ниже порог выявления HBsAg, определенный с помощью ОСО.

Также был отмечен тот факт, что ИФТС «Диагностические системы» обладала более высокой чувствительностью, определяемой с помощью ОСО HBsAg, и при это выявила большинство сывороток референс-панелей с более высокими значениями КП, чем другие изученные ИФТС. С другой стороны, значения КП при исследовании отрицательных сывороток референс-панелей были ниже, чем в других ИФТС. Вышеперечисленные особенности ИФТС «Диагностические системы» говорят о ее высоком качестве и преимуществах перед другими изученными тест-системами.

В результате проведенных исследований было отмечено, что все ИФТС отвечали требованиям по показателю аналитической чувствительности, определяемой с помощью ОСО HBsAg и, соответственно, могут применяться в практическом здравоохранении. Однако все изученные ИФТС различались по своей диагностической чувствительности и величине КП. Таким образом, применение одного лишь ОСО HBsAg единственного субтипа не может полностью охарактеризовать качество иммуноферментных тест-систем. С целью более полной характеристики качества следует применять референс-панели сывороток.

Изучение вновь разработанных коммерческих ИФТС с повышенной чувствительностью с использованием референс-панелей сывороток В основе нового теста лежит принцип амплификации (усиления) сигнала за счет использования пары - биотинового и стрептавидинового конъюгатов (двойной сэндвич-метод ИФА). По этому принципу были сконструированы тест-системы ИФА для выявления HBsAg с повышенной чувствительностью – «ДС-ИФА-HBsAg» (ООО «НПО «Диагностические Системы») и «HBsAg-ИФА-БЕСТ» (ЗАО «Вектор-Бест»).

Данные тест-системы были представлены в ГИСК им. Л.А.Тарасевича для аттестации и проведения испытаний.

Изучение новой высокочувствительной ИФТС «ДС-ИФА-HBsAg-0,01» (ООО «НПО «Диагностические Системы») с использованием панелей сывороток. Аналитическую чувствительность нового теста оценивали с использованием ОСО-HBsAg 42П. Диагностическую чувствительность разработанной тест-системы анализировали с использованием образцов различных панелей: «Референс-панели сывороток крови человека, содержащих и не содержащих поверхностный антиген вируса гепатита В (HBsAg), субтипы ay и ad» (ЗАО Медицинский центр «Авиценна»), «Референс-панели сывороток, содержащих и не содержащих HBsAg» (ЗАО «Вектор-Бест»).

Клиническими материалами для изучения тест-системы служили образцы сыворотки крови от пациентов, страдающих острым и хроническим вирусным гепатитом В ( образцов), сыворотки здоровых доноров (320 образцов). При исследовании сывороток крови пациентов, страдающих гепатитом В, вновь разработанная ИФТС продемонстрировала 100% диагностическую чувствительность. При исследовании отрицательных сывороток крови пациентов инфекционной больницы тест-система продемонстрировала 100% специфичность. При изучении в новой тест-системе образцов референс-панелей сывороток (ЗАО «Медицинский Центр «Авиценна» и ЗАО «ВекторБест») была показана более высокая чувствительность, чем у ранее применявшихся тест-систем, выражавшаяся в достоверно более высоких значениях ОП. Чувствительность вновь разработанной ИФТС «ДС-ИФА-HBsAg-0,01» составила 0,01 МЕ/мл. На основании проведенных исследований данная тест-система была рекомендована к регистрации в Российской Федерации (ТУ 9398-091-05941003-2006).

Изучение новой высокочувствительной ИФТС «HBsAg-ИФА-БЕСТ» (ЗАО «Вектор-Бест») с использованием панелей сывороток. В результате проведенных исследований изученная ИФТС выявила положительные образцы референс-панели сывороток, содержащих и не содержащих HBsAg (ЗАО «Вектор-Бест») с более высокими показателями ОП, чем препараты сравнения (коммерческие ИФТС для выявления HBsAg, применяющиеся в работе диагностических лабораторий). Диагностическая специфичность, определяемая с использованием СОП 06-20, составила 100%. Аналитическая чувствительность, определяемая с использованием ОСО HBsAg, составила 0,01 МЕ/мл.

По результатам приемочных испытаний данная ИФТС была признана соответствующей требованиям проектной документации и рекомендована для проведения медицинских испытаний. Результатом медицинских испытаний явилась регистрация тест-системы «HBsAg-ИФА-БЕСТ» (ТУ 9398-058-235-481-72-2007).

Изучение вакцин против гепатита в по показателю «специфическая активность» методом иммуноферментного анализа Перед нами была поставлена задача по изучению возможности использования отечественных ИФТС для определения СА вакцин против гепатита В. С этой целью готовили 7 последовательных разведений изученных вакцин, которые исследовали в 2-х повторностях. Режим проведения ИФА определяли в соответствии с инструкциями по применению ИФТС. Пробы вносили в лунки иммуносорбента в случайном порядке. Все вакцины изучали одновременно в одном опыте на одном иммуносорбенте.

Значение СА вакцин по отношению к референс-образцу определяли статистически методом параллельных линий с помощью компьютерной программы «Паралайн». Исследование повторяли 3 раза. СА вакцин определяли с использованием отечественных коммерческих ИФТС для выявления HBsAg: «ИФА-HBsAg» (ФГУП «НПО «Микроген», филиал в г. Нижний Новгород), «ГепаСтрип» (ООО «Ниармедик Плюс», г. Москва), «ЭКОлаб-HBsAg» (ЗАО «ЭКОлаб», г. Электрогорск, Московская область), «ВектоГеп В-HBs-антиген» (ЗАО «Вектор-Бест», п. Кольцово, Новосибирская область). Все использованные в работе серии ИФТС отвечали требованиям качества по чувствительности (0,1 МЕ/мл HBsAg по ОСО HBsAg).

Были изучены следующие вакцины: «Шанвак В» («Шанта Биотехникс Лтд.», Индия), «Энджерикс В» («СмитКляйн Бичем - Биомед», Россия-Бельгия), «Эбербиовак НВ» («Эбербиотек», Куба), «Регевак В» (ЗАО «Биннофарм», Россия), «Вакцина гепатита В рекомбинантная (рДНК)» («Серум Инститьют Оф Индия», Индия). В качестве референс-образца при расчете СА вакцин была выбрана вакцина «Энджерикс В», серия 00650606, СА которой определена по отношению к референс-образцу Европейского союза методом ИФА с применением валидированной ИФТС «Abbott Auszyme Monoclonal»; СА данной серии вакцины «Энджерикс В» составляла по паспорту 20,56 мкг/мл HBsAg. В ходе работы изучали образцы одних и тех же серий вакцин.

ИФТС при определении СА вакцин против гепатита В оценивали по следующим критериям: доверительный интервал полученных значений СА изучаемого препарата должен находиться в пределах 80-120%, результаты должны отвечать требованиям линейности и параллелизма, должна быть подтверждена значимость линейной регрессии.

Результаты определения СА вакцин против гепатита В в ИФТС «Микроген».

Статистическая обработка данных ИФА методом дисперсионного анализа с использованием компьютерной программы «Паралайн» подтвердила теорию линейности и параллелизма полученных результатов во всех повторах исследования, при этом число измерений, препаратов и степень линейной регрессии были признаны значимыми, что также свидетельствует о достоверности полученных результатов. В одном исследовании из 3-х полученные результаты не отвечали критериям валидности по доверительному интервалу, то есть верхний и нижний пределы активности при p=0,95 выходили за границы 80-120% от значения СА. Все результаты отвечали критериям линейности и параллелизма.

В результате проведенных исследований показано, что СА вакцин «Шанвак В»

и «Серум Инститьют оф Индия», определяемая с использованием ИФТС «Микроген», значительно превышала СА вакцин «Энджерикс В», «Эбербиовак НВ» и «Регевак В», в то время, как СА вакцин «Энджерикс В» и «Регевак В» была сопоставима, а СА кубинской вакцины была достоверно ниже СА всех остальных вакцинных препаратов.

Результаты определения СА вакцин против гепатита В в сравнении с вакциной «Энджерикс В» в ИФТС «Микроген» представлены на рис. 1.

Средние значения специфической активности вакцин Рис. 1. Средние значения специфической активности вакцин, определенные в тест-системе «Микроген» в трех повторах в сравнении с вакциной «Энджерикс В»

Результаты определения СА вакцин против гепатита В в ИФТС «Ниармедик Плюс». Статистическая обработка данных ИФА методом дисперсионного анализа подтвердила теорию линейности и параллелизма полученных результатов во всех повторах исследования, при этом число измерений, препаратов и степень линейной регрессии были признаны значимыми, что также свидетельствует о достоверности полученных результатов. Все результаты отвечали критериям линейности и параллелизма, а также находились в пределах доверительного интервала 80-120%.

В результате проведенных исследований показано, что СА вакцин «Шанвак В»

и «Серум Инститьют оф Индия», определяемая с использованием ИФТС «Ниармедик Плюс», превышала СА вакцин «Энджерикс В», «Эбербиовак НВ» и «Регевак В», в то время, как СА вакцин «Эбербиовак НВ» и «Регевак В» была ниже СА вакцины «Энджерикс В». Результаты определения СА вакцин против гепатита В в сравнении с вакциной «Энджерикс В» в ИФТС «Ниармедик Плюс» представлены на рис. 2.

Средние значения специфической активности вакцин Рис. 2. Средние значения специфической активности вакцин, определенные в тест-системе «Ниармедик Плюс» в трех повторах в сравнении с вакциной «Энджерикс В»

Результаты определения СА вакцин против гепатита В в ИФТС «ЭКОлаб».

Статистическая обработка данных ИФА методом дисперсионного анализа подтвердила теорию линейности и параллелизма полученных результатов в двух повторах исследования из трех, при этом число измерений, препаратов и степень линейной регрессии были признаны значимыми во всех случаях, что говорит о том, что полученные результаты не всегда были достоверными. Во всех 3-х повторах исследования полученные результаты не отвечали критериям валидности по доверительному интервалу, то есть верхний и нижний пределы активности при p=0,95 выходили за границы 80-120% от значения СА изучаемых препаратов.

В результате проведенных исследований показано, что СА всех изученных в ИФТС «ЭКОлаб» вакцин была выше СА вакцины «Энджерикс В».

Результаты определения СА вакцин против гепатита В в сравнении с вакциной «Энджерикс В» в ИФТС «ЭКОлаб» представлены на рис. 3.

Рис. 3. Средние значения специфической активности вакцин, определенные в тест-системе «ЭКОлаб» при трехкратном исследовании в сравнении с вакциной «Энджерикс В»

Результаты определения СА вакцин против гепатита В в ИФТС «Вектор-Бест».

Статистическая обработка данных ИФА методом дисперсионного анализа не подтвердила теорию параллелизма полученных результатов во всех повторах исследования, и подтвердила теорию линейности только во 2-м повторе исследования, при этом число измерений, препаратов и степень линейной регрессии были признаны значимыми, что говорит о том, что полученные результаты не всегда были достоверными.

Во всех 3-х повторах исследования полученные результаты не отвечали критериям валидности по доверительному интервалу, то есть верхний и нижний пределы активности при p=0,95 выходили за границы 80-120% от значения СА изучаемых препаратов.

В результате проведенных исследований показано, что СА всех изученных в ИФТС «Вектор-Бест» вакцин была выше СА вакцины «Энджерикс В».

Результаты определения СА вакцин против гепатита В в сравнении с вакциной «Энджерикс В» в ИФТС «Вектор-Бест» представлены на рис. 4.

Все изученные вакцины против гепатита В при изучении в отечественных ИФТС обладали различной СА, что может быть связано как с различным количественным содержанием HBsAg, так и с особенностями штамма-продуцента, конфигурации молекул, состава готовой лекарственной формы вакцины и т.п.

Рис. 4. Средние значения специфической активности вакцин, определенные в тест-системе «Вектор-Бест» в трех повторах в сравнении с вакциной «Энджерикс В»

На основании проведенных исследований было принято решение провести сравнительное изучение вакцин против гепатита В по показателю СА в ИФТС «Ниармедик Плюс» и «Abbott» с целью оценки сходимости результатов, полученных в этих тест-системах.

Сравнительное изучение СА вакцин против гепатита В в ИФТС «ГепаСтрип»

(ООО «Ниармедик Плюс») и «Abbott Auszyme Monoclonal» («Abbott Laboratories Ltd.», США). В последние годы возникла необходимость внедрения в практику контроля специфической активности вакцин против гепатита В новых ИФТС взамен ранее рекомендованной «Abbott Auszyme Monoclonal», производство которой в настоящее время прекращено. На основании результатов ранее проведенных исследований для проведения сравнительной оценки с ИФТС «Abbott» была выбрана ИФТС «Ниармедик Плюс», так как она продемонстрировала удовлетворительные аналитические показатели в ходе ранее проведенных исследований.

СА вакцин против гепатита В определяли одновременно параллельно в обеих ИФТС в соответствии с инструкциями по применению.

В ходе сравнительного изучения СА вакцин против гепатита В были получены результаты, представленные в таб. 3.

Результаты сравнительного изучения специфической активности вакцин в тест-системах «Abbott» и «Ниармедик Плюс»

На первый взгляд данные, полученные в разных ИФТС, отличаются. Однако корреляция, определенная по методу Пирсона (r), составила 0,994, что свидетельствует о тесной связи между рядами данных и, соответственно, о сопоставимости полученных результатов. При этом полученные результаты полностью соответствуют критериям валидности (линейность, параллелизм, верхний и нижний пределы доверительного интервала специфической активности в пределах 80-120%). Полученные результаты сравнительного изучения вакцин в обеих тест-системах свидетельствуют о возможности применения ИФТС «ГепаСтрип» для контроля вакцин против гепатита В по показателю СА.

Средние значения специфической активности вакцин Рис. 5. Результаты изучения специфической активности вакцин против гепатита В в тест-системах «Abbott» и «Ниармедик Плюс»

Применение метода ИФА для оценки специфической активности вакцины против гепатита В «Шанвак В» (Индия) В рамках реализации национального проекта «Здоровье» в Российскую Федерацию было поставлено свыше 20 млн доз вакцины «Шанвак В» («Шанта Биотехникс Лтд.», Индия). Был проведен выборочный контроль 157 серий вакцины «Шанвак В».

Для контроля вакцин применялась ИФТС « «Ниармедик Плюс». В качестве референспрепарата применяли референс-образец предприятия, предоставленный производителем вакцины.

Все отконтролированные серии вакцины «Шанвак В» соответствовали требованиям НД по показателю «Специфическая активность». Результаты статистической обработки значений СА приведены в таб. 4.

Проведенный выборочный контроль показал, что вакцина «Шанвак В» соответствует требованиям НД по показателю специфической активности.

Оценка результатов выборочного контроля специфической активности вакцины «Шанвак В»

Среднее значение специфической активности по отношению к референс-препарату в выборке Минимальное специфической активности по отношению к референс-препарату в выборке Максимальное специфической активности по отношению к референс-препарату в выборке Применение метода ИФА для оценки специфической активности вакцины против гепатита В «Эбербиовак НВ» (Куба) В рамках реализации национального проекта «Здоровье» в Российскую Федерацию было поставлено свыше 20 млн доз вакцины «Эбербиовак НВ»

(«Эбербиотек», Куба). Был проведен выборочный контроль данной вакцины.

Для определения специфической активности вакцины применяли ИФТС «ГепаСтрип», выпускаемую ООО «Ниармедик Плюс». В качестве референсобразца специфической активности использовали референс-препарат предприятия, предоставленный производителем вакцины – кубинским предприятием «Эбербиотек».

В результате выборочного контроля 104 серий вакцины «Эбербиовак НВ»

были получены показатели специфической активности, представленные в таб.

Проведенный выборочный контроль показал, что вакцина «Эбербиовак НВ»

соответствует требованиям НД по показателю специфической активности.

Оценка результатов выборочного контроля специфической активности вакцины «Эбербиовак НВ»

Среднее значение специфической активности по отношению к референс-препарату в выборке Минимальное специфической активности по отношению к референс-препарату в выборке Максимальное специфической активности по отношению к референс-препарату в выборке Резюмируя вышеизложенное, можно сказать, что результатом диссертационной работы явилось внедрение в практическую работу отечественной тест-системы «ГепаСтрип» (ООО «Ниармедик Плюс») для контроля специфической активности вакцин против гепатита В методом ИФА, как в ГИСК им. Л.А. Тарасевича, так и на отечественных производственных предприятиях, выпускающих вакцины для профилактики гепатита В. Впервые сделан вывод о том, что специфическая активность разных вакцин против гепатита В, определяемая методом ИФА по отношению к единому препарату сравнения, различается.

Кроме того, впервые была дана сравнительная оценка качества ИФТС отечественного производства для выявления HBsAg с применением референс-панелей сывороток. Также на основании проведенных исследований были зарегистрированы тест-системы для выявления HBsAg нового поколения с повышенной чувствительностью – 0,01 МЕ/мл.

ВЫВОДЫ

1. Установлено, что отечественные иммуноферментные тест-системы для обнаружения HBsAg выявляют различные субтипы и варианты поверхностного антигена вируса гепатита В; чувствительность и специфичность изученных тест-систем соответствует требованиям регламентирующих документов.

2. Доказано, что результаты определения специфической активности отечественных и зарубежных вакцин против гепатита В, полученные при использовании иммуноферментной тест-системы «ГепаСтрип» (ООО «Ниармедик Плюс»), соответствуют общепринятым критериям валидности. Тест-система «ГепаСтрип» рекомендована для контроля специфической активности вакцин против гепатита В.

3. Вакцины для профилактики гепатита В, зарегистрированные в Российской Федерации, различаются по показателям специфической активности, определяемой методом ИФА по отношению к единому препарату сравнения (вакцина «Энджерикс В»). Рекомендовано определять специфическую активность вакцин против гепатита В в иммуноферментном анализе по отношению к собственным референс-образцам, приготовленным по одной технологии с использованием одного и того же штамма-продуцента.

4. Установлены преимущества и рекомендованы к регистрации и медицинскому применению иммуноферментные тест-системы нового поколения для выявления HBsAg с повышенной чувствительностью (0,01 МЕ/мл) – «ДС-ИФА-HBsAg-0,01»

(ООО «НПО «Диагностические системы», ТУ 9398-091-05941003-2006) и «HBsAg-ИФА-БЕСТ» (ЗАО «Вектор-Бест», ТУ 9398-058-235-481-72-2007).

Список работ, опубликованных по теме диссертации 1. Шалунова Н.В., Коровкин А.С., Мусина Е.Е., Бочарова Н.Г. Изучение стандартных панелей сывороток, содержащих и не содержащих HBsAg, в коммерческих тест-системах для выявления HBsAg методом иммуноферментного анализа // XIV Международная конференция «Новые информационные технологии в медицине, биологии, фармакологии и экологии»: Материалы конференции. - Украина, Крым, Ялта-Гурзуф, 31 мая – 9 июня 2006 года. – С.145-146.

2. Коровкин А.С., Бектимиров Т.А., Шалунова Н.В., Мусина Е.Е. Сравнительное изучение тест-систем ИФА для выявления HBsAg с помощью стандартных панелей сывороток // II Всероссийская научно-практическая конференция с международным участием «Вакцинология 2006. Совершенствование иммунобиологических средств профилактики, диагностики и лечения инфекционных болезней»:

Тезисы докладов. – М., 21-22 ноября 2006. – С.51.

3. Коровкин А.С., Шалунова Н.В., Бектимиров Т.А. Выбор тест-системы ИФА для исследования подлинности и специфической активности вакцин против гепатита В // 7-я всероссийская научно-практическая конференция «Вирусные гепатиты – проблемы эпидемиологии, диагностики, лечения и профилактики»: Тезисы докладов. - М., 29 – 31 мая 2007. -С. 40-41.

4. Коровкин А.С., Шалунова Н.В., Бектимиров Т.А. Разработка и аттестация стандартного образца вакцины против гепатита В для оценки подлинности и специфической активности вакцин в ИФА // 7-я всероссийская научно-практическая конференция «Вирусные гепатиты – проблемы эпидемиологии, диагностики, лечения и профилактики»: Тезисы докладов. - М., 29 – 31 мая 2007. - С.115-116.

5. Коровкин А.С., Шалунова Н.В., Нетёсова И.Г., Бектимиров Т.А. Сравнительное изучение коммерческих тест-систем ИФА для выявления HBsAg с помощью стандартной панели сывороток, содержащих и не содержащих HBsAg. // Биопрепараты. 2007. № 3 (27). С. 29-33.

6. Коровкин С.А., Коровкин А.С. Проблема стандартизации вакцин против гепатита В // Создание и перспективы применения медицинских иммунобиологических препаратов: Материалы конференции. - Пермь, 18 – 19 июня 2008. – С.17-19.

7. Коровкин А.С. Методика определения специфической активности вакцин против гепатита В методом ИФА // Создание и перспективы применения медицинских иммунобиологических препаратов: Материалы конференции. - Пермь, 18 – июня 2008. – С.56-58.

8. Коровкин А.С. Подходы к оценке специфической активности вакцин против гепатита В методом in vitro // III Всероссийская научно-практическая конференция с международным участием «Вакцинология 2008. Совершенствование иммунобиологических средств профилактики, диагностики и лечения инфекционных болезней»: Тезисы докладов. – М., 11-12 ноября 2008. – С. 65.

9. Егорова Н. И., Пыренкова И. Ю., Иголкина С. Н., Шарипова И. Н., Пузырев В. Ф., Обрядина А. П., Бурков А. Н., Корниенко Н. В., Howard A. Fields, Коровкин А. С., Шалунова Н. В., Бектимиров Т. А., Кузнецов К. В., Кощеева Н. А., Уланова Т. И.

Диагностические преимущества тест-системы «ДС-ИФА-HBsAg-0,01» для выявления поверхностного антигена вируса гепатита B // Вопросы вирусологии.-2009.- №2.-С.44-48.



 
Похожие работы:

«КРАВЦОВА Людмила Павловна БИОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ PANZERINA LANATA (L.) SOJAK SUBSP. ARGYRACEA (KUPRIAN.) KRESTOVSK. ПРИ ИНТРОДУКЦИИ В ХАКАСИИ 03.00.05 – Ботаника АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Новосибирск – 2006 Работа выполнена в НИИ аграрных проблем Хакасии СО РАСХН (г. Абакан) и в Центральном сибирском ботаническом саду СО РАН (г. Новосибирск). Научный руководитель — доктор биологических наук, с.н.с. Высочина Галина...»

«Трошева Татьяна Дмитриевна АНТИФУНГАЛЬНЫЕ СРЕДСТВА И ФАКТОРЫ ПАТОГЕННОСТИ ОППОРТУНИСТИЧЕСКИХ ГРИБОВ 03.01.06 – Биотехнология (в том числе бионанотехнологии) 03.02.03 – Микробиология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Санкт-Петербург – 2013 Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении науки Санкт-Петербургский научно-исследовательский центр экологической безопасности Российской академии наук (НИЦЭБ РАН) в...»

«ДУДИНА Юлия Викторовна СТРУКТУРНАЯ РЕОРГАНИЗАЦИЯ СЛУХОВОЙ КОРЫ ПРИ ВИСОЧНОЙ ЭПИЛЕПСИИ 03. 00. 25 – гистология, цитология, клеточная биология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук Владивосток – 2008 2 Работа выполнена в ГОУ ВПО Владивостокском государственном медицинском университете Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию Научный консультант : доктор медицинских наук, профессор Мотавкин Павел Александрович...»

«Ломакин Алексей Юрьевич РОЛЬ ДИНАМИКИ МИКРОТРУБОЧЕК И СТРУКТУРЫ ИХ СЕТИ В ОРГАНИЗАЦИИ ВНУТРИКЛЕТОЧНОГО ТРАНСПОРТА 03.00.03 – молекулярная биология 03.00.25 – гистология, цитология, клеточная биология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Москва – 2009 Работа выполнена на факультете биоинженерии и биоинформатики Московского государственного университета имени М.В. Ломоносова и в департаменте клеточной биологии Медицинской школы...»

«Айбулатов Сергей Вадимович ФАУНА И ЭКОЛОГИЯ ДВУКРЫЛЫХ НАСЕКОМЫХ КОМПЛЕКСА ГНУСА НА ТЕРРИТОРИЯХ, ПРИЛЕГАЮЩИХ К ФИНСКОМУ ЗАЛИВУ 03.00.19 паразитология Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Санкт-Петербург 2009 Работа выполнена в Учреждении Российской академии наук Зоологического института РАН Научный руководитель : доктор биологических наук Медведев Сергей Глебович Официальные оппоненты : доктор биологических наук, профессор Нарчук...»

«СИЛКИНА Ольга Владимировна КОМПЛЕКСНАЯ ОЦЕНКА ЭКОЛОГО-ФИЗИОЛОГИЧЕСКИХ ПАРАМЕТРОВ ХВОИ ABIES SIBIRICA И PICEA ABIES В ПРОЦЕССЕ ВЕГЕТАЦИИ И ЕЕ ФИТОПРОДУКТИВНАЯ АКТИВНОСТЬ Специальности 03.00.16 – Экология 03.00.32 – Биологические ресурсы Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук КАЗАНЬ — 2006 Работа выполнена на кафедре химии Марийского государственного технического университета и кафедре прикладной экологии Казанского государственного...»

«Куликова Наталья Александровна ЗАЩИТНОЕ ДЕЙСТВИЕ ГУМИНОВЫХ ВЕЩЕСТВ ПО ОТНОШЕНИЮ К РАСТЕНИЯМ В ВОДНОЙ И ПОЧВЕННОЙ СРЕДАХ В УСЛОВИЯХ АБИОТИЧЕСКИХ СТРЕССОВ Специальности 03.00.16 – Экология и 03.00.27 –Почвоведение Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук Москва-2008 Работа выполнена на факультете почвоведения МГУ имени М.В. Ломоносова Научный консультант : доктор химических наук, профессор Перминова И.В. Официальные оппоненты : Доктор...»

«Олифиренко Александр Борисович ОСОБЕННОСТИ БИОЛОГИИ ДВУСТВОРЧАТОГО МОЛЛЮСКА Anadara broughtoni В ЗАЛИВЕ ПЕТРА ВЕЛИКОГО (ЯПОНСКОЕ МОРЕ) 03.00.18 – гидробиология 03.00.16 – экология Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Владивосток 2007 2 Работа выполнена в лаборатории ресурсов беспозвоночных прибрежных вод и континентальных водоемов и секторе экосистемных исследований биоресурсов прибрежных вод Федерального государственного унитарного...»

«АНТИПИНА Ольга Валерьевна СПОСОБНОСТЬ ЛИСТЬЕВ И КОРНЕЙ ТЕПЛОЛЮБИВЫХ РАСТЕНИЙ ТАБАКА К ФОРМИРОВАНИЮ УСТОЙЧИВОСТИ К ГИПОТЕРМИИ 03.01.05 – физиология и биохимия растений АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Москва – 2010 Работа выполнена в лаборатории зимостойкости Учреждения Российской академии наук Института физиологии растений им. К.А. Тимирязева РАН, г. Москва. НАУЧНЫЙ РУКОВОДИТЕЛЬ: кандидат биологических наук Попов Валерий...»

«НОТОВ Александр Александрович СОПРЯЖЕННЫЙ АНАЛИЗ КОМПОНЕНТОВ ФЛОРЫ ТВЕРСКОЙ ОБЛАСТИ Специальность 03.02.01 – Ботаника Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук Москва – 2012 Работа выполнена на кафедре ботаники ФГБОУ ВПО Тверской государственный университет Официальные оппоненты : доктор географических наук, профессор Анна Яковлевна Григорьевская доктор биологических наук, профессор Наталия Николаевна Попова доктор биологических наук,...»

«ЧИГИНЕВА Надежда Ивановна ВЛИЯНИЕ ДОСТУПНОСТИ СОЕДИНЕНИЙ УГЛЕРОДА И АЗОТА НА СТРУКТУРУ ГРИБНЫХ СООБЩЕСТВ И СКОРОСТЬ ДЕСТРУКЦИИ РАСТИТЕЛЬНОГО ОПАДА 03.00.24 – микология 03.00.16 – экология Автореферат на соискание ученой степени кандидата биологических наук Москва Работа выполнена на кафедре микологии и альгологии биологического факультета Московского государственного университета имени М.В....»

«Есюнина Дарья Михайловна Особенности реакции расщепления РНК и регуляции активности у РНК-полимераз Deinococcus radiodurans, Thermus aquaticus и Thermus thermophilus 03.01.03 - молекулярная биология Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Москва – 2013 Работа выполнена на кафедре молекулярной биологии биологического факультета Федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования...»

«АХТЯМОВ РАСУЛ ГУМЕРОВИЧ ОЦЕНКА И ПУТИ УМЕНЬШЕНИЯ ЭКОЛОГИЧЕСКОЙ ОПАСНОСТИ ОБЪЕКТОВ АВТОТРАНСПОРТНОЙ ИНФРАСТРУКТУРЫ УРБАНИЗИРОВАННОЙ ТЕРРИТОРИИ 03.00.16 – Экология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата технических наук Казань – 2009 Работа выполнена в ГОУ ВПО Уфимском государственном авиационном техническом университете доктор технических наук, профессор Научный руководитель Красногорская Наталия Николаевна доктор технических наук, профессор Официальные...»

«ЩЕРБАЧЕНКО ИРИНА МИХАЙЛОВНА МОДИФИЦИРОВАННЫЕ ОКИСЛЕНИЕМ ЭРИТРОЦИТЫ КАК ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ МОДЕЛЬ ДЛЯ ОЦЕНКИ АКТИВНОСТИ АНТИОКСИДАНТОВ. 03.00.04. — биохимия АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Москва – 2008 2 Работа выполнена в Государственном учреждении Гематологический Научный Центр Российской Академии Медицинских Наук Научный руководитель : доктор биологических наук Лисовская Ирина Львовна Официальные оппоненты : Д.б.н., профессор...»

«ДУБОВСКИЙ Иван Михайлович АНТИОКСИДАНТНАЯ СИСТЕМА КИШЕЧНИКА ЛИЧИНОК GALLERIA MELLONELLA L. ПРИ БАКТЕРИОЗЕ И ВОЗДЕЙСТВИИ ВТОРИЧНЫХ МЕТАБОЛИТОВ РАСТЕНИЙ 03. 00. 09 – энтомология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Новосибирск – 2004 Работа выполнена в лаборатории патологии насекомых Института систематики и экологии животных СО РАН Научный...»

«Шеметова Инна Сергеевна ЭКОЛОГО-БИОЛОГИЧЕСКИЕ ОСНОВЫ СОЗДАНИЯ РАСТИТЕЛЬНЫХ ГАЗОНОВ В УСЛОВИЯХ ПРЕДБАЙКАЛЬЯ 03.02.08 - экология АВТОРЕФЕРАТ на соискание ученой степени кандидата биологических наук Улан-Удэ – 2011 1 Работа выполнена на кафедре сельскохозяйственной экологии ФГОУ ВПО Иркутской государственной сельскохозяйственной академии Научный руководитель : Доктор сельскохозяйственных наук, профессор Хуснидинов Шарифзян Кадирович Официальные оппоненты : Доктор биологических...»

«Копылов Артур Тигранович РАЗРАБОТКА МАСС-СПЕКТРОМЕТРИЧЕСКОГО МЕТОДА ОЦЕНКИ СОДЕРЖАНИЯ БЕЛКОВ БЕЗ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ ИЗОТОПНЫХ МЕТОК 03.00.04 – биохимия Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук МОСКВА - 2009 Работа выполнена в Учреждении Российской академии медицинских наук Научноисследовательском институте биомедицинской химии имени В.Н.Ореховича РАМН. Научный руководитель : Кандидат биологических наук Згода Виктор Гаврилович Официальные...»

«Протасова Светлана Владимировна ОСОБЕННОСТИ ОБМЕНА ГЛИКОЗАМИНОГЛИКАНОВ В КОЖЕ И ПЕЧЕНИ КРЫС С РАЗЛИЧНОЙ УСТОЙЧИВОСТЬЮ К СТРЕССУ 03.01.04 – Биохимия Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Казань - 2010 Работа выполнена в государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования Ижевская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию. Научный руководитель :...»

«Шабалин Иван Григорьевич СТРУКТУРНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ НАД+-ЗАВИСИМЫХ ФОРМИАТДЕГИДРОГЕНАЗ ИЗ РАЗЛИЧНЫХ ОРГАНИЗМОВ Специальность 03.01.04 – биохимия АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учёной степени кандидата химических наук МОСКВА 2010 Работа выполнена в лаборатории инженерной энзимологии Учреждения Российской академии наук Института биохимии им. А.Н. Баха РАН Научные руководители: доктор химических наук, профессор В.О. Попов кандидат физикоматематических наук К.М. Поляков...»

«КОРЗУН АЛЕКСЕЙ СЕРГЕЕВИЧ КАРАСЬ СЕРЕБРЯНЫЙ АМУРСКИЙ (Carassius auratus gibelio) В ИХТИОФАУНЕ ОМСКОЙ ОБЛАСТИ 03.02.04 - ЗООЛОГИЯ АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учной степени кандидата биологических наук Омск – 2011 Работа выполнена в ФГБОУ ВПО Омский государственный педагогический университет, кафедра зоологии и физиологии животных Научный руководитель : Кассал Б.Ю., кандидат ветеринарных наук, доцент Официальные оппоненты : Журавлев В.Б., доктор биологических наук,...»






 
© 2013 www.diss.seluk.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Авторефераты, Диссертации, Монографии, Методички, учебные программы»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.