WWW.DISS.SELUK.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА
(Авторефераты, диссертации, методички, учебные программы, монографии)

 

На правах рукописи

Репина Екатерина Николаевна

Функциональное состояние лейкоцитов крови

лабораторных животных при экспериментальной анемии и

влиянии фитоэкдистероидов serratula coronata l.

03.00.13 – физиология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Ярославль 2007

Работа выполнена на кафедре физиологии человека и животных ГОУ ВПО «Сыктывкарский государственный университет»

Научные руководители кандидат биологических наук, доцент Мойсеенко Н.А.

доктор биологических наук, профессор Федорова М.З.

Официальные оппоненты доктор медицинских наук, профессор Михайлов В.П.

кандидат биологических наук, доцент Пизов А.В.

Ведущая организация Российский университет дружбы народов

Защита состоится «» 2007 г. в «» час.

на заседании диссертационного совета Д 212.307.02 при ГОУ ВПО «Ярославский государственный педагогический университет им.

К.Д. Ушинского» (150000, Ярославль, ул. Республиканская, 108)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО «Ярославский государственный педагогический университет им.

К.Д. Ушинского».

Автореферат разослан «» 2007 г.

Ученый секретарь диссертационного совета кандидат биологических наук, доцент Тихомирова И.А.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Одной из важнейших проблем современной физиологии является исследование закономерностей процессов адаптации организма к различным факторам среды (Н.А.

Агаджанян и соавт, 1999; 2001; В.П. Казначеев, 1980; Ф.З. Меерсон, 1981; В.С. Новиков, 1998). Система крови, имея высокую реактивность, быстро включается в реакции на действие физиологических и экстремальных факторов среды, обеспечивая поддержание гомеостаза (Н.В. Васильев и соавт., 1992; П.Д.

Горизонтов и соавт., 1983; Г.И. Козинец и соавт., 2001; Б.Г. Юшков и соавт., 1999; 2001). Лейкоциты крови вовлечены в иммунные процессы (Р.В. Петров, Т.И. Ульянкина, 1995; В.А. Черешнев и соавт., 2002 и др.), играют важную роль в создании микрососудистого сопротивления (C.A. Alonso et al., 1995; M.T. Eppihimer, H.H.





Lipowsky, 1996; B.P. Helmke et al., 1997).

В последнее время значительно вырос интерес к изучению растительных экдистероидов, обладающих комплексом положительных свойств при отсутствии каких-либо побочных эффектов на организм животных и человека (Л.Д. Пчеленко и соавт., 2002; В.Н. Сыров, З.А. Хушбактова, 2001; Yu. D. Kholodova, 2001).

Показано, что растительные экдистероиды оказывают адаптогенное;

анаболическое; иммуномодулирующее и иммунокорригирующее;

антиоксидантное и антирадикальное; бактерицидное и противовоспалительное; улучшающее реологические свойства крови (В.В. Володин, 1999, 2006; Л.Ф. Осинская и соавт., 1992; М.Б.

Плотников и соавт., 1999; A.G. Kurmukov, O.A. Yermishina, 1991).

Известно влияние экдистероидов на пролиферацию клеток позвоночных (З. Саатов и соавт., 1979; K. Slama, 1993), что имеет важное значение при развитии анемий разного происхождения.

Фитоэкдистероиды – полигидроксилированные стерины, структурно идентичные или подобные гормонам линьки и метаморфоза насекомых. Теоретической основой их применения является физиологическое действие на организм млекопитающих, обусловленное свойством данных соединений стимулировать биосинтез белка без эффектов других стероидов (K. Slama, R. Lafont, 1995). В 80-х годах в Институте химии растительных веществ АН УзССР из корней левзеи сафлоровидной (Rhapontucum cartomoides (Willd.) Iljin) была выделена активная экдистероидсодержащая субстанция, на основе которой разработан препарат тонизирующего действия «Экдистен» (Н.К. Абубакиров, 1981; И.О. Куракина, В.М.

Булаев, 1990; А.У. Маматханов и соавт., 1980). Низкий процент выхода экдистероидов левзеи, высокие затраты на создание сырьевой базы приводят к поиску растений с высоким содержанием экдистероидов, одним из которых является серпуха венценосная (Serratula coronata L.). Экдистероидсодержащая субстанция Серпистен растений Serratula coronata L. успешно разрабатывается в последнее время (В.В. Володин, И.Ф. Чадин, 1996). Однако механизмы физиологического действия новой субстанции на организм теплокровных изучены недостаточно. Система крови и в том числе лейкоциты отражают многие происходящие в организме физиологобиохимические процессы. Изучение функционального состояния лейкоцитов в ответ на действие Серпистена продиктовано стремлением ближе подойти к раскрытию механизмов действия субстанции на живой организм, а также потребностью создания нового препарата с большим набором физиологических эффектов.

Цель исследования: изучение функциональной активности и количественного состава лейкоцитов крови лабораторных животных при экспериментальной анемии в условиях корригирующего действия растительных экдистероидов.

Для достижения цели определены следующие задачи:

1. Исследование особенности функциональной активности лейкоцитов крови при экспериментальной гемолитической анемии (фенилгидразин).

2. Оценка характера влияния и эффекты последействия экдистероидсодержащей субстанции на состав и функции лейкоцитов крови практически здоровых лабораторных животных в зависимости от режима и дозы введения.





3. Изучение функционального состояния лейкоцитов крови под действием субстанции Серпистен на фоне развившейся гемолитической анемии и при условии предварительных (профилактических) введений исследуемой субстанции.

Научная новизна исследования. Впервые показаны эффекты одно- и многократного введения экдистероидсодержащей субстанции (ЭС) Серпистен на функциональную активность лейкоцитов лабораторных животных. Выявлена способность ЭС повышать активность элементов защитной системы крови, усиливая фагоцитарную активность лейкоцитов, повышая сумму поглощенных микроорганизмов независимо от дозы, режима введения и состояния организма.

Впервые проведено комплексное исследование функциональной активности лейкоцитов под действием Серпистена у крыс в норме и при экспериментальной гемолитической анемии. Исследованы особенности сопротивляемости лейкоцитов крови средам с низкой осмолярностью, выраженные через резистентность и регуляторные возможности при сочетанном и раздельном действии Серпистена и фенилгидразина. Выявлено, что ЭС, введенная как до, так и на фоне гемолитика, способствует формированию «экономного» типа реагирования нейтрофилов и лимфоцитов, проявляющегося в ограничении набухания клеток при снижении концентрации окружающего раствора. Проведена оценка адгезионной способности лейкоцитов крови под действием Серпистена у крыс в норме и при анемии. Впервые показано, что эффект Серпистена зависит от пола животных (мыши, крысы). Впервые продемонстрирована возможность ЭС «нормализовать» картину белой крови крыс, измененной действием гемолитического яда.

Научно-практическая значимость. Способность новой ЭС Серпистен стимулировать неспецифические защитные силы организма трех видов лабораторных животных (млекопитающих) может быть учтена и использована при создании новых лекарств или биологически активных пищевых добавок.

Эффекты ЭС в условиях экспериментальной анемии открывают перспективы использования ее в качестве мембраностабилизирующего и адаптогенного средства в клинической практике для предупреждения и лечения гемолитических анемий.

Материалы и методы экспериментальной части включены в работы большого практикума по курсу «Физиология человека и животных» на кафедре физиологии человека и животных СГУ.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Снижение повреждающего действия гемолитического яда как при профилактическом введении ЭС Серпистен, так и при введении на фоне фенилгидразиновой анемии обусловлено стабилизацией поверхностной мембраны клеток крови, способствующей облегчению выхода животных из состояния гемолитической анемии.

2. При введении ЭС Серпистен в реакциях на гемолитический яд стабилизируется количественное соотношение различных форм лейкоцитов крови лабораторных животных.

3. В ответ на введение ЭС Серпистен происходит активация лейкоцитов, проявляющаяся в повышении суммы поглощенных микроорганизмов и фагоцитарной активности нейтрофилов и моноцитов крови лабораторных животных.

На правах автора выражаю благодарность научным руководителям д.б.н., проф. М.З. Федоровой БелГУ за руководство в выполнении работы и к.б.н., доц. Н.А. Мойсеенко СыктГУ за научное направление темы диссертации и осуществление руководства над работой в период учебы в аспирантуре; д.б.н. В.В. Володину и к.б.н.

С.О. Володиной ИБ КНЦ УрО РАН за предоставленную ЭС Серпистен и химические реактивы; сотрудникам кафедры физиологии человека и животных СыктГУ; к.м.н., врачу высшей категории, гематологуиммунологу г. Н. Новгорода Г.В. Сидневу; ст.н.с. ИБ КНЦ УрО РАН А.И. Кичигину.

Апробация работы. Результаты исследований доложены и обсуждены на III Всероссийской конференции с международным участием, посвященной 175-летию со дня рождения Ф.В. Овсянникова «Механизмы функционирования висцеральных систем», СанктПетербург, 2003; VII Всероссийской медико-биологической конференции молодых исследователей «Человек и его здоровье», Санкт-Петербург, 2004; конференции студентов и молодых ученых «Научное студенческое сообщество и современность», Анталия, 2004;

XIX Съезде физиологического общества им. И.П. Павлова, Екатеринбург, 2004; IX международном Съезде Фитофарм, конференции молодых ученых Европейского Фитохимического общества «Растения и здоровье», Санкт-Петербург, 2005; IV Молодежной научной конференции Института физиологии КНЦ УрО РАН «Физиология человека и животных: от эксперимента к клинической практике», Сыктывкар, 2005; 2006; IV Всероссийской научной конференции «Химия и технология растительных веществ», Сыктывкар, 2006.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 22 печатных работы, из них 3 статьи.

Объем и структура диссертации. Диссертация содержит страницы машинописного текста, 27 таблиц, 9 рисунков. Рукопись состоит из четырех глав (обзор литературы, материал и методы исследования, трех разделов, содержащих результаты исследований, обсуждения результатов), выводов и литературы, включающего наименований (213 отечественных и 76 зарубежных публикаций).

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Исследования выполнены на 453 крысах (нелинейные и Wistar) обоего пола, на 319 мышах (альбиносы и СВА) обоего пола и на кроликах Шиншилла (самцы).

Выделение Серпистена из надземной части растений Serratula coronata L. проведено в лаб. биохимии и биотехнологии растений ИБ КНЦ УрО РАН (патент РФ № 2153346, № 2276991, товарный знак № 282636 от 22.05.2005г.; приоритет 04.08.2005г). Субстанция содержит:

20-гидроксиэкдизон (20Е) – 80%, 25S-инокостерон – 11%, экдизон – 5% и др. минорные фракции. Серпистен растворяли в 0,9% NaCl (ЗАО “Верофарм”, Воронеж), получая 0,3% раствор.

Организация эксперимента. Лабораторным животным одно- и многократно вводили Серпистен. Анемию вызывали подкожным введением фенилгидразина (ФГ) (2,5% раствор). Крыс и мышей после дачи эфирного наркоза декапитировали. У кроликов кровь для анализа брали из краевой вены уха в объеме 1-1,25 мл. Кровь стабилизировали в жидком состоянии гепарином.

Распределение животных по группам представлено в таблице 1.

Кролики ное введение III – 0,9%NaCl (на 2 ч, объем соответ. II) 8 Все манипуляции проводили в соответствии с Правилами (1983) и международными рекомендациями по проведению медикобиологических исследований с использованием животных (1993).

Методы исследования лейкоцитов крови. Общее количество лейкоцитов крови подсчитывали общепринятым методом в камере Горяева (А.Я. Любина и соавт., 1971; В.В. Меньшиков и соавт., 1987).

Количественное соотношение различных видов лейкоцитов проводили дифференцированным подсчетом клеток на мазках крови (Й. Тодоров, 1963; Е.А. Кост, 1975).

Розеткообразующие (РОК) клетки определяли по методу Д.И.

Бельченко (1992). Готовили мазок, фиксировали метанолом, окрашивали по Романовскому-Гимзе и путем визуализации определяли РОК (прилипание эритроцита к гранулоцитам), представляющие структуры, напоминающие розетки. Подсчет РОК производили на 100 просмотренных, на мазке крови лейкоцитов. РОК в крови крыс были в основном моноциты и нейтрофилы.

Фагоцитарную активность лейкоцитов определяли методом дрожжевого фагоцитоза (Организация…, 1988) в нашей модификации.

Для реакции дрожжевого фагоцитоза в лунки иммунологического планшета помещали 0,1 мл крови, 0,01 мл плазмы крови и 0,01 мл 1%ной взвеси клеток пекарских дрожжей (Saccharomyces cerevisiae).

Полученную смесь инкубировали в термостате при 370С. Через 30 мин готовили мазки инкубационной смеси, фиксировали метанолом и окрашивали. Подсчитывали количество фагоцитирующих клеток (ФА) и количество захваченных объектов фагоцитоза (СПК-сумма поглощенных объектов фагоцитоза). Рассчитывали фагоцитарный индекс (ФИ) – среднее количество объектов, захваченных одним лейкоцитом (А.Г. Кудяшева, А.И. Кичигин, 2000).

Исследование геометрии, резервных возможностей мембраны и осморегуляции лейкоцитов крови проводили комплексным методом М.З. Федоровой и В.Н. Левина (1997). По 10 мкл концентрированной суспензии лейкоцитов помещали в три лунки гематологической планшетки. Туда же добавляли по 100 мкл одного из растворов NaCl (0,9%; 0,45%; 0,2%). Первая лунка (0,9% NaCl) служила контролем. Из оставшихся двух лунок по прошествии определенного времени инкубации (0,45% - через 60 с и 60 мин; 0,2% - через 60 с) забирали и переносили на предметное стекло каплю разбавленной суспензии лейкоцитов объемом 5 мкл. Из капли готовили мазок, фиксировали метанолом и окрашивали. Под микроскопом при увеличении окуляр-микрометром МОВ-1-15* измеряли диаметр клеток.

Вычисляли средние значения диаметра для 50 нейтрофилов и лимфоцитов в одном мазке. Объем и площадь поверхности клеток вычисляли по стандартным формулам для шаровидных тел:

Для определения осмотической стойкости клеток подсчитывали их число в 0,9% NaCl и после 1 ч в 0,2% NaCl. Функциональное состояние клеток крови оценивали по кинетике набухания (60 с в 0,45% NaCl) и способности восстанавливать исходный объем при 1 ч в этой же среде. Резервные возможности мембраны определяли по изменениям размера клеток после 60 с в 0,2% NaCl по сравнению с исходной величиной.

За основу исследования адгезионной способности лейкоцитов взята методика, описанная Л.Г. Зайцевым (2000) в нашей модификации. 0,1 мл суспензии лейкоцитов пропускали через капилляр с внутренним диаметром 1,5 мм. После этого через ту же трубочку пропускали физиологический раствор при напряжении сдвига 0,1 Н/м2. Считали число клеток в исходной суспензии, а также в первом (неадгезировавшие клетки и с малой силой сцепления) и втором (со средней силой сцепления) смывах. Рассчитывали число клеток, оставшихся в капилляре (с большой силой сцепления). Для определения соотношения адгезионной способности нейтрофилов и лимфоцитов готовили мазки.

Статистическая обработка. Проводили подсчет средних арифметических, среднеквадратического отклонения, средней ошибки средней арифметической. Степень достоверности межгрупповых различий определяли по непарному t критерию Стьюдента, сдвиги морфометрических показателей в опытах с гипоосмотическим набуханием – по парному t критерию Стьюдента (Г.Ф. Лакин, 1990).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Изменение функциональных свойств лейкоцитов крови лабораторных животных с гемолитической анемией при действии ЭС Серпистен Для оценки адаптационных реакций и резистентности организма к экстремальным факторам среды особое значение имеет анализ изменений состояния лейкоцитов, выполняющих в организме комплекс важных функций (М.З. Федорова, 2001). Поскольку Серпистен обладает мембраностабилизирующим (А.В. Коцюруба и соавт., 1999), иммуномодулирующим и стрессозащитным (Ж.Е.

Иванкова, Н.А. Мойсеенко, 2004) эффектом, выбор серии экспериментов остановился на изучении функциональных свойств лейкоцитов крыс с гемолитической анемией при действии Серпистена.

Для моделирования анемии крысам вводили гемолитик - ФГ.

Получены данные о снижении ФА лейкоцитов крыс Wistar, в ответ на действие ФГ независимо от пола животного. Так, в ответ на введение (в течение 3 дней) ФГ в дозе 5 мг/кг ФА снижается от 24% до 36%, p0,001 у самцов и от 15%, p0,02 до 38%, p0,01 у самок.

Одновременно снижается СПК: от 24%, p0,01 до 32%, p0,001 у самцов и от 7%, P0,5 до 51%, p0,1 у самок. ФИ изменяется несущественно. Известно, что гемолитическая анемия при воздействии ФГ обусловлена стимуляцией образования активных форм кислорода и липидных свободных радикалов, которые вызывают разрушение бимолекулярного фосфолипидного слоя мембран с образованием в них пор и ингибированием Na+/K+-АТФ-азы, а также молекулярные нарушения в состоянии белков скелета клетки. Это ведет к вхождению ионов Na+ в клетку, а затем и воды, вследствие чего, клетка (эритроцит) гипергидратируется и гемолизируется (Б.Н. Лю, 2001;

Н.М. Василенко, 2002; I. Stoian et al., 1996). Изучение структуры и молекулярной организации белков мембраны эритроцитов дает информацию о молекулярных подходах к изучению аналогичных белков в других клетках, например, спектрин, анкирин и др. в лейкоцитах, поэтому, обнаруженные эффекты ФГ на эритроцитах, можно экстраполировать и на лейкоциты.

Курсовое введение ЭС Серпистен в течение 5 дней, вводимая до ФГ, стимулирует лейкоциты анемичных крыс. Это выражается в увеличении (p0,001) ФА нейтрофилов и моноцитов в крови крыс по сравнению с животными, которым вводили только ФГ (ФА выше на 37% у самцов и 46% у самок). Отмечается повышение СПК (на 50%, p0,05 у самцов и 36%, p0,01 у самок), что может говорить о способности Серпистена эффективно выводить организм из патологического состояния, усиливая процесс фагоцитоза и повышая защитные свойства крови. ФИ сохраняется на уровне нормы.

Аналогичная реакция клеток наблюдается и при введении Серпистена крысам после ФГ. Выявлено, что в ответ на введение Серпистена как до, так и после введения ФГ по сравнению с интактными животными ФА клеток крови либо не изменяется, либо становится выше. Это говорит об адаптогенном действии исследуемой субстанции и согласуется с данными литературы (Н.П. Тимофеев, 2001; 2005 и др.).

Анализ адгезионной способности лейкоцитов крыс показал (табл. 2), что в ответ на введение ФГ повышается число адгезировавших клеток по сравнению с показателем у интактных (от 14%, P0,3 до 39%, p0,05 у самцов и в качестве тенденции - до 7% у самок). Выявлено увеличение числа клеток (лимфоцитов) с высокой силой сцепления независимо от пола животного. Полученные данные, возможно, свидетельствуют о нарушениях, вносимых ФГ, как на (в) мембране, так и внутри лейкоцитов, что подтверждает гипотезы о негативном действии гемолитика на клетки крови. При введении ЭС как до гемолитика, так и на его фоне число адгезировавших клеток оказывается меньше, чем у интактных и тех, которым вводили только ФГ. Выявлено снижение числа клеток (лимфоцитов) с высокой силой сцепления (табл. 2). Снижение адгезионной способности лейкоцитов под влиянием Серпистена коррелирует с данными H. Matsuda et al.

(1970), указывающими на антиатеросклеротическое действие фитоэкдистероидов.

Для оценки функционального состояния и резервных возможностей лейкоцитов проведено сравнительное изучение осморегуляторных реакций клеток крови анемичных крыс и крыс, которым вводили Серпистен до гемолитика или на его фоне. Показано, что при введении ФГ, воздействие на лейкоциты в течение 1 ч гипоосмотической нагрузки (0,2% NaCl) приводило к разрушению заметного числа клеток по сравнению с интактными (до 50,5%, p0,001 у самцов и в качестве тенденции от 7% до 26% у самок).

Повышение осмотической стойкости клеток обнаружено при введении Серпистена до ФГ по сравнению с введением только ФГ: 57,8% против 25,7%, p0,001 у самцов и 74,8% против 46,6%, p0,01 у самок.

а). Изменение адгезионной способности лейкоцитов крыс Wistar с гемолитической анемией на фоне предварительных инъекций ЭС Интактные Серпистен+ФГ б).Изменение адгезионной способности лейкоцитов крыс Wistar при действии ЭС Серпистен на фоне гемолитической анемии (X±mx) Интактные (0,66±0,04) (0,66±0,1) (0,66±0,03) ФГ+Серпистен (0,75±0,1) (0,8±0,1) (0,8±0,1) Примечание: n - число животных самцов и самок соответственно; Ан – неадгезировавшие клетки; Ас – клетки со средней силой сцепления; Ав – клетки с высокой силой сцепления; Аа – общее количество адгезировавших лейкоцитов; разница по сравнению с интактной группой достоверна при p0,05*, 0,02**, 0,01***; разница с ФГ группой достоверна при p0,05a, 0,001b; в скобках указано соотношение нейтрофилов и лимфоцитов (отн.ед).

Такая же реакция клеток выявлена при введении Серпистена после ФГ. Полагаем, что ЭС изменяет свойства мембраны, повышая резистентность лейкоцитов в условиях гипотонии и препятствует нарушению мембраны клеток при действии гемолитика.

Изучение осморегуляторных свойств лейкоцитов показало (табл.

3), что в ответ на введение ФГ, через 60 с инкубации в 0,2% NaCl зафиксировано максимальное увеличение среднеклеточных: диаметра, площади поверхности и объема, как нейтрофилов, так и лимфоцитов крови независимо от пола животного. Рост данных параметров клеток по отношению к таковым в изотоническом растворе более выражен, нежели у интактных, что отражает влияние гемолитика на свойства мембраны (М.З. Федорова, 2002). Анализ характера объемных изменений лейкоцитов при повышении трансмембранного осмотического градиента свидетельствует о меньшей устойчивости гранулоцитов к понижению осмотического давления.

Размеры нейтрофилов (а) и лимфоцитов (б), инкубированных в растворах хлорида натрия разной концентрации у самцов крыс Wistar с гемолитической анемией на фоне предварительных инъекций ЭС Группа (n=10) Интактная 9,5±0, Серпистен+ФГ 9,2±0,1 9,6±0,2 9,6±0, Группа (n=10) Примечание: в таблице представлены значения диаметра клеток (мкм);

n – число животных в каждой группе; достоверность внутригрупповых различий с клетками, инкубированными в изотоническом (0,9% NaCl) растворе при p0,05а, 0,02b, 0,01с, 0,001d.

В умеренно гипотонической среде (0,45% NaCl) лейкоциты анемичных животных демонстрируют нарушение осморегуляторных реакций, проявляющиеся в неполном восстановлении объема при удлинении времени инкубации. При введении Серпистена до гемолитика или на его фоне в опытах с гипоосмотическими нагрузками установлено формирование «экономного» типа реагирования лейкоцитов крови животных, проявляющегося в ограничении набухания клеток при снижении концентрации окружающего раствора. Осморегуляторные реакции клеток обеспечивали практически полное восстановление исходного объема клеток через 1 ч в 0,45% NaCl как у интактных животных, так и у тех, которым вводили Серпистен как до гемолитика, так и на его фоне. Т.е.

Серпистен стабилизирует мембрану, что подтверждает его защитные свойства.

В ответ на ФГ независимо от режима введения (по 5 и 7,5 мг/кг соответственно в течение 3 и 2 дней) увеличивается общее количество лейкоцитов (от 24%, P0,3 до 59%, p0,001 у самцов и до 103%, p0,001 у самок) за счет нейтрофилов. Снижение доли лимфоцитов проявлялось как тенденция. Субстанция Серпистен, вводимая как до, так и на фоне ФГ, сохраняет число лейкоцитов и их соотношение на исходном уровне, т.е., «нормализует» клеточный состав крови, измененный действием ФГ, что подтверждает данные о пролиферативном действии фитоэкдистероидов, к которым относится исследуемая субстанция (З. Саатов и соавт., 1979; K. Slama, 1993).

Динамика изменения количества лейкоцитов крови крыс под действием ФГ и сочетанного с ним действия ЭС Серпистен одной из серии экспериментов представлена на рисунке 1.

Рис. 1. Изменение общего количества лейкоцитов крови крыс Wistar с гемолитической анемией на фоне предварительных инъекций ЭС Серпистен.

Примечание: разница с интактной группой достоверна при p0,001**;

разница с группой ФГ достоверна при p0,01а.

Наряду с повышением числа лейкоцитов в ответ на ФГ наблюдается увеличение РОК, которое снижается при введении Серпистена как до, так и после ФГ. Динамика изменения РОК крови крыс при действии ФГ и ЭС Серпистен представлена на рисунке 2.

% Рис. 2. Изменение доли (%) РОК в крови крыс Wistar с гемолитической анемией на фоне предварительных инъекций ЭС Серпистен (за «0» приняты значения интактных животных, соответствующие 100%).

Примечание: разница с интактной группой достоверна при p0,01*, 0,001**; разница с группой ФГ достоверна при p0,01а.

Выявлено, что показатели крови крыс в ответ на введение NaCl (растворитель Серпистена), как до, так и на фоне гемолитика имеют однонаправленный характер изменения; не отличаются от ответа на введение только ФГ: выраженное увеличение размера клеток в гипотонической среде и неполное восстановление объема через 1 ч инкубации в 0,45% NaCl; изменение количества РОК; сдвиги количественного состав лейкоцитов. Эти данные показывают разный эффект Серпистена и его растворителя (NaCl).

В целом реакция лейкоцитов в ответ на введение фенилгидразина проявляется в снижении фагоцитарной активности и осмотической резистентности клеток, повышении адгезионной способности лейкоцитов, числа розеткообразующих клеток, общего количества, изменении соотношения лейкоцитов независимо от пола животного. В условиях гипотонии выявлено выраженное увеличение размеров клеток и нарушение осморегуляторных свойств лейкоцитов.

При введении Серпистена как до, так и после гемолитика, показатели фагоцитоза, осмотической стойкости лейкоцитов, их общего количества и клеточного состава становятся близкими к уровню интактных животных. Количество адгезирующих и розеткообразующих клеток снижается, нормализуются их осморегуляторные реакции.

Реакция лейкоцитов крови лабораторных животных на однократное введение ЭС Серпистен Исследование динамики изменений состава и функции лейкоцитов в ответ на действие Серпистена проводилось с клетками крови практически здоровых лабораторных животных (мыши, крысы, кролики). В экспериментах (зима, лето) на мышах альбиносах обоего пола Серпистен в дозе 5 мг/кг через 24 ч после введения повышает ФА клеток крови от 23% до 29%, p0,1 (самцы) и от 8% до 36%, p0, (самки) и СПК от 40%, p0,1 до 80%, p0,001 (самцы) и от 19%, P0, до 66%, p0,001 (самки). Показатель ФИ не меняется. Вместе с тем, у мышей обоего пола летом выявлена закономерность: с увеличением дозы вводимого вещества (с 5 до 20 мг/кг) повышаются все показатели фагоцитоза. В зимний период года с увеличением дозы вводимой субстанции достоверно выше оказывается ФА клеток крови самцов, тогда как у самок данный показатель фагоцитоза повышается незначительно. Достоверных изменений СПК и ФИ в ответ на введение большей дозы ЭС как по сравнению с показателями у интактных животных, так и теми, кому вводили вещество в дозе мг/кг, нет.

Аналогичные изменения показателей фагоцитоза (ФА и СПК) получены на крови самок мышей СВА. При этом эффект Серпистена на ФА нейтрофилов и моноцитов в ответ на введение дозы 5 мг/кг более выражен у животных в возрасте 5 и 12 мес, нежели в возрасте мес, тогда как в ответ на большую дозу эффект максимален - у 9 мес.

Показатель ФИ, независимо от дозы, сохраняется на исходном уровне, за исключением повышения его (26%, p0,05) у 12 мес мышей (доза Серпистена составила 5 мг/кг).

В сериях исследования на крысах (нелинейные и Wistar) обоего пола Серпистен в дозе 20 мг/кг через 12 ч после введения повышает ФА клеток на 11% (p0,05) у самцов и, чуть меньше, у самок – 7% по сравнению с интактными животными. Через 1 и 3 ч после введения Серпистена крысам в той же дозе, показатель ФА повышается незначительно. Независимо от времени действия Серпистена, у самок крыс показатель СПК оказывается повышенным, у самцов существенно не меняется, т.е. эффект Серпистена полозависим.

Достоверных изменений ФИ не зарегистрировано.

В экспериментах на кроликах Шиншилла в ответ на введение Серпистена в дозе 2,5 мг/кг независимо от времени действия, происходит повышение ФА клеток крови в среднем на 12%, p0, через 2 ч и на 14%, p0,02 через 24 ч после введения субстанции.

Отмечается некоторое повышение СПК. Значение показателя ФИ сохраняется на уровне интактных животных. Активная деятельность лейкоцитов крови животных независимо от пола и вида, выраженная через усиление фагоцитарной активности нейтрофилов и моноцитов, и, повышение, тем самым, уровня неспецифической резистентности организма, указывает на высокую биологическую активность вводимого растительного экдистероида – ЭС Серпистен.

Опытами с гипоосмотическими нагрузками при введении самкам мышей СВА Серпистена установлено (табл. 4) формирование Размеры нейтрофилов (а) и лимфоцитов (б), инкубированных в растворах хлорида натрия разной концентрации у мышей СВА при Группа Концентрация раствора, время инкубации б).

Группа Концентрация раствора, время инкубации Примечание: в таблице представлены значения диаметра клеток (мкм);

в скобках - число животных в возрасте 5, 9 и 12 мес соответственно;

достоверность внутригрупповых различий с клетками, инкубированными в изотоническом (0,9% NaCl) растворе при p0,05а, 0,02b, 0,01с, 0,001d.

«экономного» типа реагирования лейкоцитов, проявляющегося в ограничении набухания клеток при 60 секундной инкубации в 0,2% NaCl по сравнению с клетками интактных животных. Реакция лейкоцитов в ответ на 60 секундную инкубацию в 0,45% NaCl аналогична 0,2% раствору, но менее выражена. С увеличением дозы лейкоциты становятся более резистентными к условиям гипотонии.

Полученные данные свидетельствуют о стабилизации мембраны лейкоцитов в ответ на действие Серпистена. Это подтверждается полным восстановлением исходного объема клеток при часовой инкубации в 0,45% NaCl, при введении Серпистена самкам мышей СВА, как в дозе 5, так и 20 мг/кг. Аналогичные данные получены в эксперименте на мышах альбиносах обоего пола.

Проведен анализ реакции лейкоцитов лабораторных животных в ответ на введение NaCl. Полученные данные свидетельствуют о том, что эффект NaCl не сводится к эффекту Серпистена. Подтверждением является снижение показателей фагоцитоза, изменение лейкоцитарной формулы, общего уровня лейкоцитов независимо от вида, пола животных по сравнению с интактными. В ответ на введение NaCl лейкоциты оказываются менее стойкими к условиям гипотонии, что выражается в увеличении размеров нейтрофилов и лимфоцитов при помещении их в гипотонический раствор и неполное восстановление объема клеток через 1 ч инкубации в 0,45% NaCl.

Итак, при введении Серпистена (содержащего 0,3% вещества и 99,7% NaCl) происходит «нормализация» картины белой крови животных; повышается активность элементов защитной системы крови независимо от времени действия вещества. В условиях гипотонии лейкоциты становятся более резистентными.

Реактивность лейкоцитов крови крыс на одно- и многократное введение ЭС Серпистен Анализ разного режима введения Серпистена показал, что у самцов через 2 ч после однократной инъекции ЭС практически не меняется общее количество лейкоцитов и несколько снижается (22%, P0,3) в ответ на 5-кратные инъекции практически того же количества вещества. Наряду с этим снижается количество нейтрофилов (на 30% при однократном и на 26%, p0,05 при продолжительном введении Серпистена), за счет сегментоядерных клеток, причем эффект через 2 ч после введения выраженнее, чем через 5 суток. Доля палочкоядерных клеток, наоборот, несколько увеличивается через 2 ч после однократной инъекции и не изменяется после 5-кратных инъекций Серпистена. Т.е. ответ на введение дозы Серпистена 20 мг/кг однократно выражен сильнее, чем ответ на практически такую же и даже большую (25 мг/кг суммарно) дозу Серпистена, но введенную в приемов. Это указывает на значение режима введения ЭС:

постепенное накопление дозы дает эффект той же направленности, но несколько мягче выраженный.

У самок через 2 ч после введения Серпистена отмечается некоторое повышение уровня лейкоцитов (29%, P0,2), в ответ на 5кратные инъекции количество клеток сохраняется на уровне нормы.

Достоверного изменения доли нейтрофилов не обнаружено. Т.е реакция нейтрофилов в ответ на введение ЭС нелинейным крысам зависит от пола животного.

Выявлено, что при введении Серпистена в крови самцов появляются базофилы. В ответ на однократную инъекцию ЭС базофилов в циркулирующей крови оказывается в 2 раза больше, чем в ответ на многократную. Это может свидетельствовать о снижении вязкости цельной крови крыс, поскольку базофилы синтезируют гепарин (Г.И. Козинец и соавт., 2001). У интактных крыс эти клетки не выявляются. У самок базофилы обнаружены во всех исследуемых группах, но максимальное количество (выше в 3 раза) отмечено через 2 ч после введения ЭС.

В отличие от стероидных гормонов (кортизон, гидрокортизон), вызывающих нейтрофилез и снижение количества эозинофилов (П.Д.

Горизонтов и соавт., 1983), введение Серпистена приводит к незначительной нейтропении и не вызывает достоверных изменений количества эозинофилов. Это подтверждает положение о том, что Серпистен, относящийся к классу полигидроксилированных стероидов, не обладает свойствами истинных стероидных гормонов.

Данные литературы свидетельствуют, что ЭС оказывает кратковременное действие. Согласно работам A.V. Tuganova. и A.V.

Kotsyuruba (1996) максимальное накопление С27-стеринов (к которым относится основной компонент (20-гидроксиэкдизон) Серпистена) в тканях отмечается через 2 ч после их введения. Действительно, в нашей работе ответ лейкоцитов на введение новой субстанции фитоэкдистероидов через 2 ч оказывается, более выражен, чем ответ на многократные инъекции. В то же время после прохождения курса 7дней действие экдистероидов составляет до 2-х мес (Г.М. Яковлев и соавт., 1990), что подтверждает влияние Серпистена на количественный состав лейкоцитов после 5 дневного курса инъекций.

Серией эксперимента показано разное действие Серпистена и NaCl. Так у самцов независимо от режима введения Серпистена доля нейтрофилов снижается за счет сегментоядерных клеток; в ответ же на однократное введение NaCl она увеличивается за счет палочкоядерных клеток, на многократное – снижается, но в меньшей степени, чем в ответ на Серпистен. Кроме того, через 2 ч после введения NaCl отмечается тенденция снижения доли эозинофилов на 63%, после 5кратных инъекций на 16%. Показано (Г.И. Козинец и соавт., 2004 и др.), что среди признаков, характерных для стресс-реакции системы крови, является нейтрофильный лейкоцитоз и эозинопения. Полагаем, что ЭС является фактором, нивелирующим стресс-реакцию, вызванную NaCl и уколом.

Итак, в ответ на введение Серпистена существенно не меняется общее количество лейкоцитов; степень и направление изменений гематологических показателей зависят от режима введения субстанции: количественный состав лейкоцитов максимально выражен через 2 ч после введения; действие однократного введения Серпистена оказывается сильнее многократных; Серпистен обладает антистрессорным действием и не обнаруживает эффектов стероидных гормонов.

ВЫВОДЫ

1. Фенилгидразин приводит к максимальному использованию «резервных возможностей» мембраны лейкоцитов в ответ на высокие гипоосмотические нагрузки и к неполному восстановлению исходного объема клеток в умеренно гипотонической среде, что свидетельствует о нарушении регуляторных реакций лейкоцитов в ответ на действие гемолитика.

2. В условиях гемолитической анемии в крови крыс уменьшается доля лимфоцитов, увеличивается относительное количество нейтрофилов при снижении поглотительной способности фагоцитов;

повышается ауторозеткообразование.

3. Физиологический эффект субстанции Серпистен приводит к повышению фагоцитарной активности нейтрофилов и моноцитов крови при малых и больших дозах введения независимо от режима, пола и вида животного. Фагоцитарный индекс при этом не меняется. В ответ на субстанцию Серпистен, независимо от дозы вещества, «мембранный резерв» лейкоцитов используется менее эффективно.

4. Последействие субстанции Серпистен (через 1, 2, 3, 12 и 24 ч) не сопровождается существенными изменениями общего количества лейкоцитов крови и достоверными сдвигами в лейкоцитарной формуле практически здоровых лабораторных животных (мыши, крысы, кролики). Влияние субстанции Серпистен на количественный состав лейкоцитов максимально выражен через 2 ч после введения, при этом эффект однократного введения оказывается сильнее многократных инъекций.

5. В условиях анемии профилактическое и фоновое введение субстанции Серпистен повышает фагоцитарную активность лейкоцитов и сумму поглощенных микроорганизмов, уменьшает адгезионную способность клеток крови и снижает количество ауторозеток, что указывает на его корригирующее действие в условиях фенилгидразиновой анемии.

6. Профилактическое и фоновое введение субстанции Серпистен в условиях анемии приводит к повышению осмотической стойкости и формированию «экономного» типа реагирования лейкоцитов на гипоосмотические нагрузки, проявляющиеся в ограничении набухания клеток в сильно гипотонической среде и полном восстановлении их объема в умеренно гипотоническом растворе.

7. Субстанция Серпистен оказывает протекторное действие на физиологические реакции лейкоцитов, стабилизируя свойства поверхностной мембраны, и оптимизируя количественный состав и соотношение различных форм белых клеток крови, в условиях экспериментальной анемии.

1. Репина Е.Н., Мойсеенко Н.А. Модификация лейкоцитов и лейкоцитарной формулы крыс под влиянием 20-гидроксиэкдизона // Вестник Сыктывкарского университета. – 2003. – Сер. Биология (4). – Вып. 2 – С. 66-68.

2. Репина Е.Н., Мойсеенко Н.А., Иванкова Ж.Е., Петрова Н.Б.

20-гидросиэкдизон из растений Serratula coronata L. как адаптоген // Эколого-физиологические проблемы адаптации: Материалы XI междунар. симп. – М.: РУДН, 2003. – С. 368-369.

3. Репина Е.Н., Мойсеенко Н.А. Изменения состава белой крови крыс под влиянием фенилгидразина на фоне 20-гидроксиэкдизона // Механизмы функционирования висцеральных систем: Тез. III Всерос.

конф. с междунар. участием, посвящ. 175-летию со дня рождения Ф.В.

Овсянникова. – СПб., 2003. – С. 247-248.

4. Репина Е.Н., Мойсеенко Н.А., Иванкова Ж.Е. Эффекты экдистерона из растений Serratula coronata L. на теплокровных // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: Материалы 58-й межрегион. конф. по фармации и фармакологии. – Пятигорск, 2003. – С. 338-340.

5. Репина Е.Н., Иванкова Ж.Е. Антистрессовое влияние 20гидроксиэкдизона из растений Serratula coronata L. // Биоразнообразие.

Экология. Эволюция. Адаптация: Материалы Юбилейной науч. конф.

студентов, аспирантов и молодых ученых, посвящ. 180-летию со дня рождения Л.С. Ценковского. – Одесса, 2003. – С. 66.

6. Репина Е.Н., Мойсеенко Н.А., Петрова Н.Б., Иванкова Ж.Е.

Фитоэкдистероиды и кровь млекопитающих в норме и патологии // Экология и здоровье человека: Тр. IX Всерос. конгресса. – Самара, 2004. – С. 188-190.

7. Репина Е.Н. Эффект 20-гидроксиэкдизона на состав и функции белой крови крыс на фоне гемолитической анемии // Человек и его здоровье: Материалы седьмой медико-биологической конф. молодых исследователей. – СПб., 2004. – С. 242-243.

8. Репина Е.Н., Мойсеенко Н.А., Иванкова Ж.Е. Влияние 20гидроксиэкдизона из растений Serratula coronata L. на свойства белой и красной крови кроликов породы Шиншилла // Фундаментальные исследования. – М.: РАЕ, 2004. – № 2. – С. 151-153.

9. Репина Е.Н., Мойсеенко Н.А. Влияние 20-гидроксиэкдизона из растений Serratula coronata L. на состав и функциональную активность клеток белой крови крыс линии Wistar // Современные наукоемкие технологии. – М.: РАЕ, 2004. – № 3. – С. 88-89.

10. Репина Е.Н. Эффекты 20-гидроксиэкдизона на показатели белой крови крыс // Молодежный вестник. – Сыктывкар, 2004. – Вып.

2. – С. 39-42.

11. Репина Е.Н., Мойсеенко Н.А. Влияние 20-гидроксиэкдизона на нейтрофилы и лимфоциты крови крыс на фоне фенилгидразина // Рос. физиол. журнал. им. И.М. Сеченова. – 2004. – Т. 90. – № 8. – С.

229-230.

12. Репина Е.Н., Мойсеенко Н.А., Иванкова Ж.Е. Влияние 20гидроксиэкдизона на параметры красной и белой крови при гемолитических анемиях // Экология человека: Материалы. Всерос.

конф. с междунар. участием. – Архангельск, 2004. – С. 327-329.

13. Репина Е.Н., Шадрин Д.М. Действие 20-гидроксиэкдизона на фагоцитарную активность нейтрофилов и моноцитов мышей СВА // Физиология человека и животных: от эксперимента к клинической практике: Тез. докл. IV Молодежной науч. конф. Института физиологии Коми НЦ УрО РАН. – Сыктывкар, 2005. – С. 111.

14. Репина Е.Н. Действие растительного препарата 20гидроксиэкдизона на нейтрофилы и лимфоциты крови мышей СВА // Физиология и медицина: Сб. материалов Всерос. конф. молодых исследователей. – Вестник молодых ученых. – СПб., 2005. – С. 99.

15. Репина Е.Н., Мойсеенко Н.А. Влияние 20-гидроксиэкдизона на фагоцитарную активность крови млекопитающих // Бюллетень сибирской медицины. – Томск, 2005. – Т. 4. – С. 40.

16. Репина Е.Н., Пономарёв М.Б., Иванкова Ж.Е. Влияние экдистероидов серпухи венценосной на показатели крови мышей линии СВА разного возраста // Молодые исследователи – регионам:

Материалы Всерос. науч. конф. студентов и аспирантов. – Вологда:

ВоГТУ, 2005. – В 2-х т. – Т. 1. – С. 41-42.

17. Репина Е.Н., Шадрин Д.М. Фагоцитарная активность и состав клеток белой крови крыс Wistar при гемолитической анемии на фоне предварительных инъекций 20-гидроксиэкдизона из Serratula coronata L. // Молодые исследователи – регионам: Материалы Всерос.

науч. конф. студентов и аспирантов. – Вологда: ВоГТУ, 2005. – В 2-х т.

– Т. 1. – С. 46-47.

18. Репина Е.Н., Мойсеенко Н.А., Иванкова Ж.Е., Володин В.В.

Роль 20-гидроксиэкдизона растений Serratula coronata L. в развитии вызванной гемолитической анемии крыс Wistar // Растения и здоровье:

Материалы IX междунар. Съезда Фитофарм. Конф. молодых ученых Европейского Фитохимического общества. – СПб., 2005. – С. 179-184.

19. Репина Е.Н, Мойсеенко Н.А., Шадрин Д.М. Действие фитоэкдистероидов (20-гидроксиэкдизона) на лейкоциты крови мышей СВА разного возраста в норме // Тез. докл. и лекций XIII Междунар.

совещания и VI школы по эволюционной физиологии. – СПб.: ВВМ, 2006. – С. 184.

20. Репина Е.Н., Шадрин Д.М. Фагоцитарная активность клеток белой крови лабораторных животных в норме и эксперименте, и влияние на нее 20-гидроксиэкдизона // Физиология человека и животных: от эксперимента к клинической практике: Тез. докл. V Молодежной науч. конф. Института физиологии Коми НЦ УрО РАН. – Сыктывкар, 2006. – С. 102.

21. Репина Е.Н., Мойсеенко Н.А. Реактивность лейкоцитов крови крыс Wistar с гемолитической анемией на фоне предварительных инъекций фитоэкдистероидов // Химия и технология растительных веществ: Тез. докл. IV Всерос. науч. конф. – Сыктывкар, 2006. – С. 279.

22. Репина Е.Н., Мойсеенко Н.А., Петрова Н.Б., Иванкова Ж.Е.

Действие фитоэкдистероидов на количественные и качественные показатели крови млекопитающих в норме и при экспериментальных воздействиях // Вестник Сыктывкарского университета. – 2006. – Сер.

Биология (2). – Вып. 1. – С. 122-137.



 
Похожие работы:

«ФАН МИ ХАНЬ БИОТЕХНОЛОГИЯ БАКТЕРИАЛЬНОЙ ЦЕЛЛЮЛОЗЫ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ШТАММА - ПРОДУЦЕНТА GLUCONACETOBACTER HANSENII GH – 1/2008 Специальность 03.01.06 – Биотехнология (в том числе бионанотехнологии) Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Москва 2013 Работа выполнена на кафедре Химия пищи и пищевая биотехнология Института прикладной биотехнологии Федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего...»

«Ерзин Иван Васильевич ОЦЕНКА СОСТОЯНИЯ НАСАЖДЕНИЙ ГОРОДСКИХ ПАРКОВ В СВЯЗИ С ИХ РЕКОНСТРУКЦИЕЙ (НА ПРИМЕРЕ г. МОСКВЫ) 03.02.08 – Экология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учёной степени кандидата биологических наук Москва – 2011 2 Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования Московский государственный университет леса Научный руководитель : доктор сельскохозяйственных наук, профессор Теодоронский...»

«МУЗЫКАНТОВ Алексей Александрович АДАПТАЦИЯ МИКОПЛАЗМ (MYCOPLASMA GALLISEPTICUM S6) К НЕБЛАГОПРИЯТНЫМ УСЛОВИЯМ 03.00.04 - биохимия 03.00.07 - микробиология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Казань-2008 Работа выполнена в лаборатории молекулярных основ патогенеза Казанского института биохимии и биофизики Казанского научного центра Российской академии наук Научный руководитель : доктор биологических наук Чернова Ольга Александровна...»

«ТОМОВА ТАТЬЯНА АЛЕКСАНДРОВНА ВЛИЯНИЕ ПЕПТИДА ГЛИЦИЛ-ПРОЛИНА НА СЕКРЕТОРНУЮ ФУНКЦИЮ ЖЕЛУДКА ПРИ ИММОБИЛИЗАЦИОННОМ СТРЕССЕ 03.00.13 – физиология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учёной степени кандидата биологических наук Томск – 2006 Работа выполнена на кафедре физиологии человека и животных Томского государственного университета Научный руководитель : доктор биологических наук, профессор Гриднева Вера Ивановна Официальные оппоненты : доктор биологических наук, профессор...»

«Тихомирова Людмила Ивановна ОСОБЕННОСТИ ИНДУЦИРОВАННОГО МОРФОГЕНЕЗА И РЕГЕНЕРАЦИИ У РАЗЛИЧНЫХ ТИПОВ ЭКСПЛАНТОВ IN VITRO КУЛЬТИВАРОВ ВИДОВ РОДА IRIS L. Специальность 03.02.01 – Ботаника Автореферат диссертации на соискание учёной степени кандидата биологических наук Барнаул, 2011 2 Диссертационная работа выполнена в Государственном научном учреждении Научно-исследовательский институт садоводства Сибири имени М.А. Лисавенко Российской академии сельскохозяйственных наук (НИИСС)...»

«ЯКОВЛЕВ Роман Викторович ДРЕВОТОЧЦЫ (LEPIDOPTERA, COSSIDAE) СТАРОГО СВЕТА 03.02.05 – энтомология Автореферат диссертации на соискание учёной степени доктора биологических наук Барнаул – 2014 Работа выполнена в Алтайском государственном университете Научный консультант доктор биологических наук Владимир Викторович Дубатолов. Официальные оппоненты : Синев Сергей Юрьевич, доктор биологических наук, профессор, Зоологический институт РАН, заведующий лабораторией систематики...»

«СОРОКИНА ЕЛЕНА АЛЕКСАНДРОВНА ВЛИЯНИЕ ФИТОНЕМАТОД НА МОРФОЛОГИЮ РАСТЕНИЙ Специальность 03.02.08 – экология (биология) Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Томск – 2011 Работа выполнена на кафедре биологии с основами генетики и паразитологии ГОУ ВПО Кемеровская государственная медицинская академия Росздрава (г. Кемерово) доктор биологических наук, профессор Научный руководитель : Начева Любовь Васильевна Официальные оппоненты : доктор...»

«Каткова Екатерина Владимировна ПРИМЕНЕНИЕ МЕТОДОВ МОЛЕКУЛЯРНОГО МОДЕЛИРОВАНИЯ ДЛЯ РАЗРАБОТКИ НОВЫХ ЛЕКАРСТВ Специальность 03.01.02 – Биофизика, 03.01.08 – Биоинженерия АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата физико-математических наук Москва – 2014 2 Работа выполнена на кафедре биофизики физического факультета Московского государственного университета имени М.В. Ломоносова. Научные доктор биологических наук, профессор руководители: Атауллаханов Фазоил...»

«КОЛЕСОВА Наталья Сергеевна ВИДОВОЕ РАЗНООБРАЗИЕ И СТРУКТУРА НАСЕЛЕНИЯ ШМЕЛЕЙ (HYMENOPTERA, APIDAE: BOMBUS, PSITHYRUS) ТРАНСФОРМИРОВАННЫХ ТАЕЖНЫХ ЭКОСИСТЕМ ВОЛОГОДСКОЙ ОБЛАСТИ 03.02.08 – экология Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Сыктывкар – 2010 Работа выполнена на кафедре зоологии и экологии ГОУ ВПО Вологодского государственного педагогического университета Научный руководитель : доктор биологических наук, профессор БОЛОТОВА...»

«УДК 681,35.43.15:341.29.35.13:341.29.25.21.33 ЕШМАГАМБЕТОВА АЛИЯ Ш РАІІІЕВНА Введение в культуру Helichrysum arenarium (L.) Moench в Центральном Казахстане Специальность 03.00.05 - ботаника Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Республика Казахстан Алматы, 2007 Работа выполнена в лаборатории интродукции, фармакогнозии и ресурсов лекарственных растений АО НПЦ Фитохимия Научные руководители: академик НАН РК, доктор химических наук,...»

«СУСЛОВА Мария Юрьевна РАСПРОСТРАНЕНИЕ И РАЗНООБРАЗИЕ СПОРООБРАЗУЮЩИХ БАКТЕРИЙ РОДА BACILLUS В ВОДНЫХ ЭКОСИСТЕМАХ 03.00.16 – экология 03.00.07 – микробиология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Улан-Удэ, 2007 Работа выполнена в лаборатории водной микробиологии Лимнологического института СО РАН, г. Иркутск Научный кандидат биологических наук руководитель: ст.н.с. Парфенова Валентина Владимировна Официальные Доктор биологических наук...»

«УДК 574.4:504.054 + 631.46 Воробейчик Евгений Леонидович РЕАКЦИЯ ПОЧВЕННОЙ БИОТЫ ЛЕСНЫХ ЭКОСИСТЕМ СРЕДНЕГО УРАЛА НА ВЫБРОСЫ МЕДЕПЛАВИЛЬНЫХ КОМБИНАТОВ 03.00.16 - экология Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Екатеринбург - 1995 Работа выполнена в лаборатории экологической диагностики и нормирования Института экологии растений и животных Уральского отделения Российской Академии Наук. Научный руководитель - доктор биологических наук,...»

«Дукенбаева Асия Дарбаевна БИОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ AJANIA FRUTICULOSA (LEDEB.) POLJAK. И ЕЕ ИНТРОДУКЦИЯ В УСЛОВИЯХ ЦЕНТРАЛЬНОГО КАЗАХСТАНА 03.02.01 – ботаника АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Томск – 2010 Работа выполнена в лаборатории природной флоры и ботанического ресурсоведения АО Международный научно-производственный холдинг Фитохимия, г. Караганда, Республика Казахстан академик НАН РК, Научные руководители: доктор...»

«Цветков Илья Леонидович БИОХИМИЧЕСКИЕ ПАРАМЕТРЫ СТРЕСС–РЕДУЦИРУЮЩЕЙ РЕАКЦИИ ГИДРОБИОНТОВ ПРИ ИНТОКСИКАЦИИ 03.00.16 — экология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук Москва 2009 Работа выполнена на кафедре общей и биоорганической химии Ярославского государственного университета, кафедре органической и биологической химии Московского государственного педагогического университета и в лаборатории экологической биохимии...»

«КИРСАНОВ ВЛАДИМИР ВАСИЛЬЕВИЧ НАУЧНО-ТЕХНИЧЕСКИЕ ОСНОВЫ СОВЕРШЕНСТВОВАНИЯ СИСТЕМЫ МОНИТОРИНГА, УПРАВЛЕНИЯ ЭКОЛОГИЧЕСКОЙ БЕЗОПАСНОСТЬЮ И ПРОЦЕССАМИ БИООЧИСТКИ СТОЧНЫХ ВОД ПРЕДПРИЯТИЙ НЕФТЕХИМИЧЕСКОГО КОМПЛЕКСА 03.00.16 - Экология Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора технических наук Казань – 2008 1 Работа выполнена в Открытом акционерном обществе Казаньоргсинтез Официальные оппоненты : доктор технических наук, профессор Мелконян Рубен Гарегинович доктор...»

«МАТВЕЕВА Анжелика Рафиковна СЕКРЕТИРУЕМЫЕ ПРОТЕАЗЫ НЕКОТОРЫХ МИЦЕЛИАЛЬНЫХ ГРИБОВ: ВЫДЕЛЕНИЕ, ОЧИСТКА И ХАРАКТЕРИСТИКА ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИХ И ФУНКЦИОНАЛЬНЫХ СВОЙСТВ 03.00.24-микология 03.00.04-биохимия АВТОРЕФЕРАТ на соискание ученой степени кандидата биологических наук Москва 2008 Работа выполнена на кафедре микологии и альгологии биологического факультета и в отделе функциональной биохимии...»

«Бессонова Наталья Сергеевна ВЛИЯНИЕ КЕТАМИНА И ТИОПЕНТАЛА НАТРИЯ НА ПРОЦЕСС ЛИПИДПЕРОКСИДАЦИИ КРОВИ И ЕГО КОРРЕКЦИЯ АЛЬФА-ТОКОФЕРОЛОМ У БОЛЬНЫХ ПРИ ХОЛЕЦИСТЭКТОМИИ 03.01.04 – биохимия Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Казань – 2012 Работа выполнена в Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования Тюменская государственная медицинская академия Министерства здравоохранения и социального...»

«ЛИХАЦКАЯ Галина Николаевна МЕХАНИЗМЫ ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ ТРИТЕРПЕНОВЫХ И СТЕРОИДНЫХ ГЛИКОЗИДОВ С ЛИПИДНЫМИ МЕМБРАНАМИ Специальность: 03.00.02 – биофизика АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата физико-математических наук Владивосток 2006 2 Работа выполнена в Тихоокеанском институте биоорганической химии ДВО РАН Научный руководитель : Доктор физико-математических наук Ермишкин Лев Николаевич Официальные оппоненты : Профессор, доктор физико-математических наук...»

«ШЕСТАК Анна Александровна АКТИВНЫЕ ФОРМЫ КИСЛОРОДА И ИХ ИСТОЧНИКИ В ПРОГРАММИРОВАННОЙ ГИБЕЛИ КЛЕТОК РАСТЕНИЙ И ЦИАНОБАКТЕРИИ АNABAENA VARIABILIS 03.00.2503 – гистология, цитология, клеточная биология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Москва – 2007 Работа выполнена на кафедре физиологии микроорганизмов биологического факультета Московского государственного университета им. М.В.Ломоносова. Научный руководитель : доктор...»

«Ибатуллина Римма Петровна ЭКОЛОГИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ ПРИМЕНЕНИЯ БИОПРЕПАРАТОВ В РЕСПУБЛИКЕ ТАТАРСТАН 03.02.08 - экология (биологические наук и) АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Казань – 2011 2 Работа выполнена на кафедрах биохимии и микробиологии биолого-почвенного факультета ФГАОУВПО Казанский (Приволжский) федеральный университет и ООО НПИ Биопрепараты. Научный руководитель : доктор биологических наук, профессор Алимова Фарида...»






 
© 2013 www.diss.seluk.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Авторефераты, Диссертации, Монографии, Методички, учебные программы»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.