WWW.DISS.SELUK.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА
(Авторефераты, диссертации, методички, учебные программы, монографии)

 

На правах рукописи

Капустина Ольга Александровна

ХАРАКТЕРИСТИКА ГРИБОВ РОДА CANDIDA КАК АССОЦИАНТОВ

В МИКРОБИОЦЕНОЗАХ ТЕЛА ЧЕЛОВЕКА

03.02.03 – «Микробиология»

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени

кандидата биологических наук

Оренбург –2013 1

Работа выполнена в федеральном государственном бюджетном учреждении науки «Институт клеточного и внутриклеточного симбиоза Уральского отделения Российской академии наук»

Научный руководитель:

Доктор биологических наук Карташова Ольга Львовна

Официальные оппоненты:

Доктор биологических наук, профессор Соловых Галина Николаевна ГБОУ ВПО «Оренбургская государственная медицинская академия»

Минздрава России Доктор медицинских наук, профессор Потатуркина-Нестерова ФГБОУ ВПО «Ульяновский Наталия Иосифовна государственный университет»

Ведущая организация: ГБОУ ВПО «Южно-Уральский государственный медицинский университет Министерства здравоохранения Российской Федерации»

Защита состоится « 26» сентября 2013 г. в часов на заседании диссертационного совета Д 208.066.03 при Оренбургской государственной медицинской академии по адресу: Россия, 460000, г. Оренбург, ул.Советская, д.6, телефон (3532)40-35-62, факс (3532) 77-24-59, e-mail: orgma ds 1 @esso.ru, Официальный сайт: http//orgma.ru.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ОрГМА.

Автореферат разослан «_»2013 г., автореферат и текст объявления размещены на официальном сайте ВАК Министерства образования и науки РФ в сети интернет «»2013 г.

Ученый секретарь диссертационного совета д.м.н., профессор Немцева Наталия Вячеславовна

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблемы Дрожжеподобные грибы рода Candida, являясь комменсалами, обитающими в пищеварительном или/и дыхательном и урогенитальном трактах, на поверхности кожи, могут вызывать развитие заболеваний (Мамедова Л.Р. Караев З.О., 2010; Кузьмина Д.А. с соавт., 2011). Грибы рода Candida в биотопах тела человека выживают в условиях постоянного воздействия факторов врожденного и адаптивного иммунитета, используя механизмы супрессии/нейтрализации компонентов антимикробной защиты макроорганизма. Так, у грибов, выделенных при дисбактериозе кишечника, вагинальном кандидозе и хронических инфекционно-воспалительных заболеваниях придатков матки выявлены антилизоцимная, антикомплементарная, антилактоферриновая активности (Валышев А.В. с соавт. 2003; Рафикова Л.М., 2009), а у грибов, колонизирующих полость рта, – антиинтерфероновая активность (Четвертнова Г.А., 2008).





Вместе с тем среди Candida spp. встречаются штаммы, устойчивые к современным антимикотикам. Устойчивость Candida spp. к противогрибковым препаратам может проявляться на разных уровнях: генетическом, клеточном, популяционном и видовом. С распространением заболеваемости кандидозом и широким использованием противогрибковой терапии проблема устойчивости Candida spp. приобретает все большую значимость.

Присутствуя в биоценозе, грибы рода Candida взаимодействуют с другими видами условно-патогенных микроорганизмов и представителями нормофлоры.

В микробных ассоциациях между разными видами микроорганизмов возникают неоднозначные взаимоотношения, что может оказать существенное влияние, как на колонизацию слизистой, так и на течение инфекционного процесса (Долгушина В.Ф. с соавт., 2004; Karagozov I. et al., 2004). В подобных ситуациях многими исследователями (Семенов А.В., 2009; Вахитов Т.Я., 2007; Barefoot S.F. et al., 1994; Mearns-Spragg A. et al., 1998; Yan L. et al., 2003; Dubuis C., Haas D., 2007) существенным признается определение у выделенных культур факторов патогенности и персистенции и оценка характера взаимоотношений, складывающихся между сочленами микробных сообществ в том или ином биотопе.

В настоящее время накоплен большой фактический материал по взаимодействию грибов рода Candida и представителей нормофлоры. Однако вопрос об изменении биологических свойств данных микроорганизмов при инфекции остается недостаточно изученным.

В этой связи, известный интерес представляет, с одной стороны, изучение особенностей видового состава и комплекса биологических характеристик грибов рода Candida, выделенных из разных биотопов тела человека в норме, при инфекционно-воспалительных заболеваниях и дисбиотических состояниях, а с другой – особенностей межмикробных взаимодействий микроорганизмовсимбионтов в условиях грибково-бактериальных ассоциаций.

Цель и задачи исследования Целью настоящего исследования является сравнительное изучение видового состава и биологических свойств грибов рода Candida, выделенных из разных биотопов тела человека в норме, при инфекционно-воспалительных заболеваниях и дисбиотических состояниях, а также особенностей их взаимодействий с бактериями-доминантами и ассоциантами.

Для достижения поставленной цели были сформулированы и решены следующие задачи:

1. Изучить видовой состав грибов рода Candida, выделенных из разных биотопов тела человека в норме, при инфекционно-воспалительных заболеваниях и дисбиозе.





2. Оценить комплекс биологических свойств грибов рода Candida (факторы патогенности, персистентные характеристики, способность к образованию биопленок, антибиотикорезистентность).

3. Изучить молекулярно-генетические механизмы патогенности и резистентности грибов рода Candida к антимикотическим препаратам.

4. Изучить особенности межмикробных взаимодействий грибов рода Candida с бактериями-доминантами и ассоциантами.

Проведен сравнительный анализ видового разнообразия грибов рода Candida в различных биотопах тела человека (ротовая полость, кишечник, репродуктивный тракт) в норме и при патологических состояниях (дисбиозы, острая и хроническая инфекционно-воспалительная патология). Установлено увеличение количества видов грибов при патологических состояниях по сравнению с нормой, доминирующим видом является C.albicans.

Впервые охарактеризован широкий спектр биологических свойств грибов рода Candida spp., включающий факторы патогенности, факторы персистенции, способность к образованию биопленок и антибиотикорезистентность, на фенотипическом уровне и с использованием молекулярно-генетических исследований. На основе полученных данных охарактеризованы биопрофили грибов рода Candida, выделенных при инфекционно-воспалительных заболеваниях из разных биотопов и дисбиозе кишечника. Показано, что экспрессия персистентных свойств у грибов рода Candida, выделенных из разных биотопов тела человека, экологически детерминирована и проявляется в соответствии с уровнем факторов естественной резистентности в биотопе.

Установлена важная патогенетическая роль персистентных характеристик грибов Candida в развитии инфекционно-воспалительных заболеваний: они широко распространены среди штаммов, выделенных из всех исследованных биотопов, при этом выраженность исследуемых признаков выше при хроническом течении инфекционно-воспалительных заболеваний по сравнению с острым течением.

Проведенными молекулярно-генетическими исследованиями у C.albicans установлено наличие генов секретируемых аспартат протеиназ (SAP1-4, SAP6SAP9-10) и генов антибиотикорезистентности (MDR1, FLU1, CDR1) как у грибов, выделенных у здоровых лиц, так и при инфекционно-воспалительных заболеваниях и дисбиозе.

При изучении межмикробных связей индигенной и ассоциативной микрофлоры кишечника и репродуктивного тракта при дисбиозе и инфекционновоспалительных заболеваниях с C.albicans установлено преимущественное подавление факторов персистенции C.albicans под действием индигенной микрофлоры и их повышение под действием ассоциантов.

Полученные данные расширяют теоретические представления о биологических свойствах грибов рода Candida, выделенных из разных биотопов тела человека в норме, при инфекционно-воспалительных заболеваниях и дисбиозе кишечника, а также характере межмикробных взаимодействий.

Полученные результаты о распространенности и выраженности факторов персистенции у грибов рода Candida, могут быть использованы при прогнозировании течения инфекционно-воспалительных заболеваний.

Выявленные особенности регулирующего воздействия индигенной микрофлоры (лактобактерии, энтерококки) на факторы персистенции грибов рода Candida могут быть использованы в качестве дополнительных критериев отбора эффективных пробиотиков с целью коррекции дисбиозов кишечника и влагалища.

Определен спектр антимикотиков в отношении грибов рода Candida, изолированных из разных биотопов тела человека при инфекционновоспалительных заболеваниях. Полученные данные могут быть использованы при выборе эффективных препаратов для эмпирической терапии больных кандидозом.

1. Различные биотопы тела человека характеризуются особенностями видового состава грибов рода Candida в норме, при инфекционно-воспалительных заболеваниях и дисбиозе кишечника, а выраженность биологических свойств у данных микроорганизмов является информативным критерием их экотопной принадлежности.

2. Качественный спектр биологических свойств и количественные параметры факторов персистенции у грибов рода Candida определяют направление развития инфекционного процесса.

3. Межмикробные бактериально-грибковые взаимодействия при инфекционно-воспалительных заболеваниях и дисбиозе кишечника характеризуются преимущественным подавлением факторов персистенции C.albicans под действием представителей индигенной микрофлоры и стимуляцией – под влиянием ассоциативных бактерий.

Апробация работы. Материалы работы были доложены и обсуждены на VI и VII всероссийской научной конференции «Персистенция микроорганизмов» (Оренбург, 2009; 2012); всероссийской конференции с международным участием «Актуальные вопросы медицинской науки» (Ярославль, 2009); всероссийской научной конференции с международным участием «Физиология и генетика микроорганизмов в природных и экспериментальных системах»

(Москва, 2009); научно-практической конференции «Экология. Природные ресурсы. Рациональное природопользование. Охрана окружающей среды»

(Москва, 2009); всероссийской научно-практической конференции по медицинской микологии «Микозы и микоаллергозы, нозокомиальные грибковые инфекции» (Санкт-Петербург, 2010); V научно-практической конференции с международным участием «Студенты и аспиранты в науке – 2011» (Оренбург, 2011);

межрегиональной научной конференции «Актуальные проблемы современной микробиологии» (Оренбург, 2011); всероссийской научно-практической конференции по медицинской микологии «Микозы и микоаллергозы. Новые технологии в микробиологической диагностике» (Санкт-Петербург, 2011); I молодежной научной школе-конференции «Микробные симбиозы в природных и экспериментальных экосистемах» (Оренбург, 2011); Российской научнопрактической конференции «Медико-социальные аспекты формирования вторичных иммунодефицитных состояний у жителей Южно-Уральского региона»

(Оренбург, 2011); III Междисциплинарной конференции молодых ученых УрО РАН (Оренбург – Бузулук, 2012).

Фрагменты работы были представлены на областных конкурсах научноисследовательских работ и отмечены премией Правительства Оренбургской области (2011) и премией Губернатора Оренбургской области (2012).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 15 печатных работ, в том числе 9 публикаций в журналах, рекомендованных ВАК.

Объем и структура диссертационной работы Текст диссертации изложен на 165 страницах машинописи, содержит введение, 8 глав собственных исследований, заключение, выводы, указатель литературы, включающий 130 отечественных и 60 иностранных источников и приложение.

Связь работы с научными программами. Представленные данные являются составной частью тем открытого плана НИР ИКВС УрО РАН «Формирование и функционирование микробных симбиозов в живых системах» (№ гос.

регистрации 01.2010.67427) и «Эндогенные инфекции как проявление нарушения ассоциативного симбиоза» (№ гос. регистрации 01.2010.67429).

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

В работе были изучены 202 штамма грибов рода Candida, в том числе из ротовой полости здоровых лиц и больных стоматитом, острым и хроническим катаральным гингивитом; 48 штаммов из фекалий здоровых людей и пациентов с дисбиозом кишечника I-III степени; 64 - из репродуктивного тракта здоровых женщин и больных кольпитом, сальпингоофоритом (острое и хроническое течение); 54 штамма от больных острым и хроническим бронхитом и пневмонией. Штаммы были получены из лаборатории дисбиозов ИКВС УрО РАН (зав. лабораторией к.м.н. Валышев А.В.), бактериологической лаборатории ЦРБ Оренбургского района (врач-бактериолог Логачева Л.Е.), а также выделены из вагинального биотопа при профилактическом осмотре клинически здоровых женщин в женской консультации Областной клинической больницы №2 города Оренбурга (гинеколог Аксенченко Е.С.); из фекалий клинически здоровых детей, обучающихся в учреждении муниципального образования «Нежинский лицей» (село Нежинка Оренбургского района Оренбургской области, педиатр Семенова Л.В.).

Выделение и идентификацию грибов рода Candida проводили по Р.Н. Ребровой (1989).

Гемолитическую и каталазную активности определяли по М.О. Биргер (1982), способность грибов рода Candida к продукции лизоцимподобных ферментов по методу А.А. Ленцнера с соавт. (1975), фосфолипазную активность определяли по Т.С. Богомоловой (1990), липолитическую активность по методике А.И. Нетрусова (2005), антиоксидантную активность (АОА) - амперометрическим методом на анализаторе «ЦветЯуза-01-АА» (НПО «Химавтоматика», Москва).

Распространенность генетических детерминант секретируемых протеаз семейства SAP изучали с помощью метода ПЦР с использованием известных праймеров (Niewerth M., 2003).

У выделенных штаммов грибов определяли также антилизоцимную активность (АЛА) и sIgA-протеазную активность по методике О.В. Бухарина с соавт.

(1999; 2004) фотометрическим методом, антилактоферриновую активность (АЛфА) по И.В. Валышевой с соавт. (2005) иммуноферментным методом. Образование биоплёнок грибами оценивали по степени связывания ими кристаллического фиолетового в стерильных 96-луночных полистироловых планшетах (O`Toole G., 2000).

Чувствительность грибов к антимикотикам определяли методом диффузии в агар с помощью бумажных дисков, пропитанных противогрибковыми препаратами, согласно Инструкции научно-исследовательского центра фармакотерапии (2004).

При помощи ПЦР анализа у грибов рода Candida определяли гены, кодирующие антибиотикорезистентность: CDR1-4 - к ингибиторам стеролового синтеза, MDR1 – к циклогексимиду и флуконазолу, FLU1 – к флуконазолу.

Для ПЦР-амплификации использовали известные праймеры (Niewerth M., 2003), синтезированные компанией «СИНТОЛ» (г. Москва) Чистые культуры лактобацилл и энтерококков выделяли из женского репродуктивного тракта и кишечника, изучали морфологические, тинкториальные, культуральные и биохимические свойства. Видовую идентификацию бактерий рода Lactobacillus осуществляли на основании определения ферментации углеводов с использованием углеводов и бульона с 0,3% бромкрезолового зелёного (Определитель бактерий Берджи, 1997), бактерий рода Enterococcus - с помощью мультиплексной (мультилокусной) полимеразной цепной реакции по наличию видовых генов, кодирующих синтез супероксиддисмутазы (Jackson C.R. et al., 2004).

Для постановки ПЦР бактериальные лизаты получали с помощью реагента «ДНК-ЭКСПРЕСС» («Литех», Россия), для ПЦР-амплификации использовали известные праймеры (Jackson C.R. et al., 2004). Синтез праймеров осуществлен компанией «СИНТОЛ» (г. Москва).

Детерминанты вирулентности энтерококков обнаруживали с помощью известных праймеров (Semedo Т. et al., 2003, Vankerckhoven V. et al., 2004).

Взаимодействие грибов рода Candida и бактерий рода Lactobacillus sp. исследовали при совместном культивировании в жидкой питательной среде Brucella Broth Base – BBB («Hi Media», Индия), а с бактериями рода Enterococcus spp. в бульоне Шадлера («Hi Media», Индия) (Ермоленко Е.И., 2007). Достоверность различий сравниваемых показателей оценивали по t-критерию Стьюдента (Лакин Г.Ф., 1990).

В ходе исследования при обследовании здоровых лиц из кишечника, репродуктивного тракта и ротовой полости были получены и идентифицированы на основании морфологических и биохимических свойств 34 штамма дрожжеподобных грибов рода Candida.

Частота встречаемости дрожжеподобных грибов рода Candida в кишечнике здоровых лиц составила 22%, в репродуктивном тракте – 30,4%, в ротовой полости - 21%. Численность грибов рода Candida, выделенных из всех изученных биотопов, не превышала 1х103 КОЕ/мл.

Наиболее часто из всех изученных биотопов выделялись C.albicans, которые регистрировались в ротовой полости в 100% случаев, в кишечнике – в 82% и в репродуктивном тракте – в 64,7% случаев. Другие виды дрожжеподобных грибов встречались значительно реже: C. glabrata в 23,5% случаев в репродуктивном тракте и 9% случаев в кишечнике, C. tropicalis в 11,8% и 9% случаев, соответственно.

При изучении факторов патогенности у грибов рода Candida, выделенных от здоровых людей в норме, было установлено, что все изученные штаммы продуцировали каталазу, тогда как фосфолипазной активностью обладали лишь 9% штаммов С. albicans, выделенных из репродуктивного тракта. Наличием липолитической активности характеризовались 86% штаммов С. albicans, выделенных из ротовой полости, 89% - из кишечника, 90,1% - из репродуктивного тракта, а также 25% вагинальных изолятов C.glabrata.

Изучение способности к инактивации факторов естественной резистентности у изученных грибов рода Candida показало наличие АЛА у 43% штаммов С.

albicans, выделенных из ротовой полости, со средним значением признака, равным 0,27±0,015 мкг/мл и у 33,3% фекальных изолятов со средним значением 0,14±0,01 мкг/мл. Все штаммы C. tropicalis, выделенные как из репродуктивного тракта, так и из кишечника и 25% вагинальных изолятов C. glabrata, обладали способностью к инактивации лизоцима со средним значением, равным 0,1±0,001 и 0,15±0,002 мкг/мл и 0,29 ±0,003 мкг/мл, соответственно.

sIgA-протеазной активностью обладали все штаммы C. tropicalis, выделенные из кишечника и репродуктивного тракта и C. glabrata, выделенные из кишечника, со средними значениями признака 0,1±0,01, 0,2±0,015 и 0,3±0, мкг/мл, соответственно. Способностью к инактивации sIgA характеризовались все штаммы С. albicans, выделенные из ротовой полости, и 33% культур, выделенных из репродуктивного тракта, со средними значениями признака 0, мкг/мл, а также 50% штаммов C. glabrata, выделенных из репродуктивного тракта, у которых среднее значение признака составляло 0,25±0,001 мкг/мл.

Для всех штаммов грибов рода Candida, выделенных от здоровых людей в норме, было характерно наличие антиоксидантной активности с высокой выраженностью признака: у С. albicans, выделенных из ротовой полости, среднее значение признака составляло 9,8±3,8 ед. кв., у фекальных изолятов - 9,3±2, ед. кв. и у изолятов из репродуктивного тракта 9,7±2,7 ед. кв. Выраженность АОА у C. tropicalis, выделенных из кишечника и репродуктивного тракта, составила 5,9±1,3 ед. кв., у C. glabrata – 3,8±0,4 и 2,9±0,9 ед. кв., соответственно.

Далее нами было установлено видовое разнообразие грибов рода Candida, выделенных из разных биотопов при инфекционно-воспалительных заболеваниях и дисбиозе. Наиболее часто выделяемым из всех биотопов явился вид C.albicans, который регистрировался в кишечнике в 73,6±3,8% случаев, репродуктивном тракте в - 76,5±8,5%, респираторном тракте - в 88,9±4,6% и в ротовой полости - в 86,2±7,7% случаев; значительно реже выделялись C. glabrata.

Необходимо отметить, что наиболее часто данный вид высевался из репродуктивного тракта (17,6±3,9%), из ротовой полости - в 13,8±3,8%, и значительно реже – из респираторного тракта (5,5±1,3%) и кишечника (5,3±1,1%). Штаммы C. tropicalis были изолированы только из кишечника и респираторного тракта, частота их встречаемости составляла 10,5±1,3% и 1,9±0,4%, соответственно.

Штаммы C. kefyr выделяли с частотой 7,9±2,4% из кишечника и 3,7±1,2% из респираторного тракта, а C. krusei была выделена в 2,7±1,3% случаев из кишечника и в 5,9±1,4% случаев из репродуктивного тракта. Проведенными исследованиями выявлено увеличение видового разнообразия грибов рода Candida в ряду:

ротовая полость, репродуктивный тракт, респираторный тракт, кишечник.

При изучении факторов патогенности у выделенных штаммов, было установлено, что фосфолипазной активностью обладает только C. albicans (49,0±4,5%), причем число штаммов с данным признаком значительно варьирует в зависимости от биотопа выделения: 58,8±13,6% изолятов C. albicans из репродуктивного тракта, 51,7±11,2% штаммов из ротовой полости; в 37,5±7,1% и 39,5±9,8% случаях из респираторного тракта и кишечника. Достоверно большее количество изолятов с высоким коэффициентом фосфолипазной активности отмечено при остром течении заболевания по сравнению с хроническим течением.

Липолитическая активность была обнаружена практически у всех исследованных видов грибов (исключение составили штаммы C. krusei): у C. аlbicans в 78,9±3,9% случаев, C. glabrata, C.kefyr и C. tropicalis в 26±2,8%, 20±1,7% и 20±1,8%, соответственно. При изучении распространенности данной активности у C. аlbicans в зависимости от биотопа выделения было обнаружено, что 86,2±7,7% изолятов с липолитической активностью выделено из ротовой полости; 74,1±6,4% - из респираторного тракта; 76,5±11,8% из репродуктивного тракта женщин и 65,8±9,2% из кишечника.

Среди non-albicans видов липолитическую активность проявляли 50±2,2% штаммов С. kefyr, все штаммы C. tropicalis, изолированные из респираторного тракта, и 75±1,9% штаммов C. glabrata, выделенных из ротовой полости.

Изучение продукции каталазы грибами рода Candida показало наличие у всех изученных штаммов этого фермента, необходимого грибам для предотвращения действия системы перекиси водорода, являющейся одним из наиболее активных фунгицидных факторов.

Таким образом, изучение биологических свойств у грибов рода Candida, выделенных при инфекционно-воспалительных заболеваниях и дисбиозе, позволило установить наличие каталазной, фосфолипазной и липолитической активности у C. аlbicans, липолитической активности у C. glabrata, C.kefyr, C.

tropicalis, каталазной активности у всех исследованных non-albicans видов. При анализе распространенности факторов патогенности у штаммов грибов рода Candida, выделенных при разных формах течения инфекционного процесса, достоверной разницы не установлено.

Известно, что грибы рода Candida обладают многоступенчатой стратегией ускользания от иммунной защиты хозяина, во многом обеспечиваемой секрецией различного вида протеаз, способных инактивировать эффекторы врожденного (С3b, C4b, C5 - компоненты комплемента) и адаптивного (IgG) иммунитета (Behnsen J. et al., 2010), что существенно снижает уровень антимикробной защиты макроорганизма.

Анализ распространенности генетических детерминант патогенности свидетельствует о высокой частоте встречаемости генов семейства Sap у C.

albicans, выделенных при инфекционно-воспалительных заболеваниях и дисбиозе кишечника (рис. 1). Восемь из 10 генов секретируемых аспартат протеаз (Sap1-Sap4, Sap6, Sap7, Sap9, Sap10) встречаются у изолятов из ротовой полости, кишечника и респираторного тракта, а пять генов (Sap4, Sap6, Sap7, Sap9 и Sap10) у штаммов из репродуктивного тракта. Гены Sap5 и Sap8 не обнаруживаются у грибов ни в одном из изученных биотопов.

Рис. 1. Фореграмма наличия генов SAP6 у C. albicans: дорожка 1 маркер молекулярного веса (GeneRuler 1 kbp DNA Ladder (Fermentas, Литва)); дорожка 2 – отрицательный контроль; штаммы 1, 2, 3, 4, 7, 9, 10, 11 – специфический продукт реакции (600 bp), соответствующий гену SAP Для всех штаммов грибов рода Candida, выделенных из разных биотопов при инфекционно-воспалительных заболеваниях и дисбиозе, было характерно наличие антиоксидантной активности со средними значениями выраженности признака у C. glabrata, равными 1,6±0,23 ед. кв., С. albicans 1,2±0,07 ед. кв., C.

tropicalis – 1,1±0,2 ед.кв., у С. kefyr и C. krusei - 0,9±0,01 ед. кв. и 0,96±0,1 ед.

кв., соответственно. При изучении выраженности АОА у грибов рода Candida, выделенных из разных биотопов, отмечено, что максимальной АОА обладали изоляты из ротовой полости (2,9±0,4 ед. кв.), у штаммов, выделенных из респираторного тракта, среднее значение признака составило 1,5±0,2 ед. кв., у фекальных штаммов 1,4±0,2 ед. кв., у вагинальных изолятов – 1,0±0,8 ед. кв.

При изучении АОА C. аlbicans, выделенных при разных формах течения инфекционного процесса, установлено, что значения признака в 1,5 раза выше при остром течении заболевания по сравнению с хроническим течением.

Полученные нами данные подтверждают тот факт, что антиоксиданты защищают возбудителя от окислительного стресса и могут быть факторами его выживания на ранних стадиях болезни (Абрамова Л.С. с соавт., 2008).

На следующем этапе нашей работы у изолятов грибов были изучены факторы персистенции, одним из которых является способность к образованию биопленок (БО), представляющих собой специфическим образом сформированные сообщества микроорганизмов, компартменты которого выполняют различные функции и имеют единую цель – максимальную адаптацию к данной экологической нише и наиболее эффективное распространение популяции. И поскольку самым распространенным и часто выделяемым видом в нашем исследовании являлся Candida albicans, нами было принято решение изучить способность к пленкообразованию только у штаммов данного вида, выделенных из разных биотопов.

Проведенные исследования показали, что 79±4,0% штаммов C. albicans на абиотической поверхности формируют пленку, у 21±4,0% штаммов способности к образованию биопленок не установлено.

В зависимости от биотопа выделения способность БО у грибов была различной: у 100% штаммов, выделенных из кишечника и репродуктивного тракта, 71,0±6,6% изолятов из респираторного тракта и у 25±6,8% - из ротовой полости.

Среднее значение признака БО С.albicans в зависимости от биотопа выделения варьировало в пределах от 1,2±0,1 до 1,5±0,3. Наиболее высокие значения коэффициента биопленкообразования отмечены у штаммов С.albicans, выделенных из кишечника, что согласуется с полученными ранее в экспериментальных исследованиях данными А.В. Валышева с соавт. (2009).

При сравнении коэффициента биопленкообразования у штаммов С.albicans, выделенных при разных формах течения инфекционного процесса, достоверной разницы не установлено.

Инфекционные заболевания являются результатом сложного взаимодействия между патогеном и хозяином. В последние годы наблюдается изменение характера течения инфекций в сторону увеличения доли их затяжных и хронических форм, при этом нередко этиологическим фактором являются условнопатогенные микроорганизмы, включая грибы рода Candida. И если основной стратегией патогенных микроорганизмов при хронической инфекции является адаптация, направленная на длительное выживание, которое возможно только при реализации эффективных механизмов защиты и нападения, то при острой – размножение и распространение. Поэтому далее мы изучили АЛфА, sIgAпротеазную активность и АЛА грибов рода Candida.

При изучении способности грибов к инактивации факторов естественной резистентности была установлена высокая частота распространения антилизоцимной, антилактоферриновой и sIgA-протеазной активностей у изученных штаммов.

Выраженность АЛфА у грибов рода Candida была следующей: у С. kefyr 95,5±10,0 нг/мл; C. glabrata 171,3±20,0 нг/мл; С. albicans 189,1±40,7 нг/мл; C.

krusei 208,2±5,4 нг/мл; C. tropicalis 271,6±15,3 нг/мл. Результаты исследования способности грибов рода Candida к инактивации лактоферрина показали, что наиболее выраженными значениями АЛфА характеризуются вагинальные штаммы (228,8±26,83 нг/мл), что может сказываться на снижении бактерицидных свойств вагинального секрета, одним из факторов защиты которого является лактоферрин (Valenti P., Antonini G., 2005). Эти данные подтверждают принцип экологической детерминированности факторов персистенции микроорганизмов (Бухарин О.В., 1999). При изучении АЛфА дрожжеподобных грибов рода Candida, выделенных при разном течении инфекционно-воспалительного процесса, было установлено, что уровень признака всех исследуемых видов, выделенных при острой форме заболевания, был достоверно ниже при сравнении с видами, выделенными при хроническом течении заболевания.

Для многих представителей микрофлоры, колонизирующих слизистые открытых полостей организма человека, характерна способность секретировать протеолитические ферменты, расщепляющие sIgA и IgA (Кострюкова Н.Н., Бехало В.А., 2006; Rao M.B. et al., 1998).

Исследование sIgA-протеазной активности у грибов рода Candida показало наличие данного признака у всех изученных штаммов, что расширяет представления о механизмах выживания условно-патогенных микроорганизмов на слизистых оболочках, поскольку секреторный IgA является основным протективным иммуноглобулином местной иммунной защиты. Выраженность sIgAпротеазной активности составила у C. kefyr 1,0±0,4 мкг/мл, C. albicans - 0,9±0, мкг/мл, C. glabrata - 0,9±0,5 мкг/мл, С. tropicalis - 0,7±0,3 мкг/мл, C. krusei мкг/мл.

Высокий уровень sIgA-протеазной активности у грибов, выделенных из респираторного тракта (1,2±0,05 мкг/мл), может быть связан с их выживанием в условиях высокой концентрации секреторного IgA в данном биотопе (Тотолян А.А.,1999).

Полученные нами результаты о высоком уровне sIgA-протеазной активности у штаммов, выделенных при хронической инфекции, свидетельствуют, что sIgA-протеазы грибов рода Candida способны поддерживать воспалительный процесс и участвовать в его хронизации.

Уровень антилизоцимной активности грибов нарастал в ряду: C. albicans, C.

tropicalis, C. glabrata, C. kefyr, C. krusei, максимальная экспрессия признака была отмечена у штаммов, выделенных из репродуктивного тракта (1,0±0, мкг/мл*ОП), и уменьшалась в ряду: ротовая полость (0,9±0,1 мкг/мл*ОП), кишечник (0,9±0,06 мкг/мл*ОП), респираторный тракт (0,8±0,08 мкг/мл*ОП). Значения признака при остром течении заболевания были достоверно ниже, чем при хроническом.

Проведенными исследованиями установлено, что уровень изученных факторов персистенции (АЛА, АЛфА, sIgA-протеазная активность) C. аlbicans и C.

glabrata, выделенных при острой форме инфекционно-воспалительного заболевания, был достоверно ниже, чем при хронической форме инфекционного процесса. Выявлена прямая зависимость между уровнем факторов персистенции грибов и длительностью течения заболевания: sIgA-протеазная активность у различных видов грибов рода Candida, наряду с антилактоферриновой и антилизоцимной активностями, определяет персистенцию данных микроорганизмов в организме человека (рис. 2, 3, 4).

Рис. 2. Выраженность АЛфА активности грибов рода Candida, выделенных при разных формах течения инфекционно-воспалительного процесса (* - 1,2 0,05) Рис. 3. Выраженность sIgA-протеазной активности грибов родагрибов рода Candida, выд ленных при разных формах течения инфекционно-воспалительного процесса ение Хроническое Острое течение торный тракт Репродуктивный ение Хроническое Острое течение Рис.

4. Выраженность АЛА активности-грибов рода Candida, выделенных при разных формах течения инфекционно-воспалительного процесса (* - р 0,05) сть факторов персистенции у грибов рода Candida, выделенных при разных формах течения инфекционно-воспалительного процесса Проведенные исследования позволили охарактеризовать различия биопрофилей грибов рода Candida по распространенности и уровню выраженности признаков в зависимости от занимаемого биотопа (рис. 5, 6). Уровень экспрессии персистентных свойств у грибов рода Candida, выделенных из разных биотопов тела человека, экологически детерминирован и проявляется в соответствии с интенсивностью их контакта с уровнем соответствующих факторов естественной резистентности в биотопе.

Затем нами была изучена чувствительность к антимикотикам грибов рода Candida, выделенных из разных биотопов. Для количественной характеристики антибиотикорезистентности изучаемых штаммов дрожжеподобных грибов мы использовали показатель «маркер антибиотикорезистентности» - МР (Бондаренко В.И., 1990), который рассчитывали как отношение числа штаммов, резистентных к четырем и более антимикотикам, к общему числу штаммов.

Анализ антибиотикорезистентности показал, что максимальный маркер антибиотикорезистентности характерен для С. glabrata (0,67±0,046), минимальный для С. albicans (0,19±0,038). У C. kefyr и С. tropicalis МР был равен 0,4±0,047, у C. krusei 0,5±0,048. Выраженность маркера резистентности изменялась в зависимости от биотопа выделения грибов рода Candida. Так, максимальное значение МР было характерно для изолятов из вагинального биотопа (0,47±0,017) и уменьшалось в ряду респираторный тракт (0,25±0,015), кишечник (0,19±0,007), ротовая полость (0,17±0,009). При сравнении МР у штаммов С.albicans, выделенных при разных формах течения инфекционного процесса, достоверной разницы не установлено (0,23±0,05 и 0,27±0,04 соответственно).

Таким образом, грибы рода Candida, изолированные из разных экотопов тела человека, обладают вариабельной антибиотикорезистентностью, частота которой зависит от видовой принадлежности грибов и биотопа выделения.

Анализ генетических детерминант резистентности, среди штаммов C.albicans, выделенных из всех изученных биотопов, показал широкую распространенность генов резистентности к антимикотикам FLU1, CDR1, MDR1 с максимальной частотой встречаемости у изолятов из ротовой полости и минимальной у штаммов из респираторного тракта и кишечника.

Полученные данные о факторах персистенции, патогенности и антибиотикорезистентности грибов позволили охарактеризовать различия биопрофилей грибов рода Candida, выделенных при инфекционно-воспалительных заболеваниях и дисбиозе кишечника в зависимости от занимаемого биотопа, на основе чего возможна дифференциация по распространенности и уровню выраженности признаков. Показано, что экспрессия персистентных свойств у грибов рода Candida, выделенных из разных биотопов тела человека, экологически детерминирована и проявляется в соответствии с уровнем факторов естественной резистентности в биотопе.

Рис. 5.Распространенность факторов патогенности и персистенции грибов Рис. 6. Выраженность факторов патогенности и персистенции грибов рода Значительное внимание исследователей в последнее время уделено изучению взаимодействия симбионтов в микросимбиоценозе при инфекции. Изучение межбактериальных взаимодействий симбионтов в ассоциативном симбиозе при инфекции выявило два существенных момента: подавление факторов персистенции патогенов под действием анаэробной индигенной микрофлоры и повышение персистентного потенциала патогенов и условно-патогенных микроорганизмов под действием ассоциантов-симбионтов при формировании патобиоценозов и бактерионосительства (Бухарин О.В. с соавт., 2011). При инфекции меняется персистентный потенциал микроорганизмов, что немаловажно для развития инфекционного процесса.

При выделении грибов рода Candida из кишечника и репродуктивного тракта параллельно было выделено по 10 штаммов фекальных энтерококков и лактобацилл, из репродуктивного тракта - 7 штаммов бактерий рода Enterococcus sp. и 10 штаммов Lactobacillus sp. Выделенные энтерококки были идентифицированы с помощью мультиплексной (мультилокусной) полимеразной цепной реакции по наличию видовых генов, кодирующих синтез супероксиддисмутазы (Jackson C.R. et al., 2004), как E.faecalis (12 штаммов) и E.faecium (5 штаммов). Все выделенные лактобациллы были идентифицированы на основании морфологических, тинкториальных, биохимических свойств как L.acidophilus ( штаммов), L.plantarum (4 штамма), L. casei (4 штамма) и L.fermentum (8 штамма). Изучение факторов патогенности энтерококков проводили на фенотипическом уровне по способности продуцировать желатиназу и гемолизировать эритроциты и на молекулярно-генетическом с помощью ПЦР с детекцией в агарозном геле с определением генов адгезии и колонизации (asa, esp), токсигенности (cylA, B, M), пенетрации, колонизации и повреждения тканей (hyl, gelE). В результате было выявлено, что все фекальные изоляты E.faecium не проявляли патогенности на фенотипическом и молекулярно-генетическом уровнях, все выделенные штаммы E.faecalis обладали широким спектром детерминант вирулентности и проявляли желатиназную активность. Таким образом, лактобациллы на основании видовой принадлежности продукции перекиси водорода и энтерококки, не обладающие факторами патогенности на фенотипическом и молекулярно-генетическом уровнях отнесены к представителям нормофлоры кишечника и репродуктивного тракта человека, а остальные изоляты – к группе патогенных ассоциантов. И далее нами было изучено влияние этих бактерий на факторы персистенции грибов и их способность к биопленкообразованию.

При сокультивировании с лактобациллами, выделенными из кишечника, у всех фекальных изолятов С. аlbicans, и у большинства штаммов C.glabrata и C.tropicalis наблюдалось достоверное снижение способности к инактивации лизоцима в 2 раза. При сокультивирования с лактобациллами, выделенными из репродуктивного тракта, достоверно снижались как распространенность, так и выраженность антилизоцимной активности у грибов рода Candida вплоть до потери признака. Бактерии рода Lactobacillus вызывали снижение способности образовывать биопленки у большинства фекальных изолятов С. аlbicans вплоть до потери признака, но индуцировали биопленкообразование у non-albicans видов, выделенных из кишечника. У большинства non-albicans видов, выделенных из репродуктивного тракта, лактобациллы стимулировали способность к биопленкообразованию, но разнонаправлено влияли на данный признак С. аlbicans. Характер влияния бактерий рода Lactobacillus на распространенность способности к инактивации лизоцима и биопленкообразованию грибов рода Candida представлен на рис. 7-10.

C. krusei C.glabrata C.albiсans Рис. 7. Характер влияния бактерий рода Lactobacillus на антилизоцимную акC. krusei тивность фекальных изолятов грибов рода Candida C.glabrata C.albiсans Рис. 8. Характер влияния бактерий рода Lactobacillus на антилизоцимную активность вагинальных изолятов грибов рода Candida C. krusei C.glabrata C.albiсans Рис. 9. Характер влияния бактерий рода Lactobacillus на способность к биодоля штаммов пленкообразованию фекальных изолятов грибов рода Candida C. krusei C.glabrata C.albiсans Рис. 10. Характер влияния бактерий рода Lactobacillus на способность к биопленкообразованию вагинальных изолятов грибов рода Candida На следующем этапе исследования было изучено влияние бактерий Enterococcus на биологические свойства грибов рода Candida. Установлено, что как E.faecium, так и E.faecalis изменяют выраженность антилизоцимной активности и способности к биопленкообразованию грибов рода Candida. Так фекальные изоляты E.faecium снижают способность грибов рода Candida к инактивации лизоцима на 20%, коэффициент биопленкообразования у С. аlbicans на 27%, а у non-albicans видов вызывают потерю способности формировать биопленки. Как фекальные, так и вагинальные штаммы E.faecalis вызывают достоверное увеличение антилизоцимной активности грибов рода Candida, повышая АЛА фекальных изолятов С. аlbicans в 1,2 раза и non-albicans видов – в 1,7 раза, у вагинальных штаммов С. аlbicans – в 2,2 раза, non-albicans видов – в 1,6 раза. При сокультивировании с E.faecalis грибы рода Candida достоверно увеличивают способность к биопленкообразованию: вагинальные и фекальные изоляты С. аlbicans – в 1,2 раза, non-albicans виды, выделенные из кишечника – в 1,3 раза, а из репродуктивного тракта – в 1,4 раза. Характер влияния бактерий рода Enterococcus на распространенность способности к инактивации лизоцима и биопленкообразованию грибов рода Candida представлен на рис. 11-14.

Рис.11. Характер влияния бактерий рода Enterococcus на антилизоцимную активность фекальных изолятов грибов рода Candida Рис.12. Характер влияния бактерий рода Enterococcus на антилизоцимную активность вагинальных изолятов грибов рода Candida Рис.13. Характер влияния бактерий рода Enterococcus на способность к биопленкообразованию фекальных изолятов грибов рода Candida Рис.14. Характер влияния бактерий рода Enterococcus на способность к биопленкообразованию вагинальных изолятов грибов рода Candida Таким образом, при изучении межмикробных связей индигенной и ассоциативной микрофлоры кишечника и репродуктивного тракта при дисбиозе и инфекционно-воспалительных заболеваниях установлено преимущественное подавление факторов персистенции C.albicans под действием микроорганизмов рода Lactobacillus и E.faecium; и повышение персистентного потенциала C.albicans под действием E.faecalis.

Подводя итог проделанной работе, следует заключить, что различные биотопы тела человека характеризуются особенностями видового состава грибов рода Candida в норме, при инфекционно-воспалительных заболеваниях и дисбиозе кишечника, а выраженность биологических свойств у данных микроорганизмов является информативным критерием их экотопной принадлежности.

Качественный спектр биологических свойств и количественные параметры факторов персистенции у грибов рода Candida определяют направление развития инфекционного процесса, а межмикробные бактериально-грибковые взаимодействия при инфекционно-воспалительных заболеваниях и дисбиозе кишечника характеризуются преимущественным подавлением факторов персистенции C.albicans под действием представителей индигенной микрофлоры и стимуляцией – под влиянием ассоциативных бактерий.

1.Установлена низкая частота обнаружения грибов рода Candida, выделенных у здоровых людей из кишечника, репродуктивного тракта и ротовой полости. В условиях нормоценоза доминирующим видом являлся C.albicans, наряду с которым из кишечника и репродуктивного тракта выделяли C. glabrata и С. tropicalis.

2. Установлено видовое разнообразие грибов рода Candida, выделенных из разных биотопов тела человека при инфекционно-воспалительных заболеваниях и дисбиозе кишечника: доминирующим явился вид C.albicans, значительно реже выделялись C. kefyr, C. glabrata, С. tropicalis, C. krusei. Выявлено увеличение видового разнообразия грибов рода Candida в ряду: ротовая полость, репродуктивный тракт, респираторный тракт, кишечник.

3. Проведена комплексная оценка фенотипических характеристик грибов рода Candida – способности к инактивации факторов естественной резистентности: (лизоцима, лактоферрина, секреторного иммуноглобулина А), выделенных из разных биотопов у здоровых лиц, больных инфекционно-воспалительными заболеваниями и при дисбактериозе кишечника человека, что позволило определить диагностическую информативность изученных свойств при разных формах течения заболеваний. Наличие АЛА и sIgA–протеазной активностей у грибов рода Candida, выделенных от здоровых лиц, свидетельствует об участии данных факторов в процессах колонизации слизистых.

4. Охарактеризованы различия биопрофилей грибов рода Candida в зависимости от занимаемого биотопа, что позволяет их дифференцировать по распространенности и уровню выраженности признаков. Показано, что экспрессия персистентных свойств у грибов рода Candida, выделенных из разных биотопов тела человека, экологически детерминирована и проявляется в соответствии с уровнем факторов естественной резистентности в биотопе.

5. Установлено, что грибы рода Candida, изолированные из разных биотопов тела человека при инфекционно-воспалительных заболеваниях и дисбиозе кишечника, обладают вариабельной антибиотикорезистентностью, частота которой зависит от видовой принадлежности грибов и биотопа выделения.

6. Выявлено, что для грибов рода Candida, выделенных у здоровых лиц, при инфекционно-воспалительных заболеваниях и дисбиозе кишечника характерно наличие каталазной, липолитической, антиоксидантной активностей и способности к биопленкообразованию. Культуры, изолированные при ИВЗ и микроэкологических нарушениях кишечника, наряду с данными свойствами, характеризовались также наличием фосфолипазной активности и низкими значениями АОА по сравнению с культурами от здоровых лиц.

7. При проведении молекулярно-генетических исследований установлено наличие генов секретируемых аспартат протеиназ (SAP1-4, SAP6-7, SAP9-10) и генов антибиотикорезистентности (MDR1, FLU1, CDR1) как у грибов, выделенных у здоровых лиц, так и при инфекционно-воспалительных заболеваниях и дисбактериозе.

8. При изучении межмикробных связей индигенной и ассоциативной микрофлоры кишечника и репродуктивного тракта при дисбиозе и инфекционновоспалительных заболеваниях установлено преимущественное подавление факторов персистенции C.albicans под действием микроорганизмов рода Lactobacillus и E.faecium; и повышение персистентного потенциала C.albicans под действием E.faecalis.

Список работ, опубликованных в научных журналах, рекомендованных 1. Капустина О.А. Видовой состав и биологические свойства грибов рода Candida, выделенных из разных биотопов тела человека / О.А. Капустина, Л.Е.

Логачева, О.Л. Карташова // Известия Оренбургского государственного аграрного университета, 2009. №4. С. 179-181.

2. Капустина О.А. Биологические свойства грибов рода Candida / О.А.

Капустина, О.В. Михайличенко, О.Л. Карташова // Бюллетень Московского общества испытателей природы, отдел биологический, 2009. Т. 114. Вып. 2.

С. 54-55.

3. Капустина О.А. Таксономический состав и физиологические свойства грибов рода Candida, выделенных из разных биотопов / О.А.Капустина, О.Л.

Карташова, Н.С. Пашинин // Бюллетень Московского общества испытателей природы, отдел биологический, 2009. Т. 114. Вып. 3. С. 418-420.

4. Факторы персистенции грибов рода Candida, выделенных из разных биотопов / О.А. Капустина, О.Л. Карташова, И.Н. Чайникова, Н.С. Пашинин // Проблемы медицинской микологии, 2010. Т.12. №2. С. 92.

5. Капустина О.А. Влияние экзометаболитов бактерий рода Lactobacillus на антилизоцимную активность грибов рода Candida / О.А. Капустина, Я.Е.

Диянова // Вестник Оренбургского государственного университета, 2011. №4.

С. 38-40.

6. Биопленкообразование грибов рода Candida, выделенных из разных биотопов тела человека / О.А. Капустина, О.Л. Карташова, Л.П. Потехина, Т.М. Уткина // Проблемы медицинской микологии, 2011. Т.13. №2. С. 81-82.

7. Капустина О.А. Устойчивость грибов рода Candida к факторам естественного иммунитета человека в условиях микроэкологических нарушений / О.А. Капустина, И.Н. Чайникова, О.Л. Карташова // Гигиена и санитария, 2012. №3. С. 27-29.

8. Капустина О.А. Видовая характеристика и факторы персистенции грибов рода Candida, выделенных из разных биотопов при инфекционновоспалительных заболеваниях и дисбиозе кишечника / О.А. Капустина, И.Н.

Чайникова, О.Л. Карташова // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии, 2012. №4. С. 37-41.

9. Капустина О.А. Влияние Lactobacillus на способность к биопленкообразованию Candida, выделенных из разных биотопов тела человека / О.А. Капустина, О.Л. Карташова, Т.М. Уткина // Проблемы медицинской микологии, 2012. Т. 14. №2. С 91.

10. Капустина О.А. Антилизоцимная активность грибов рода Candida, выделенных из разных биотопов. Тематический сборник научных работ / О.А.

Капустина, О.В. Михайличенко, Е.А. Назарова // Современный мир, природа и человек [Электронный журнал]. – Томск, 2009. URL: http:// www.tele-conf.ru.

11. Капустина О.А. Антиоксидантная активность грибов рода Candida / О.А. Капустина, О.В. Михайличенко, Е.А. Назарова // Тематический сборник научных работ. Современный мир, природа и человек [Электронный журнал]. Томск, 2009. URL: http:// www.tele-conf.ru.

12. Капустина О.А. Антилактоферриновая активность грибов рода Candida / О.А. Капустина, О.В. Михайличенко, О.Л. Карташова // Сборник научных работ студентов и молодых ученых Всероссийской конференции с международным участием «Актуальные вопросы медицинской науки». – Ярославль, 2009. С. 77.

13. Чувствительность к противогрибковым препаратам грибов рода Candida, выделенных из разных биотопов тела человека / О.А. Капустина, О.Л.

Карташова, Н.С. Пашинин, Р.М. Нургалиева // Современные наукоемкие технологии, 2010. №2. С. 94.

14. Капустина О.А. Особенности биопленкообразования грибов рода Candida / О.А. Капустина // Материалы V научно-практической конференции «Студенты и аспиранты в науке». – Оренбург, 2011. С. 15-17.

15. Капустина О.А. Факторы патогенности грибов рода Candida и возможность их регуляции эфирными маслами / О.А. Капустина, О.Л. Карташова //Бюллетень Оренбургского научного центра УрО РАН [Электронный журнал], 2013. №1. URL: http://www.elmag.uran.ru.

КАПУСТИНА

ОЛЬГА АЛЕКСАНДРОВНА

ХАРАКТЕРИСТИКА ГРИБОВ РОДА CANDIDA КАК АССОЦИАНТОВ

В МИКРОБИОЦЕНОЗАХ ТЕЛА ЧЕЛОВЕКА

Оригинал макет подготовлен в программе Word for Windows Формат 60*84/16. Усл.-печ. Л. 1,0. Печать оперативная.



 
Похожие работы:

«Андрющенко Сергей Валерьевич ГЕНЕТИЧЕСКИЕ ДЕТЕРМИНАНТЫ СПЕЦИФИЧЕСКИХ СЕКРЕТИРУЕМЫХ ИНГИБИТОРОВ ЛИЗОЦИМА В АНТИЛИЗОЦИМНОЙ АКТИВНОСТИ ЭНТЕРОБАКТЕРИЙ 03.02.03 – Микробиология Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Оренбург – 2012 2 Работа выполнена в федеральном государственном бюджетном учреждени науки Институте клеточного и внутриклеточного симбиоза Уральского отделения Российской академии наук. Научный руководитель : кандидат...»

«СПЕРАНСКАЯ НАТАЛЬЯ ЮРЬЕВНА СОСТАВ И ЖИЗНЕННОЕ СОСТОЯНИЕ ДРЕВЕСНЫХ НАСАЖДЕНИЙ г. БАРНАУЛА Специальность 03.00.05 – ботаника АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Барнаул – 2007 2 Работа выполнена на кафедре ботаники Алтайского государственного университета, г. Барнаул Научный руководитель : доктор биологических наук, профессор, Терёхина Татьяна Александровна, Алтайский госуниверситет Официальные оппоненты : доктор биологических наук,...»

«ДЬЯКОВА Елена Владимировна ВЛИЯНИЕ ЭКСПРЕССИИ ГЕНА МЕМБРАННОЙ + Н -ПИРОФОСФАТАЗЫ RHODOSPIRILLUM RUBRUM НА УРОВЕНЬ СОЛЕУСТОЙЧИВОСТИ РАСТЕНИЙ ТАБАКА 03.01.06 – биотехнология (в том числе бионанотехнологии) 03.01.03 – молекулярная биология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук МОСКВА - 2012 Работа выполнена в лаборатории генетической инженерии в Федеральном государственном бюджетном учреждении науки Центре Биоинженерия Российской...»

«Босхомджиев Араша Петрович ИЗУЧЕНИЕ БИОДЕСТРУКЦИИ И БИОСОВМЕСТИМОСТИ ПОЛИМЕРНЫХ СИСТЕМ НА ОСНОВЕ ПОЛИОКСИАЛКАНОАТОВ 03.01.04 - биохимия АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Москва – 2010 Работа выполнена в лаборатории биохимии азотфиксации и метаболизма азота Учреждения Российской академии наук Института биохимии им. А.Н. Баха РАН Научный руководитель : кандидат биологических наук Г.А. Бонарцева Официальные оппоненты : доктор...»

«Бахтин Роман Федорович ОСОБЕННОСТИ ЭКОЛОГИИ ЧЕРНОГО КОРШУНА (MILVUS MIGRANS BODD.) В УСЛОВИЯХ АНТРОПОГЕННЫХ ЛАНДШАФТОВ 03.02.08 – экология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Барнаул – 2012 Работа выполнена на кафедре экологии, биохимии и биотехнологии ФГБОУ ВПО Алтайский государственный университет Научный руководитель : доктор биологических наук, профессор Соколова Галина Геннадьевна Официальные оппоненты : доктор биологических...»

«Смелышева Лада Николаевна СЕКРЕТОРНАЯ ФУНКЦИЯ ЖЕЛУДКА И ПОДЖЕЛУДОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ ПРИ ДЕЙСТВИИ ЭМОЦИОНАЛЬНОГО СТРЕССА 03.00.13 - физиология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук Тюмень – 2007 2 Работа выполнена на кафедре анатомии, физиологии и гигиены человека ГОУ ВПО Курганский государственный университет Научный консультант : доктор биологических наук, профессор, заслуженный деятель науки РФ Кузнецов Александр Павлович Официальные...»

«Шамшаева Виктория Федоровна ПОЧВЫ ПРИОЗЕРНЫХ ЛАНДШАФТОВ СТЕПНОЙ ЗОНЫ ХАКАСИИ Специальность 03.00.27 – почвоведение Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Томск-2003 Работа выполнена на кафедре почвоведения и экологии почв Томского государственного университета Научные руководители: доктор биологических наук, профессор М.Г. Танзыбаев доктор биологических наук С.П. Кулижский Официальные оппоненты : доктор географических наук, профессор...»

«ДОМАНИЦКАЯ НАТАЛЬЯ ВАСИЛЬЕВНА РОЛЬ ABCC10-ТРАНСПОРТЕРА В ФОРМИРОВАНИИ МНОЖЕСТВЕННОЙ ЛЕКАРСТВЕННОЙ УСТОЙЧИВОСТИ РАКА МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ ПРИ ЛЕЧЕНИИ ТАКСАНАМИ 03.01.04 – биохимия Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Новосибирск – 2014 Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении Научноисследовательский институт молекулярной биологии и биофизики Сибирского отделения Российской академии медицинских наук, г....»

«ЧЕРНИКОВА Анна Александровна НАКОПЛЕНИЕ МЕДИ И МАРГАНЦА В КЛЕТКАХ ЦИАНОБАКТЕРИИ SPIRULINA PLATENSIS 03.00.12 – Физиология и биохимия растений АВТОРЕФЕРАТ ДИССЕРТАЦИИ на соискание ученой степени кандидата биологических наук Москва -2009 Работа выполнена в Лаборатории управляемого фотобиосинтеза Учреждения Российской академии наук Института физиологии растений им. К.А. Тимирязева РАН, г. Москва НАУЧНЫЙ РУКОВОДИТЕЛЬ: доктор биологических наук, профессор Пронина Наталия...»

«ЯЗЫНИНА Елена Валентиновна РАЗРАБОТКА ИММУНОХИМИЧЕСКИХ МЕТОДОВ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГЕРБИЦИДОВ 03.00.04 – биохимия АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук Москва - 2003 Работа выполнена в лаборатории иммунобиохимии Института биохимии им. А.Н. Баха РАН. Научные руководители: доктор химических наук, профессор Б.Б. Дзантиев, кандидат биологических наук А.В. Жердев. Официальные оппоненты : доктор химических наук Б.А. Кузнецов, кандидат химических...»

«СОСНИЦКАЯ Татьяна Николаевна ЭКОЛОГИЧЕСКОЕ СОСТОЯНИЕ ПОЧВ Г. СВИРСКА ИРКУТСКОЙ ОБЛАСТИ: ОСОБЕННОСТИ НАКОПЛЕНИЯ И ДЕТОКСИКАЦИИ ТЯЖЕЛЫХ МЕТАЛЛОВ 03.02.08 – экология (биологические наук и) АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Иркутск – 2014 Работа выполнена на кафедре агроэкологии, агрохимии, физиологии и защиты растений Федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования Иркутская...»

«МУДРАК ДАРЬЯ ЕВГЕНЬЕВНА Молекулярно-генетические особенности устойчивости к бета-лактамным антибиотикам грамотрицательных микроорганизмов - возбудителей нозокомиальных инфекций. 03.02.03 – Микробиология, 03.01.03 - Молекулярная биология Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Москва – 2010 2 Работа выполнена в государственном образовательном учреждении дополнительного профессионального образования Российская Медицинская Академия...»

«Мирошкин Денис Георгиевич ВЛИЯНИЕ ГОРОДСКОЙ СРЕДЫ НА ОСОБЕННОСТИ МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНОГО РАЗВИТИЯ МАЛЬЧИКОВ 14-15 ЛЕТ (НА ПРИМЕРЕ ГОРОДОВ АЛТАЙСКОГО КРАЯ) 03.02.08 – экология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Барнаул–2012 Работа выполнена на кафедре биологии ФГБОУ ВПО Алтайская государственная академия образования имени В.М. Шукшина Научный руководитель : доктор биологических наук, профессор Гайнанова Нурия Камалтдиновна Официальные...»

«Корчагин Владимир Иванович ЗАЩИТА ОКРУЖАЮЩЕЙ СРЕДЫ В ПРОИЗВОДСТВЕ ЭЛАСТОМЕРНЫХ КОМПОЗИЦИЙ Специальность: 03.00.16 – Экология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора технических наук Иваново - 2008 2 Работа выполнена на кафедре машин и аппаратов химических производств и на кафедре технологии переработки полимеров ГОУ ВПО Воронежская государственная технологическая академия Научный консультант : доктор технических наук, профессор, Шутилин Юрий Федорович...»

«Черневская Екатерина Александровна РОЛЬ БИОХИМИЧЕСКИХ МАРКЕРОВ В ПЕРИОПЕРАЦИОННОМ МОНИТОРИНГЕ ИНФЕКЦИИ У КАРДИОХИРУРГИЧЕСКИХ ПАЦИЕНТОВ 03.00.04 – биохимия АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Москва-2008 Диссертационная работа выполнена в Научном центре сердечно-сосудистой хирургии им. А.Н. Бакулева РАМН Научный руководитель : доктор медицинских наук, профессор Белобородова Наталья Владимировна Официальные оппоненты : доктор...»

«НЕСТЕРОВА ОЛЬГА ЮРЬЕВНА БИОХИМИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ НАТИВНЫХ И МОДИФИЦИРОВАННЫХ ФОРМ IgG НЕКОТОРЫХ ПРЕДСТАВИТЕЛЕЙ СЕМЕЙСТВА ПСОВЫХ Специальность 03.00.04 – биохимия АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Казань - 2009 2 Работа выполнена на кафедре биохимии и биотехнологии Государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования Удмуртский государственный университет Научный руководитель : кандидат...»

«Гордеева Татьяна Валерьевна ФАУНА И БИОНОМИЯ ВЫСШИХ РАЗНОУСЫХ ЧЕШУЕКРЫЛЫХ (LEPIDOPTERA, METAHETEROCERA) БУРЯТИИ 03.00.09 – энтомология Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Новосибирск – 2009 Работа выполнена в лаборатории экологии животных Института общей и экспериментальной биологии Сибирского отделения Российской академии наук Научный руководитель - д.б.н. Дубатолов Владимир Викторович Научный консультант - к.б.н. Василенко Сергей...»

«НЕВЗОРОВ Илья Анатольевич Изменения структуры и свойств тропомиозина при стабилизации и дестабилизации различных участков его молекулы 03.01.04 – биохимия Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Москва 2011 Работа выполнена в лаборатории молекулярной организации биологических структур Учреждения Российской Академии наук Института биохимии им. А.Н. Баха РАН Научный руководитель : доктор биологических наук, профессор Д.И. Левицкий...»

«Нетесонова Ирина Анатольевна Гумусовое и структурное состояние эродированных почв зонального ряда Специальность 03.02.13 – почвоведение АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Москва – 2010 Работа выполнена на кафедре почвоведения и в Испытательном центре почвенно-экологических исследований Российского государственного аграрного университета – МСХА имени К.А. Тимирязева Научный руководитель : заслуженный деятель науки РФ, доктор...»

«МАЗАНКО МАРИЯ СЕРГЕЕВНА ВЛИЯНИЕ СОЧЕТАННОГО ХИМИЧЕСКОГО И ЭЛЕКТРОМАГНИТНОГО ЗАГРЯЗНЕНИЯ НА БИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ПОЧВ 03.02.08 – экология (биологические наук и) АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Ростов-на-Дону – 2013 2 Работа выполнена на кафедре экологии и природопользования ФГАОУ ВПО Южный федеральный университет Научный руководитель : доктор сельскохозяйственных наук, профессор Колесников Сергей Ильич Официальные оппоненты :...»






 
© 2013 www.diss.seluk.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Авторефераты, Диссертации, Монографии, Методички, учебные программы»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.