WWW.DISS.SELUK.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА
(Авторефераты, диссертации, методички, учебные программы, монографии)

 

На правах рукописи

КАЛМЫКОВА ЕЛЕНА ВАСИЛЬЕВНА

ИССЛЕДОВАНИЕ АССОЦИАЦИЙ ПОЛИМОРФНЫХ МАРКЕРОВ

ГЕНОВ ИНТЕРЛЕЙКИНОВ С ХРОНИЧЕСКИМ

ГЛОМЕРУЛОНЕФРИТОМ

03.00.15 генетика

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва – 2009

Работа выполнена на кафедре медико-биологических дисциплин Государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования государственный «Белгородский университет»

Научный руководитель:

доктор медицинских наук, профессор Чурносов Михаил Иванович

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор Щипков Валерий Петрович доктор биологических наук, профессор Спицын Виктор Алексеевич

Ведущая организация:

ГОУ ВДО «Российская медицинская академия последипломного образования Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Защита состоится « 2009 г. в « » часов на заседании »

диссертационного совета Д 212.203.05 при ГОУ ВПО «Российский университет дружбы народов» по адресу: 117198, г. Москва, ул. МиклухоМаклая, д. 8.

С диссертацией можно ознакомиться в Научной библиотеке ГОУ ВПО «Российский университет дружбы народов» по адресу: 117198, г. Москва, ул. Миклухо-Маклая, д. 6.

Автореферат разослан «»2009 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат биологических наук, доцент О.Б. Гигани

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. В настоящее время хронический гломерулонефрит (ХГН) представляет серьезную проблему современной медицины в связи с тяжестью болезни и широкой распространенностью в разных регионах мира [Полещук, 2006]. В нашей стране ежегодно с диагнозом хронический гломерулонефрит госпитализируется около 1от всех терапевтических больных. В структуре всей почечной патологии, составляющей около 200 случаев на 100 тыс. населения, ХГН является наиболее частым заболеванием, доля которого достигает 40% [Мартынов, 2006]. Следует отметить, что заболевание поражает преимущественно лица трудоспособного возраста, что наносит значительный социальный и экономический ущерб [Кутырина, 2006].





ХГН нередко приводит к летальности в связи с достижением терминальной стадии хронической почечной недостаточности [Картамышева и др., 2006; Ермоленко, 2006; Бадаева, 2006].

Хронический гломерулонефрит является генетически детерминированным иммуновоспалительным заболеванием [Шулутко, 2006], важное значение в развитии которого, как свидетельствуют данные литературы, играют интерлейкины [Корякова, 2006; Петросян, 2006; Симбирцев, 2006]. Интерлейкины – полипотентные вещества белковой природы, обладающие множественными биологическими эффектами [Хабелова, 2007]. Являясь начальным звеном активации иммунного ответа, они определяют эффективность и тип иммунного реагирования на инфекционные и неинфекционные агенты, принимают непосредственное участие в регуляции иммунологической защиты [Кетлинский, 2008; Галова, 2008].

Гены интерлейкинов обладают значительной популяционной вариабельностью. Определенные мутации в генах, кодирующих соответствующие интерлейкины, значительно изменяют уровень их экспрессии, что может влиять на развитие хронического воспалительного процесса [Симбирцев, 2006]. Однако результаты молекулярно-генетических исследований хронического гломерулонефрита разных авторов часто различаются и не дают однозначного ответа на вопрос о патогенетической роли отдельных полиморфизмов генов интерлейкинов [Acharya, 2005; Петросян, 2006;

Chen, 2008; Mller-Berghaus, 2008]. Кроме того, в России такие исследования затрагивают лишь ограниченный набор локусов: гены ренин-ангиотензиновой системы [Кутырина, 2006; Шарнова, 2006], интерлейкинов [Петросян, 2006], факторов некроза опухоли [Некипелова, 2007]. Данные по изучению ассоциаций генов антагониста рецептора интерлейкина 1, интерлейкина 1А, интерлейкина 1В, интерлейкина 5, интерелейкина 9 с ХГН в отечественной литературе отсутствуют, а в мировой литературе малочисленны [Kim, 2004;

Buraczynska, 2006; Dashash, 2007]. Это диктует необходимость проведения дальнейших исследований в данной области.

Цель исследования:

интерлейкинов и оценить их патогенетическую значимость для хронического гломерулонефрита.

Задачи исследования:

1. Изучить распространенность полиморфизмов по шести точечным заменам (-511C/T IL-1B, -889C/T IL-1, C-703T IL-5, T113M ILC/A IL-10, -4257G/A IL-13) и одному локусу с вариабельным числом тандемных повторов (VNTR IL-1Ra) генов интерлейкинов у больных хроническим гломерулонефритом и в популяционном контроле.

2. Установить роль молекулярно-генетических маркеров в формировании хронического гломерулонефрита.

3. Провести анализ ассоциаций полиморфизмов генов интерлейкинов с качественными патологическими фенотипами ХГН.

4. Оценить влияние аллельных вариантов генов интерлейкинов на изменчивость клинически значимых количественных признаков ХГН.





5. Определить взаимосвязи генетических полиморфизмов с почечной выживаемостью и скоростью прогрессирования хронического гломерулонефрита.

Научная новизна. Впервые комплексно изучен полиморфизм генов интерлейкина 1В (-511C/T IL-1B), интерлейкина 1A (-889C/T ILинтерлейкина 5 (C-703T IL-5), интерлейкина 9 (T113M IL-9), интерлейкина 10 (-592C/A IL-10), интерлейкина 13 (-4257G/A IL-13) и локусу с вариабельным числом тандемных повторов антагониста рецептора интерлейкина 1 (VNTR IL-1Ra) у больных хроническим гломерулонефритом русской национальности, являющихся уроженцами Центрального Черноземья РФ.

Впервые выявлены ассоциации полиморфных маркеров генов интерлейкинов с особенностями проявления хронического гломерулонефрита.

Впервые показан аддитивный характер взаимодействий генов интерлейкинов при развитии заболевания и их плейотропное действие на формирование клинически значимых качественных и количественных признаков хронического гломерулонефрита.

Впервые установлено значимое влияние генетических полиморфизмов интерлейкинов на почечную выживаемость и характер прогрессирования ХГН.

Научно-практическое значение. Результаты работы вносят вклад в расшифровку механизмов патогенеза хронического гломерулонефрита, формирование представлений о молекулярно-генетических основах заболевания.

Выделены генетические факторы риска развития неблагоприятных качественных и количественных клинически значимых признаков ХГН.

Определены генетические маркеры раннего развития хронической почечной недостаточности.

Установлены неблагоприятные прогностические факторы, снижающие почечную выживаемость – аллели -889СС IL-1A, -592А ILполиморфизм -511C/T IL-1B в сочетании с паратипическими факторами.

Генотипирование больных ХГН по генам интерлейкинов позволит определять индивидуальную предрасположенность к тяжелому течению болезни, с целью разработки комплекса лечебно-профилактических мероприятий, направленных на предотвращение неблагоприятного исхода ХГН.

Положения, выносимые на защиту:

1. Полиморфизмы генов интерлейкинов ассоциированы с клинически значимыми качественными и количественными признаками хронического гломерулонефрита.

2. Молекулярно-генетические маркеры проявляют плейотропное действие при формировании ХГН.

3. Аллельные варианты генов интерлейкинов оказывают аддитивное влияние на патогенетически значимые признаки ХГН.

4. Скорость развития терминальной хронической почечной недостаточности на 10-16% определяется генетическим полиморфизмом VNTR IL-1Ra и сочетанием C-703T IL-5 с VNTR IL-1Ra или -592C/A ILПолифакторность и разнонаправленность генетической и средовой детерминации почечной выживаемости.

Апробация работы. Основные результаты диссертации доложены и обсуждены на: Годичной научной конференции сотрудников Белгородского государственного университета (Белгород, 2006, 2007, 2008), Российской научной конференции с международным участием «Медико-биологические аспекты мультифакториальной патологии»

(Курск, 2006), Международной конференции "Генетика в России и мире", посвященной 40-летию Института общей генетики им. Н.И.

Вавилова РАН (Москва, 2006), Международном конгрессе «Здоровье и образование в XXI веке; концепции болезней цивилизации» (Москва, 2007), 71-й и 72-ой научных конференциях КГМУ и сессии ЦентральноЧерноземного научного центра РАМН (Курск, 2006, 2007), 73-й итоговой межвузовской научной конференции молодых ученых «Молодежная наука и современность» (Курск, 2008).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано печатных работ, в том числе 5 в журналах из списка ВАК.

Объем и структура диссертации. Работа изложена на страницах машинописного текста, включает в себя 18 таблиц, рисунка. Состоит из введения, 4 глав, заключения и выводов.

Библиографический список включает 228 источников, из них отечественных и 120 иностранных.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Материал исследования. Анализ полиморфизмов генов интерлейкинов проводили на материале двух выборок: 238 больных хроническим гломерулонефритом (127 мужчин и 111 женщин) и человек популяционного контроля (125 мужчин и 116 женщин) в возрасте от 15 до 79 лет.

Формирование выборок больных и популяционного контроля осуществлялось сплошным методом. В них включались индивидуумы русской национальности, являющиеся уроженцами Белгородской области и не имеющие родства между собой. Пациенты включались в группу больных только после установления диагноза заболевания, подтвержденного с помощью клинических и лабораторноинструментальных методов обследования. Клиническое обследование и диагностика проводились сотрудниками отделения нефрологии Белгородской областной клинической больницы (заведующая отделением - к.м.н. Некипелова Е.В.).

Исследовали 7 полиморфных вариантов генов интерлейкинов, имеющих важное значение в развитии иммуновоспалительных заболеваний [Bidwell, 1999; Пузырев, 2002; Фрейдин, 2002; Дубаков, 2004; Сазонов, 2005; Liu, 2005; Acharya, 2005; Петросян, 2006;

Шабалдин, 2006б]: интерлекина 1В (-511C/T IL-1B), интерлейкина 1А (C/T IL-1А), антагониста рецептора интерлейкина 1 (VNTR IL-1Ra), интерлейкина 5 (C-703T IL-5), интерлейкина 9 (T113M IL-9), интерлейкина 10 (-592C/A IL-10), интерлейкина 13 (-4257G/A IL-13).

Данные интерлейкины синтезируются сразу же после стимуляции инфекционными и воспалительными медиаторами, обладают множеством биологических эффектов и действуют как системно, так и локально [Тареева, 1998; Корякина, 2001]. Мутантные аллели генов интерлейкинов способны изменять уровень секреции соответствующих интерлейкинов [Parry, 1999; Hutyrov, 2002, Mathieson, 2002; Tenbrock, 2002; Ruzzo, 2005; Ulukaya, 2008; Girnita, 2008 и др.]. Были рассмотрены взаимосвязи указанных локусов с количественными и качественными признаками, характеризующими хронический гломерулонефрит.

Методы исследования. Молекулярно-генетические методы.

ДНК выделяли из периферической крови методом фенольнохлороформной экстракции [Mathew, 1984].

Анализ всех локусов осуществлялся методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) синтеза ДНК. ПЦР проводилась на амплификаторе «Терцик-МС4» производства компании “ДНКтехнология” с использованием ДНК-полимеразы Thermus aquaticus производства фирмы “Силекс-М” и олигонуклеотидных праймеров, синтезированных фирмой «Синтол» (табл. 1).

Генотипирование ДНК-маркеров производилось методом анализа полиморфизма длины рестрикционных фрагментов (ПДРФ) продуктов ПЦР-амплификации специфических участков генома с использованием соответствующих ферментов рестрикции производства ООО "Сибэнзим" (Новосибирск) (табл. 1).

Структура праймеров и ферменты рестрикции, использованные для генотипирования ДНК-маркеров методом ПЦР IL-1A IL-1B IL-1Ra IL- IL- IL- IL- Статистические методы. Формирование базы данных и статистические расчеты осуществлялись с использованием программы «STATISTICA 6.0». Определение фенотипических и генных частот проводили стандартными методами [Животовский, 1983]. Для оценки соответствия наблюдаемого распределения генотипов ожидаемому, исходя из равновесия Харди-Вайнберга, использован критерий 2 [Вейр, 1995].

Ассоциации аллелей и генотипов изученных ДНК-маркеров с предрасположенностью к хроническому гломерулонефриту, а также с качественными признаками, характеризующими его клинические особенности, оценивали с помощью анализа таблиц сопряженности 2х с расчетом критерия 2 с поправкой Йетса на непрерывность и отношения шансов (OR) с 95% доверительными интервалами (CI) количественными патогенетически значимыми признаками ХГН и полиморфизмами генов интерлейкинов изучали с помощью однофакторного и двухфакторного дисперсионного анализа [Лакин, 1990]. В данном иследовании в силу малочисленности групп гомозигот по редким аллелям их объединяли с гетерозиготами. Анализ ассоциаций почечной выживаемости с полиморфными генетическими маркерами проведен методом множительных оценок Каплан-Майера [Реброва, 2002]. Влияние генетических и средовых факторов на почечную выживаемость изучали с применением регрессионной модели Кокса [Реброва, 2002].

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Исследование ассоциаций генетических полиморфизмов интерлейкинов с качественными и количественными патогенетически значимыми для хронического гломерулонефрита признаками.

Анализ полученных данных показывает, что практически для всех изученных локусов в группе больных ХГН и в популяционной выборке эмпирическое распределение генотипов соответствует теоретически ожидаемому при равновесии Харди-Вайнберга (p0,05) (табл. 2).

Исключение составил локус -4257G/A IL-13: среди больных ХГН выявлено отклонение от равновесия Харди-Вайнберга за счет снижения наблюдаемой гетерозиготности по сравнению с ожидаемой (2=7,56, p0,01, D=-0,23).

Максимальное разнообразие по локусам, оцененное на основании величины фактической гетерозиготности, отмечено для C-703T IL-5 и С/А IL-10. Уровень аллельного разнообразия по изученным локусам варьировал от Н0=0,29 (для локуса T113M IL-9) до Н0=0,44 (для локуса C-703T IL-5) в популяционной выборке и от Н0=0,31 (-4257G/A IL-13) до Н0=0,44 (-592С/А IL-10) среди больных ХГН. Полученные результаты соответствует литературным данным по другим популяциям [Огородова, 2003; Петросян, 2006; Шабалдин, 2007].

Сравнительное исследование частот генов и генотипов полиморфных локусов интерлейкинов между больными ХГН и популяционным контролем не выявило достоверных различий. Это согласуется с литературными данными, свидетельствующими о значимой роли генов интерлейкинов в патогенезе хронического гломерулонефрита, но не в возникновении данного заболевания [Ozen, 1999; Тареева, 2000]. На следующем этапе работы, исходя из функциональной роли интерлейкинов в развитии иммуновоспалительных процессов, проводилось исследование ассоциаций полиморфных маркеров интерлейкинов с патогенетическими признаками хронического гломерулонефрита.

Из полученных результатов следует, что все рассмотренные нами полиморфные генетические маркеры интерлейкинов ассоциированы с различными клинически значимыми качественными и количественными признаками хронического гломерулонефрита. Установлено, что у пациентов с генотипами 2R/2R, 2R/4R VNTR локуса IL-1Ra при начале Распределение генотипов, наблюдаемой (N0) и ожидаемой (NE) гетерозиготности, индекса фиксации (D) полиморфных маркеров генов интерлейкинов среди больных ХГН и в популяционном контроле -511 С/Т IL-1B -889 C/T IL-1A VNTR IL-1Ra C-703T IL- T113M IL- -592С/А IL- -4257G/A IL- заболевания гематурический синдром был зарегистрирован в 2,5 раза чаще, чем у носителей генотипа 4R/4R (28,4% против 11,4%; OR=3,15;

95%CI 1,38-7,26; 2=8,15; р=0,005). Наряду с этим, обнаружена ассоциация генотипа 4R/4R Ra с остронефритическим синдромом при формировании ХГН, который отмечался у 35,7% больных с генотипом 4R/4R против 16,7%-22,4% у пациентов с другими генотипами (OR=2,15; 95%CI 1,09-4,30; 2=4,80; р=0,03), а также с формированием смешанного типа ХГН при обострении заболевания:

доля индивидуумов с указанной формой гломерулонефрита составила 29,7% среди больных, имеющих указанный генотип, против 8-18% у пациентов с другими генотипами (OR=2,43; 95%CI 1,15-5,17; 2=5,58;

р=0,02). Таким образом, полученные данные свидетельствуют о плейотропном характере влияний VNTR полиморфизма IL-1Ra на развитие ХГН.

Полиморфизм -889C/T IL-1А взаимосвязан с гематурическим синдромом при возникновении ХГН и уровнем протеинурии (в сочетании с другими полиморфизмами). Установлено, что у пациентов с генотипом -889СС гена IL-1А заболевание достоверно чаще проявлялось гематурическим синдромом в начале заболевания по сравнению с группой пациентов – носителей других генотипов: 23,2% и 12,1% соответственно (OR=2,10; 95%CI 1,01-5,04; 2=3,63; р=0,05). Поскольку последовательностях генов, они могут затрагивать уровень белковой экспрессии. Из работы Hutyrova (2002) следует, что у здоровых индивидуумов, гомозиготных по аллелю -889С IL-1А, плазменные уровни IL-1А увеличены по сравнению с носителями других генотипов.

Следовательно, наличие аллеля -889С IL-1А, обладающего провоспалительным эффектом, может приводить к более острому и тяжелому началу заболевания.

Установлено, что аллель -592A IL-10 ассоциирован с развитием нефротического синдрома при возникновении ХГН и формированием смешанного типа заболевания при его течении. Получено, что у больных ХГН - носителей аллеля -592А IL-10 частота проявления нефротического синдрома при возникновении заболевания составила 39,7%, что значительно превысило число случаев выявления данного синдрома среди пациентов без этого аллеля (26,3%; OR=1,90; 95%CI 1,01-3,62; 2=3,82; р=0,05). Частота встречаемости смешанного типа ХГН у пациентов с генотипами -592АА, -592АС IL-10 составила 29,4% против 17,4% у индивидуумов с генотипом -592СС (OR=2,01; 95%CI 1,01-4,15; 2=3,66; р=0,05). Функциональные механизмы полученных ассоциаций могут быть связаны с влиянием интерлейкина 10 на аллергическое и эффекторное звенья хронического гломерулонефрита, посредством активации лимфоцитов, тучных и других клеток, участвующих в патогенезе заболевания [Фрейдин, 2002]. Наличие в генотипе больных ХГН аллеля -592A IL-10, увеличивающего экспрессию интерлейкина 10, приводит к индукции Е-селектина, что, в свою очередь, способствует увеличению нейтрофильной инфильтрации в очаге острого воспаления, повышению пролиферации и дифференцировки В-клеток, увеличению антителозависимой клеточной цитотоксичности [Вашурина, 2002].

Полиморфный маркер -4257G/А IL-13 оказывает плейотропное влияние на формирование тяжелой артериальной гипертензии в течении заболевания, развитие умеренной протеинурии и возникновение гематурии. Частота генотипа -4257AA IL-13 у больных с уровнем артериального давления 160/110 более чем в 3 раза превысила долю этого генотипа в контрольной группе (20,69% и 6,54% соответственно;

OR=3,53; 95%CI 1,33-9,70; 2=3,99; р=0,05). Выявлено достоверное снижение частоты аллеля -4257G и увеличение доли генотипа -4257AА IL-13 у больных без гематурии в сравнении с контрольной группой (61,11% (OR=0,49; 95%CI 0,26-0,95; 2=4,74; р=0,03) и 27,58% (OR=4,16;

95%CI 2,01-12,04; 2=5,40; р=0,02) против 76,10% и 6,54% в контроле).

По данным Петросяна Э.К. и др. (2006) генотип -4257АА гена ИЛ повышает концентрацию ИЛ13, IgE и может рассматриваться как маркер развития атопической реакции в генезе гломерулонефрита.

Дисперсионный анализ взаимосвязей полиморфных генетических маркеров интерлейкинов со среднесуточной протеинурией у больных ХГН выявил, что пациенты с генотипами 2R/5R, 4R/5R IL-1Ra и AA IL-13 имеют достоверно более высокий уровень протеинурии по сравнению с больными без этих генотипов (р0,05). У индивидуумов с генотипами 2R/5R, 4R/5R среднесуточная протеинурия составила 3, г/сут., тогда как у пациентов с другими генотипами по этому локусу данный показатель равен 1,60-2,23 г/сут. Среднесуточная протеинурия у пациентов с генотипом -4257AA IL-13 составила 4,70 г/cут. против 2, г/сут. и 2,37 г/сут. у больных ХГН с генотипами -4257GG и -4257AG соответственно (р=0,05). Сила влияния полиморфизмов -4257G/A IL- и VNTR IL-1Ra на формирование высокого уровня протеинурии, оцененная с помощью дисперсионного анализа, составила h2=5,08% и h2=9,96% соответственно.

С целью анализа эффектов совместного действия изучаемых генов на уровень протеинурии был проведен двухфакторный дисперсионный анализ. Его результаты свидетельствуют о том, что сочетания полиморфизмов -889C/T IL-1A и VNTR IL-1Ra, а также -889C/T IL-1A и -4257G/A IL-13 оказывают достоверно значимое влияние на уровень протеинурии у больных ХГН. Коэффициент детерминации (h2), показывающий какая доля изменчивости уровня протеинурии обусловлена генотипами рассматриваемых генов, составил 20,22% для локусов -889C/T IL-1A и -4257G/A IL-13 и 35,36% для локусов -889C/T IL-1A и VNTR IL-1Ra.

Следует отметить значительное усиление влияния исследованных генетических полиморфизмов на уровень протеинурии в составе парных «ансамблей» (h2=25-30%) по сравнению с их моноэффектами (h2=5что может свидетельствовать об аддитивном характере взаимодействия вышерассмотренных полиморфизмов генов интерлейкинов при формировании такого патогенетически значимого для хронического гломерулонефрита количественного признака как уровень протеинурии.

Изучение взаимосвязей полиморфных маркеров генов интерлейкинов со скоростью прогрессирования ХГН.

В связи с особой значимостью для нефрологии проблемы прогрессирования хронического гломерулонефрита, связанной с необходимостью проведения гемодиализа и трансплантации почки при ее гибели [Картамышева и др., 2003; Игнатова, 2005], мы изучили взаимосвязи полиморфных маркеров интерлейкинов со скоростью прогрессирования хронического гломерулонефрита.

Для изучения ассоциации молекулярно-генетических маркеров c прогрессированием хронического гломерулонефрита нами была сформирована выборка больных ХГН, достигших терминальной стадии почечной недостаточности (ТХПН) (n=71). Оценка распределения генотипов и аллелей полиморфных маркеров интерлейкинов в этой выборке больных и среди контроля выявила следующую особенность.

Частота генотипа -703СС IL-5 у больных в терминальной стадии ХПН достоверно превышала частоту этого генотипа в контрольной группе (64,15% и 49,7% соответственно), что позволяет считать генотип -703СС маркером развития ТХПН (ОR=1,97; 95%CI 1,01-3,39; 2=3,88, р=0,05).

При исследовании длительности ХГН до развития ТХПН в зависимости от генотипов рассматриваемых молекулярно-генетических маркеров установлены статистически значимые взаимосвязи VNTRполиморфизма антагониста рецептора интерлейкина 1 с временем развития ТХПН от начала заболевания. На основе дисперсионного анализа показано, что раньше всего терминальной стадии ХПН достигали индивидуумы с генотипом 4R/4R (р=0,04): у пациентов с данным генотипом ТХПН развивается через 5,99 лет против 8,25-11, лет при других генотипах по данному локусу. Степень влияния полиморфизма антагониста рецептора интерлейкина 1 на характер прогрессирования ХГН, оцененная с использованием коэффициента детерминации, весьма существенна и составляет 10,31%.

Результаты двухфакторного дисперсионного анализа влияния парных комбинаций исследуемых генетических полиморфизмов на время развития ТХПН от начала ХГН позволяют заключить, что совместное действие полиморфизмов C-703T IL-5 с VNTR IL-1Ra или С/А IL-10 обусловливает более раннее развитие ТХПН у больных хроническим гломерулонефритом. Полученные коэффициенты детерминации для сочетаний данных полиморфизмов – 15,73% и 13,49% соответственно, свидетельствуют о том, что указанные комбинации молекулярно-генетических маркеров оказывают существенное влияние на скорость развития ТХПН. Такой эффект можно объяснить с позиций клеточных механизмов иммунного воспаления: согласно данных литературы [Огородова, 2000; Вашурина, 2000] аллели -703С IL-5 и А IL-10 обусловливают повышенную продукцию соответствующих интерлейкинов, которые, в свою очередь, приводят к увеличению секреции IgE, обладающего атопическим эффектом: IgE связывается с помощью IgE-рецептора (FcRI) с тучными клетками слизистых оболочек, приводя к дегрануляции последних с освобождением провоспалительных субстанций и цитокинов, которые стимулируют миграцию эозинофилов и Th2 лимфоцитов в слизистые оболочки, в свою очередь приводя к развитию выраженного воспаления тканей [Хопкин, 1999]. При этом развитие более выраженного иммуновоспалительного процесса в гломерулах будет обусловливать и более высокую скорость прогрессирования ХГН, приводя к раннему развитию ТХПН.

Проведен анализ распределения частот аллелей и генотипов полиморфных маркеров интерлейкинов в группе больных ХГН в зависимости от уровня креатинина (n=138). Удвоение исходного уровня креатинина было выявлено у 34 пациентов с ХГН. Установлена ассоциация аллеля -703С и генотипа -703СС IL-5 с удвоением уровня креатинина. Величина отношения шансов составила 1,99 (95%CI 1,01р=0,05) и 2,02 (95%CI 1,01-4,20; 2=3,70; р=0,05) соответственно. Наряду с этим, частоты аллеля -592А и генотипа АА IL-10 у больных с удвоением креатинина значительно превысили соответствующие значения как в контрольной группе, так и в группе больных ХГН без удвоения креатинина. Полученные результаты позволяют считать аллель 592А и генотип -592АА IL-10 маркерами снижения функции почек (ОR=9,05; 95%CI 4,55-18,18; 2=48,09; р=0,00;

ОR=17,02; 95%CI 6,07-48,64; 2=47,63; р=0,00 соответственно).

Примечательно и полное отсутствие генотипа -592CC у пациентов с удвоением креатинина при значительной доле этого генотипа в контрольной группе (58,67%; 2=35,30; р=0,00) и группе больных без удвоения креатинина (52,58%; 2=29,99; р=0,00).

Для оценки влияния изучаемых полиморфных генетических маркеров на скорость прогрессирования ХГН нами использовался метод множительных оценок Каплан-Майера [Боровиков, 2003]. Среди всех рассмотренных генетических полиморфизмов интерлейкинов статистически значимые взаимосвязи со скоростью прогрессирования ХГН были выявлены для локуса IL-1Ra. Согласно полученным данным у индивидуумов, носителей генотипов 2R/5R, 4R/5R наблюдается тенденция ускоренного падения функции почек (2=8,29; p=0,05) (рис.).

Следует подчеркнуть тот факт, что данные о значимом влиянии полиморфизмов C-703T IL-5, VNTR IL-1Ra, -592A/C IL-10 на скорость прогрессирования хронического гломерулонефрита нами получены на двух различных выборках больных ХГН: больные с ТХПН и больные с удвоением уровня креатинина, что свидетельствует об их надежности.

С целью установления факторов, обладающих неблагоприятным прогностическим значением для ХГН был проведен монофакторный анализ почечной выживаемости с использованием регрессионной модели Кокса. Установлено, что наличие аллеля -889C IL-1А, аллеля A IL-10 и артериальной гипертензии на протяжении ХГН ухудшают почечную выживаемость (табл. 3).

Учитывая возможную взаимосвязь факторов, влияющих на почечную выживаемость, был проведен многофакторный регрессионный анализ, который показал, что неблагоприятными прогностическими факторами являются: носительство аллеля -511T ILB (р=0,005), наличие нефротического синдрома на момент первого обследования (р=0,007) и артериальной гипертензии в течении ХГН (р=0,002).

Рис. Почечная выживаемость у больных ХГН в зависимости от генотипов полиморфного маркера VNTR IL-1Ra Монофакторный анализ влияния генетических и паратипических факторов на почечную выживаемость у больных Снижение функции почек на момент первого обследования Наличие нефротического синдрома на момент первого обследования Наличие артериальной гипертензии на протяжении ХГН 0,

ВЫВОДЫ

Полиморфизмы генов интерлейкинов -511C/T IL-1B, -889C/T IL-1А, VNTR IL-1Ra, C-703T IL-5, T113M IL-9, -592C/A IL-10, -4257G/A IL-13 ассоциированы с особенностями проявления и характером прогрессирования хронического гломерулонефрита.

Молекулярно-генетические маркеры интерлейкинов обнаруживают аддитивный характер взаимодействий при развитии заболевания. В формировании уровня протеинурии моноэффекты полиморфизмов VNTR IL-1Ra и -4257G/A IL-13, составляющие 5-10%, возрастают до 20-35% при их сочетании с полиморфизмом -889C/T ILА.

Полиморфные варианты -889C/T IL-1А, VNTR IL-1Ra, C/A IL-10, -4257G/A IL-13 оказывают плейотропное действие на формирование клинически значимых качественных и количественных признаков хронического гломерулонефрита.

Маркерами раннего развития хронической почечной недостаточности являются 4R/4R VNTR IL-1Ra, сочетание C-703T IL-5 с VNTR IL-1Ra или -592C/A IL-10. Данные полиморфизмы на 10-16% определяют ускоренный характер прогрессирования заболевания.

Носительство аллелей -889C IL-1А, -592A IL-10, наличие артериальной гипертензии на протяжении хронического гломерулонефрита в сочетании с аллелем -511Т IL-1В и нефротическим синдромом при возникновении заболевания являются неблагоприятными прогностическими факторами, снижающими почечную выживаемость.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

- вариабельное число тандемных повторов ТХПН - терминальная хроническая почечная недостаточность ХГН - хронический гломерулонефрит ХПН - хроническая почечная недостаточность

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ

ДИССЕРТАЦИИ

Калмыкова Е.В. Анализ полиморфизма генов хемокинов у больных хроническим гломерулонефритом / Е.В. Калмыкова, Е.В.

Некипелова, М.И. Чурносов // Материалы Российской научной конференции с международным участием «Медико-биологические аспекты мультифакториальной патологии». – 2006. – Т. II. – С. 7-10.

Калмыкова Е.В. Анализ распределения частот аллелей и генотипов у больных хроническим гломерулонефритом / Е.В.

Калмыкова, Е.В. Некипелова, М.И. Чурносов // Университетская наука:

Взгляд в будущее. Сборник трудов 71-й научной конференции КГМУ и сессии Центрально Черноземного центра РАМН. – Курск: КГМУ, 2006.

– Т. 1. – С. 149.

генетических маркеров для описания популяционной структуры населения / М.И. Чурносов, Е.В. Балановская, И.Н. Сорокина, И.Н.

Лепендина, Л.А. Цапкова, И.К. Аристова, В.Ю. Песик, Н.А. Рудых, М.С. Жерлицына, В.С. Ващилин, Е.В. Калмыкова, Е.В. Никипелова // Вестник новых медицинских технологий. – 2006. – Т. XIII, №2. – С.173Некипелова Е.В. Клиническое и молекулярно-генетическое исследование больных с хроническим гломерулонефритом / Е.В.

Некипелова, Е.В. Калмыкова, М.И. Чурносов // Вестник новых медицинских технологий. – 2006. – Т. XIII, №4. – С. 170 – 173.

Калмыкова Е.В. Полиморфизм гена антагониста рецептора интерлейкина 1 у больных с хроническим гломерулонефритом / Е.В.

Калмыкова // Вестник РГМУ. – 2007. – №2 (55). – С. 274.

Калмыкова Е.В. Распределение полиморфных маркеров гена интерлейкина 1В у больных хроническим гломерулонефритом / Е.В.

Калмыкова, Е.В. Некипелова, М.И. Чурносов // Научные труды VIII международного конгресса «Здоровье и образование в XXI веке;

концепции болезней цивилизации». – Москва, 2007. – С. 294-295.

Решетников Е.А. Генетическая изменчивость некоторых полиморфных систем среди населения Белгородской области / Е.А.

Решетников, Е.В. Калмыкова, М.И. Чурносов // Вестник РГМУ. – 2008.

– №2 (61). – С. 328.

иммунологических факторов в формировании хронической почечной недостаточности на фоне хронического гломерулонефрита / И.А.

Юшина, Е.В. Калмыкова, Е.В. Некипелова, М.И. Чурносов // Курский научно-практический вестник «Человек и его здоровье». – 2008. – №2.

– С. 116-125.

Калмыкова Е.В. Полиморфизм гена интерлейкина 1В и его роль в формировании хронического гломерулонефрита / Е.В.

Калмыкова, Е.В. Некипелова, М.И. Чурносов // Материалы 73-й итоговой межвузовской научной конференции студентов и молодых ученых «Молодежная наука и современность». – Курск, 2008. – С. 26.

Калмыкова Елена Васильевна (Россия) Исследование ассоциаций полиморфных маркеров генов интерлейкинов с хроническим гломерулонефритом Изучено распределение генетических полиморфизмов -511C/T ILB, -889C/T IL-1А, VNTR IL-1Ra, C-703T IL-5, T113M IL-9, -592C/A IL- 10, -4257G/A IL-13 среди больных хроническим гломерулонефритом (ХГН) и в популяционном контроле. Доказаны ассоциации полиморфных маркеров генов интерлейкинов с различными клинически значимыми качественными и количественными признаками хронического гломерулонефрита. Установлен аддитивный характер взаимодействий и плейотропное действие полиморфизмов генов интерлейкинов в формировании ХГН. Выявлены молекулярногенетические маркеры ускоренного прогрессирования хронического гломерулонефрита.

Research of associations of polymorphic markers of genes interleukins Distribution genetic polymorphysm -511C/T IL-1B,-889C/T IL-1А, VNTR IL-1Ra, C-703T IL-5, T113M IL-9,-592C/A IL-10,-4257G/A IL- among patients chronic glomerulonephritis and in the population control was studied. Associations of polymorphic markers of genes with various clinically significant qualitative and quantitative attributes chronic interleukins was proved. Additive character of interactions and plural action polymorphism genes interleukins in formation chronic glomerulonephritis was established.

Molekular-genetic markers of the accelerated progressing chronic glomerulonephritis was revealed.



 
Похожие работы:

«Лущаева Инна Владимировна Экология сульфатредуцирующих бактерий и их геохимическая деятельность в подземных водах палеогеновых отложений Обь-Томского междуречья 03.00.16 - Экология Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Томск-2007 Работа выполнена на кафедре физиологии растений и биотехнологии в ГОУ ВПО Томский государственный университет и в секторе общей микробиологии ОСП НИИ биологии и биофизики ТГУ Научный руководитель : доктор...»

«ФАРАФОНТОВА ЕКАТЕРИНА ИВАНОВНА МОЛЕКУЛЯРНЫЕ МЕХАНИЗМЫ АНТИАРИТМИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ПРЕПАРАТОВ 03.01.03 – молекулярная биология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Уфа – 2013 Работа выполнена в лаборатории молекулярной фармакологии и иммунологии Федерального государственного бюджетного учреждения науки Института биохимии и генетики Уфимского научного центра Российской академии наук Научный руководитель : Вахитова Юлия...»

«Кляйн Ольга Ивановна ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ БАЗИДИАЛЬНЫХ ГРИБОВ С ГУМИНОВЫМИ ВЕЩЕСТВАМИ 03.01.04 Биохимия АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук МОСКВА – 2013 Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении науки Институт биохимии им. А.Н. Баха Российской академии наук и Федеральном государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования Московский государственный университет имени М.В. Ломоносова...»

«Логинов Дмитрий Сергеевич СРАВНИТЕЛЬНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА НАТИВНОГО И РЕКОМБИНАНТНОГО ЛИГНОЛИТИЧЕСКОГО ФЕРМЕНТА – ЛАККАЗЫ Специальность 03.01.04 – биохимия АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учёной степени кандидата биологических наук МОСКВА 2010 Работа выполнена в лаборатории молекулярных основ биотрансформации Учреждения Российской академии наук Института биохимии им. А.Н. Баха РАН Научный руководитель : доктор биологических наук, профессор О.В. Королева Официальные...»

«Заводовский Петр Геннадьевич АФИЛЛОФОРОИДНЫЕ ГРИБЫ В ЛЕСНЫХ ЭКОСИСТЕМАХ ВОДЛОЗЕРЬЯ 03.02.12 – микология Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Москва – 2010 1 Работа выполнена на кафедре зоологии и экологии эколого-биологического факультета Петрозаводского государственного университета Научный руководитель : член-корр. РАН, доктор биологических наук,...»

«Тихонова Анастасия Геннадьевна Эритроциты как носители ферментов для окисления этанола 03.01.04 – биохимия АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Москва - 2010 Работа выполнена в Учреждении Российской Академии Медицинских наук Гематологический научный центр РАМН Научный руководитель : доктор биологических наук, профессор Атауллаханов Фазоил Иноятович Официальные оппоненты : Бирюкова Людмила Семеновна, доктор медицинских наук;...»

«БАЛАНДИНА Анна Николаевна Пороговые свойства системы свертывания крови in vitro при активации тканевым фактором 03.01.02 - биофизика АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Москва 2010 Работа выполнена в Учреждении Российской академии медицинских наук Гематологический научный центр РАМН и в Учреждении Российской академии наук Центр теоретических проблем физико-химической фармакологии РАН Научный руководитель : доктор биологических...»

«УДК 597.553.2:597-114.78 ПАВЛОВ Ефим Димитриевич Состояние половых желёз лососевых рыб в условиях интродукции Специальность 03.02.06 – ихтиология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учёной степени кандидата биологических наук Москва - 2011 г. Работа выполнена во Всероссийском научно-исследовательском институте рыбного хозяйства и океанографии (ФГУП ВНИРО). Научный руководитель : профессор, доктор биологических наук Микодина Екатерина Викторовна Официальные доктор...»

«БОЧКАЕВА (АДЬЯНОВА) Занда Владимировна Специфические особенности инициации трансляции на РНК вируса гепатита С 03.01.03 – Молекулярная биология Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Москва 2010 1 Работа выполнена на Факультете биоинженерии и биоинформатики Московского Государственного университета им. М.В. Ломоносова Научные...»

«АЛИМОВА ФАРИДА КАШИФОВНА Биологическое разнообразие видов рода Trichoderma (Fungi, Ascomycetes, Hypocreales) и их роль в функционировании микробиоты и защите растений в агроценозах различных почвенно - климатических зон на территории Республики Татарстан 03.00.07 - микробиология 06.01.11 - защита растений Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук КАЗАНЬ 2006 2 Работа выполнена на кафедрах микробиологии и биохимии Казанского...»

«МАМАДЮСУФОВА МЕНУ ГУЛОМАЙДАРОВНА ОСОБЕННОСТИ БИОХИМИЧЕСКИХ ПОКАЗАТЕЛЕЙ У ПШЕНИЦЫ И ЕЕ ДИКИХ СОРОДИЧЕЙ, ПРОИЗРАСТАЮЩИХ В РАЗНЫХ ЗОНАХ ТАДЖИКИСТАНА (03.01.04 –биохимия) АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Душанбе – 2014 1 Работа выполнена в Институте ботаники, физиологии и генетики растений Академии наук Республики Таджикистан Научный руководитель : доктор биологических наук, профессор Насырова Фируза Юсуфовна Официальные оппоненты :...»

«ПАНЬКОВ Александр Сергеевич МИКРОБИОЦЕНОЗ ДЫХАТЕЛЬНОЙ СИСТЕМЫ И МЕЖМИКРОБНЫЕ ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ ПРИ ГРИППЕ 03.02.03 - Микробиология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук Оренбург – 2012 Работа выполнена в Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования Оренбургская государственная медицинская академия Министерства здравоохранения Российской Федерации Научный консультант : доктор медицинских наук,...»

«ТУЖИКОВ АЛЕКСАНДР ИВАНОВИЧ СТРУКТУРА И СВОЙСТВА ФИТАСПАЗЫ NICOTIANA TABACUM 03.01.03 – Молекулярная биология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Москва – 2011 Работа выполнена в отделе химии и биохимии нуклеопротеидов Научно-исследовательского Института физико-химической биологии имени А.Н. Белозерского Московского государственного университета имени М.В. Ломоносова. доктор химических наук, профессор Научные руководители:...»

«ВОЛОДИНА Елена Владимировна ОРГАНИЗАЦИЯ ВОКАЛЬНОГО РЕПЕРТУАРА У ГЕПАРДА ACINONYX JUBATUS В НЕВОЛЕ Специальность: 03.00.08 - зоология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Москва 2000 Работа выполнена в отделе научных исследований Московского государственного зоологического парка профессор, доктор биологических наук Научный руководитель : А.А. Никольский доктор биологических наук Официальные оппоненты : В.В. Иваницкий кандидат...»

«Орлова Дарья Юрьевна КИНЕТИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ ПОВЕРХНОСТНЫХ И ВНУТРИКЛЕТОЧНЫХ ЛИГАНД-РЕЦЕПТОРНЫХ ВЗАИМОДЕЙСТВИЙ С ПОМОЩЬЮ ПРОТОЧНОЙ ЦИТОМЕТРИИ И ЛАЗЕРНОЙ СКАНИРУЮЩЕЙ МИКРОСКОПИИ 03.01.02 – биофизика Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата физико-математических наук Красноярск – 2011 Работа выполнена в Учреждении Российской академии наук Институте химической кинетики и горения Сибирского отделения РАН доктор физико-математических наук Научный...»

«БЕРСЕНЕВА Оксана Андреевна ЭКОЛОГО-МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА НАЗЕМНЫХ ЭКОСИСТЕМ В РАЙОНЕ ПРЕДПРИЯТИЙ АЛЮМИНИЕВОЙ ПРОМЫШЛЕННОСТИ 03.02.08 - экология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Улан-Удэ - 2010 Работа выполнена на кафедре физико-химической биологии Иркутского государственного университета Научный руководитель : доктор биологических наук, профессор Саловарова Валентина Петровна Официальные оппоненты : доктор...»

«Лихачева Ольга Викторовна ЛИШАЙНИКИ УСАДЕБНЫХ ПАРКОВ ПСКОВСКОЙ ОБЛАСТИ Специальность 03.02.12 – микология Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Псков, 2010 Диссертационная работа выполнена на кафедре альгологии и микологии Биологического факультета Московского государственного университета им. М.В. Ломоносова и на кафедре ботаники и экологии растений...»

«Урусов Александр Евгеньевич РАЗРАБОТКА И СРАВНИТЕЛЬНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА СИСТЕМ ЭКСПРЕССНОГО ИММУНОХИМИЧЕСКОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ МИКОТОКСИНОВ специальность 03.01.04 – биохимия АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук Москва 2012 Работа выполнена в лаборатории иммунобиохимии Федерального государственного бюджетного учреждения науки Института биохимии им. А.Н.Баха Российской академии наук Научные руководители: доктор химических наук, профессор...»

«Филатов Дмитрий Александрович БИОДЕГРАДАЦИЯ УГЛЕВОДОРОДОВ НЕФТИ В ПОЧВЕ С ПРИМЕНЕНИЕМ СВЕТОКОРРЕКТИРУЮЩИХ ПОЛИМЕРНЫХ ПЛЕНОК 03.00.16 - экология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Томск – 2009 Работа выполнена в лаборатории коллоидной химии нефти Института химии нефти Сибирского отделения Российской академии наук Научные руководители: доктор технических наук, профессор Алтунина Любовь Константиновна кандидат биологических наук,...»

«Губкин Андрей Александрович Динитрозильные комплексы железа, S-нитрозотиолы и коэнзим Q как антиоксиданты в системах, моделирующих окислительный стресс Специальность 03.00.02 биофизика АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата физико-математических наук Москва 2006 Работа выполнена на кафедре биофизики физического факультета МГУ им. М.В.Ломоносова и в НИИ экспериментальной кардиологии ФГУ РКНПК Росздрава. Научный руководитель : доктор физико-математических...»






 
© 2013 www.diss.seluk.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Авторефераты, Диссертации, Монографии, Методички, учебные программы»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.