WWW.DISS.SELUK.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА
(Авторефераты, диссертации, методички, учебные программы, монографии)

 

На правах рукописи

МИНГАЗОВА ЭЛЬВИРА ЗАНФИРОВНА

КЛИНИКО-ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКОЕ И МОЛЕКУЛЯРНОГЕНЕТИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ ПРОГРЕССИРУЮЩИХ

СПИНОЦЕРЕБЕЛЛЯРНЫХ АТАКСИЙ В РЕСПУБЛИКЕ

БАШКОРТОСТАН

14.00.13 – нервные болезни

03.00.15 - генетика

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Уфа - 2009

Работа выполнена в Институте биохимии и генетики Уфимского научного центра РАН Научные руководители:

доктор медицинских наук, профессор Магжанов Рим Валеевич доктор биологических наук Хидиятова Ирина Михайловна

Официальные оппоненты:

кандидат медицинских наук Клюшников Сергей Анатольевич доктор медицинских наук, профессор Зинченко Рена Абульфазовна

Ведущая организация:

Московский областной научно-исследовательский клинический институт им.

М.Ф.Владимирского

Защита диссертации состоится « 08 » декабря 2009 года в 12 часов на заседании диссертационного совета Д 001.006.01 при Учреждении РАМН Научном центре неврологии РАМН по адресу: 125367, Москва, Волоколамское шоссе, 80.

С диссертацией можно ознакомиться библиотеке НЦН РАМН

Автореферат разослан « » ноября 2009 г.

Ученый секретарь диссертационного совета кандидат медицинских наук Домашенко М.А.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы Прогрессирующие аутосомно-доминантные спиноцеребеллярные атаксии (АД СЦА) – это генетически и клинически гетерогенная группа нейродегенеративных заболеваний, обусловленных атрофическими изменениями в мозжечке и других отделах головного и спинного мозга. Их общей характеристикой является прогрессирующее расстройство координации движений, во многих случаях ассоциированное с офтальмоплегией, пирамидными и экстрапирамидными знаками, деменцией, пигментарной ретинопатией и периферической нейропатией [Conner K.E. et al., 1993; Zoghbi H.Y., 2000; Yong-Xing Z. et al. ; 2001 Иллариошкин С.Н. и др., 2006]. Клиническая вариабельность АД СЦА связана с их значительной генетической гетерогенностью: к настоящему времени картировано 26 хромосомных локусов (AD SCAs), в 16 из которых идентифицированы мутантные гены. В 10 из этих генов мутации представляют собой экспансию внутригенных микросателлитных повторяющихся последовательностей, в остальных 6-х генах это – различные точковые мутации. Известны и семьи с СЦА с неустановленной локализацией генов, существует и значительное число спорадических случаев заболевания с неизвестным генетическим дефектом [Иллариошкин С.Н. и др., 1995, 2002; 2006;

Willems P., 1994; Brice A., 1998; Stevanin G. et al., 2000]. Заболевание встречается повсеместно, с распространенностью 1 на 100 тыс. населения в среднем в мире, но с широкой популяционной вариабельностью значений распространенности как всей группы АД СЦА, так и ее отдельных генетических форм [Иллариошкин С.Н.

и др., 2006].

Диагностика СЦА основана на клиническом, семейном анализе. Из параклинических методов исследования дифференциально-диагностическое значение принадлежит методам нейровизуализации: компьютерной томографии (КТ), магнитно-резонансной томографии (МРТ) головного мозга, исключающим аномалии развития, последствия сосудистой патологии и травм, неопластические и прочие состояния. Совокупность изменений, выявляемых при КТ/МРТисследованиях, могут в ряде случаев позволить заподозрить ту или иную форму и наметить последовательность генов, подлежащих исследованию для установления ДНК-диагноза [Яхно Н.Н., 2007; Savoiardo M. et al., 1990; Friedman M.J. et al., 2006]. Дополнительную информацию также представляют данные ЭМГ и ЭНМГисследований, позволяющие выявлять диагностически значимые признаки сенсорной и моторно-сенсорной невропатии, или денервации скелетных мышц.

Информативно офтальмологическое исследование при выявлении пигментной ретинопатии или атрофии зрительных нервов и некоторые другие методы исследования при длительном течении. Однако, учитывая значительное разнообразие генетических вариантов АД СЦА, редкость многих его форм, и, соответственно, недостаточную изученность гено-фенотипических корреляций, эти методы, даже в совокупности с клиническими исследованиями, не позволяют определить точный вариант заболевания. Точная диагностика возможна только с помощью методов ДНК-анализа, позволяющих как идентифицировать генетические формы АД СЦА у больных, так и проводить пресимптоматическую и пренатальную диагностику в отягощенных семьях, что особенно важно в связи с тяжелым инвалидизирующим течением заболевания и отсутствием эффективных методов его лечения. Учитывая вышесказанное, комплексные эпидемиологические исследования АД СЦА в конкретных регионах, включающие определение распространенности заболевания, генетическую идентификацию его отдельных форм и детальное описание их клинической картины являются основой для оптимизации генетического консультирования этой группы заболеваний в соответствующих регионах и вносят вклад в познание этиопатогенеза заболевания в целом. В Республике Башкортостан - одной из многонациональных республик ВолгоУральского региона России, - эпидемиологические и молекулярно-генетические исследования спиноцеребеллярных атаксий ранее не проводились, но представляют значительный теоретический и практический интерес в связи с существующей генетической подразделенностью населения и своеобразием генофонда отдельных, проживающих здесь популяций.

Одним из важных аспектов молекулярно-генетических исследований болезней «экспансии» является изучение характера полиморфизма локусов, содержащих повторяющиеся последовательности в соответствующих генах, в популяциях среди здоровых лиц. Такой анализ направлен на познание механизмов возникновения и распространения болезней «экспансии» в популяциях человека.

Предполагается, что чем больше в популяции аллелей SCA гена с числом повторов, близким к верхней границе нормы («переходных» аллелей), являющихся более нестабильными и склонными к дальнейшей экспансии, тем выше может быть частота соответствующей мутации в данной популяции [Takano H. et al., 1998, цит. по Иллариошкин С.Н. и др., 2006]. Для СЦА1 определяющим фактором в этом отношении может служить и частота в популяции аллелей гена SCA1 с отсутствием CAT-вставок, прерывающих (CAG)n-последовательность и служащих стабилизирующим фактором для (CAG)n-тракта. Однако до сих пор эти вопросы остаются на уровне предположений, а наибольшее число популяционных исследований нормального числа тринуклеотидных повторов касается гена SCA1, ответственного за наиболее частую форму заболевания. Волго-Уральский регион в этом плане также ранее не был изучен. Поэтому анализ полиморфизма генов АД СЦА в этом регионе является актуальной проблемой, разработка которой способствовала бы разрешению ряда важных вопросов, связанных с механизмами возникновения и распространения заболевания.

В связи с вышеизложенным, были определены цели и задачи исследования.

Целью работы является оптимизация подходов к диагностике и медикогенетическому консультированию прогрессирующих аутосомно-доминантных спиноцеребеллярных атаксий в Республике Башкортостан на основе изучения их распространенности, клинических и молекулярно-генетических особенностей.

Задачи исследования:

1. Провести клиническое и генеалогическое обследование больных и их родственников в семьях с прогрессирующими спиноцеребеллярными атаксиями из Республики Башкортостан.

2. Провести анализ числа микросателлитных повторов в генах ATXN1(SCA1), ATXN2(SCA2), ATXN3(SCA3), CACNL1A4(SCA6), PPP2R2B(SCA12), TBP(SCA17) и DRPLA у больных с АД СЦА из Республики Башкортостан.

3. Изучить особенности клинических проявлений и данных МРТ-исследования при разных генетических вариантах заболевания.

4. Провести анализ распределения числа микросателлитных повторов в генах ATXN1(SCA1), ATXN2(SCA2), ATXN3(SCA3), CACNL1A4(SCA6), PPP2R2B(SCA12), TBP(SCA17) и DRPLA у здоровых индивидуумов в популяциях Волго-Уральского региона.

5. Оценить распространенность прогрессирующих спиноцеребеллярных атаксий и распределение отдельных генетических форм заболевания в Республике Башкортостан.

Научная новизна исследования:

Впервые получены оценки распространённости спиноцеребеллярных атаксий в Республике Башкортостан, с учетом административно-территориальной и этнической подразделенности населения.

Впервые в семьях больных СЦА из РБ проведено комплексное клиникогенетическое обследование, включающее анализ клинической картины и данных МРТ, и исследование семи генов (ATXN1(SCA1), ATXN2(SCA2), ATXN3(SCA3), CACNL1A4(SCA6), PPP2R2B(SCA12), TBP(SCA17) и DRPLA), ответственных за развитие заболевания. В результате данного исследования выявлены семьи с СЦА1 и СЦА6; определен вклад этих генетических форм в структуру аутосомнодоминантных спиноцеребеллярных атаксий в исследуемом регионе. Описаны особенности клинической картины больных из семей с выявленными типами СЦА при определенных значениях числа (CAG)n повторов в соответствующих генах.

Клиническая картина СЦА1, при экспансии в 45 копий CAG- повторов, складывалась из динамической и статико-локомоторной атаксии, спастического тетрапареза, более выраженного в ногах, вестибулярной дисфункции и расстройств речи по типу мозжечковой дизартрии. Глубокая чувствительность снижена на нижних конечностях. Изменения со стороны глубоких рефлексов и тонуса мышц указывали на вовлечение задних канатиков спинного мозга и пирамидных путей. Клиническая картина СЦА6, при экспансии 25 копий CAG– повторов, складывалась из нарастающей мозжечковой статико-локомоторной атаксии с расстройством координации движений в руках, мозжечковой дизартрии и вестибулярной дисфункции в виде приступов системного головокружения и нистагма. Изменения со стороны глубоких рефлексов указывали на вовлечение пирамидного тракта, что типично для AД СЦА.

Впервые в выборках здоровых индивидов из трех популяций РБ -русских, башкир и татар, - проведено изучение полиморфизма локусов (CAT)n- повторов гена SCA1, (CAG)n- повторов генов SCA2, SCA3, SCA6, SCA12, SCA17 и DRPLA;

установлена частота «длинных» аллелей, что, наряду со сведениями о распространенности соответствующих типов АД СЦА, вносит вклад в познание механизмов возникновения экспансии микросателлитных последовательностей.

Изучение полиморфизма локуса (CAG)n- повторов гена SCA1 проведено также в одиннадцати популяциях Волго-Уральского региона (три этногеографические группы башкир, татары, русские, чуваши, удмурты, мари, коми, две этногеографические группы мордвы). Сравнительный анализ полученных данных с таковыми по ряду других популяций мира позволил подтвердить предположение о решающей роли числа САТ-вставок в последовательности CAG-повторов гена SCA1 в процессе возникновения CAG- экспансии. Существующее предположение о зависимости распространенности АД СЦА от числа «длинных» аллелей генов AD SCA не было подтверждено для СЦА2 и СЦА3, но не было исключено для СЦА6.

Научно-практическая значимость работы:

совершенствования системы специализированного неврологического наблюдения, медицинской и социально-реабилитационной помощи больным и их семьям в исследованном регионе. Выявление этиологической основы заболевания у больных, а также носителей мутантного гена способствует проведению ранних лечебно-профилактических мероприятий, позволяющих отсрочить клиническую манифестацию заболевания или замедлить темпы его прогрессирования. Кроме того, является необходимым условием для проведения пренатальной диагностики с целью профилактики повторных случаев заболевания в семьях.

Результаты проведенного исследования вносят определенный вклад в геногеографичекое картирование наследственной патологии на территории одного из крупных регионов России.

Внедрение результатов исследования в практику Разработанные формализованная карта и регистр по спиноцеребеллярным атаксиям используются в медико-генетической консультации Республиканского перинатального центра г.Уфы.

Материалы работы с 2008 г. включены в программу обучения врачейинтернов, клинических ординаторов, аспирантов кафедры неврологии с курсом нейрохирургии и медицинской генетики Башкирского государственного медицинского университета.

Положения, выносимые на защиту:

1. Неравномерное территориальное и этническое распространение спиноцеребеллярных атаксий в Республике Башкортостан.

2. Невысокая распространенность генетических форм СЦА1 и СЦА6 в Республике Башкортостан, отсутствие форм СЦА2, СЦА3, СЦА12, СЦА17 и ДРПЛА.

3. Отсутствие четких клинических различий у больных СЦА с разными типами наследования. Преобладание в клинической картине СЦА1 и СЦА6 в РБ статиколокомоторной атаксии с расстройством координации движений в руках, спастического тетрапареза (СЦА1), вестибулярной дисфункции в виде приступов системного головокружения (СЦА6) и нистагма, расстройств речи по типу мозжечковой дизартрии. Изменения со стороны глубоких рефлексов и тонуса мышц указывают на вовлечение задних канатиков спинного мозга и пирамидного тракта, что типично для AД СЦА.

4. Отсутствие CAT-вставок в нормальной последовательности CAG-повторов в гене SCA1 является основным фактором, предрасполагающим к возникновению экспансии CAG-повторов, приводящей к развитию заболевания.

5. Характеристика полиморфизма локусов CAG- повторов в гене SCA1 в одиннадцати популяциях Волго-Уральского региона, в генах SCA2, SCA3, SCA6, SCA12, SCA17 и DRPLA – в популяциях русских, башкир и татар из РБ;

гетерогенность исследуемых популяций по распределению частот аллелей генов SCA1, SCA3, SCA6 и SCA12.

6. Для генов SCA2 и SCA3 не подтверждено предположение о зависимости распространенности соответствующих заболеваний в популяциях от частоты «длинных» («переходных») аллелей локусов CAG-повторов; для гена SCA6 такая зависимость не исключена.

Апробация работы Основные положения диссертации были представлены на конференциях Европейского общества генетиков человека (ESHG) (Ницца, 2007; Барселона, 2008), школе-семинаре «Биомика-наука XXI века» (Уфа, 2007), школе молодых ученых «Геномика и эволюция» (Звенигород, 2008), XX Международном конгрессе генетиков (Берлин, 2008), 8-ой Балканской конференции по генетике человека (Хорватия, 2009), V съезде Российского общества генетиков и селекционеров им. Н.И. Вавилова (Москва, 2009), на ученом совете Института биохимии и генетики УНЦ РАН 22 октября 2009 года.

Публикации По материалам диссертации опубликовано 9 работ, из них 2 статьи – в изданиях, рекомендованных ВАК.

Структура и объем диссертации Работа изложена на 156 страницах машинописного текста. Состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, результатов и обсуждения, заключения, выводов и списка литературы, включающего 215 источников, из них 187 работ зарубежных авторов. Диссертация иллюстрирована 37 рисунками и 24 таблицами, дополнена приложением (6 стр.).

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Материалы исследования В работе использованы образцы ДНК 72 больных СЦА из 55 неродственных семей и 53 их фенотипически здоровых родственника, проживающих в РБ.

Сведения о больных были получены из базы данных Медико-генетической консультации РБ и из материалов ежегодных отчетов неврологов всех городов и районов республики, собираемых на кафедре неврологии с курсами нейрохирургии и медицинской генетики Башкирского государственного медицинского университета (БГМУ). Полученные таким образом сведения дополнительно уточнялись на момент исследования как путем целенаправленного запроса в центральные городские и районные больницы, так и в процессе экспедиционных выездов 2007-2009гг., проводимых нами совместно с сотрудниками кафедры неврологии БГМУ с целью дополнительного клинического осмотра больных и членов их семей, и забора крови для ДНК-анализа.

Популяционная выборка здоровых индивидов, у которых проводилось исследование полиморфизма числа тандемных повторов в генах AD SCAs, представлены коренными жителями Волго-Уральского региона: башкирами ( чел.) из Абзелиловского (123 чел.), Бурзянского (100 чел.), Стерлибашевского ( чел.) районов РБ, татарами (170 чел.) из Буинского района Республики Татарстан, марийцами (81 чел.) из Республики Марий Эл (Йошкор-Ола), мордвой мокшей ( чел.) из Старошайгинского района и эрзя (46 чел.) из Атяшевского района Республики Мордовия, удмуртами (82 чел.) из Шарканского района Республики Удмуртия, коми (108 чел.) из Коми-пермяцкого автономного округа (с. Юсьма, с.

Ко-са), чувашами (138 чел.) из Чебоксарского, Марпосадского и Ибресинского районов Республики Чувашия, русскими (90 чел.) из Республики Башкортостан.

Методы исследования Диагноз ставили на основании жалоб больных, клинико-неврологического исследования и данных инструментальных методов исследования (МР-томография головного мозга). Формулировка диагноза проводилась в соответствии с требованиями «Международной классификации болезней» 10-го пересмотра (МКБ-10) (1994г.). Наследственные атаксии относятся к VI классу МКБ-10:

болезни нервной системы (системные атрофии, поражающие преимущественно центральную нервную систему), рубрика G11.

Для уточнения диагноза использовались нейровизуализационные и молекулярно-генетические методы. Нейровизуализационные методы исследования были проведены у 63 пациентов и включали магнитно-резонансную томографию (МРТ) головного мозга.

ДНК была выделена из периферической крови методом фенольнохлороформной экстракции [Mathew et al.,1984]. Анализ числа CAG -повторов в генах ATXN1(SCA1), ATXN2(SCA2), ATXN3(SCA3), CACNL1A4(SCA6), PPP2R2B(SCA12), TBP(SCA17) и DRPLA осуществляли методом секвенирования и полимеразной цепной реакции синтеза ДНК (ПЦР). Для идентификации наличия CAT-вставок в последовательности (CAG)n-повторов гена SCA1 использовали метод полиморфизма длин рестрикционных фрагментов (ПДРФ). Результаты ПЦР и ПДРФ оценивали при проведении электрофореза в 7% полиакриламидном геле.

Статистическая обработка полученных данных проводилась с использованием пакета программ: MS Office Excel 2003 [Microsoft], GenePop ver.

3.3 [Rousset F., 2001], Biostat [Гланц., 1999]. Определение критериев 2, Стьюдента (t), частот аллелей и генотипов, оценку соответствия характера распределения частот генотипов равновесию Харди-Вайнберга, расчет индексов наблюдаемой и ожидаемой гетерозиготности, проводили по стандартным формулам.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

1. Распространенность СЦА в Республике Башкортостан.

В РБ с населением 4 104 336 человека (перепись 2002г.) в настоящее время состоят на учете 105 больных из 83 семей со спиноцеребеллярными атаксиями.

Исходя из этого, распространенность СЦА в РБ в среднем составила 2,56 на тыс. населения. В процессе проведения исследования у одного пациента диагноз был снят и установлен диагноз аномалия Арнольда-Киари (с помощью МРтомографии, которая ранее не проводилась). Пациент был исключен из выборки.

СЦА на территории РБ распространены неравномерно (рис.1). Заболевание зарегистрировано в 25 из 54 административных районов и в 15 из 21 города.

Наблюдается широкий разброс значений распространенности в районах РБ – от 1,3 до 22,1 на 100 000 населения, большинство показателей находится в пределах 2,1 – 7,4:100 тыс. На разброс показателей распространенности заболевания могут влиять значительные различия численности населения отдельных районов («эффект малых выборок»), а также было установлено, что в отдельных районах с повышенной распространенностью заболевания проживают больные с АД СЦА (по несколько больных в семьях).

Распределение больных по половому составу выглядит следующим образом:

мужчин - 53 (50,5%), женщин – 52 (49,5%). При численности мужского и женского населения в РБ, соответственно 1923,2 тыс. (46,9%) и 2181,1 тыс. (53,1%) (перепись 2002г.), различие в распределении по полу не имеет статистической значимости (р 0,5).

По этническому составу 105 больных СЦА, проживающих в РБ, распределяются следующим образом: татар - 41 (39,0%), русских - 33 (31,4 %), башкир - 24 (22,9%), чувашей - 3 (2,86%), удмуртов - 1 (0,95%), белорусов - (0,95%). Кроме того, 2 (1,9%) больных СЦА являлись метисами от межнациональных браков башкир и татар (рис.2).

Поскольку, как среди больных, так и в структуре населения РБ преобладают русские, башкиры и татары, мы провели статистический анализ случайности распределения больных по этнической принадлежности для данных трех этнических групп. В результате этого анализа выявлено статистически значимое Рисунок 1. Распространенность СЦА на территории Республики Башкортостан.

Рисунок 2. Этнический состав больных СЦА в Республике Башкортостан.

различие в распределении больных по этническим группам по сравнению с общей популяцией РБ. Наиболее часто в РБ спиноцеребеллярные атаксии встречаются среди татар (2=6,41; df=1; p=0,01), реже среди башкир (2=1,13; df=1; p=0,3) и русских (2=0,39; df=1; p=0,5).

Клинико-генеалогический анализ позволил установить в 30,1% семьях ( случаев) аутосомно-доминантный тип наследования, в 12,0% (10 случаев) аутосомно-рецессивный тип наследования, в 57,8% (48 случаев) – спорадический.

Таким образом, распространенность АД СЦА в РБ в среднем составила 0, на 100000 населения, а доля семей с АД СЦА из числа семей с СЦА - 24,1%, что несколько ниже, чем в ряде других обследованных ранее регионах России [Иллариошкин С.Н. и др., 2006].

2. Клинико-генетическое исследование пациентов со спиноцеребеллярными неродственных семьях был достоверно установлен тип СЦА.

СЦА1 выявлена в одной семье татарской этнической принадлежности, проживающей в Салаватском районе (рис.1), у 3-х больных сибсов (рис.3). При анамнестическом обследовании ближайших родственников подобное заболевание было выявлено у матери пробанда.

У всех обследованных больных была обнаружена экспансия (CAG)nповторов гена ATXN1(SCA1), которая была подтверждена с помощью ПДРФанализа (отсутствие сайта рестрикции для эндонуклеазы SfaN1). Во всех случаях мутантный аллель гена содержал 45 копий CAG - повторов без (CAT)n – вставки III Рисунок 3. Родословная обследованной семьи Х. с СЦА1.

Рисунок 4. Электрофоретическое разделение продуктов амплификации локуса (CAG)n гена (ATXN1)SCA1 с указанием генотипов (1 - контрольный просеквенированный образец ДНК с экспансией CAG – повторов, 2, 4 – контрольные образцы ДНК с нормальным числом CAG-повторов, 3 – образец ДНК пробанда из семьи Х. с СЦА1 с 45 копиями CAG – повторов).

Клиническая картина при СЦА1 в данной семье складывалась из клиники динамической и статико-локомоторной атаксии, спастического тетрапареза, более выраженного в ногах, вестибулярной дисфункции (характеризующейся в данном случае нистагмом) и расстройств речи по типу мозжечковой дизартрии. Глубокая чувствительность снижена у всех больных на нижних конечностях. Изменения со стороны глубоких рефлексов и тонуса мышц указывают на вовлечение задних канатиков спинного мозга и пирамидных путей, что типично для AД СЦА.

Характерно, что у всех больных заболевание началось с 4-5-летнего возраста со снижения слуха, после переохлаждения. Затем через 3-5 лет присоединилась клиника атаксии. При клиническом и анамнестическом обследовании ближайших родственников других больных со снижением слуха выявлено не было. Тугоухость при СЦА1 также ранее не была описана в литературе.

СЦА1 характеризуется быстрым прогрессированием заболевания (продолжительность болезни не превышает 10-20 лет), что не характерно для описываемой семьи: обследованные нами больные только через 33-37 лет от момента манифестации заболевания не были способны к самообслуживанию из-за выраженных координаторных нарушений, нуждались в постороннем уходе и были признаны инвалидами II группы. Медленное прогрессирование заболевания в этой семье и видимая стабилизация состояния в течение длительного времени, вероятно, связана с невысокой степенью экспансии. На МРТ головного мозга пробанда из семьи Х. с СЦА1 выявляется атрофия полушарий и червя мозжечка, что согласуется с литературными данными.

СЦА6 была выявлена в двух неродственных семьях башкирской этнической принадлежности, проживающих в Баймакском районе (рис.1). По клиникоанамнестическим данным, в одной семье (А) заболевание носит спорадический характер (единственный случай в семье), при клиническом обследовании ближайших родственников других больных выявлено не было; в другой семье (Б) заболевание прослеживается в 4-х поколениях у 8 родственников (рис.5).

У всех больных из обеих семей, а также у одного из трех членов семьи Б. без клинических признаков заболевания выявлена экспансия (CAG)n-повторов гена CACNL1A4(SCA6). Во всех случаях мутантный аллель гена содержал 25 копий триплетов, число которых не изменялось при передаче из поколения в поколение (рис.6). О достаточно высокой стабильности (CAG)n-повторов в этом гене свидетельствуют и данные других авторов [Иллариошкин С.Н., Руденская, 2006].

III Рисунок 5. Родословная обследованной семьи Б. с СЦА6.

Рисунок 6. Электрофоретическое разделение продуктов амплификации локуса (CAG)n гена (CACNL1A4)SCA6 с указанием генотипов (1 – контроль; 2 (III-1), (III-3), 6 (IV-3), 7 (III-7) – экспансия; 3 (IV-11) – доклинический носитель; 4 (III-5), 8 (IV-13) – здоровые члены семьи).

Клинические проявления СЦА6 в данной семье складывались из нарастающей мозжечковой статико-локомоторной атаксии с расстройством координации движений в руках, мозжечковой дизартрии и вестибулярной дисфункции в виде приступов системного головокружения и нистагма. Повторные приступы головокружения являются достоверным маркером СЦА6, что позволило предположить данный тип СЦА в обследованной семье. Чувствительных нарушений нет. Изменения со стороны глубоких рефлексов указывают на вовлечение пирамидного тракта, что типично для AД СЦА.

У здорового носителя мутантного гена (29 лет), по-видимому, еще не достигшего возраста манифестации, при клиническом осмотре отсутствовали неврологические проявления заболевания.

СЦА6, в отличие от других типов AД СЦА, характеризуется медленным прогрессированием заболевания, что справедливо для описываемой семьи Б.:

обследованные нами больные только через 20-30 лет от момента манифестации заболевания не были способны к самообслуживанию из-за выраженных координаторных нарушений, нуждались в постороннем уходе и были признаны инвалидами III группы. На МРТ головного мозга пробанда выявляются признаки умеренной атрофии червя и полушарий мозжечка, что согласуется с литературными данными.

Таким образом, в результате молекулярно-генетического исследования, включающего анализ 7 генов у 72 больных и членов их семей (55 неродственных семей) с СЦА из РБ, выявлено только 2 типа АД СЦА в трех неродственных семьях, в которых было возможным сопоставление генетических и клинических особенностей заболевания.

Молекулярно-генетический анализ остальных больных с СЦА выявил нормальные значения числа тринуклеотидных повторов в исследованных генах, что позволило сделать заключение об отсутствии форм СЦА2, СЦА3, СЦА12, СЦА17 и ДРПЛА в структуре АД СЦА в Республике Башкортостан.

Сравнительный анализ клинической картины у других больных из РБ был проведен в зависимости от установленного типа наследования заболевания.

Возраст появления первых клинических признаков значительно варьирует у больных спиноцеребеллярной атаксией. В обследованной нами выборке больных этот показатель составлял от 1 года до 52 лет. При сравнении возраста неврологической манифестации у больных с аутосомно-доминантным, аутосомнорецессивным и спорадическим типом наследования не выявлено достоверных отличий (р0,05). При всех типах наследования, большинство больных имели длительность заболевания до 20 лет: 56,8%, 42,9% и 64,3% при АД СЦА, АР СЦА и при спорадическом типе наследования СЦА соответственно. В целом, по продолжительности заболевания при всех типах наследования между мужчинами и женщинами также нет достоверных отличий (р0,05).

Среди 72 обследованных пациентов больше половины (61,1%) имело иинвалидность. При сравнении среднего возраста инвалидизации у больных в трех вышеописанных группах не выявлено достоверных отличий (р0,05).

При сравнении распределения больных СЦА по группам инвалидности были выявлены достоверные отличия по распространенности инвалидов I группы, которые были представлены только среди пациентов с СЦА со спорадическим типом наследования (р0,05) (рис.7).

Рисунок 7. Рапределение больных СЦА с различным типом наследования по группам инвалидности.

С целью выявления дифференциально-диагностических признаков был проведен сравнительный анализ встречаемости основных клинических симптомов в разных группах сравнения (АД, АР, спорадический тип СЦА). Сравнение клинических признаков в данных группах позволило прийти к заключению, что в целом, по клинической картине АД СЦА не отличается от АР СЦА и спорадической группы СЦА, различия не достигают уровня статистической значимости (р0,05). Частота отдельных клинических проявлений в общей группе обследованных больных с СЦА представлена на рисунке 8.

Рисунок 8. Частота неврологических проявлений у больных с СЦА (в %).

Таким образом, при первичном осмотре пациента, при сочетании мозжечковой атаксии с дополнительными клиническими симптомами можно предположить СЦА. Однако данные признаки не могут служить четкими дифференциально-диагностическими критериями для отдельных генетических форм СЦА.

3. Характеристика полиморфизма нормального числа (CAG)n - повторов в генах ATXN1(SCA1) ATXN2(SCA2), ATXN3(SCA3), CACNL1A4(SCA6), PPP2R2B(SCA12), TBP(SCA17) и DRPLA в различных этнических группах.

Нами был проведен анализ распределения числа (CAG)n-повторов нормальных аллелей гена SCA1 в 11 популяциях Волго-Уральского региона, а также генов ATXN2(SCA2), ATXN3(SCA3), CACNL1A4(SCA6), PPP2R2B(SCA12), TBP(SCA17) и DRPLA в 3 этнических группах – русских, татар и башкир, проживающих в РБ.

В гене SCA1 при исследовании образцов ДНК 1088 индивидов обнаружено 13 вариантов аллелей (рис.9). Переходные аллели – CAG36 – в исследованных популяциях не выявлены. Коэффициент гетерозиготности составил 83,6%. В результате сравнительного анализа частот аллелей (CAG)n – локуса гена SCA между тремя субпопуляциями башкир, а также между двумя субпопуляциями мордвы значимые различия не выявлены, что свидетельствует об однородности этих этнических групп.

частота Рисунок 9. Распределение частот аллелей (CAG)n - повторов гена SCA1 в популяциях Волго-Уральского региона.

В результате скрининга на наличие/отсутствие (CAT)n – вставки в составе (CAG)n-повторов гена SCA1, проведенного среди здоровых индивидов в трех этнических группах населения РБ, ни у одного из обследованных лиц не было выявлено отсутствия САТ-триплетов. Полученные нами данные о низкой частоте СЦА1 и отсутствии аллелей гена SCA1 без САТ - вставок в популяциях населения РБ, а также анализ литературных данных [Осаковский В.Л. и др., 2004; Платонов Ф.А. и др., 2004; Бабушкина Н.П. и др., 2007; Mittal U. et al., 2005] подтверждают предположение о решающей роли числа CAT-вставок в последовательности CAGповторов гена SCA1 в процессе возникновения последних и, соответственно, возникновения новых случаев заболевания.

В результате исследования других 6 генов СЦА также были выявлены характерные для трех популяций населения РБ особенности распределения частот аллелей локусов этих генов, содержащих CAG-повторы (рис.10), определена частота «длинных» аллелей, и, на основе сравнительного анализа с литературными данными по другим популяциям (Европы, Азии, Индии и Африки) [Andress et al., 2002] рассмотрена возможность зависимости распространенности заболевания от частоты «длинных» аллелей в популяциях.

Такая зависимость не была подтверждена для генов SCA2 и SCA3, но не исключена для гена SCA6. Ввиду редкости форм СЦА12, СЦА17 и ДРПЛА, какиелибо обобщения в этом плане пока недоступны.

Показана значительная гетерогенность популяций РБ по распределению частот аллелей генов SCA1, SCA3, SCA6 и SCA12 что позволяет использовать полиморфные варианты (СAG)n - локусов этих генов в качестве информативных генетических маркеров популяций.

Таким образом, проведенное исследование вносит определенный вклад в решение вопросов возникновения и распространения болезней экспансии, поскольку в анализ включены популяции одного из регионов Урало-Поволжья, расположенного на границе Европы и Азии, население которого генетически гетерогенно и несет в своем генофонде как европеоидный, так и монголоидный компоненты.

0, 0, 0, 0, 0, 0, 0, 0, 0, 0, 0, 0, Рисунок 10. Распределение частот аллелей (CAG)n-повторов в генах ATXN2(SCA2), ATXN3(SCA3), CACNL1A4(SCA6), PPP2R2B(SCA12), TBP(SCA17) и DRPLA в популяциях башкир, татар и русских (Республика Башкортостан). По оси абсцисс – число (CAG)n повторов, по оси ординат – частоты аллелей 4. Регистр «Аутосомно-доминантные спиноцеребеллярные атаксии»

Был внедрен на базе МГК РПЦ РБ регистр «Спиноцеребеллярные атакиии», разработанный на основе формализованной карты. На данный момент регистр содержит информацию о 105 больных и их родственниках.

Использование регистра значительно упрощает работу врача по выборке, сортировке и анализу данных, позволяет оценивать динамику течения заболевания, сопоставлять клинико-неврологические данные с данными дополнительных методов обследования и результатами молекулярногенетического исследования.

ВЫВОДЫ

1. Распространенность спиноцеребеллярных атаксий (СЦА) в Республике Башкортостан (РБ) составляет 2,56 на 100000 населения. В значительном числе случаев СЦА установлен аутосомно-доминантный тип наследования (0,97:100000).

Заболевание имеет неравномерное этно-территориальное распространение в регионе, наиболее часто встречается среди татар.

2. В результате молекулярно-генетического анализа выявлена экспансия CAGповторов в гене SCA1 в одной семье татарского этнического происхождения, в гене SCA6 - в двух неродственных семьях башкирского этнического происхождения. В Республике Башкортостан доля семей с СЦА1 из числа семей с АД СЦА составила 4,5% (0,07 на 100000), доля СЦА6 – 9,1% (0,12 на 100000).

Генетические формы СЦА2, СЦА3, СЦА12, СЦА17 и ДРПЛА в республике не обнаружены.

3. Не выявлено клинических различий у больных с разными типами наследования СЦА из РБ. Клинические симптомы не могут служить четким дифференциально-диагностическим критерием различных генетических форм СЦА.

4. В клинической картине СЦА1 и СЦА6 в РБ преобладали статиколокомоторная атаксия с расстройством координации движений в руках, спастический тетрапарез (СЦА1), вестибулярная дисфункция в виде приступов системного головокружения (СЦА6) и нистагма, расстройства речи по типу мозжечковой дизартрии. Изменения со стороны глубоких рефлексов и тонуса мышц указывали на вовлечение задних канатиков спинного мозга и пирамидного тракта, что типично для AД СЦА.

5. На основании сравнительного популяционного анализа полиморфизма локусов (CAG)n и (CAT)n повторов гена SCA1 установлено, что основным фактором, предрасполагающим к экспансии CAG-повторов в этом гене является отсутствие САТ- вставок в составе последовательности нормальных (CAG)n аллелей.

6. В результате анализа полиморфизма нормального числа CAG-повторов в генах SCA1, SCA2, SCA3, SCA6, SCA12, SCA17 и DRPLA в трех этнических группах населения РБ – русских, башкир и татар, - показана значительная гетерогенность этих популяций по распределению частот аллелей генов SCA1, SCA3, SCA6 и SCA12.

7. Предположение о зависимости распространенности аутосомнодоминантных спиноцеребеллярных атаксий в популяциях от частоты «длинных»

(«переходных») аллелей CAG- повторов в соответствующих генах не подтверждено для генов SCA2 и SCA3, но не исключено для гена SCA6.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. С целью уточнения диагноза, прогнозирования течения заболевания и выбора оптимальной тактики лечения пациентов с АД СЦА следует использовать прямую ДНК-диагностику.

2. Учитывая характер распространения заболевания в Республике Башкортостан, необходимо проявлять диагностическую настороженность в отношении СЦА в регионах с высокой ее частотой.

3. При проведении прямой ДНК-диагностики заболевания, с целью повышения ее эффективности, наряду с клиническими признаками больных необходимо учитывать их этническую принадлежность и место рождения. В первую очередь рекомендуется исследовать гены SCA1 и SCA6.

СПИСОК ПУБЛИКАЦИЙ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Хидиятова И.М., Мингазова Э.З., Бермишева М. А., Гилязова И.Р., Магжанов Р.В., Хуснутдинова Э.К. Анализ полиморфизма локусов(CAG)n- и (СAT)n –повторов гена SCA1 у больных со спиноцеребеллярными атаксиями из Республики Башкортостан и в популяциях Волго-Уральского региона // Мед.генетика. – 2009. – №8. – С.8-12.

2. Мингазова Э.З., Хидиятова И.М., Бермишева М.А., Магжанов Р.В., Хуснутдинова Э.К. Спиноцеребеллярная атаксия 6 типа в Республике Башкортостан // Неврологический журнал. – Принята в печать. – 2010. - №1.

3. E. Mingazova, I. Khidiatova, R. Magzhanov, E. Khusnutdinova. Epidemiological study of progressive autosomal-dominant spinocerebellar ataxias in the Bashkortostan Republic. European Human Genetics Conference 2007. Nice, France. – Vol.15. – P.284.

4. Мингазова Э.З., Хуснутдинова Э.К., Хидиятова И.М. Анализ полиморфизма (CAG)n-повторов гена спиноцеребеллярной атаксии 1 типа (SCA1) в популяциях народов Волго-Уральского региона. Биомика – наука 21 века. Школа-семинар молодых ученых УФНЦ РАН и Волго-Уральского региона по физико-химической биологии и биотехнологии. Уфа, 9-15 сентября 2007г. – С.95-96.

5. E. Mingazova, E. Khusnutdinova, I. Khidiatova. Analysis of Polymorphism of the CAG Repeats in the Spinocerebellar Ataxia type 1 (SCA1) Gene in Human Populations of the Volga-Ural Region. European Human Genetics Conference 2008. Barselona, Spain. – Vol.16. – P.389.

6. Мингазова Э.З., Магжанов Р.В., Хуснутдинова Э.К., Хидиятова И.М.

Эпидемиологическое и молекулярно-генетическое изучение аутосомнодоминантных спиноцеребеллярных атаксий в Республике Башкортостан // Аграрная Россия - 2009.- Спец.выпуск.- с.126.

7. Мингазова Э.З., Магжанов Р.В., Хидиятова И.М. Клинико-генетическое изучение прогрессирующих аутосомно-доминантных спиноцеребеллярных атаксий в Республике Башкортостан. V съезд Вавиловского общества генетиков и селекционеров. Москва, 21-28 июня 2009. – с.124.

8. E.Mingazova, R.Magzhanov, I.Khidiyatova, E.Khusnutdinova Study of progressive autosomal-dominant spinocerebellar ataxias (AD SCAs) in Bashkortostan Republic // 8th Balkan Meeting on Human Genetics.

Abstract

Book. Cavtat-Dubvrovnik, Croatia, May 14-17, 2009. - P.114.

9. E.Mingazova, E.Khusnutdinova, I.Khidiyatova Analysis of polymorphism of the CAG repeats in the spinocerebellar ataxia type 1 (SCA1) gene in human populations of the Volga-Ural region // XX Intern. Congress of Genetics. Abstract Book. Berlin, Germany, July 12-17, 2008. Berlin. 2008. - P.204.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ И УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ

АД СЦА, AD SCAs - аутосомно-доминантные спиноцеребеллярные атаксии БГМУ - Башкирский Государственный Медицинский МРТ - магнитно-резонансная томография МГК - медико-генетическая консультация ПААГ - полиакриламидный гель ПДРФ - полиморфизм длины рестрикционных фрагментов ПЦР - полимеразная цепная реакция РПЦ - Республиканский перинатальный центр СЦА, SCAs - спиноцеребеллярные атаксии N (n) - количество наблюдений

 


Похожие работы:

«Гашков Сергей Иванович БИОЛОГИЯ БОЛЬШОЙ СИНИЦЫ (Parus major L.) ЮЖНОЙ ТАЙГИ ЗАПАДНОЙ СИБИРИ Специальность 03.00.08 – зоология Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Томск 2007 Работа выполнена в зоологическом музее и на кафедре зоологии позвоночных и экологии Томского государственного университета Научный руководитель : д-р биол. наук, профессор Н.С. Москвитина Официальные оппоненты : д-р биол. наук, профессор А.С. Бабенко канд. биол....»

«ТИУНОВ Алексей Владимирович МЕТАБИОЗ В ПОЧВЕННОЙ СИСТЕМЕ: ВЛИЯНИЕ ДОЖДЕВЫХ ЧЕРВЕЙ НА СТРУКТУРУ И ФУНКЦИОНИРОВАНИЕ ПОЧВЕННОЙ БИОТЫ Специальность: 03.00.16 – экология Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук Москва – 2007 Работа выполнена в лаборатории почвенной зоологии и экспериментальной энтомологии Института проблем экологии и эволюции им. А.Н. Северцова РАН Официальные оппоненты : доктор биологических наук, профессор Л.О. Карпачевский...»

«Ерофеева Елена Николаевна ЭКОЛОГО-ФИЗИОЛОГИЧЕСКИЕ ЭФФЕКТЫ ПРЕДПОСЕВНОЙ ОБРАБОТКИ СЕМЯН TRITICUM AESTIVUM ПРИРОДНЫМИ РЕГУЛЯТОРАМИ РОСТА 03.02.08 – экология (биологические наук и) Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Казань – 2011 Работа выполнена на кафедре биологии, химии, технологии хранения и переработки продукции растениеводства агрономического факультета ФГОУ ВПО Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия Научный...»

«СТРОГАНОВ Андрей Николаевич Род GADUS Linnaeus, 1758 (GADIFORMES: GADIDAE) состав, расселение, формообразование Специальность: 03.02.06 – ихтиология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук МОСКВА – 2014 Работа выполнена на кафедре ихтиологии биологического факультета Московского государственного университета имени М.В.Ломоносова Официальные оппоненты : доктор биологических наук, Глубоков Александр Иванович (Федеральное государственное...»

«Аверкиева Ирина Юрьевна ВЛИЯНИЕ ТЕХНОГЕННОЙ ЭМИССИИ ОКСИДОВ АЗОТА НА ПОЧВЕННО-ЭКОЛОГИЧЕСКИЕ И ФИТОЦЕНОТИЧЕСКИЕ УСЛОВИЯ ЛЕСНЫХ ЭКОСИСТЕМ МОСКОВСКОЙ ОБЛАСТИ Специальность 03.02.08 – экология (биология) АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Владимир 2013 Работа выполнена в лаборатории моделирования экосистем Федерального государственного бюджетного учреждения науки Института физико-химических и биологических проблем почвоведения...»

«Карганова Галина Григорьевна МЕХАНИЗМЫ МИКРОЭВОЛЮЦИИ ВИРУСА КЛЕЩЕВОГО ЭНЦЕФАЛИТА 03.00.06 – вирусология Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук МОСКВА - 2009 2 Работа выполнена в Государственном учреждении Институт полиомиелита и вирусных энцефалитов имени М.П. Чумакова РАМН Научный консультант : доктор медицинских наук, профессор, академик РАМН Лашкевич Василий Андреевич Официальные оппоненты : доктор биологических наук, профессор,...»

«УДК 577.151 РУДАКОВА НАТАЛЬЯ ЛЕОНИДОВНА НОВАЯ СЕКРЕТИРУЕМАЯ МЕТАЛЛОЭНДОПЕПТИДАЗА BACILLUS INTERMEDIUS 03.02.03 – микробиология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Казань – 2010 Работа выполнена в лаборатории биосинтеза и биоинженерии ферментов кафедры микробиологии биолого-почвенного факультета ГОУ ВПО Казанский государственный университет им. В.И. Ульянова-Ленина. Научный руководитель : Кандидат биологических наук, старший научный...»

«Осипов Денис Иванович Характеристика количественного развития и видового разнообразия зоопланктонных сообществ водоёмов с разным уровнем радиоактивного загрязнения Специальность 03.01.01 Радиобиология Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Москва 2011 2 Работа выполнена в экспериментальном отделе Уральского научно-практического центра радиационной...»

«Ваганова Екатерина Сергеевна ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ СЕЗОННОЙ ДИНАМИКИ СОДЕРЖАНИЯ ТЯЖЕЛЫХ МЕТАЛЛОВ В ВОДНЫХ ЭКОСИСТЕМАХ (НА ПРИМЕРЕ МАЛЫХ РЕК УЛЬЯНОВСКОЙ ОБЛАСТИ) Специальность 03.02.08 – экология (химические наук и) АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук Нижний Новгород – 2011 Работа выполнена на кафедре Химия Федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования Ульяновский...»

«Донских Екатерина Евгеньевна Молекулярный и микробиологический мониторинг становления микрофлоры кишечника новорожденных 03.02.03.- микробиология Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук МОСКВА – 2010 1 Работа выполнена в Государственном Образовательном Учреждении Высшего профессионального образования Российский Государственный Медицинский Университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию. Научные...»

«ХОЛОДОК Галина Николаевна МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ И ПАТОГЕНЕТИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ ВНЕБОЛЬНИЧНОЙ ПНЕВМОНИИ У ДЕТЕЙ 03.02.03 микробиология Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук Москва 2012 Работа выполнена в Хабаровском филиале Федерального государственного бюджетного учреждения Дальневосточный научный центр физиологии и патологии дыхания Сибирского отделения РАМН – Научно– исследовательском институте охраны материнства и детства Научные...»

«Борисанова Анастасия Олеговна МИКРОСКОПИЧЕСКАЯ АНАТОМИЯ И УЛЬТРАСТРУКТУРА КОЛОНИАЛЬНЫХ KAMPTOZOA НА ПРИМЕРЕ ВИДА BARENTSIA DISCRETA (BUSK, 1886) Специальность 03.02.04 – зоология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учёной степени кандидата биологических наук Москва, 2013 Работа выполнена на кафедре зоологии беспозвоночных биологического факультета Московского государственного университета имени М.В. Ломоносова Научный руководитель : чл.- кор. РАН, профессор Малахов Владимир...»

«АХМАДИШИНА ЛЕЙСАН ЗИНУРОВНА ПОЛИМОРФИЗМ ГЕНОВ ФЕРМЕНТОВ МОНООКСИГЕНАЗНОЙ СИСТЕМЫ И АНТИОКСИДАНТНОЙ ЗАЩИТЫ У БОЛЬНЫХ ХРОНИЧЕСКИМИ ЗАБОЛЕВАНИЯМИ ДЫХАТЕЛЬНОЙ СИСТЕМЫ В РЕСПУБЛИКЕ БАШКОРТОСТАН 03.00.15- генетика АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук УФА-2007 2 Работа выполнена в Институте биохимии и генетики Уфимского научного центра Российской академии наук доктор медицинских наук, профессор Научный руководитель : Викторова Татьяна...»

«ДАНИЛОВ Игорь Геннадьевич ИСКОПАЕМЫЕ ЧЕРЕПАХИ СЕМЕЙСТВА LINDHOLMEMYDIDAE И ФИЛОГЕНЕТИЧЕСКИЕ ОТНОШЕНИЯ В ГРУППЕ СКРЫТОШЕЙНЫХ ЧЕРЕПАХ (CRYPTODIRA) Специальность 03.00.08 – Зоология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Санкт-Петербург 2001 Работа выполнена в Лаборатории орнитологии и герпетологии Зоологического института РАН Научные руководители: доктор биологических наук В. Б. Суханов...»

«Рамазанов Магомед Валединович СРАВНИТЕЛЬНОЕ БИОХИМИЧЕСКОЕ И ИММУНОХИМИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ ТКАНЕВЫХ И СЫВОРОТОЧНЫХ ЖЕЛЕЗОСОДЕРЖАЩИХ БЕЛКОВ 03.01.04 - биохимия Автореферат диссертации на соискание учёной степени кандидата биологических наук Казань 2012 Работа выполнена в Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования Астраханская государственная медицинская академия Министерства здравоохранения и социального развития (ГБОУ ВПО АГМА...»

«Болтаг Альбина Хафизовна ЦИТОЭМБРИОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ СИСТЕМЫ РАЗМНОЖЕНИЯ РАСТЕНИЙ НЕКОТОРЫХ СОРТО- И ВИДООБРАЗЦОВ РОДА FESTUCA L. 03.02.01 – ботаника Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Саратов - 2010 1 Работа выполнена в государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования Саратовский государственный университет имени Н.Г. Чернышевского в Учебно-научном центре Ботанический сад Научный руководитель...»

«Полякова Наталья Игоревна ОСОБЕННОСТИ НАКОПЛЕНИЯ 137CS У РЫБ РАЗНЫХ ТРОФИЧЕСКИХ УРОВНЕЙ ИЗ ВОДОЕМОВ, ЗАГРЯЗНЕННЫХ РАДИОНУКЛИДАМИ В РЕЗУЛЬТАТЕ АВАРИИ НА ЧЕРНОБЫЛЬСКОЙ АЭС Специальность 03.00.10 – ихтиология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук МОСКВА - 2008 Работа выполнена в Институте проблем экологии и эволюции им. А.Н. Северцова РАН. Научный руководитель : доктор биологических наук, профессор М. И. Шатуновский Институт проблем...»

«Белов Алексей Алексеевич РАЗРАБОТКА ПРОМЫШЛЕННЫХ ТЕХНОЛОГИЙ ПОЛУЧЕНИЯ НОВЫХ МЕДИЦИНСКИХ МАТЕРИАЛОВ НА ОСНОВЕ МОДИФИЦИРОВАННЫХ ВОЛОКНООБРАЗУЮЩИХ ПОЛИМЕРОВ, СОДЕРЖАЩИХ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫЕ БЕЛКОВЫЕ ВЕЩЕСТВА 03.00.23 - биотехнология Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора технических наук МОСКВА - 2009 Работа выполнена в отделе биотехнологии ОАО Научно - Исследовательского института текстильных материалов, г. Москва. доктор химических наук, Научные...»

«Мустаев Олег Зинурович ВЛИЯНИЕ ПРОПОФОЛА И КЕТАМИНА НА ПРОЦЕСС ЛИПИДПЕРОКСИДАЦИИ КРОВИ И ЕГО КОРРЕКЦИЯ АЛЬФА – ТОКОФЕРОЛОМ У БОЛЬНЫХ ПРИ ХОЛЕЦИСТЭКТОМИИ 03.00.04 – биохимия Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Тюмень – 2006 Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования Тюменская государственная медицинская академия Федерального агенства по здравоохранению и социальному развитию...»

«3 МОСКОВСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ имени М. В. Ломоносова _ ФАКУЛЬТЕТ ПОЧВОВЕДЕНИЯ НА ПРАВАХ РУКОПИСИ Куликова Наталья Александровна СВЯЗЫВАЮЩАЯ СПОСОБНОСТЬ И ДЕТОКСИЦИРУЮЩИЕ СВОЙСТВА ГУМУСОВЫХ КИСЛОТ ПО ОТНОШЕНИЮ К АТРАЗИНУ 03.00.27 –ПОЧВОВЕДЕНИЕ АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Москва- Работа выполнена на кафедре общего земледелия факультета почвоведения Московского Государственного Университета имени М. В. Ломоносова. Научные...»








 
© 2013 www.diss.seluk.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Авторефераты, Диссертации, Монографии, Методички, учебные программы»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.