WWW.DISS.SELUK.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА
(Авторефераты, диссертации, методички, учебные программы, монографии)

 

На правах рукописи

ГАЛУШКО

МАКСИМ ГЕННАДЬЕВИЧ

ОЦЕНКА ТОЛЕРАНТНОСТИ ОРГАНИЗМА К ТРОМБИНУ

ПО КОАГУЛОАКТИВНОСТИ ТРОМБОЦИТОВ

И УРОВНЮ МАРКЕРОВ НЕПРЕРЫВНОГО

ВНУТРИСОСУДИСТОГО СВЕРТЫВАНИЯ КРОВИ

03.01.04 – биохимия

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Тюмень – 2012

Работа выполнена в Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Тюменская государственная медицинская академия»

Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации

Научный руководитель:

доктор медицинских наук, профессор Галян Сергей Леонидович

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор Высокогорский Валерий Евгеньевич ГБОУ ВПО «Омская государственная медицинская академия»

Министерства здравоохранения и социального развития РФ доктор медицинских наук Шевлюкова Татьяна Петровна ГБОУ ВПО «Тюменская государственная медицинская академия»

Министерства здравоохранения и социального развития РФ

Ведущая организация: ГБОУ ВПО «Челябинская государственная медицинская академия» Министерства здравоохранения и социального развития РФ

Защита состоится «….» …………. 2012 г в …. часов на заседании диссертационного совета Д 208.101.02 при ГБОУ ВПО «Тюменская государственная медицинская академия» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации по адресу: 625023, г. Тюмень, ул. Одесская,

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГБОУ ВПО «Тюменская государственная медицинская академия» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации.

Автореферат разослан «…..»…………… 2012 года

Ученый секретарь С.А. Орлов диссертационного совета

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ




Актуальность работы определяется рядом фактов, которые позволяют сформулировать некоторые положения: 1. Ведущая причина смертности в мире, в том числе и в России – заболевания сердечно-сосудистой системы [Е.И.Чазов, 2008;

G.Y.Lip, C.Weber, 2011], при которых непосредственной причиной смерти нередко являются тромбозы, обусловленные атеросклеротическими изменениями сосудистой стенки, при этом активируются тромбоциты, запуская каскад биохимических реакций, ведущих к образованию тромбоцитарной пробки и к формированию фибриновой сети [Д.М.Зубаиров, 2000; И.Н.Бокарев, 2008; Б.И.Кузник, 2010;

K.Tanaka e.a., 2008]. Столь же опасны и кровотечения, которые сопровождают не только травмы и хирургические вмешательства, но нередко и роды [А.Д.Макацария и др., 2011]. При этом часто (70-80%) кровоточивость обусловливается недостаточностью тромбоцитарного звена системы гемостаза [А.С.Шитикова, 2008]. 2. Не всегда оценку гемокоагуляции сопровождает адекватный контроль тромбоцитарного звена [И.Е.Попова, 1999; W.J.Chen, S.L.Yeh; 2003], хотя через тромбоциты в значительной мере реализуется влияние ЛПО на гемостаз [А.Ш.Бышевский и др., 1994, 2006; 2009, 2010, 2011; В.В.Юдин, 2002; С.Л.Галян и др., 2003, 2010; Р.Г.Алборов, 2006]. 3. Наклонность к гипер- или к гипокоагуляции во многом определяется изменением интенсивности взаимодействия тромбинфибриноген (ВТФ) [З.С.Баркаган, 1998; И.Н.Бокарев, 2002; M.Levi, 2004;

H.M.Spronk, 2003], так как его скорость, а, следовательно, и скорость непрерывного внутрисосудистого свертывания крови (НВСК) может рассматриваться как мера напряжения в системе гемостаза [А.П.Момот, 1990; З.С.Баркаган, 1998;

Д.М.Зубаиров, 2000; В.Ф.Киричук и др., 2002; H.M.Spronk, 2003]. 4. Интерес к оценке НВСК, протекающего в условиях физиологической нормы с малой интенсивностью [Д.М.Зубаиров, 2000; А.Ш.Бышевский и др., 2003, 2006], тем и обусловлен, что при экстремальных воздействиях сдвиги уровня маркеров НВСК отражают наклонность к гипер- или гипокоагуляции [И.Н.Бокарев, 2002; М.К.Умутбаева, 2005; А.Ш.Бышевский, С.Л.Галян и др., 2008; O.Segers e.a., 2010]. 5. Единичными работами показано, что сдвиги НВСК, обусловливаемые экзогенной гипертромбинемией, сопряжены с толерантностью к тромбину (ТкТР) [И.Н.Бокарев, 2002; В.П.Балуда, 1995; Р.Г.Алборов, 2006; А.Ш.Бышевский, С.Л.Галян и др., 2008; А.Ш.Бышевский, И.А.Карпова и др., 2011], однако неизвестно, как соотносятся уровень маркеров ВТФ и ТкТР с коагуляционной активностью тромбоцитов.

Кроме того, важно установить, является ли связь гипертромбинемии с ТкТР закономерной, независящей от причины, вызывающей рост уровня тромбина в кровотоке. 6. Определение уровня маркеров НВСК в плазме и коагулоактивности тромбоцитов у больного вполне доступно, тогда как определение ТкТР возможно лишь в экспериментах на животных, которые основаны на оценке частоты выживания после внутривенного введения тромбина или на оценке степени сдвигов активности прокоагулянтов или уровня фибриногена. Разумеется, эти способы неприемлемы для клиники, так как введение даже следовых количеств тромбина в кровоток недопустимо в связи с его способностью аутокаталитически ускорять тромбинообразование [Д.М.Зубаиров, 1978, 2000; А.Ш.Бышевский и др. 1986, 1993;





А.С.Шитикова, 2000; Л.П.Папаян, 2003]. Вместе с тем, ТкТР – один из важнейших интегральных показателей, характеризующих систему гемостаза.

Всё это и определило необходимость установить возможность оценки ТкТР неинвазивным, косвенным и доступным использованию в клинике приемом.

Цель исследования. Охарактеризовать при разнообразных воздействиях, изменяющих тромбинообразование, зависимость между коагулоактивностью тромбоцитов, плазменным уровнем маркеров непрерывного внутрисосудистого свертывания крови и способностью организма противостоять гипертромбинемии с тем, чтобы оценить возможность контроля в клинике толерантности к тромбину по уровню в плазме крови продуктов взаимодействия тромбин-фибриноген, т.е. маркеров НВСК.

Задачи исследования. 1. Изучить сдвиги коагулоактивности тромбоцитов и плазменного уровня маркеров непрерывного внутрисосудистого свертывания крови при воздействиях, уменьшающих эти величины. 2. Изучить те же сдвиги при воздействиях, повышающих коагулоактивность тромбоцитов и уровень маркеров непрерывного внутрисосудистого свертывания крови. 3. Использовать при выполнении задач, сформулированных в пп. 1 и 2, воздействия, отличающиеся по механизму, длительности и интенсивности, следовательно, и по характеру влияния на организм (в частности, на гемостаз) – это позволит выявить, насколько закономерны соотношения между коагулоактивностью тромбоцитов, плазменным уровнем маркеров непрерывного внутрисосудистого свертывания крови и сдвигами толерантности к тромбину. 4. Подвергнуть анализу взаимосвязи всех полученных переменных, оценить ранговую корреляцию их сочетаний по два, определяя величины, характеризующие наличие и тесноту ассоциативных связей (rs), оценить связи переменных, устанавливая корректность усреднения по величине коэффициентов аппроксимации. 5. Повторить эксперимент по изучению гемокоагуляции в условиях гипер- и гипокоагулемии с тем, чтобы сопоставить сдвиги толерантности к тромбину, оцениваемой использованным нами методом, и методом, основанным на определении частоты выживания животных после внутривенного введения тромбина в DL50%.

Впервые выявлено существование тесной положительной и близкой к линейной ассоциативной связи между показателями НВСК и показателями коагулоактивности тромбоцитов.

Впервые экспериментально выявлено наличие отрицательной ассоциации между коагулоактивностью тромбоцитов и интенсивностью НВСК с одной стороны, и толерантностью к тромбину - с другой.

Экспериментально показано, что результаты определения ТкТР инвазивным методом (по частоте выживания или гибели животных после внутривенного введения DL50% тромбина) близки к данным, полученным при оценке ТкТР неинвазивным методом (по степени сдвигов коагулоактивности тромбоцитов или маркеров НВСК).

Впервые выдвинуто экспериментально обоснованное предположение, согласно которому судить о толерантности пациента к тромбину можно по уровню в кровотоке продуктов ВТФ (т.е. маркеров НВСК), или по активности тромбоцитов.

Опытным путем показано, что оценивать толерантность организма к тромбину можно по уровню маркеров НВСК или по коагулоактивности тромбоцитов, что позволяет судить о ТкТР неинвазивным приемом. Ранее с этой целью определяли частоту выживания животных после введения токсической дозы тромбина или оценивали у них степень сдвигов активности некоторых прокоагулянтов. Такие приемы не могут использоваться в клинической практике, т.к. введение даже следовых количеств тромбина в кровоток исключается, в связи с его способностью аутокаталитически ускорять тромбинообразование [А.Ш.Бышевский, 1984, А.Ш.Бышевский и др. 1986; А.Ш.Бышевский, Д.М.Зубаиров и др., 1993;

Д.М.Зубаиров, 1989, 2000; А.С.Шитикова, 2000; Л.П.Папаян, 2003].

Апробация и публикация. Основные положения диссертации доложены на 42й Всероссийской научной конференции «Актуальные проблемы теоретической, экспериментальной, клинической медицины и фармации» (Тюмень, 2008); на III научной международной конференции «Современные проблемы науки и образования» (Москва, 2008); на Российской конференции, посвященной 80-летию со дня рождения Р.И. Лифшица «Актуальные проблемы теоретической и прикладной биохимии» (Челябинск, 2009); на 43-й Всероссийской научной конференции «Актуальные проблемы теоретической, экспериментальной, клинической медицины и фармации» (Тюмень, 2009); на III Международной научно-практической конференции «Адаптация биологических систем к естественным и экстремальным факторам среды» (Челябинск, 2010); на конгрессе «Человек и лекарство. Урал–2010»

(Тюмень, 2010); на 44-й Всероссийской научной конференции «Актуальные проблемы теоретической, экспериментальной, клинической медицины и фармации»

(Тюмень, 2010) на 5-й Всероссийской конференции «Клиническая гемостазиология и гемореология в сердечно-сосудистой хирургии» (Москва, НЦССХ им.

А.Н.Бакулева, Научное общество «Клиническая гемостазиология», 2011); на 45-й Всероссийской научной конференции «Актуальные проблемы теоретической, экспериментальной, клинической медицины и фармации» (Тюмень, 2011); заседании Тюменского регионального отделения РАЕ (2010, 2011), на совместном заседании кафедр биохимии, физиологии и общей гигиены с курсом экологии ТюмГМА (2011).

По материалам диссертации имеется 18 публикаций: 4 из них – в журналах, рекомендованных ВАК для публикаций диссертационных материалов, 3 – в материалах Российских конференций с международным участием и 2 главы в монографии.

Объем и структура работы. Диссертация изложена на 167 страницах машинописного текста, включает «Введение», «Обзор литературы», разделы «Материалы и методы исследований», «Обсуждение полученных данных», «Выводы», «Практические рекомендации» и «Литература» (436 источников, из них 206 зарубежных).

1. Разнообразные по природе и механизму воздействия (введение 2-кратного избытка витаминов А, Е, В5 и В12, введение тироксина, мерказолила, адреналина, тромбопластина, гепарина, смена сезонов) сопровождаются изменением интенсивности непрерывного внутрисосудистого свертывания крови.

2. Сдвигам интенсивности непрерывного внутрисосудистого свертывания крови, вызываемым этими воздействиями, неизменно сопутствуют сдвиги показателей коагулоактивности тромбоцитов, характеризующие их способность к реакции высвобождения, к спонтанной и АДФ-индуцируемой агрегации и общую коагулоактивность.

3. Воздействие факторов, приводящих к ускорению внутрисосудистого свертывания крови, сопровождается увеличением коагулоактивности тромбоцитов, а воздействие факторов, замедляющих внутрисосудистое свертывание крови, протекает со снижением коагулоактивности тромбоцитов.

4. Независимо от вида воздействия (из числа перечисленных в п. 1), его интенсивности и продолжительности постоянно выявляется тесная положительная линейная ассоциация между показателями интенсивности непрерывного внутрисосудистого свертывания крови и показателями коагулоактивности тромбоцитов.

5. Независимо от вида воздействия, его интенсивности и продолжительности связь между показателями коагулоактивности тромбоцитов, а также уровнем маркеров непрерывного внутрисосудистого свертывания крови и толерантностью к тромбину оказывается тесной отрицательной.

6. Результаты определения у животных толерантности к тромбину инвазивным методом (по частоте выживания животных после внутривенного введения тромбина в DL50%) близки к данным, полученным при оценке толерантности к тромбину методом, основанным на оценке степени сдвигов коагулоактивности тромбоцитов или маркеров непрерывного внутрисосудистого свертывания крови.

7. Судить о толерантности к тромбину можно по уровню в кровотоке продуктов взаимодействия тромбин-фибриноген, т.е. маркеров непрерывного внутрисосудистого свертывания крови, или по коагулоактивности тромбоцитов.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы исследования. Опыты проводили на нелинейных белых крысах. Животных содержали до включения в опыт на обычном смешанном рационе вивариума (злаки, овощи), а за неделю до начала эксперимента переводили на рацион вязкой консистенции (смесь ячменной и овсяной круп с добавлением растительного масла). Для обеспечения полного потребления добавок их вносили в 1/2 суточной порции рациона в ранние утренние часы. После потребления этой части рациона (примерно через 1 ч) в клетку вносили его остаток (всего – 100 г/кг массы тела).

Чтобы не допустить погрешностей, связанных с сезоном и метеоусловиями, контрольную группу включали в каждую серию экспериментов, исключая опыты, интервал между которыми не превышал 1-2 недель (в этих случаях использовали общий контроль для двух-трёх серий экспериментов).

Пробы крови брали в шприц из v. jugularis, обнажаемой овальным разрезом у фиксированных крыс (наркоз - диэтиловый эфир). Стабилизатор - 3,8% раствор цитрата натрия. Соблюдались правила, предусмотренные для гемостазиологических исследований [В.П.Балуда и др., 1980; З.С.Баркаган, 1998].

Для оценки состояния гемостаза определяли: 1. Активированное время рекальцификации (АВР) [Г.Н.Детинкина и др. 1984]; 2. Активированное частичное тромбопластиновое время (АЧТВ) [Г.Н.Детинкина и др. 1984]; 3. Содержание продуктов деградации фибрина (ПДФ) определяли в модификации А.Ш.Бышевского и др. [1991]; 4. Содержание РКМФ определяли количественным вариантом фенантролинового теста [А.П.Момот и др., 1999]; 5. Содержание D-димеров определяли методом, основанным на латексной агглютинации с моноклональными антителами к D-димерам. Результат выражали в мкг/мл эквивалентов фибриногена;

6. Концентрацию в плазме осаждаемого тромбином фибриногена определяли спектрофотометрически [А.Ш.Бышевский, В.Мохнатов, 1969]; 7. Количество тромбоцитов определяли в периферической крови [З.С.Баркаган, А.П.Момот, 1998]; 8. Агрегацию тромбоцитов определяли с помощью агрегометра “BIOLA”, индуктор агрегации - АДФ в конечной концентрации 0,01 мг/мл [З.А.Габбасов и др., 1989]; 9. Спонтанную агрегацию определяли по Н.И.Тарасовой [В.П.Балуда и др., 1980]. Концентрацию тромбоцитов в плазме приводили к 250 - 500 тыс. клеток в мкл (диапазон, корректный для работы на агрегометре), разбавляя плазму гомологичной обедненной тромбоцитами; 10. Содержание ф. Р3 в плазме рассчитывали по разнице показателей АВР плазмы до, и после освобождения её от тромбоцитов - Rabiner & Groder в описании [В.П.Балуда и др. 1980]; 11. Содержание ф. Р4 в плазме определяли по действию прогретой и обедненной тромбоцитами плазмы (источник термостабильного ф. Р4) на тромбин-гепариновое время свертывания плазмы (источник фибриногена и антитромбина III). Степень укорочения времени свертывания - мера активности ф. Р4 [В.П.Балуда и др., 1980]; 12. Общую коагулирующую активность тромбоцитов (ОКАТ) определяли по их способности изменять время свертывания при добавлении в плазму, используемую для теста АВР [А.Ш.Бышевский и др., 1996].

Для оценки липидпероксидации (ЛПО) и антиоксидантного потенциала (АОП) определяли: 1) содержание первичных и вторичных липидпероксидов (ДК и ТБК-продуктов соответственно), 2) период индукции, 3) скорость окисления.

Липиды экстрагировали 100-кратным избытком смеси равных объемов гептана и изопропилового спирта. Содержание сопряженных диеновых соединений (диеновых конъюгат - ДК) устанавливали по оптической плотности ( = 232 нм) гептановой фазы. Содержание продуктов ЛПО, реагирующих с тиобарбитуровой кислотой (ТБК) - вторичных липидпероксидов, - определяли в том же экстракте флуорометрически [В.Н.Ушкалова и др., 1987, 1997]. Интенсивность флуоресценции возбуждения устанавливали с помощью флуориметра «Биан 130».

В экстрактах определяли также кинетические величины прямого инициированного окисления липидов молекулярным кислородом в присутствии инициатора свободнорадикального окисления (азобисизобутиронитрил). Период индукции (ПИ) выражали по времени поглощения исследуемой пробой 25 мм3 О2, а скорость окисления (СО) выражали углом наклона линейного участка кинетической кривой [С.Н.Ельдецова, 1990].

Выделяли и отмывали тромбоциты для опытов in vitro и для оценки ЛПО согласно описанию [А.Б.Самаль и др., 1990].

Толерантность к тромбину устанавливали с помощью запатентованного [А.Ш.Бышевский и соавт., 2003] и апробированного [М.К.Умутбаева, 2005;

Р.Г.Алборов, 2006; Н.Н.Зороастрова, 2006; С.В.Миневцев, 2006; С.В.Шидин, 2007; Е.С.Забара, 2009; Е.М.Шаповалова, 2010; О.К.Щепетева, 2011] способа.

Для расчета использовали предложенную авторами формулу:

где D – остаточная концентрация фибриногена, %; Ск – концентрация ФГ у крыс, которым тромбин не вводили и каким-либо воздействиям не подвергали (исходный уровень, %); Со – концентрация ФГ, % у крыс, которым ввели тромбин на фоне изучающегося воздействия.

Остаточную концентрацию у крыс, которым тромбин ввели без предварительных воздействий, принимали за 100-процентную толерантность к тромбину, и устанавливали её (в %) при изучавшемся воздействии по формуле:

где X – ТкТР (%), Do – остаточная концентрация фибриногена (%) у крыс, подвергавшихся воздействию, Dк - остаточная концентрация фибриногена (%) у крыс, не подвергавшихся изучаемому воздействию (контрольная группа).

Анализ результатов проводили с помощью медико-биологической программы Biostat 4.03 [С.А.Гланц, 1998], используя вариационную статистику для малых рядов наблюдений: вычисляли среднюю арифметическую (М), среднюю ошибку средней арифметической (m) и среднеквадратическое отклонение (). Для оценки достоверности отличий вычисляли доверительный коэффициент Стъюдента (t) и степень вероятности (р). Сопоставляя интенсивные показатели, использовали альтернативное варьирование, рассчитывая те же показатели. Связи переменных анализировали методом ранговой корреляции Спирмена. Различия рассматривали как достоверные при значениях степени вероятности 0.05.

Графический анализ проводили в системе Microsoft Graf (приложение MS Word 2003), корректность аппроксимационных графиков, оценивали по величине коэффициентов аппроксимации (R2).

В работе использовали: тромбин и фибриноген бычьей крови («Технологиястандарт»), тромбопластин (кадаверный лиофильно высушенный, «Технологиястандарт»), каолин (легкая фракция фирмы «Технология-стандарт»), набор «Ddimer test» («Roche»), изопропанол ч. (дополнительная очистка простой перегонкой), хлорбензол ч. (дополнительная очистка простой перегонкой); бутанол х. ч., хлорид кальция х.ч., буфер Михаэлиса («Технология-стандарт»), цианокобаламин в ампулах по 1 мл – 200 мкг/мл (ЗАО «Уфавит»), ретинола ацетат в ампулах (Sigma), токоферола ацетат в капсулах (Slovakofarma J.S.C.), никотиновая кислота (ЗАО «Уфавит»); тетрайодтиронин (L-тироксин-Na, «Berlin-Chemi»).

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

Планируя эксперименты, мы сопоставляли уровни маркеров НВСК, коагулоактивность тромбоцитов и ТкТР при разнообразных по природе, силе и длительности воздействиях, объединенных лишь тем, что они приводят к развитию гипоили гиперкоагулемии.

В первую очередь как воздействие, модифицирующее гемостаз [А.И.Бродер, 2002; П.Я.Шаповалов и др., 2002; И.А.Аптекарь, 2003; А.Ш.Бышевский и др., 2003; С.Л.Галян и др., 2003; Е.М.Шаповалова, 2010; О.К.Щепетева, 2011], мы использовали витамины-антиоксиданты и синтетический антиоксидант димефосфон.

Оказалось, что все четыре витамина изменяют коагулоактивность тромбоцитов и плазменный уровень маркеров НВСК в разной мере, но в одном направлении – снижают все без исключения определявшиеся величины. ТкТР, напротив, во всех наблюдениях повышается (рис. 1).

Рис. 1. Степень изменения (в % от контроля) коагулоактивности тромбоцитов, уровня маркеров НВСК и ТкТР при введении ретинола, токоферола, кобаламина, ниацина (в дозах, превышающих потребность в 2 раза), или димефосфона Сходные сдвиги вызывает и димефосфон – соединение с антиоксидантной активностью. Так было получено первое свидетельство существования отрицательной ассоциации между коагулоактивностью тромбоцитов и скоростью НВСК с одной стороны, и ТкТР - с другой. Димефосфон проявляет аналогичный эффект – признак того, что интенсивность ЛПО – фактор, определяющий состояние гемостаза.

На рис. 2 представлен эффект мерказолила, введение которого ведет к торможению ЛПО из-за снижения в крови уровня тиреогормонов. На том же рисунке представлен эффект этинилэстрадиола – фактора, ускоряющего ЛПО [В.А.Полякова и др., 1999; А.И. Бродер, 2002; П.Я Шаповалов и др., 2003]. Здесь видно, что введение мерказолила, снижающего коагулоактивность тромбоцитов (уменьшены все тесты коагулоактивности), сопровождается замедлением НВСК и значительным ростом ТкТР. Видно также и то, что и этинилэстрадиол вызывает противоположно направленные сдвиги коагулоактивности тромбоцитов, скорости НВСК, и величины ТкТР - показатели коагулоактивности тромбоцитов и уровень маркеров НВСК растут, а ТкТР снижается.

Рис. 2. Степень отклонения (на 15-й день, в % от контроля) коагулоактивности тромбоцитов, уровня маркеров НВСК и ТкТР при введении мерказолила (12 мг/кг ежедневно) или этинилэстрадиола (6.0 мкг/кг ежедневно) Следовательно, при введении мерказолила или этинилэстрадиола, как и при введении витаминов-антиоксидантов, также выявилась отрицательная ассоциация между НВСК и ТкТР – рост коагулоактивности тромбоцитов и ускорение НВСК сопровождалось снижением ТкТР (этинилэстрадиол), а спад коагулоактивности тромбоцитов и замедление НВСК (мерказолил), напротив, сопровождались повышением ТкТР.

Видимо, отрицательная ассоциация между НВСК и ТкТР сопровождает и гипо-, и гиперкоагулемические сдвиги. Значимо и то, что в этом эксперименте выявлена та же ассоциативная связь при воздействиях регуляторных соединений значительно отличающихся от витаминов по характеру влияния на метаболические процессы.

В следующих опытах крысам вводили те же витамины в прежних дозах, но в течение восьми недель (вместо двух), контролируя через 2, 4 и 8 недель активность тромбоцитов, уровень маркеров НВСК и ТкТР. Оценивать ЛПО в этом случае не было необходимости, т.к. известно, что с увеличением длительности введения антиоксидантов их влияние на ЛПО и АОП в тромбоцитах усугубляются пропорционально длительности введения [С.Л.Галян и. др., 2003; А.Ш.Бышевский и др., 2003, 2009; Р.Г.Алборов и др., 2005; П.Я.Шаповалов и др., 2005]. Не было необходимости и в оценке всей совокупности показателей коагулоактивности тромбоцитов, так как все они изменялись однонаправлено и в примерно равной степени с показателем общей коагулоактивности - ОКАТ.

На рис. 3 (рис. 3А - ретинол, 3Б - токоферол, 3В - кобаламин и 3Г - ниацин) представлена динамика сдвигов ОКАТ, уровня маркеров НВСК и ТкТР в зависимости от продолжительности введения витаминов. Эффекты витаминов выражены в виде степени отклонения измеряемых переменных в процентах от их контрольных значений (т.е. в виде интенсивных величин). Рис. 3Г содержит легенду, общую для рис. 3А, 3Б и 3В. В верхней части рисунков располагаются значения коэффициентов аппроксимации трендов (R2). Чтобы не усложнять рисунки надписями, приводим общую для всех графиков последовательность значений R2 слева направо: ОКАТ, ПДФ, РКМФ, D-димеров и ТкТР.

ОКАТ ПДФ РКМФ

Рис. 3. Влияние ретинола (3А), токоферола (3Б), кобаламина (3В) и ниацина (3Г) на ОКАТ, уровень маркеров НВСК (ПДФ, РКМФ, D-димеров) и на ТкТР при длительном их введении (доза каждого витамина в 2 раза выше потребности в нём).

Обозначения в легенде рис. 3А относятся также к рис. 3Б, 3В и 3Г.

В первую очередь отметим, что степень снижения показателя общей коагулоактивности тромбоцитов (ОКАТ) становится более выраженной с увеличением длительности введения каждого из витаминов. Эффект нарастает линейно – коэффициенты аппроксимации (R2) трендов, интерполирующих зависимость эффекта от длительности введения ретинола, токоферола и кобаламина весьма близки к единице: 0,91, 0,99, 0,96. Исключение составляет величина R2 для ниацина - она равна 0,75. Это связано с относительно малым и медленнее развивающимся его влиянием (в сравнении с другими витаминами) на величину ОКАТ.

С увеличением длительности опытов столь же закономерно снижался уровень каждого из оцениваемых маркеров НВСК. Коэффициенты аппроксимации (R2) трендов, характеризующих сдвиги уровня ПДФ также предельно близки к единице (1,0, 0,99, 0,97 и 0,84 для ретинола, токоферола, кобаламина и ниацина соответственно).

Сходны для всех исследованных нами витаминов и линейные тренды, характеризующие спад уровня РКМФ - величины R2 равны 0,99, 0,75, 0,81 и 0,98 соответственно для ретинола, токоферола, кобаламина и ниацина. Близки и характеристики трендов, отражающих динамику снижения плазменного уровня D-димеров, - 0,90, 0,99, 0,75 и 0,75 соответственно для ретинола, токоферола, кобаламина и ниацина.

Это позволяет допустить, что оценивать изменения интенсивности НВСК не обязательно путем определения всей совокупности маркеров взаимодействия тромбинфибриноген, т.к. динамика их снижения при длительном воздействии, сопровождающемся развитием гипокоагулемии, сходна (можно сказать идентична).

ТкТР повышалась линейно с увеличением длительности опытов (для каждого из исследуемых витаминов). Об этом свидетельствует величина коэффициентов R линейных трендов, характеризующих динамику эффектов ретинола, токоферола, кобаламина и ниацина - они равны 0,99, 0,96, 0,96 и 0,98 соответственно.

Для подтверждения наличия корреляции и степени ее выраженности, мы ориентировались на коэффициенты ранговой корреляции (rs).

При введении ретинола обнаружилась тесная положительная связь между сдвигами ОКАТ и уровнем ПДФ (rs = 0,8), сдвигами ОКАТ и уровнем РКМФ (rs = 0,9), сдвигами ОКАТ и уровня D-димеров (rs = 0,8).

При сопоставление динамики сдвигов, вызываемых ретинолом в парах ПДФРКМФ, ПДФ-D-димеры и РКМФ-D-димеры также выявлены четкие указания на тесную положительную связь (rs = 0,8, 0,8, 0,9 соответственно).

При анализе динамики сдвигов, вызываемых ретинолом в парах ПДФ-ТкТР, РКМФ-ТкТР и D-димеры-ТкТР выявилась тесная отрицательная связь (rs = -0.9, и -0,8 соответственно).

Значения rs, вычисленные при сопоставлении динамики тех же пар показателей в опытах с токоферолом или кобаламином практически не отличались от приведенных выше. Несколько ниже была теснота всех положительных и отрицательных ассоциаций при введении ниацина, ниже были и все его другие исследовавшиеся эффекты.

Результаты эксперимента позволяют с бльшей уверенностью утверждать наличие тесной положительной связи между сдвигами общей коагулоактивности тромбоцитов (ОКАТ) и уровнем каждого из определявшихся маркеров НВСК. Несомненно, и существование такой же связи между изменениями уровня отдельных маркеров НВСК (ПДФ, РКМФ и D-димеров), а также тесной отрицательной связи между динамикой каждого из маркеров НВСК с динамикой толерантности к тромбину.

Таким образом, при введении витаминов-антиоксидантов отрицательная ассоциация между НВСК и ТкТР сохраняется при разной длительности воздействия.

Оказалось также, что сдвиги коагулоактивности, будучи тесно положительно ассоциированы со сдвигами уровня маркеров НВСК, отрицательно ассоциируют со сдвигами ТкТР. Таким образом, оценка ОКАТ может служить ещё одним тестом для суждения о состоянии ТкТР, особенно в комбинации с маркерами НВСК.

Далее изучали эффекты тироксина, выбрав такие дозы, которые вызывают медленно прогрессирующую гиперкоагулемию. Данные рис. 4 свидетельствует, что ОКАТ растет с увеличением продолжительности введения наименьшей из доз тироксина. Растет также уровень всех определявшихся маркеров НВСК (ПДФ, РКМФ и D-димеров), а ТкТР при этом снижается.

Динамика всех оцениваемых сдвигов предельно близка к линейной – R2 для всех маркеров близки к единице, что указывает на линейную зависимость эффекта тироксина от длительности его введения в использованной дозе.

Существенно с позиций цели работы то, что здесь, как и в предыдущих опытах, между ОКАТ и уровнем маркеров НВСК (с одной стороны) и ТкТР (с другой) выявлена отрицательная ассоциация. Таким образом, и при воздействии, ведущем к гиперкоагулемии (введение тироксина), сохраняется тот же тип зависимости (отрицательная ассоциация) между динамикой сдвигов ТкТР и динамикой сдвигов уровня маркеров НВСК (при минимальной дозе тироксина), который находили на фоне гипокоагулемии (при введении витаминов-антиоксидантов и димефосфона). При оценке ранговой корреляции подтвердилась и высокая теснота связи - rs = -0,9.

Все сказанное относится и к сдвигам, вызванным более высокими дозами тироксина (1,3, 1,6 и 1,9 мг/кг) - при введении каждой них найден линейный прирост коагулоактивности тромбоцитов, уровня маркеров НВСК и снижения ТкТР (соответствующие графики мы не приводим из-за ограниченности листажа в автореферате).

- - Рис. 4. Отклонения (в % от контроля) уровня маркеров НВСК и ТкТР в зависимости от длительности введения тироксина в дозе 1,0 мг/кг.

Следовательно, как при инициации гипокоагулемии, так и при инициации гиперкоагулемии существует тесная отрицательная зависимость между сдвигами интенсивности НВСК и ТкТР, которая сохраняется при разной продолжительности наблюдений и при изменении силы воздействия (т.е. изменении дозы). Это ещё одно свидетельство существования отрицательной ассоциации между интенсивностью НВСК и толерантностью к тромбину.

Приняв во внимание то, что состояние гемостаза в разные времена года неодинаково [Ю.И.Гурфинкель и др., 2005], мы рассмотрели сдвиги изучаемых нами показателей в разные сезоны (весна, лето, осень и зима) (рис.5).

На рис. 5 видно, что ход тренда, характеризующего ТкТР прямо противоположен по направлению трендам, характеризующим сдвиги уровня маркеров НВСК.

В связи с этим можно настаивать на том, что и в сезонном разрезе выявляется отрицательная связь между НВСК и ТкТР.

Затем мы изучили влияние на коагулоактивность тромбоцитов, НВСК, ТкТР и других воздействий, ускоряющих эндогенный тромбиногенез, используя с этой целью введение тромбопластина в дозе, не вызывающей гибели животных.

ОКАТ ПДФ

- Рис. 5. Отклонения (в %) ОКАТ, уровня ПДФ, РКМФ, D-димеров и ТкТР летом, осенью и зимой от значений, найденных весной и принимаемых за равные 100% Через 0,5 ч после введения взвеси тромбопластина заметно возросли значения всех показателей уровня маркеров НВСК (рис.6). Увеличился и интегральный показатель коагулоактивности тромбоцитов, в то время как ТкТР снизилась.

ОКАТ ПДФ РКМФ

Рис. 6. Динамика общей коагулоактивности тромбоцитов, уровня маркеров НВСК и ТкТР (отклонения в % от контроля) после введения тромбопластина Таким образом, и при гипокоагулемии потребления, которая была вызвана введением тромбопластина, выявлена отрицательная ассоциация между коагулоактивностью тромбоцитов, уровнем маркеров НВСК с одной стороны и ТкТР - с другой.

Далее мы провоцировали эндогенную гипертромбинемию инъекциями адреналина - 30 мкг/кг. Эта доза не ускоряет потребление фибриногена, т.е. провоцирует компенсированную гиперкоагулемию, длящуюся более получаса.

Выявилось (рис. 7), что сдвиги ОКАТ, ПДФ, РКМФ и D-димеров противонаправлены сдвигам ТкТР - признак отрицательной связи.

ОКАТ ПДФ РКМФ

- - - Рис. 7. Динамика ОКАТ, уровня маркеров НВСК и ТкТР (отклонения в % от контроля через 20 и 30 мин после инъекции адреналина) Исследуя изменения всех тех же показателей под влиянием гепарина, предварительно мы нашли те его дозы (1, 4 и 8 мг/кг), которые при внутримышечном введении вызывают различающуюся по степени гипокоагулемию, и изучили их эффекты.

На рис. 8 видно, что, как и в случае с введением животным соединений, вызывающих гиперкоагулемию (адреналина, тироксина), здесь наблюдаются линейные сдвиги всех оцениваемых показателей.

ОКАТ ПДФ РКМФ

Рис. 8. Изменения ОКАТ, плазменного уровня маркеров НВСК и ТкТР (отклонения в % от контроля через 1 ч после инъекции разных доз гепарина); значения R2 расположены в поле диаграммы в последовательности, обозначенной в легенде Обнаруживается и отрицательная ассоциация между сдвигами ОКАТ и сдвигами уровня каждого из маркеров НВСК в отдельности (с одной стороны), и толерантностью к тромбину – с другой.

Можно констатировать, что в результате введения прямого антикоагулянта, как и в других экспериментальных ситуациях, сопровождающихся гипо- или гиперкоагулемией, выявляется отрицательная связь между НВСК и ТкТР.

Это подкрепляет предположение о возможности контролировать ТкТР путем оценки уровня маркеров ВТФ, являющихся одновременно маркерами НВСК.

Таким образом, все рассмотренные выше данные указывают на отрицательную корреляцию между коагулоактивностью тромбоцитов и ТкТР, а также между уровнем маркеров НВСК и ТкТР. В связи с этим возникла необходимость выяснить, какие из указанных сдвигов – изменение ОКАТ или изменение интенсивности НВСК - инициируют сдвиги толерантности к тромбину.

Пытаясь ответить на этот вопрос, мы изучили, отбирая пробы крови с малыми интервалами после введения гепарина (через 20, 30, 40, 50 и 60 мин) динамику сдвигов коагулоактивности тромбоцитов и уровня маркеров НВСК, контролируя одновременно и ТкТР. Все результаты подвергли графическому анализу. На рис. 9 и рис. видно, что чем дольше длится наблюдение, тем заметнее становятся сдвиги всех оцениваемых показателей, и то, что зависимость степени сдвигов от времени наблюдений носит линейный характер (величины R2 трендов на обоих рисунках близки к единице). Видна и отрицательная зависимость между каждым из тестов, отражающих ОКАТ или уровень маркеров НВСК и толерантностью к тромбину.

Рис. 9. Изменения коагулоактивности тромбоцитов и ТкТР (отклонения в % от контроля в разные сроки после инъекции гепарина - 8 мг/кг). Значения R2 расположены в поле диаграммы в той же последовательности, что и в легенде слева направо.

Итак, (рис. 9), через 20 мин после введения гепарина коагулоактивность тромбоцитов уже снизилась (ниже контроля оказались уровни фф. Р3 и Р4, ОКАТ), как и их способность к агрегации (и спонтанная и АДФ-агрегация, р 0.05). Тогда же (рис.

10) уровень ПДФ и РКМФ был равен контрольному, а уровень D-димеров обнаруживал лишь слабо выраженную тенденцию к снижению (на 5% при р 0,05).

Рис. 10. Сдвиги уровня маркеров НВСК и ТкТР (отклонения в % от контроля в разные сроки после инъекции гепарина – 8 мг/кг); Значения R2 расположены в поле диаграммы в той же последовательности, что и в легенде слева направо.

Через 30 мин после введения гепарина коагулоактивность тромбоцитов (по всем показателям) уже отличалась не только от контрольных величин, но и от величин, найденных на 20-й минуте. Уровень ПДФ обнаружил к этому моменту лишь тенденцию к снижению, уровень РКМФ не изменился, а уровень D-димеров упал, но в меньшей мере, чем показатели коагулоактивности тромбоцитов. И только через 40 минут после введения гепарина, когда показатели коагулоактивности тромбоцитов были уже заметно ниже, чем на 20-й и 30-й минутах, уровни всех маркеров НВСК снизились достоверно. По всей видимости, вначале на введение антикоагулянта реагируют тромбоциты, несколько позднее изменяется и степень тромбинемии, от которой и зависит интенсивность НВСК. Как и в других экспериментах, здесь (рис. 9 и 10) видно, что со снижением коагулоактивности тромбоцитов и, соответственно, снижением уровня маркеров НВСК растет ТкТР. Кроме этого здесь видно, что в отсутствии сдвигов со стороны тромбоцитов и НВСК отсутствуют и изменения ТкТР.

Кроме того, выявлено (соответствующие данные приведены в диссертации), что в ответ на введение соединений, вызывающих гиперкоагулемию (адреналина и тироксина) в более ранние сроки наблюдается рост коагулоактивности тромбоцитов, позднее - рост уровня маркеров НВСК и лишь затем снижение ТкТР. Следовательно, схематически последовательность наблюдаемых изменений можно представить следующим образом: введение антикоагулянта или прокоагулянта снижение (соответственно рост) коагулоактивности тромбоцитов замедление (соответственно ускорение) НВСК повышение (соответственно снижение) толерантности к тромбину.

И это позволило согласиться с предположением об инициирующей роли тромбоцитов в развитии гиперкоагулемии [А.Ш.Бышевский и др., 1998, 2006, 2010, 2011;

С.Л.Галян, 1997, 2003; Р.Г.Алборов, 2006; В.Г.Соловьев, 1997; В.В. Юдин, 2002].

Завершая опыты, мы прибегли к определению ТкТР по частоте выживания животных при внутривенном введении тромбина в DL50%, определяя толерантность одновременно и способом, основанном на определении остаточного количества фибриногена после введения более слабого раствора тромбина: 1 группа – контрольная (крысы получали полноценный рацион 10 недель), 2 группа – крысы получали тироксин (1,3 мг/кг ежедневно) в течение 10 недель с тем же рационом, 3.

крыс содержали на полноценном рационе 10 недель, гепарин ввели внутримышечно (8 мг/кг) в последний день 10-й недели. У всех крыс определяли в один и тот же день активность тромбоцитов и уровень маркеров НВСК (5 особей) и ТкТР (5 особей), а на 20 особях из каждой группы - частоту выживания (за 24 ч) после внутривенного введения тромбина (1 мл/кг, активность - 21 с). Сдвиги после введения тироксина или гепарина совпали с представленными на рисунках, иллюстрирующих эффекты этих соединений (рис. 4 и 8). Частота выживания на фоне тироксина после введения DL50% тромбина (т.е. ТкТР, определяемая этим приемом) упала против контроля на 36%, при введении нетоксичной дозы тромбина ТкТР упала на 34% (р 0,075). На фоне гепарина разница между результатами, полученными первым и вторым приёмом, существенна - в первом случае ТкТР повышена на 81%, во втором - на 39%. Расхождение объяснить так: первый приём оценивает толерантность к тромбину через 1 ч после внутривенного введения (по степени потребления плазменного фибриногена), второй приём выражает толерантность к тромбину через процент выживших за 24 ч животных. Здесь на результате сказывается не только способность организма ограничивать взаимодействие между тромбином и фибриногеном (за счет изменения скорости потребления субстрата), но и способностью организма противодействовать негативному эффекту, обусловленному успевающими развиться нарушениями микроциркуляции. Иначе говоря, направленность изменений ТкТР, определяемой обоими способами, одинакова - при повышении уровня маркеров НВСК, толерантность к тромбину снизилась при её оценке обоими приемами, а при снижении уровня маркеров, толерантность повысилась также в обоих случаях.

Этим ещё раз подтвердилось наличие отрицательной ассоциации между сдвигами интенсивности НВСК и ТкТР при разных экспериментальных ситуациях.

Заключая обсуждение, выделим наиболее важные моменты.

Разнообразие экспериментальных ситуаций, в которых разнонаправлено изменяется степень коагулоактивности тромбоцитов и уровень маркеров НВСК свидетельствует о наличии отрицательной связи между коагулоактивностью тромбоцитов или НВСК с одной стороны и ТкТР – с другой.

Последовательность развития этих изменений во времени укладывается в выше представленную схему, а оценка взаимосвязей между изучавшимися переменными, позволяет рассматривать эту отрицательную связь как достаточно тесную.

Итак, существует возможность судить о ТкТР путем оценки коагулоактивности тромбоцитов или уровня маркеров НВСК. При повышении коагулоактивности тромбоцитов или уровня маркеров НВСК при разных воздействиях, толерантность к тромбину снижается, а при снижении коагулоактивности тромбоцитов или уровня маркеров НВСК, толерантность к тромбину растет. Это позволяет надеяться, что способность организма адекватно реагировать на воздействия, повышающие тромбинемию (следовательно, повышающие коагулоактивность тромбоцитов и ускоряющие НВСК), можно оценивать по уровню коагулоактивности тромбоцитов и (или) по плазменному уровню маркеров взаимодействия тромбинфибриноген.

ВЫВОДЫ

1. Разнообразные по природе воздействия (2-кратный избыток витаминов А, Е, В5 и В12, введение тироксина, мерказолила, адреналина, тромбопластина, гепарина, смена сезонов) на организм экспериментальных животных, содержащихся на сбалансированном по калорийности, микро- и макронутриентам рационе, сопровождаются изменением интенсивности НВСК.

2. Сдвигам интенсивности НВСК, вызываемым этими воздействиями, сопутствуют сдвиги доступных определению в неспециализированной клинической лаборатории показателей коагулоактивности тромбоцитов (их способность к реакции высвобождения, к спонтанной и АДФ-индуцируемой агрегации и их общей коагулоактивности).

3. При воздействиях, перечисленных в выводе 1, интенсификация внутрисосудистого свертывания крови сопровождается увеличением коагулоактивности тромбоцитов, а при воздействиях, замедляющих внутрисосудистое свертывание крови, коагулоактивность тромбоцитов снижается.

4. Независимо от вида перечисленных воздействий, их интенсивности и продолжительности во всех случаях выявляется тесная положительная линейная ассоциация между показателями интенсивности непрерывного внутрисосудистого свертывания крови и показателями коагулоактивности тромбоцитов (величины rs колеблются от 0,8 до 1.0, а R2 от 0,99 до 0,82).

5. Независимо от вида, интенсивности и продолжительности воздействия, связь между показателями коагулоактивности тромбоцитов, а также уровнем маркеров непрерывного внутрисосудистого свертывания крови и толерантностью к тромбину является тесной отрицательной (rs колеблются от 0,7 до 0.9).

6. Результаты определения сдвигов коагулоактивности тромбоцитов и интенсивности непрерывного внутрисосудистого свертывания, а также толерантности к тромбину инвазивным методом (по частоте выживания животных после внутривенного введения тромбина) близки у животных к данным, полученным при оценке толерантности к тромбину неинвазивным методом, т.е. по степени сдвигов коагулоактивности тромбоцитов или маркеров НВСК.

7. Судить о толерантности обследуемого к тромбину можно по уровню в кровотоке продуктов взаимодействия тромбин-фибриноген, являющихся маркерами непрерывного внутрисосудистого свертывания крови, или по коагулоактивности тромбоцитов.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Целесообразно контролировать толерантность к тромбину, определяя способность тромбоцитов к высвобождению (определение уровня в плазме крови факторов Р3 и Р4), спонтанную, АДФ-индуцированную агрегацию, общую коагулоактивность тромбоцитов и плазменный уровень продуктов коагуляционного превращения фибриногена (ПДФ, РКМФ, D-димеры).

2. В отсутствие условий для выполнения всех перечисленных выше определений, можно ограничиваться оценкой общей коагуляционной активности тромбоцитов - метод, который требует минимум оборудования (лабораторная центрифуга для получения тромбоцитов, термостатированная водяная баня, микропипетка с делениями в 0,1 мл и подсветка). Необходимо также располагать собственными данными о величине определяющихся показателей у здоровых доноров. Желательно по этим данным строить калибровочную кривую зависимости показателей от степени разведения плазмы донора - в этом случае, принимая среднее значение у здоровых доноров за 100%, можно найденную у пациента величину выражать в процентах относительно нормы.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ РАБОТ

1.*Бышевский А.Ш. Маркеры взаимодействия тромбин-фибриноген, коагулоактивность тромбоцитов, фибринолиз, толерантность к тромбину и состояние ЛПО при содержании крыс на сбалансированном рационе без витамина В5 и с его избытком/ А.Ш.Бышевский, С.Л.Галян, М.Г.Галушко, и др. // Медицинская наука и образование Урала. - 2008. – 4. - С.32-35.

2.Бышевский А.Ш. Гемостаз при неразвивающейся беременности, влияние антиоксиданта селмевита/А.Ш.Бышевский, В.А.Полякова, М.Г.Галушко и др.//Успехи современного естествознания. – 2008. – 5. – С.67.

3.Byshevsky A.Sh. Antioxidant complex selmevit in hemostasis correction at some uterine surgeries (report III) / A.Sh. Byshevsky, S.L. Galyan, M.G. Galushko e.a. // European journal of natural history. – 2008. -3. - P.10-15.

4.Галушко М.Г. О связи витамина В12 с гипергомоцистеинемией и гемостазом (обзор литературы) // Материалы 42-й Всероссийской научной конференции «Актуальные проблемы теоретической, экспериментальной, клинической медицины и фармации». – Тюмень. – 2008.- С.27.

5.Галушко М.Г. Гемостаз и липопероксидация при гипертиреозе и тиреотоксикозе // Материалы 43-й Всероссийской научной конференции «Актуальные проблемы теоретической, экспериментальной, клинической медицины и фармации». Тюмень. - 2009. С.27.

6.*Алборов Р.Г. Маркеры непрерывного внутрисосудистого свертывания крови и толерантность к тромбину при гипертромбинемии / Р.Г.Алборов, Л.А.Васильев, М.Г.Галушко и др.// Медицинская наука и образование Урала. – 2009. – 2. - С. 49-51.

7.*Галушко М.Г. Гемостаз при гипертиреозе и тиреотоксикозе/ М.Г.Галушко, Р.Г.Алборов, Л.А.Васильев и др. // Медицинская наука и образование Урала. – 2009.С.147-149.

8.Бышевский А.Ш. Непрерывное внутрисосудистое свертывание крови и липидпероксидация в тромбоцитах/ А.Ш.Бышевский, Л.А.Васильев, С.Л.Галян, М.Г.Галушко и др. // Материалы всероссийской научной конференции «Актуальные проблемы теоретической и прикладной биохимии». Челябинск - 2009. - С.16-19.

9.Byshevsky A.Sh. Antioxidant complex selmevit in hemostasis correction at some uterine surgeries/ A.Sh.Byshevsky, S.L.Galyan, M.G.Galushko e.a. // Фундаментальные исследования. – 2009. – 3. – С.7- 10.Бышевский А.Ш. Связаны ли изменения липидпероксидации в тромбоцитах со скоростью самосборки фибрина/ А.Ш.Бышевский, М.Г.Галушко, А.Ю.Рудзевич и др.

// Тромбоз, гемостаз и реология – 2010. - 1(41). – С. 52-59.

11.Винокурова Е.А. Гемостаз и липидпероксидация при беременности (обзор литературы) / Е.А.Винокурова, М.Г.Галушко// Материалы 44-й Всероссийской научной конференции «Актуальные проблемы теоретической, экспериментальной, клинической медицины и фармации». Тюмень. - 2010. - С. 19-20.

12.Галушко М.Г. Влияние эстрогенов и гестагенов на гемостаз в эксперименте / М.Г.Галушко, И.А.Карпова // Материалы 44-й Всероссийской научной конференции «Актуальные проблемы теоретической, экспериментальной, клинической медицины и фармации». Тюмень. - 2010. – С. 34-35.

13.Полякова В.А. Изменения системы гемостаза и липидпероксидации при внутриматочном использовании левоноргестрела / В.А.Полякова, А.Ш.Бышевский … М.Г.

Галушко и др. // Материалы Российского национального конгресса «Человек и лекарство. Урал–2010». Тюмень. – 2010 - С. 123-123.

14.Бышевский А.Ш. Гемостаз, перекисное окисление липидов и витамины / А.Ш.Бышевский, С.Л.Галян, М.Г.Галушко и др. // Материалы III Международной научно-практической конференции «Адаптация биологических систем к естественным и экстремальным факторам среды» Челябинск. – 2010. С.40-43.

15.Бышевский А.Ш. Толерантность организма к тромбину, коагулоактивность тромбоцитов и уровень маркеров непрерывного внутрисосудистого свертывания крови /А.Ш.Бышевский, С.Л.Галян, М.Г.Галушко и др. //Материалы 5-й Всероссийской конф. (с международным участием) «Клиническая гемостазиология и гемореология в сердечно-сосудистой хирургии» М.: Министерство здравоохранения и социального развития РФ. Научный центр сердечно-сосудистой хирургии им. А.Н.Бакулева, Научное общество «Клиническая гемостазиология». – 2011. С.84- 16.Галушко М.Г. Влияние витаминов-антиоксидантов на непрерывное внутрисосудистое свертывание крови, коагулоактивность тромбоцитов и толерантность к тромбину / М.Г.Галушко, С.Л.Галян // Там же. – С. 122- 17.Галушко М.Г. Влияние витаминов-антиоксидантов на непрерывное внутрисосудистое свертывание крови, коагулоактивность тромбоцитов и толерантность к тромбину/М.Г.Галушко// Материалы 45-й Всероссийской научной конференции «Актуальные проблемы теоретической, экспериментальной, клинической медицины и фармации». – Тюмень. - 2011. – С.29.

18.*Полякова В.А. Изменения гемостаза у женщин на фоне гормональной контрацепции в зависимости от состава, пути и длительности введения / В.А.Полякова, А.Ш.Бышевский, … М.Г.Галушко // Медицинская наука и образование Урала. С.18-22.

19. Витамины А, Е, С, В5 и В12, гемостаз и перекисное окисление липидов / Е.М.Шаповалова, Л.А.Васильев, М.Г.Галушко и др. // Глава в монографии «Влияние важнейших витаминов-антиоксидантов на непрерывное внутрисосудистое свертывание и толерантность к тромбину». Москва: Медицинская книга. – 2009. – 112 с. – С. 14-46.

20. Интегральные показатели состояния гемостаза в зависимости от обеспеченности организма витаминами-антиоксидантами /М.Г.Галушко и др.// Глава в монографии «Влияние важнейших витаминов-антиоксидантов на непрерывное внутрисосудистое свертывание и толерантность к тромбину». Москва: Медицинская книга. – 2009. – с. – С. 46-79.

активированное время рекальцификации АВР аденозиндифосфорная кислота (аденозиндифосфат) АДФ антиоксидантный потенциал АОП активированное частичное тромбопластиновое время АЧТВ взаимодействие тромбин-фибриноген ВТФ липидпероксидация (перекисное окисление липидов) ЛПО непрерывное внутрисосудистое свертывание крови НВСК общая коагулирующая активность тромбоцитов ОКАТ продукты деградации фибрина ПДФ растворимые комплексы мономерного фибрина РКМФ скорость индуцированного окисления вещества, взаимодействующие с тиобарбитуровой кислотой ТБК ТкТР Ф. (фф.) средняя летальная доза вещества, вызывающая гибель половины DL50% особей испытуемой группы животных

ГАЛУШКО

МАКСИМ ГЕННАДЬЕВИЧ

ОЦЕНКА ТОЛЕРАНТНОСТИ ОРГАНИЗМА К ТРОМБИНУ

ПО КОАГУЛОАКТИВНОСТИ ТРОМБОЦИТОВ И

УРОВНЮ МАРКЕРОВ НЕПРЕРЫВНОГО ВНУТРИСОСУДИСТОГО

СВЕРТЫВАНИЯ КРОВИ

диссертации на соискание ученой степени Типография ООО «Печатник», лицензия ПД № 17- Тел. (3452) 20-51-13, тел./факс (3452) 32-13-

 
Похожие работы:

«ДУХОВЛИНОВА Елена Николаевна ИЗУЧЕНИЕ РАЗНООБРАЗИЯ ГЕНА env ШТАММОВ ВИЧ-1, ЦИРКУЛИРУЮЩИХ В ГРУППАХ РИСКА В САНКТПЕТЕРБУРГЕ 03.01.04 – Биохимия 03.01.03 – Молекулярная биология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Санкт-Петербург 2010 Работа выполнена в лаборатории негосударственного научноисследовательского учреждения Биомедицинский центр, Санкт-Петербург. Научный руководитель - доктор...»

«Ягудин Тимур Анверович Гуманизация антител против возбудителей чумы и бешенства Специальность 03.01.04 – Биохимия Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Москва 2010 г Работа выполнена в лаборатории молекулярной биологии ГосНИИГенетика и в лаборатории оптимизации экспрессии генов Института биохимии им. А.Н. Баха РАН. Научный руководитель : кандидат биологических наук С.В. Беневоленский Официальные оппоненты : доктор биологических наук,...»

«УДК 597.553.2:597-114.78 ПАВЛОВ Ефим Димитриевич Состояние половых желёз лососевых рыб в условиях интродукции Специальность 03.02.06 – ихтиология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учёной степени кандидата биологических наук Москва - 2011 г. Работа выполнена во Всероссийском научно-исследовательском институте рыбного хозяйства и океанографии (ФГУП ВНИРО). Научный руководитель : профессор, доктор биологических наук Микодина Екатерина Викторовна Официальные доктор...»

«Халилова Айгуль Фидаилевна ОСНОВНЫЕ ФАКТОРЫ И МЕХАНИЗМЫ ФИТОТОКСИЧНОСТИ ТОПЛИВНЫХ УГЛЕВОДОРОДОВ И УСЛОВИЯ ЕЕ СНИЖЕНИЯ 03.02.08 - Экология Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Казань – 2012 2 Работа выполнена в научно-исследовательском отделе Химии окружающей среды Химического Института ФГАОУВПО Казанского (Приволжского) федерального университета Научный руководитель доктор биологических наук, (консультант): профессор Бреус Ирина...»

«Неизвестная Наталья Геннадьевна ИЗУЧЕНИЕ СОСТАВА И СВОЙСТВ ПРОМЫШЛЕННЫХ ГУМИНОВЫХ ПРЕПАРАТОВ РАЗЛИЧНОГО ГЕНЕЗИСА МЕТОДАМИ БИОТЕСТИРОВАНИЯ И КОЛИЧЕСТВЕННОЙ СПЕКТРОСКОПИИ ЯМР 03.02.08 – экология (биологические наук и) АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Москва – 2013 Работа выполнена на кафедре системной экологии и в Центре ПРИМА ЦКП (НОЦ) Федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального...»

«КОМКОВ АЛЕКСАНДР ЮРЬЕВИЧ РАЗРАБОТКА СИСТЕМЫ ФУНКЦИОНАЛЬНЫХ МОЛЕКУЛЯРНОГЕНЕТИЧЕСКИХ МАРКЕРОВ НА ОСНОВЕ ИНСЕРЦИЙ ALU-РЕТРОЭЛЕМЕНТОВ 03.01.06 Биотехнология (в том числе бионанотехнологии) АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук МОСКВА – 2012 Работа выполнена на кафедре биотехнологии и бионанотехнологии Московского государственного университета тонких химических технологий имени М. В. Ломоносова и в Лаборатории сравнительной и функциональной...»

«ЛАТОНОВА ОЛЬГА БОРИСОВНА ТЕХНОЛОГИЯ И ОБОРУДОВАНИЕ ДЛЯ РЕАБИЛИТАЦИИ ЗАГРЯЗНЕННЫХ ГРУНТОВ УРБАНИЗИРОВАННЫХ ТЕРРИТОРИЙ Специальность 03.02.08 – Экология (в химии и нефтехимии) АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата технических наук Москва – 2011 2 Работа выполнена в федеральном государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования Московский государственный университет инженерной экологии (ФГБОУ ВПО МГУИЭ). Научный...»

«ДОБРОТВОРСКАЯ Ирина Сергеевна ЗАЩИТНОЕ ДЕЙСТВИЕ ОТ ОКИСЛИТЕЛЬНЫХ ПОВРЕЖДЕНИЙ ГОЛОВНОГО МОЗГА АНТИОКСИДАНТОВ И МОДУЛЯТОРОВ АКТИВНОСТИ ГЛУТАМАТНЫХ РЕЦЕПТОРОВ Специальность 03.00.04 – биохимия Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Москва – 2009 Работа выполнена в Учреждении Российской академии медицинских наук Научном центре неврологии РАМН Научный руководитель : Доктор биологических наук Федорова Татьяна Николаевна Официальные...»

«Поляков Николай Александрович ЭКОЛОГИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ РАЦИОНАЛЬНОГО ИСПОЛЬЗОВАНИЯ БАГУЛЬНИКА БОЛОТНОГО 03.00.16 – Экология Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Томск – 2008 Работа выполнена в ФГОУ ВПО Красноярский государственный аграрный университет на кафедре машины и аппараты пищевых производств. Научные руководители: доктор химических наук, профессор Ефремов Александр Алексеевич доктор биологических наук Кириенко Наталья...»

«КУЛУЕВ БУЛАТ РАЗЯПОВИЧ НОВЫЕ ПРОМОТОРЫ КАУЛИМОВИРУСОВ И КОНСТРУИРОВАНИЕ ИХ ХИМЕРНЫХ ФОРМ 03.00.04 - биохимия 03.00.03 – молекулярная биология Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Уфа – 2007 Работа выполнена в Институте биохимии и генетики Уфимского научного центра РАН и на кафедре биохимии и биотехнологии Башкирского государственного университета. Научные руководители Доктор биологических наук, профессор Р.И. Ибрагимов Доктор...»

«ЕГОРОВ Владимир Николаевич ОЦЕНКА ЭКОЛОГИЧЕСКОГО СОСТОЯНИЯ ЛИПНЯКОВ В ГОРНОЙ ШОРИИ 03.00.16 – Экология Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Кемерово – 2009 Работа выполнена в Институте экологии человека СО РАН Научный руководитель : доктор биологических наук Баранник Леонид Прокофьевич Официальные оппоненты : доктор биологических наук, профессор Ревякина Надежда Васильевна кандидат биологических наук Малиновских Алексей Анатольевич...»

«Рущук Александр Дмитриевич РАСТИТЕЛЬНЫЙ ПОКРОВ СТЕПЕЙ ЛЕВОБЕРЕЖЬЯ ДНЕСТРА: АНАЛИЗ ФЛОРЫ И КЛАССИФИКАЦИЯ РАСТИТЕЛЬНОСТИ Специальность 03.00.05 – Ботаника Автореферат диссертации на соискание учёной степени кандидата биологических наук Тирасполь 2007 Работа выполнена на кафедре ботаники и экологии естественно-географического факультета ПГУ имени Т.Г. Шевченко Научные доктор сельскохозяйственных наук, руководители...»

«АЛЬ-КЕЙСИ Татьяна Викторовна СРАВНИТЕЛЬНОЕ ИССЛ ЕДОВ АНИЕ АЛЛЕЛОФ ОНД А ЯКОВ И ИХ ГИБРИДОВ С КРУПНЫМ РОГ АТЫМ СКОТОМ С ИСПОЛЬЗОВ АНИЕМ М ИКРОСАТЕЛЛИТОВ 03.02.07 – Генетика 06.02.07 – Разведение, селекция и генетика сельскохозяйственных животных А В ТО Р Е Ф ЕР А Т диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Дубровицы – 2011 Работа выполнена в Центре биотехнологии и молекулярной диагностики животных Государственного научного учреждения Всероссийский...»

«ГОТОВЦЕВА Варвара Юрьевна ИЗУЧЕНИЕ БИОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ ПРИРОДНЫХ ГИПОЛИПИДЕМИЧЕСКИХ СОЕДИНЕНИЙ Специальности: 14.03.07 - Химиотерапия и антибиотики, 03.01.06 – Биотехнология (в том числе бионанотехнологии) Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Москва 2013 1 Работа выполнена на кафедре Экологическая и промышленная биотехнология Московского государственного университета инженерной экологии и ООО Виорин (ранее – сектор коллекции...»

«ВАКАТОВ Алексей Владимирович СОСТАВ, СТРУКТУРА И ДИНАМИКА ЗООПЛАНКТОННОГО СООБЩЕСТВА ТАУЙСКОЙ ГУБЫ ОХОТСКОГО МОРЯ 03.00.16 - Экология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Казань – 2008 2 Работа выполнена на кафедре зоологии беспозвоночных ФГОУ ВПО Казанский государственный университет им. В. И. Ульянова-Ленина и в лаборатории морских промысловых рыб ФГУП Магаданский научноисследовательский институт рыбного хозяйства и океанографии...»

«ДУЛЕПОВА Наталья Алексеевна ФЛОРА И РАСТИТЕЛЬНОСТЬ РАЗВЕВАЕМЫХ ПЕСКОВ ЗАБАЙКАЛЬЯ 03.02.01 – “Ботаника” АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Новосибирск – 2014 Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении науки Центральном сибирском ботаническом саду Сибирского отделения Российской академии наук. Научный руководитель — доктор биологических наук, с.н.с. Королюк Андрей Юрьевич. Официальные оппоненты : Силантьева...»

«ДУХОВЛИНОВА Елена Николаевна ИЗУЧЕНИЕ РАЗНООБРАЗИЯ ГЕНА env ШТАММОВ ВИЧ-1, ЦИРКУЛИРУЮЩИХ В ГРУППАХ РИСКА В САНКТПЕТЕРБУРГЕ 03.01.04 – Биохимия 03.01.03 – Молекулярная биология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Санкт-Петербург 2010 Работа выполнена в лаборатории негосударственного научноисследовательского учреждения Биомедицинский центр, Санкт-Петербург. Научный руководитель - доктор...»

«Смирнова Людмила Олеговна ГЕНЕТИЧЕСКОЕ РАЗНООБРАЗИЕ ОВСА ПО ФОТОПЕРИОДИЧЕСКОЙ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ И СКОРОСПЕЛОСТИ Специальности: 06.01.05 – селекция и семеноводство сельскохозяйственных растений, 03.01.05 – физиология и биохимия растений АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Санкт-Петербург 2011 Диссертационная работа выполнена в отделе генетических ресурсов овса, ржи, ячменя и отделе физиологии растений Всероссийского...»

«Добринских Евгения Александровна Изучение участия систем микротрубочек и актиновых филаментов в процессе движения фибробластов 03.00.25 – гистология, цитология, клеточная биология. автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Москва 2007 1 Работа выполнена на Биологическом факультете Московского Государственного Университета им. М.В. Ломоносова Научный руководитель : Доктор биологических наук, профессор, Воробьев Иван Андреевич Официальные...»

«ЮСУПОВ ИЛЬДАР РАВИЛЕВИЧ Естественное возобновление ели сибирской (Picea obovata Ledeb.) и пихты сибирской (Abies sibirica Ledeb.) в провинции широколиственно-темнохвойных лесов Южного Урала (на примере Южно-Уральского государственного природного заповедника) Специальность 03.02.01 – ботаника АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Оренбург – 2014 2 Работа выполнена в научном отделе ФГБУ Южно-Уральского государственного природного...»








 
© 2013 www.diss.seluk.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Авторефераты, Диссертации, Монографии, Методички, учебные программы»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.