WWW.DISS.SELUK.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА
(Авторефераты, диссертации, методички, учебные программы, монографии)

 

На правах рукописи

ЛОБОВ СЕМЕН ЛЕОНИДОВИЧ

СТРУКТУРНЫЕ ОСОБЕННОСТИ ГЕНОВ ПЕНДРИНА

(SLC26A4) И ПРЕСТИНА (SLC26A5) У БОЛЬНЫХ

НАСЛЕДСТВЕННОЙ НЕСИНДРОМАЛЬНОЙ

СЕНСОНЕВРАЛЬНОЙ ГЛУХОТОЙ

03.02.07 – генетика

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

УФА – 2013 2

Работа выполнена в лаборатории молекулярной генетики человека Федерального государственного бюджетного учреждения науки Института биохимии и генетики Уфимского научного центра РАН

Научный руководитель: Джемилева Лиля Усеиновна доктор медицинских наук, доцент

Официальные оппоненты: Викторова Татьяна Викторовна доктор биологических наук, профессор ГБОУ ВПО Башкирский Государственный Медицинский Университет, заведующая кафедрой биологии Спицин Виктор Алексеевич доктор биологических наук, профессор ФГБУ «Медико-генетический научный центр» РАМН, заведующий лабораторией экологической генетики

Ведущая организация: ГБОУ ВПО Российский национальный медицинский университет им. Н.И.

Пирогова

Защита диссертации состоится «_» мая 2013 г. в «» часов на заседании Диссертационного совета Д 002.133.01 при Федеральном государственном бюджетном учреждении науки Институте биохимии и генетики УНЦ РАН по адресу: 450054, Уфа, Пр. Октября, 71. ИБГ УНЦ РАН

С диссертацией и авторефератом можно ознакомиться в научной библиотеке Уфимского научного центра РАН по адресу: 450054, Уфа, Пр. Октября, 71 и на сайтах ВАК РФ и ИБГ УНЦ РАН:

e-mail: molgen@anrb.ru

Автореферат разослан «_» апреля 2013г.

Ученый секретарь диссертационного совета, к.б.н С.М. Бикбулатова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. По статистическим данным ВОЗ на сегодняшний день в мире насчитывается около 300 млн. человек, страдающих нарушением слуха различной этиологии (III-IV степени тугоухости) (www.genetests.org). В Российской Федерации эта цифра превышает 13 млн. человек, из которых более 1 млн. - это дети в возрасте до 18 лет. По прогнозам ВОЗ к 2020 году более 30% всей популяции земного шара будут иметь нарушения слуха (Загорянская и др., 2003). Наиболее частая форма наследственной глухоты – несиндромальная сенсоневральная тугоухость/глухота (НСНТ) (Nance, 2003; Cryns et. al., 2004; Morton et. al., 2006;





Chalestori et. al., 2007; Batissoco et al., 2009; Bhalla et al., 2011). Среди всех идентифицированных генов, вовлеченных в функционирование системы звуковосприятия, наиболее значимыми являются гены белков-коннексинов 26 (GJB2), 30 (GJB6), 31 (GJB3), и гены митохондриальной ДНК 12SrRNA и tRNASER(UCN), вклад которых в развитие несиндромальных и некоторых синдромальных форм, по данным различных авторов, достигает 20-80% в различных этнических группах (Friedman et al., 2000; Petit et al., 2001; Cryns et. al., 2004; Smith et al., 2005; Petersen et. al., 2006, Джемилева с соавт., 2009; Барашков с соавт., 2009; Dzhemileva et al., 2010; Barashkov et al., 2011). Однако у довольно большого числа семей, которые обращаются к врачугенетику по поводу определения риска врожденных наследственных форм потери слуха у потомства, при проведении молекулярного исследования генов коннексинов и генов митохондриальной ДНК, не удается выявить генетический дефект, приводящий к потере слуха.

Поскольку наследственная несиндромальная сенсоневральная тугоухость и глухота относятся к заболеваниям с выраженной генетической гетерогенностью (Cryns et. al., 2004; Smith et al., 2005; Petersen et. al., 2006), то можно предположить, что мутации, приводящие к нарушению процесса звуковосприятия у части пробандов из семей высокого риска, могут затрагивать и другие гены, вовлеченные в функционирование процесса звуковосприятия.

По имеющимся литературным данным известно, что вклад мутаций в генах пендрина (SLC26A4) и престина (SLC26A5) составляет от 5 до 12% всех несиндромальных наследственных форм глухоты и тугоухости в различных популяциях мира (Hutchin et al., 2005; Azaiez et al., 2007; Dai et al., 2008; Wu et al., 2008; Kahrizi et al., 2009; Yang et al., 2007, 2009).

Мутации в гене SLC26A4 являются причиной как синдромальной потери слуха (синдром Пендреда), дисплазии Мондини (дисплазия улитки в сочетании с деформацией преддверия и системы полукружных каналов), EVA (расширенный водопровод преддверия), так и несиндромальной формой тугоухости и глухоты (DFNB4) (Takahashi et al., 2006; Pourova et al., 2010), тогда как мутации в гене SLC26A5 вызывают только несиндромальные формы потери слуха (DFNB61) (Liu et al., 2003).

Известно более 160 мутаций в гене SLC26A4 (Dai et al., 2008). Мутации p.Thr416Pro и c.1001+1GA - две наиболее частые мутации у глухих и тугоухих пациентов из популяций Северной Европы (Albert et al., 2006). У больных из Японии, Кореи и Китая преобладающими являются мутации p.His723Arg и c.919-2AG, которые обнаруживаются у 45,5% пациентов с синдромом Пендреда и дисплазией Мондини (Park et al., 2003; Pourova et al., 2010). В гене SLC26A5 мажорной для большинства пациентов из евразийских популяций является мутация c.-53-2AG (IVS2-2AG), выявляемая у 4 % больных с нарушениями слуха (Tang et al., 2005).





Таким образом, учитывая существование выраженных межпопуляционных различий в частоте и спектре мутаций генов SLC26A4 и SLC26A5, анализ их генетической гетерогенности при несиндромальной аутосомно-рецессивной глухоте и тугоухости в отдельных регионах и этнических группах является актуальной проблемой медицинской генетики, необходимым условием при разработке оптимальных для данного региона подходов ДНК-диагностики наследственных форм потери слуха.

Целью исследования является изучение структурных особенностей генов несиндромальной глухотой из Республики Башкортостан и оптимизация подходов ДНК-диагностики заболевания.

Для достижения поставленной цели были сформулированы следующие задачи:

1. Провести скрининг мажорной мутации р.H723R в гене SLC26A4 у пациентов с наследственными формами потери слуха из РБ.

2. Определить спектр и частоту мутаций в гене пендрина (SLC26A4) у больных несиндромальной наследственной глухотой и у членов их семей из РБ.

3. Определить спектр и частоту мутаций в гене престина (SLC26A5) у больных несиндромальной наследственной глухотой и у членов их семей из РБ.

4. Определить частоту мажорной для стран Западной Европы мутации c.-53AG (IVS2-2AG) в гене SLC26A5 в популяциях Евразии.

5. Оптимизировать подходы молекулярно-генетической диагностики наследственной несиндромальной глухоты и тугоухости у пациентов из РБ.

Научная новизна исследования. Анализ мутаций генов SLC26A4 (пендрина) и SLC26A5 (престина) у больных наследственной несиндромальной глухотой из Башкортостана позволил установить, что к мутациям, приводящим к глухоте, относятся: c.85GC (p.Glu29Gln) (0,2%), с.149TG (p.Leu50Arg) (0,2%), g.919-2AG (0,2%), g.29607delA (0,2%) в гене SLC26A4 (пендрина) и с.-53-2AG (g.24586AG, IVS2-2AG) (1,42%), p.Asn330Ser (c.989AG) (0,2%) в гене SLC26A5 (престина).

Впервые изучена частота гетерозиготного носительства мутации c.-53-2AG (IVS2AG) в гене SLC26A5 в 16 популяциях Евразии. Выявлена существенная гетерогенность по частоте гетерозиготного носительства мутации c.-53-2AG (IVS2AG) в гене SLC26A5 между славянскими, финно-угорскими и тюркскими этносами.

Впервые обнаружены две новые мутации в генах SLC26A4 (g.29607delA) и в SLC26A (p.Asn330Ser).

государственному контракту № 16.512.11.2047 «Разработка постгеномных методов для молекулярно-генетической диагностики соматических заболеваний»

(Федеральная целевая научно-техническая программа «Исследования и разработки по приоритетным направлениям развития науки и техники на 2009-2013 годы») создана уникальная патентно-чистая тест-система экспресс-ДНК-диагностики НСНТ на основе определения мажорной мутации с.-53-2AG (g.24586AG, IVS2-2AG) в гене SLC26A5.

Полученные данные о частоте и спектре мутаций и полиморфных вариантах в генах SLC26A4 (пендрина) и SLC26A5 (престина) вносят определенный вклад в познание фундаментальных механизмов функционирования процесса звуковосприятия, являясь необходимым условием для повышения эффективности работы медико-генетического консультирования в РБ.

Публикации и апробация работы: по теме диссертации опубликовано печатных работ, из которых 4 в журналах из Перечня ВАК.

Результаты исследования были представлены на международных и российских конференциях: Human Genome Meeting (Dubai, UAE, 2011); European Human Genetics Conference (Amsterdam, the Netherlands, 2011); Вторая и Третья школа-конференция по физико-химической биологии и биотехнологии «Биомика наука XXI века» (Уфа, 2011, 2012); European Human Genetics Conference (Nrnberg, Germany, 2012); International Polar Year 2012 (Montral, Canada, 2012);

Congress of the European Academy of Paediatric Societies (Istanbul, 2012); V Всероссийская конференция с международным участием «Пренатальная диагностика и генетический паспорт - основа профилактической медицины в век нанотехнологий»

(Санкт-Петербург, 2012); Всероссийской школы-конференции молодых ученых «Актуальные проблемы генетики человека, животных, растений и микроорганизмов»

(Уфа, 2012).

Структура и объем диссертации. Работа изложена на 172 страницах машинописного текста, содержит 9 таблиц и 25 рисунков. Список литературы включает 319 источников.

Автор данной работы выражают глубочайшую благодарность заведующей отделом Геномики Федерального государственного бюджетного учреждения науки Институт биохимии и генетики Уфимского научного центра Российской академии наук, доктору биологических наук, профессору Эльзе Камилевне Хуснутдиновой за выбор направления исследования и постоянную помощь при обсуждении и интерпретации полученных результатов.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы. Критерием включения в исследование был диагноз «Наследственная сенсоневральная тугоухость/глухота» (НСНТ) (G11 по МКБ-10), установленный на основании клинических и лабораторно-инструментальных методов исследований в соответствии с современными диагностическими критериями, предлагаемыми Институтом глухоты и коммуникативных расстройств (г. Омаха, наследственным нарушениям слуха GENDEAF (Stephens et al., 2001; Mazzoli et al., 2003). В ходе исследования уточнялись данные об этнической принадлежности больных путем опроса и выяснения национальной принадлежности родителей до третьего поколения.

Особое внимание уделялось установлению места рождения пробандов, их родителей и прародителей; выявлению кровнородственных браков в семьях обследованных пациентов.

Согласно первичному анализу данных, и, исходя из диагностических критериев НСНТ, из общего числа случаев изолированной тугоухости/глухоты, были выделены несиндромальные сенсоневральные нарушения слуха с отягощенным по нарушенному звуковосприятию семейным анамнезом. Таким образом, в исследование вошли 246 семей пациентов с НСНТ из РБ.

Популяционная выборка включает 1310 образцов ДНК, полученных от здоровых неродственных индивидов – представителей 16 различных этнических групп, проживающих на территории России и стран бывшего Советского Союза, у которых проводился скрининг частоты гетерозиготного носительства мутации с.-53AG в гене SLC26A5.

Для настоящего исследования все образцы ДНК были анонимизированы. Забор крови производили после медицинского осмотра у взрослых жителей, принадлежащих к разным семьям, что позволяет рассматривать выборки случайными для популяций. Данная научно-исследовательская работа была одобрена локальным этическим комитетом по биомедицинской этике при ИБГ УНЦ РАН. Образцы крови были взяты с информированного письменного согласия пациентов и их родителей.

Молекулярно-генетические исследования проведены с использованием стандартных методов: выделения ДНК; полимеразной цепной реакции синтеза ДНК (ПЦР); анализа полиморфизма длины амплифицированных фрагментов (ПДАФ) и полиморфизма длины рестрикционных фрагментов (ПДРФ), гибридизации на чипах (APEX) фирмы Asper Biothech; конформационного полиморфизма однонитевой ДНК (SSCP) и ресеквенирования.

Статистический анализ полученных данных проведен с использованием стандартных для популяционно-генетических и медицинских исследований методов и соответствующего программного обеспечения (Statistica 5.5, GenePop 3.3, Genetic Data Analysis 1.0).

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

Для проведения молекулярно-генетического анализа мы сформировали выборку из 246 семей с 424 больными с наследственной формами тугоухости и глухоты. Рецессивный тип наследования предположительно определен в 220 семьях (385 больных), доминантный - 26 семьях (39 больных). Х-сцепленный тип наследования не был обнаружен ни в одной семье с наследственными формами тугоухости и глухоты из Республики Башкортостан (РБ).

Скрининг мутации р.H723R в гене SLC26A4 у пациентов с наследственными Учитывая высокую частоту встречаемости мутации р.H723R не только у пациентов из азиатских популяций, но и в других этносах Европы и Сев. Америки (Pera et al., 2008; Dossena et al., 2009), был проведен скрининг мутации в выборке больных из РБ. Для детекции мутации р.H723R был использован метод идентификации данной аминокислотной замены с помощью ПЦР с последующим ПДРФ–анализом (Scott et al., 2000). При использовании данного метода теряется 1 из двух сайтов рестрикции для эндонуклеазы Fat1 (Рис. 1), что позволяет выявлять гомозиготных и гетерозиготных носителей этой мутации.

Результаты скрининга показали, что мутация р.H723R, выявленная ранее в некоторых популяциях в ассоциации (или без) с мутациями в гене GJB2 (Tsukamoto, et al., 2003; Choi et al., 2009), не была зарегистрирована ни у одного пациента из РБ.

Рис. 1. Идентификация мутации р.H723R в гене SLC26A4 с помощью ПДРФ–анализа (Fat1): электрофореграмма 1-5 и 7-11 – образцы, не содержащие мутацию, 6 контрольный образец.

Таким образом, данная мутация не является причиной потери слуха среди пациентов с несиндромальной сенсоневральной глухотой в РБ. Следовательно, можно предполагать, что причиной тугоухости и глухоты у пациентов из РБ, наравне с мутацией с.35delG в гене GJB2 (Джемилева, 2011), являются мутации в других генах, участвующих в процессе звуковосприятия, тем более что спектр и частота мутаций гена SLC26A4 во многих азиатских и европейских популяциях достаточно скудны (Coyle et al., 1998; Campbell et al., 2001; Pryor et al., 2005; Albert et al., 2006).

Анализ мутаций c.85GC (p.Glu29Gln) и с.149TG (p.Leu50Arg) в гене пендрина Мутация c.85GC (p.Е29Q) была идентифицирована с помощью глубокого ресеквенирования в компаунд гетерозиготном состоянии с мутацией с.149TG у пробанда с НСНТ (глухота) в семье башкирской этнической (p.L50R) принадлежности (Рис. 2).

представлена на рисунке 2Б (1 и 2). На серии томограмм (1, 2) визуализируется наружный слуховой проход, размеры и форма которого не изменены. На КТ-снимках цепь слуховых косточек не изменена. Также у пациента не выявлено изменений со стороны сосцевидного отростка, однако при этом видны выраженные изменения со стороны улитки – ее дисплазия и резко расширенный водопровод преддверия.

Мутация c.85GC (р.E29Q) в гетерозиготном состоянии была впервые описана в 2001 году в семье с мальформацией Мондини у пробанда из Айовы (США) (Campebell et al., 2001). Позднее, в 2003 году при исследовании 55 пациентов с синдромом Пендреда из Англии и Бельгии, частота c.85GC в выборке больных составила 0,9% (Prasad et al., 2004).

Рис. 2. Фрагмент родословной семьи Д башкирской этнической принадлежности с НСНТ из РБ. Пробанд III-1 – пациент с генотипом c.85GC / с.149TG (А). Анализ пирамиды височной кости. Фотографии 1 и 2 – мальформация Мондини, фотография 3 – норма. (Б). Последовательность участка 2 экзона гена SLC26A4, содержащего мутации c.85GC / с.149TG в компаунд-гетерозиготном состоянии (В).

В 2004 году мутация c.85GC была также выявлена в семье французов в гетерозиготном состоянии у пробанда и одного сибса (Blons et al., 2004). При анализе 8 образцов ДНК из 2-х семей с наследственной формой несиндромальной сенсоневральной глухоты из Англии, мутация c.85GC была обнаружена в компаундгетерозиготном состоянии с мутацией c.2TC (р.M1T) (Shears et. al., 2004), вызывающей синдром Пендреда в гомозиготном состоянии (Prasad et al., 2004; Shears et. al., 2004).

Мутация с.149TG (p.L50R) в гене SLC26A4 была описана у пробанда с глухотой, француза по этнической принадлежности, как патологическая мутация, вызывающая замену лейцина на аргинин в пендрине и приводящая к синдрому Пендреда (Prasad et al., 2004). Известно, что лейцин в 50–ом положении аминокислотной последовательности пендрина является абсолютно консервативным как среди всех видов белков – сульфатных транспортеров у человека, так и среди таковых у различных видов организмов (Romero et al. 2009), и обладает способностью образовывать прочные ковалентные связи с другими аминокислотами, благодаря чему может участвовать как в образовании локальной структуры, так и в доменной укладке белковой молекулы (Wangemann et al., 2009; Sun et al., 2009). Считается, что второй, третий и четвертый трансмембранные домены пендрина участвуют в обмене ионов, при этом наибольший вклад вносит третий трансмембранный домен (Romero et al., 2009). Мутантный пендрин, по-видимому, теряет способность к осуществлению ионного транспорта, что выражается в повреждении мембранного и костного лабиринтов органа Корти, что, в свою очередь, приводит к стойкому повреждению процесса звуковосприятия (Grimaldi et al., 2007; Hughey et al., 2007; Sindic et al., 2007;

Wall et al., 2008; Kopp et al., 2008; Dossena et al., 2009; Ito et al., 2011).

Таким образом, частота мутации c.85GC составила 0,2%, как и частота мутации с.149TG в общей выборке неродственных больных НСНТ, а в выборке больных НСНТ башкирской этнической принадлежности – по 1,35 % для обеих мутаций.

Анализ мутации c.919-2AG в гене пендрина (SLC26A4) В татарской семье у пробанда с глухотой мутация с.167delT в гене GJB выявлена в сочетании с мутацией с.919-2AG, расположенной в 7 интроне в сайте сплайсинга 8 экзона в гене SLC26A4. У пробанда четверо детей с глухотой, родители пробанда слышащие. К сожалению, образцы ДНК детей, жены и родителей пробанда оказались недоступны для исследования (родители пробанда, а также его жена и дети отказались от генетического тестирования по религиозным причинам). Подобное сочетаниe мутаций g.-3179GA и с.35delG в гене GJB2 и g.2-2AG в гене SLC26A обнаружено в двух эстонских семьях с нарушением слуха (Teek et al., 2009). У пробанда, китайца по этнической принадлежности, мутация с.919-2AG была выявлена в гомозиготном состоянии, тогда как у его жены и двух дочерей, имеющих тугоухость IV степени, данная мутация выявлялась в компаунд-гетерозиготном состоянии с другой мутацией p.H723R (Yong et al., 2001; Prasad et al., 2004), наиболее частой для пациентов с синдромом Пендреда и синдромом расширенного водопровода преддверия (EVA) из Китая, Монголии, Японии и Кореи (Iwasaki et al., 2006; Cho et al., 2006; Dai et al., 2008; Guo et al., 2010; Wang et al., 2011).

Анализ варианта нуклеотидной последовательности g.29607delA (IVS9+43delA) в При молекулярном анализе 9 экзона и протяженного участка 9 интрона гена принадлежности было обнаружено ранее неописанное в литературе изменение нуклеотидной последовательности g.29607delA (IVS9+43delA) (Рис. 3). Из всей выборки больных (N=246) данная делеция в гетерозиготном состоянии была выявлена только у 1 пациента (0,2%). В связи с этим мы провели поиск данного изменения в контрольной выборке (150 неродственных индивидов с нормальным слухом), представленной тремя наиболее многочисленными этническими группами региона (русскими, татарами и башкирами). Делеция g.29607delA (IVS9+43delA) в контрольной выборке не обнаружена. Сделать какое-либо предположение о функциональной роли найденного изменения нуклеотидной последовательности достаточно трудно.

Рис. 3. Идентификация мутации g.29607delA (IVS9+43delA) в гетерозиготном состояниях в гене SLC26A4 с помощью ресеквенирования 9 экзона и протяженного участка 9 интрона (A). Нормальная последовательность участка 9 интрона гена SLC26A4 (Б).

Вполне возможно, данная делеция в 9 интроне гена SLC26A4 оказывает влияние на процесс сплайсинга первичного РНК транскрипта, поскольку ее локализация совпадает с одним из сайтов альтернативного сплайсинга (по данным программы Splice Prediction using Consensus Sequences (WebGene):

http://www.itba.mi.cnr.it/webgene). Однако о каких-то функциональных особенностях подобных последовательностей, локализованных в интронных областях гена SLC26A4, прилегающих к 10-му экзону, пока ничего не известно. Также у данного индивида была выявлена мутация с.35delG в гене GJB2 в компаунд гетерозиготном состоянии с мутацией с.235delC.

Анализ полиморфного варианта rs17154353 (p.Gly740Ser, с.49548GA) в гене На хромосомах больных несиндромальной сенсоневральной глухотой и тугоухостью из Республики Башкортостан в 19 экзоне гена SLC26A4 был выявлен вариант нуклеотидной последовательности – rs17154353 (p.Gly740Ser, с.49548GA), описанный в литературе как нейтральный полиморфизм. По данным литературы, идентифицированные полиморфные варианты гена SLC26A4 не приводят к образованию дефектного белка и не влияют на процесс звуковосприятия. Тем не менее, патогенетическая значимость данных нуклеотидных замен рядом авторов трактуется неоднозначно и носит дискуссионный характер (Everett et al., 1999; Borck et al., 2003).

гетерозиготном состоянии у одного пациента с мутациями c.333_335delAA и с.35delG в компаунд гетерозиготном состоянии в гене GJB2 и у его двоюродного брата с нормальным слухом (Рис. 4).

Рис. 4. Последовательность участка 19 экзона гена SLC26A4, содержащего полиморфный вариант rs17154353 (p.Gly740Ser, с.49548GA) в гетерозиготном состоянии (A), и нормальная последовательность участка 19 экзона гена SLC26A4 (Б).

Таким образом, частота полиморфного варианта rs17154353 (p.Gly740Ser, с.49548GA) составила 0,2% в выборке больных с наследственной глухотой и тугоухостью из РБ.

Анализ мутации c.-53-2AG (g.24586AG, IVS2-2AG) в гене престина (SLC26A5) При оценке географического ареала распространения c.-53-2AG у пациентов с НСНТ из различных популяций мира, следует отметить, что данная мутация является достаточно частой и в большинстве случаев повреждений слуха регистрируется только в сочетании с мутациями в генах GJB2 (Tang et al., 2005; Yuan et al., 2009) и SLC26A4 (Rodriguez-Paris et al., 2010). Единичные случаи гомозигот по этой мутации были обнаружены в США у переселенцев европейского происхождения (Liu et al., 2003). Трансверсия c.-53-2AG повреждает сайт сплайсинга 3 экзона гена SLC26A (Liberman et al., 2002). При изучении уровня экспрессии престина с аберрантным сплайсингом в 3 экзоне и функционировании ионного транспорта в клетке Кортиева органа мыши было показано, что мутация c.-53-2AG выражено нарушает ионный транспорт через мембрану волосковой клетки по сравнению с клетками с нормальным уровнем престина (Toth et al., 2007; Schaechinger et al., 2007; Rybalchenko et al., Romero et al., 2009; Wangemann et al., 2010). Таким образом, функциональная значимость данной замены на сегодняшний день спорна – ряд исследователей считает, что c.-53-2AG - полиморфный вариант (Tang et al. 2005; Minor et al., 2009), а другие же придерживаются мнения, что c.-53-2AG - мутация с аутосомнорецессивным типом наследования (Liberman et al., 2002; Teek et al, 2009; RodriguezParis et al., 2010).

На первом этапе исследований был проведен скрининг мутации c.-53-2AG в гене престина (SLC26A5) у 246 неродственных пациентов из Республики Башкортостан. У 8 пациентов (7 неродственных) данная мутация была выявлена в гетерозиготном состоянии, что составляет 3,25% всех обследованных семей с НСНТ (Рис. 5).

распределились следующим образом: 6 русских и 1 татарин. У пяти пациентов с НСНТ русской этнической принадлежности мутация c.-53-2AG (IVS2-2AG) в гене SLC26A5 сочеталась с мутациями с.35delG (p.Gly12fs) и p.M34T в гене GJB2. У трех пациентов мутация с.35delG была идентифицирована в гомозиготном состоянии, и у одного – в гетерозиготном.

Рис. 5. Последовательность участка 2 интрона гена SLC26A5, содержащего мутацию c.-53-2AG (g.24586AG, IVS2-2AG) в гетерозиготном состоянии (A), и нормальная последовательность участка 2 интрона гена SLC26A5 (Б).

У пациента татарской этнической принадлежности мутация c.-53-2AG в гене SLC26A5 была выявлена с компаунд гетерозиготным состоянием мутаций с.235delС (p.L79fs) и c.314_327del14 (p.K105fs) в гене GJB2. Следовательно, частота мутации c.AG в выборке больных из РБ составляет 1,42%, а среди пациентов, русских по этнической принадлежности, частота данной мутации – 3%. Таким образом, учитывая высокую частоту ассортативных браков между глухими индивидами (до 45%) (Джемилева, 2011), достаточно легко объяснить сегрегацию мутантных аллелей в генах GJB2 и SLC26A5 среди больных из Республики Башкортостан.

Анализ мутации p.N330S (с.989GA) в гене престина (SLC26A5) У пробанда с глухотой из семьи с НСНТ, русского по этнической принадлежности, была идентифицирована замена аденина на гуанин в 989 положении (с.989GA), которая ведет к замене аминокислоты аспарагин на серин в положении (p.N330S) (Рис. 6 А и Б).

Рис. 6. Последовательность участка 10 экзона гена SLC26A5, содержащего мутацию p.N330S (c.989AG) в гетерозиготном состоянии (A), и нормальная последовательность участка 2 интрона гена SLC26A5 (Б).

Данная мутация была выявлена у индивида, имеющего мутацию c.35delG в гомозиготном состоянии. Частота мутации в общей выборке больных НСНТ из РБ составила 0,2%. Данная мутация была выявлена нами впервые и в литературе не описана.

Анализ полиморфного варианта rs7779997 (c.403+14АG, IVS5+14АG, Вариант нуклеотидной последовательности rs7779997 (c.403+14АG, IVS5+14АG, g.103053435AG) в гене SLC26A5 был выявлен у 106 пациентов с НСНТ (Рис. 7). В гетерозиготном состоянии rs7779997 (c.403+14АG, IVS5+14АG, g.103053435AG) был выявлен у 80 больных (17 башкир, 32 русских, 20 татар, украинцев и у 9 метисов).

В гомозиготном состоянии rs7779997 был обнаружен у 26 глухих пациентов (у 5 башкир, 9 русских, 4 татар, 8 метисов) из РБ. Таким образом, частота полиморфного варианта rs7779997 (c.403+14АG, IVS5+14АG, g.103053435AG) в гене SLC26A5 у пациентов из РБ составила 43%.

В группе контроля полиморфный вариант rs7779997 (c.403+14АG, IVS5+14АG, g.103053435AG) был выявлен у 43% индивидов, из них у 77 в гетерозиготном и у 10 – в гомозиготном состоянии.

Проведенный анализ распределения частот аллелей и генотипов полиморфного варианта rs7779997 у пациентов с НСНТ и в контрольной выборке не выявил статистически значимых различий.

Рис. 7. Последовательность участка 5 интрона гена SLC26A5, содержащего полиморфный вариант rs7779997 (c.403+14АG, IVS5+14АG, g.103053435AG) в гетерозиготном (А) и гомозиготном (Б) состоянии, нормальная последовательность гена SLC26A5 (В).

Отсутствие достоверных различий в распределении частот аллелей и генотипов rs7779997 в гене SLC26A5 у пациентов НСНТ и в контрольной выборке из РБ, свидетельствует о нейтральности данной трансверсии, что также подтверждено исследованиями частот аллелей rs7779997 в различных популяциях по данным проекта «1000 геномов» (http://www.1000genomes.org/).

Анализ полиморфного варианта rs72655380 (c.1302AG g.60740AG Вариант нуклеотидной последовательности rs72655380 (c.1302AG g.60740AG p.Ser434Ser) в гене SLC26A5 был выявлен в гетерозиготном состоянии у двух пациентов с IV степенью тугоухости из РБ, у татарина и башкира по этнической принадлежности (0,4%) (Рис. 8). У пациента татарской этнической принадлежности данный полиморфный вариант в гене SLC26A5 сочетался с мутацией c.35delG в гетерозиготном состоянии в гене GJB2.

Полиморфный вариант rs72655380 (c.1302AG g.60740AG p.Ser434Ser), в результате которого аминокислота серин в 434 положении сохраняется, и строение белка остается неизменным, является достаточно редкой нейтральной трансверсией, не влияющей на процесс звуковосприятия, и встречается, в основном, у (http://www.1000genomes.org/).

Рис. 8. Последовательность участка 12 экзона гена SLC26A5, содержащего полиморфный вариант rs72655380 (c.1302AG g.60740AG p.Ser434Ser) в гетерозиготном состоянии (А) и нормальная последовательность гена SLC26A5 (Б).

Таким образом, частота полиморфного варианта rs72655380 среди пациентов с наследственной потерей слуха из РБ составила 0,4%.

Анализ частоты гетерозиготного носительства мутации c.-53-2AG в гене Полученные значения частоты мутации c.-53-2AG в гене SLC26A5 среди больных наследственной несиндромальной глухотой в Республике Башкортостан подтверждают важность изучения распространенности этой трансверсии в гене престина (SLC26A5) в различных популяциях Волго-Уральского региона, Восточной и Северной Европы, Средней Азии, Северного Кавказа и Восточной Сибири. Новые данные, полученные в данной работе, позволяют, до некоторой степени, закрыть существующие пробелы в информации о распространенности мутации c.-53-2AG в гене SLC26A5 на территории Евразии. Данные о частотах и географическом ареале распространения мутации c.-53-2AG в гене SLC26A5, несомненно, очень важны для разработки стратегии молекулярной диагностики наследственных нарушений слуха в различных этнических группах, проживающих как в Республике Башкортостан, так и, в целом, на территории Российской Федерации, а также могут послужить в решении вопроса о возможной роли эффекта основателя в происхождении данной трансверсии.

При исследовании индивидов с нормальным слухом, было показано, что нормальнослышащих индивидов составляет 2,6 % (1/37), с вариацией от 1,3% у испанцев до 4% у венгров, французов и метисов европейского происхождения из США (Tang et al., 2005).

Нами была изучена частота гетерозиготного носительства c.-53-2AG среди различных популяций коренного населения Волго-Уральского региона (башкиры, татары, чуваши, мордва, удмурты, коми-пермяки), а также в выборке русских из города Екатеринбурга и Пинежского района Архангельской области. В тюркоязычных популяциях Волго-Уральского региона мутация c.-53-2AG обнаружена с частотами 2,5% и 2,6%, у татар, и чувашей, соответственно.

Скрининг частоты гетерозиготного носительства c.-53-2AG, выполненный нами в двух восточно-европейских популяциях (украинцы и белорусы), выявил достаточно высокие частоты c.-53-2AG - 2.5% у украинцев (1/40) и 1.3% у белорусов (1/80), соответственно.

Среди финно-угорских популяций Волго-Уральского региона мутация c.-53AG была выявлена с высокой частотой 6% у коми (1/16), с частотой 5,4% у мордвы (1/19) и отсутствует у удмуртов. Ранее, высокая частота c.-53-2AG (4.1%) была обнаружена у выходцев из Европы, живущих в США (венгров, испанцев и французов) (Tang et al., 2005). Частота гетерозиготного носительства c.-53-2AG, выявленная нами в смешанной выборке русских – 2,3%. Таким образом, частота гетерозиготного носительства мутации c.-53-2AG, выявленная в популяциях мордвы и коми, близка к частоте носительства этой мутации в популяции Эстонии (Teek et al., 2009), где на сегодняшний день наиболее высока частота гетерозиготного носительства c.-53AG.

В среднем же, распространенность гетерозигот по мутации c.-53-2AG в популяциях Волго-Уральского региона составляет 0,0275, что несколько ниже частоты гетерозиготного носительства c.-53-2AG в популяциях Северной Европы, и белых представителей Америки европейского происхождения (4%) (Tang et al., 2005).

Частота гетерозиготного носительства мутации c.-53-2AG в исследованных нами популяциях Восточной Европы составила 0,011. Отсутствие мутации в популяциях башкир, объединяющих четыре этногеографические группы, вероятнее всего, объясняется преобладанием в структуре их генофонда монголоидного компонента, являющегося основой генофондов популяций Азии, где частота мутации c.-53-2AG в гене SLC26A5 крайне низка (0/230), а среди больных с несиндромальной аутосомнорецессивной глухотой из-за повреждения гена SLC26A4 преобладают мутации р.H723R (c.2168AG) и c.766-2AG (IVS7-2AG) (Dai et al., 2008; Yuan et al., 2009;

Guo et al., 2010; Wang et al., 2011).

В исследованных тюркоязычных популяциях Центральной Азии (казахи, узбеки) мутация c.-53-2AG с достаточно высокой частотой обнаружена у казахов (2,5%) и не выявлена у узбеков. В тюркоязычных популяциях Сибири (якуты, алтайцы) мутация c.-53-2AG с относительно низкой частотой (1,3%) была выявлена нами только в популяции алтайцев и не обнаружена в популяции якутов.

Мутация c.-53-2AG была выявлена у абхазов с частотой 1,3% (1/80).

Таким образом, ареал распространения мутации c.-53-2AG демонстрирует наибольшую частоту в популяциях Северной и Восточной Европы с постепенным снижением градиента частоты с севера на юг и с запада на восток. Характер распространения мутации c.-53-2AG в изученных нами этнических группах соответствует их географическому расположению и вписывается в географический градиент снижения частоты с запада на восток, что дает основание предполагать, что она распространилась по Евразии в результате смешения с европейцами, мигрировавшими из Северной Европы.

Полученные данные о распространенности мутации c.-53-2AG среди различных популяций, располагающихся на обширных территориях Евразии, позволят, до некоторой степени, уточнить или, возможно, пересмотреть современные представления о центре происхождения, возрасте, и механизмах распространенности мутации c.-53-2AG. Таким образом, полученные нами данные показали градиент снижения частоты гетерозиготного носительства мутации c.-53-2AG с запада на восток: высокая частота c.-53-2AG в популяциях Восточной Европы (белорусы, украинцы) и в финно-угорских популяциях (коми и мордва), промежуточные частоты c.-53-2AG - в некоторых популяциях Волго-Уральского региона, Средней Азии и Северного Кавказа, и минимальная частота c.-53-2AG у алтайцев в Восточной Сибири.

Характер распространенности мутации c.-53-2AG в изученных этнических группах может служить свидетельством предполагаемой роли эффекта основателя в происхождении и распространенности этой мутации в популяциях мира.

В отношении некоторых рецессивных мутаций в гене GJB2 были предложены оригинальные гипотезы о возможных механизмах поддержания высокой частоты их гетерозиготного носительства (Common et al., 2004) в контексте их возможной повышенной резистентности носителей к инфекциям. Вполне вероятно, что гетерозиготные носители мутации c.-53-2AG в гене SLC26A5 также имеют определенное адаптивное преимущество, поскольку в ряде работ обсуждается роль престина как белка-модификатора, влияющего на ионный гомеостаз в клетке и взаимодействующего с CFTR-белком (Rybalchenko et al., 2008; Dallos et al., 2008; Sun et al., 2009; Homma et al., 2010).

В заключение необходимо отметить важность проводимых исследований в разработке стратегий скрининга мутаций в гене SLC26A5 и SLC26A4 в различных этнических группах для более раннего выявления и профилактики наследственных форм тугоухости и глухоты, учитывая высокую распространенность данного заболевания.

Оптимизация подходов ДНК-диагностики наследственных форм тугоухости и глухоты у пациентов из Республики Башкортостан У пациентов с НСНТ из Республики Башкортостан было выявлено 4 мутации c.85GC (p.Glu29Gln), с.149TG (p.Leu50Arg), g.919-2AG, g.29607delA и полиморфный вариант rs17154353 (p.Gly740Ser, с.49548GA) в гене SLC26A4 и мутации - с.-53-2AG (g.24586AG, IVS2-2AG), p.Asn330Ser (c.989AG) и полиморфных варианта rs7779997 (c.403+14TC, IVS5+14TC, g.38190TC), rs72655380 (c.1302AG, g.60740AG, p.Ser434Ser) в гене SLC26A5.

В изученной выборке больных наследственной глухотой из Республики Башкортостан наиболее распространенной мутацией в гене SLC26A5 оказалась мутация с.-53-2AG (1,42%), остальные мутации генов SLC26A5 и SLC26A4, в общей сложности, составили менее 1 %.

Следует отметить, что мутации c.85GC (p.Glu29Gln) и с.149TG (p.Leu50Arg) в компаунд-гетерозиготном состоянии в гене SLC26A4 были выявлены у пациента с несиндромальной формой тугоухости и рентгенологической картиной мальформации Мондини, что позволило верифицировать диагноз и провести проспективное медикогенетическое консультирование для членов данной семьи.

Относительно высокая частота сочетания мутаций с.-53-2AG (g.24586AG, IVS2-2AG) в гене SLC26A5 и c.35delG в гене GJB2 у больных в РБ предполагает возможность проведения прямой ДНК–диагностики. Учитывая этнический состав населения РБ, в котором преобладающим является европеоидный компонент, можно отметить, что молекулярно-генетическое тестирование на данные мутации является обоснованным и необходимым условием при проведении дифференциальной и пренатальной ДНК–диагностики наследственной несиндромальной глухоты в Республике Башкортостан.

На основании полученных результатов исследований о спектре и частоте мутаций в генах GJB2 (Джемилева, 2011), SLC26A5 и SLC26A4 нами были оптимизированы подходы ДНК-диагностики наследственных несиндромальных форм тугоухости/глухоты в Республике Башкортостан. Обследование следует начинать с прямой диагностики на наличие мажорной для популяций Башкортостана и Западной Европы мутации c.35delG гена GJB2, а также с рецессивной мажорной для некоторых популяций из Европы и Азии мутации с.-53-2AG в гене SLC26A5. Наравне с прямой диагностикой мутаций, также обязательно проведение компьютерной томографии височной кости, на основании которой следует проводить прямое глубокое ресеквенирование всех экзонов гена SLC26A4. В случае полной информативности семьи ДНК-диагностика ограничивается прямым методом. В случае частичной информативности или абсолютной неинформативности должен проводиться поиск мутаций в генах GJB2, GJB3, GJB6 и генах мтДНК 12SrRNA и tRNASer(UCN), согласно алгоритму, предложенному ранее (Джемилева, 2011) (Рис. 9).

Рис. 9. Алгоритм ДНК-диагностики наследственных форм тугоухости и глухоты в РБ (желтым обозначены новые позиции, которые не применялись в ранее предложенном алгоритме (Джемилева, 2011)).

ВЫВОДЫ

1. Мутация p.H723R в гене пендрина (SLC26A4) у больных наследственной несиндромальной сенсоневральной глухотой из Республики Башкортостан не обнаружена.

2. В гене пендрина (SLC26A4) у больных наследственной несиндромальной сенсоневральной глухотой из Республики Башкортостан выявлены 4 мутации c.85GC (p.Glu29Gln) (0,2%), с.149TG (p.Leu50Arg) (0,2%), g.919-2AG (0,2%), g.29607delA (0,2%) и 1 полиморфный вариант rs17154353 (p.Gly740Ser, с.49548GA) (0,2%). Мутации c.85GC (p.Glu29Gln), с.149TG (p.Leu50Arg), g.919-2AG, g.29607delA в гене пендрина (SLC26A4) выявлены только у больных – башкир и татар по этнической принадлежности. Мутация g.29607delA обнаружена впервые.

3. В гене престина (SLC26A5) у больных наследственной несиндромальной сенсоневральной глухотой из Республики Башкортостан обнаружены 2 мутации с.-53-2AG (g.24586AG, IVS2-2AG) (1,42%), p.Asn330Ser (c.989AG) (0,2%) и полиморфных варианта rs7779997 (c.403+14TC, IVS5+14TC, g.38190TC) (43%), rs72655380 (c.1302AG, g.60740AG, p.Ser434Ser) (0,8%). Мутации с.-53AG (g.24586AG, IVS2-2AG), p.Asn330Ser (c.989AG) в гене престина (SLC26A5) принадлежности. Мутация p.Asn330Ser (c.989AG) выявлена впервые.

4. Мутация с.-53-2AG (g.24586AG, IVS2-2AG) в гене престина (SLC26A5) выявлена в популяциях финно-угорского происхождения с частотой 2,95%, в популяциях славянской группы - в 2,0%, у тюркских народов в 1,3% случаев, соответственно. Обнаружен градиент снижения частоты мутации с.-53-2AG с запада на восток и севера на юг, что дает основание предполагать о ее распространенности в популяциях Центральной Евразии из Западной Европы.

5. Оптимизирован алгоритм ДНК-диагностики наследственной несиндромальной глухоты для Республики Башкортостан.

СПИСОК ПУБЛИКАЦИЙ ПО ТЕМЕ РАБОТЫ

1. Dzhemileva, L.U. Carrier frequency of GJB2 gene mutations c.35delG, c.235delC and c.167delT among the populations of Eurasia / L.U. Dzhemileva, N.A.

Barashkov, O.L. Posukh, R.I. Khusainova, V.L. Akhmetova, I.A. Kutuev, I.R.

Gilyazova, V.N. Tadinova, S.A. Fedorova, I.M. Khidiyatova, S.L. Lobov, E.K.

Khusnutdinova // Journal of human genetics – 2010.- V.55. – P.749–754.

2. Barashkov, N.A. Autosomal recessive deafness 1A (DFNB1A) in Yakut population isolate in Eastern Siberia: extensive accumulation of the splice site mutation IVS1+1GA in GJB2 gene as a result of founder effect / N.A. Barashkov, L.U.

Dzhemileva, S.A. Fedorova, F.M. Teryutin, O.L. Posukh, E.E. Fedotova, S.L. Lobov, E.K. Khusnutdinova. // Journal of Human Genetics. – 2011. – V.56(9). - P.631–639.

Джемилева, Л.У. Оценка гаплотипического разнообразия и реконструкция предкового гаплотипа хромосом с мутацией с.35delG гена GJB2 (сх26) в популяциях Волго-Уральского региона / Л.У. Джемилева, О.Л. Посух, Н.А.

Барашков, С.А. Федорова, Ф.М. Терютин, В.Л. Ахметова, И.М. Хидиятова, Р.И.

Хусаинова, С.Л. Лобов, Э.К. Хуснутдинова // Acta Naturae (русскоязычная версия). – 2011. – Т.3. - №3. – С.17-27.

Лобов, С.Л. Молекулярно-генетический анализ генов GJB2, SLC26A4 и SLC26A5 у больных с наследственными нарушениями слуха из Республики Башкортостан / С.Л. Лобов, Л.У. Джемилева, Э.К. Хуснутдинова // Известия Самарского научного центра Российской академии наук. – 2011. - Т.13 – №5(3).– С.251–255.

5. Barashkov, N.A. Molecular, audiological and population features of autosomal recessive deafness 1A (DFNB1A) in Yakut population isolate from Eastern Siberia / N.A. Barashkov, L.U. Dzhemileva, S.A. Fedorova, F.M. Teryutin, O.L. Posukh, E.E.

Fedotova, S.L. Lobov, and E.K. Khusnutdinova // HUGO Human Genome Meeting 2011. Dubai. – P.218.

6. Barashkov, N. Molecular, audiological and population features of autosomal recessive deafness 1 A (DFNB1A) in Yakut population isolate from Eastern Siberia / N. Barashkov, L. Dzhemileva, S. Fedorova, F. Teryutin, O. Posukh, E. Fedotova, S.

Lobov, E. Khusnutdinova // European Journal of human genetics. - Amsterdam, the Netherlands 2011. -P. 7. Dzhemileva, L.U. Spectrums and frequences of GJB2, GJB6, GJB3, 12SrRNA, tRNASer(UCN), SLC26A4, SLC26A5 и MYO7A mutations among patients with nonsyndromic hearing loss from Bashkortostan (Russia) / L.U. Dzhemileva, S.L. Lobov, E.K. Khusnutdinova // European Journal of human genetics. - Amsterdam, the Netherlands 2011. - P.312.

Лобов, С.Л. Анализ генов SLC26A4, SLC26A5 и GJB2 у больных с наследственной несиндромальной тугоухостью/глухотой из Республики Башкортостан / С.Л. Лобов, Л.У. Джемилева, Р.З. Муртазина, Р.Р. Хасанова, Л.Р. Шафикова, А.А. Султанова, Э.К. Хуснутдинова // Биомика. – 2011. – Т.1 С.72-73.

9. Dzhemileva, L.U. Haplotype diversity and reconstruction of ancestral haplotype associated with the c.35delG mutation in the GJB2 (Cx26) gene among the VolgoUral populations of Russia / L.U. Dzhemileva, O.L. Posukh, N.A. Barashkov, S.

Lobov, E.K. Khusnutdinova // European Journal of human genetics. - Nrnberg, Germany 2012. – P.254.

10. Barashkov, N.A. Autosomal Recessive Deafness in Yakut Population Isolate in Eastern Siberia: Extensive Accumulation of the Splice Site Mutation IVS1+1GA in GJB2 Gene as a Result of Founder Effect / N.A. Barashkov, L.U. Dzhemileva, S.A.

Fedorova, F.M. Teryutin, O.L. Posukh, A.V. Soloviev, E.E. Fedotova, S.L. Lobov, L.S. Zamorshikova, O.A. Melnitchuk, E.K. Khusnutdinova and E.I. Mikhailova // International Polar Year. - Montral, Canada, 2012.

11. Lobov, S.L. Spectrums and frequencies of SLC26A4 and SLC26A5 genes mutation among patients with inherited hearing loss from different regions of Russia / S.L.

Lobov, L.U. Dzhemileva, E.K. Khusnutdinova // European Journal of human genetics. - Nrnberg, Germany 2012. - P.333.

12. Dzhemileva, L.U. Frequencies of SLC26A4 and SLC26A5 genes mutation among patients with inherited hearing loss from different regions of Russia / L.U.

Dzhemileva, S.L. Lobov, E.K. Khusnutdinova // Congress of the European Academy of Paediatric Societies (EAPS 2012) – 2012. – Istanbul, Turkey – Р. 345.

13. Джемилева, Л.У. Молекулярно-генетический анализ наследственной несиндромальной сенсоневральной тугоухости в различных регионах России / Л.У. Джемилева, С.Л. Лобов, А.С. Мукминов, Э.К. Хуснутдинова // V Всероссийская конференция с международным участием «Пренатальная диагностика и генетический паспорт - основа профилактической медицины в век нанотехнологий»: Материалы конференции. – Санкт-Петербург. – 2012. С.40.

14. Лобов, С.Л. Анализ спектра и частоты мутаций и полиморфных вариантов в генах SLC26A4 и SLC26A5 у больных с наследственными нарушениями слуха из республики Башкортостан / С.Л. Лобов, Л.У. Джемилева, Э.К. Хуснутдинова // Актуальные проблемы генетики человека, животных растений и микроорганизмов: Материалы Всероссийской школы-конференции молодых ученых. – Уфа. – 2012. – С.89.

15. Лобов, С.Л. Анализ частоты гетерозиготного носительства мутации c.-53AG в гене SLC26A5 в популяциях Евразии / С.Л. Лобов, Л.У. Джемилева, А.Н. Барашков, О.Л. Посух, Э.К. Хуснутдинова // Биомика. –2012. – Т.3 - №1. С.69-71.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ, ИСПОЛЬЗОВАННЫХ В ТЕКСТЕ

12SrRNA Enlarged vestibular aqueduct (расширенный водопровод преддверия) EVA Gap junction 2 (ген коннексина 26) GJB Gap junction B6 (ген коннексина 30) GJB mtDNA MYO7A Solute carrier family 26, member 4 (ген пендрина) SLC26A Solute carrier family 26, member 5 (ген престина) SLC26A Single Strand Conformation Polymorphism (анализ конформационных SSCP полиморфизмов одноцепочечных фрагментов ДНК) tRNASer(UCN) Ген митохондриальной ДНК, кодирующий транспортную РНК Аутосомно-доминантная форма заболевания Аутосомно-рецессивная форма заболевания Всемирная организация здравоохранения ВОЗ Волго-Уральский регион.

ВУР Компьютерная томография Медико-генетическая консультация МГК Магнитно-резонансная томография МРТ Несиндромальная сенсоневральная тугоухость/глухота НСНТ п.н.

ПААГ Полиморфизм длины рестрикционных фрагментов ПДРФ Полимеразная цепная реакция ПЦР Республика Башкортостан

 
Похожие работы:

«Назарова Орзугуль Домулоджановна ЭКОЛОГИЯ СЕРОЙ КРЫСЫ (RATTUS NORVEGICUS BERKENHOUT, 1769) В ГИССАРСКОЙ ДОЛИНЕ ЦЕНТРАЛЬНОГО ТАДЖИКИСТАНА специальность 03.02.04 – зоология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Новосибирск – 2012 1 Работа выполнена в лаборатории природных очагов болезней Научно-производственного предприятия Биологические препараты Таджикской Академии сельскохозяйственных наук Научный руководитель : доктор биологических...»

«ШАГЖИНА АЙВИ ПЕТРОВНА ЭКОЛОГО-БИОХИМИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МИКРООРГАНИЗМОВ, УЧАСТВУЮЩИХ В КРУГОВОРОТЕ АЗОТА В ЩЕЛОЧНЫХ ГИДРОТЕРМАХ ПРИБАЙКАЛЬЯ 03.00.16 – экология 03.00.07 – микробиология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Улан-Удэ 2007 1 Работа выполнена в Институте общей и экспериментальной биологии СО РАН доктор биологических наук, профессор Научный руководитель : Баир Бадмабазарович Намсараев доктор биологических наук Научный...»

«НИКОЛАЕВ Кирилл Евгеньевич ОСОБЕННОСТИ РЕАЛИЗАЦИИ ЖИЗНЕННЫХ ЦИКЛОВ ТРЕМАТОД СЕМЕЙСТВ ECHINOSTOMATIDAE И RENICOLIDAE В ЛИТОРАЛЬНЫХ ЭКОСИСТЕМАХ КАНДАЛАКШСКОГО ЗАЛИВА БЕЛОГО МОРЯ 03.02.11 – паразитология Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Санкт-Петербург 2012 Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении науки Зоологический Институт Российской Академии Наук Научный руководитель : Галактионов Кирилл Владимирович,...»

«Зайцева Юлия Анатольевна ПАРТЕНОГЕНЕТИЧЕСКАЯ АКТИВАЦИЯ И ХИМИЧЕСКАЯ ЭНУКЛЕАЦИЯ ООЦИТОВ КРЫС. ПРОЦЕССЫ ДЕМЕТИЛИРОВАНИЯ ДНК У РАННИХ ПРЕДИМПЛАНТАЦИОННЫХ ЭМБРИОНОВ КРЫС И МЫШЕЙ 03.00.25 Гистология, цитология, клеточная биология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учёной степени кандидата биологических наук Санкт-Петербург 2008 Работа выполнена в Центре молекулярной медицины имени Макса Дельбрюка (Берлин) и в Институте цитологии Российской акдемии наук (Санкт-Петербург) Научные...»

«ИВАЩЕНКО ТАТЬЯНА АЛЕКСАНДРОВНА МОНОКЛОНАЛЬНЫЕ АНТИТЕЛА К F1 И V АНТИГЕНАМ YERSINIA PESTIS ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ ВОЗБУДИТЕЛЯ ЧУМЫ 03.02.03 – микробиология 03.01.06 – биотехнология (в том числе бионанотехнологии) АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Оболенск – 2013 2 Работа выполнена в Федеральном бюджетном учреждении науки Государственный научный центр прикладной микробиологии и биотехнологии Роспотребнадзора Научные руководители: доктор...»

«ЕВРЕИНОВА АЛЕНА ВЛАДИМИРОВНА ИЗМЕНЕНИЕ ЭКОЛОГО-БИОЛОГИЧЕСКИХ СВОЙСТВ ЧЕРНОЗЕМА ОБЫКНОВЕННОГО ПРИ ЗАГРЯЗНЕНИИ ТЯЖЕЛЫМИ МЕТАЛЛАМИ ВТОРОГО КЛАССА ОПАСНОСТИ (Mo, Co, Cr, Ni) 03.00.16 – экология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Ростов-на-Дону - 2006 2 Работа выполнена на кафедре экологии и природопользования Ростовского государственного университета Научный руководитель : доктор сельскохозяйственных наук, доцент Колесников Сергей...»

«Мельник Анна Александровна ЭКОЛОГИЧЕСКОЕ СОСТОЯНИЕ ПОЧВ И ЛЕСА НИЗКОГОРНОЙ ЧАСТИ АДЫГЕИ (на примере Майкопского лесничества) 03.02.08 – экология (биологические наук и) АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Ростов-на-Дону - 2011 2 Работа выполнена на кафедре лесохозяйственных дисциплин Майкопского государственного технологического университета Научный руководитель : доктор географических наук, профессор Елисеева Наталия Волеславовна...»

«НИКИТЕНКО Елена Викторовна МАКРОЗООБЕНТОС ВОДОЕМОВ ДОЛИНЫ ВОСТОЧНОГО МАНЫЧА 03.02.10 – гидробиология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учёной степени кандидата биологических наук Борок – 2014 Работа выполнена в Бюджетном научном учреждении Республики Калмыкия Институт комплексных исследований аридных территорий в отделе экологических исследований Научный руководитель : доктор биологических наук, Щербина Георгий Харлампиевич Официальные оппоненты : Курашов Евгений...»

«ГУЛГЕНОВ Сергей Жаргалович ЭКОЛОГО-ФАУНИСТИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ НАСЕЛЕНИЯ СООБЩЕСТВА ПТИЦ СЕЛЬСКИХ НАСЕЛЁННЫХ ПУНКТОВ БАЙКАЛЬСКОЙ СИБИРИ 03.00.16 – экология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Улан-Удэ, 2007 Работа выполнена в Институте общей и экспериментальной биологии СО РАН Научный руководитель : доктор биологических наук, профессор Доржиев Цыдыпжап Заятуевич Официальные оппоненты : доктор биологических наук Елаев Эрдени Николаевич...»

«БОЧАРОВА Наталья Александровна Исследование причин токсичности удлиненного полиглутаминового фрагмента хантингтина в дрожжах Saccharomyces cerevisiae 03.00.04 – биохимия Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Москва 2008 3 Работа выполнена в лаборатории программируемой смерти одноклеточных эукариот Научно-Исследовательского Института Физико-Химической Биологии имени А.Н. Белозерского при Московском Государственном Университете имени...»

«ШИРЯЕВА Анна Петровна ФУНКЦИОНАЛЬНОЕ СОСТОЯНИЕ ДЫХАТЕЛЬНОЙ ЦЕПИ МИТОХОНДРИЙ ГЕПАТОЦИТОВ КРЫС ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ ТОКСИЧЕСКОМ ГЕПАТИТЕ специальность 03.00.25 – гистология, цитология, клеточная биология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Санкт-Петербург 2008 Работа выполнена в Лаборатории клеточной патологии Института цитологии РАН, Санкт-Петербург Научные руководители: кандидат биологических наук Сакута Галина Анатольевна доктор...»

«ОМАРОВА ЛЕЙЛА ТАДЖИБОВНА СВОБОДНОРАДИКАЛЬНЫЕ ПРОЦЕССЫ В КРОВИ КРЫС ПРИ УМЕРЕННОЙ ГИПОТЕРМИИ И ВВЕДЕНИИ ДАЛАРГИНА 03.01.04 - биохимия Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Казань – 2013 Работа выполнена на кафедре химии Дагестанского государственного технического университета и кафедре...»

«Коровина Наталья Анатольевна ЖУКИ-ЖУЖЕЛИЦЫ (COLEOPTERA, CARABIDAE) УРБАНИЗИРОВАННЫХ ЛУГОВЫХ ЦЕНОЗОВ (НА ПРИМЕРЕ г. КЕМЕРОВО) 03.00.08 – зоология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Томск 2007 Работа выполнена на кафедре зоологии и экологии ГОУ ВПО Кемеровский государственный университет Научный руководитель : кандидат биологических наук, доцент Еремеева Наталья Ивановна Официальные оппоненты : доктор биологических наук, профессор...»

«НИКИТЕНКО Мария Анатольевна ВЛИЯНИЕ УРБАНИЗАЦИИ НА ТРАНСФОРМАЦИЮ ПОЧВЕННОГО ПОКРОВА И УСЛОВИЯ ФУНКЦИОНИРОВАНИЯ ДРЕВЕСНЫХ РАСТЕНИЙ ГОРОДОВ СРЕДНЕГО ПРЕДУРАЛЬЯ (НА ПРИМЕРЕ Г. САРАПУЛА И Г. КАМБАРКИ) 03.00.16 - экология Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук ИЖЕВСК - 2007 Работа выполнена в ГОУВПО Удмуртский государственный университет на кафедре ботаники и экологии растений Научный руководитель : доктор...»

«СГИБНЕВ АНДРЕЙ ВИКТОРОВИЧ ПРО- И АНТИОКСИДАНТЫ КАК ФАКТОРЫ ФОРМИРОВАНИЯ И РЕГУЛЯЦИИ СИМБИОТИЧЕСКИХ СИСТЕМ С УЧАСТИЕМ ПРОКАРИОТ 03.02.03 – Микробиология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук Оренбург – 2013 Работа выполнена в Федеральном Государственном бюджетном учреждении науки Институте клеточного и внутриклеточного симбиоза Уральского отделения РАН академик РАН и РАМН, Научный консультант : Заслуженный деятель науки РФ, доктор...»

«Хусид Светлана Борисовна ФИЗИОЛОГО-БИОХИМИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ ПОДБОРА СОРТОВ ТЫКВЫ ДЛЯ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ В КОРМОПРОИЗВОДСТВЕ Специальность 03.01.05 – физиология и биохимия растений АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата сельскохозяйственных наук Краснодар – 2013 1 Работа выполнена в федеральном государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования Кубанский государственный аграрный университет в 2006-2012 гг. Научный...»

«ЛУБЯНОВ Александр Александрович МЕХАНИЗМЫ ДЕЙСТВИЯ РЕГУЛЯТОРА РОСТА РАСТЕНИЙ СТИФУНА И ЕГО ПРОТЕКТОРНЫЕ СВОЙСТВА В УСЛОВИЯХ КАДМИЕВОГО СТРЕССА Специальность 03.00.04 - биохимия АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Уфа – 2009 Работа выполнена в Учреждении Российской Академии наук Институт биохимии и генетики Уфимского научного центра РАН Научный руководитель : кандидат биологических наук Яхин Олег Ильдусович Научный консультант :...»

«ГУМЕРОВА РАУШАНИЯ ХАНИФОВНА Оценка опасности и способы ремедиации нефтешламов, содержащих природные радионуклиды 03.02.08 – экология (биологические наук и) АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук КАЗАНЬ – 2013 Работа выполнена на кафедре прикладной экологии Института экологии и географии Казанского (Приволжского) федерального университета Научные руководители: доктор биологических наук, профессор Селивановская Светлана Юрьевна...»

«Черневская Екатерина Александровна РОЛЬ БИОХИМИЧЕСКИХ МАРКЕРОВ В ПЕРИОПЕРАЦИОННОМ МОНИТОРИНГЕ ИНФЕКЦИИ У КАРДИОХИРУРГИЧЕСКИХ ПАЦИЕНТОВ 03.00.04 – биохимия АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Москва-2008 Диссертационная работа выполнена в Научном центре сердечно-сосудистой хирургии им. А.Н. Бакулева РАМН Научный руководитель : доктор медицинских наук, профессор Белобородова Наталья Владимировна Официальные оппоненты : доктор...»

«ПАНОВ Алексей Валерьевич ОБОСНОВАНИЕ, ОЦЕНКА ЭФФЕКТИВНОСТИ И ОПТИМИЗАЦИЯ ЗАЩИТНЫХ И РЕАБИЛИТАЦИОННЫХ МЕРОПРИЯТИЙ НА ТЕРРИТОРИЯХ, ПОДВЕРГШИХСЯ ЗАГРЯЗНЕНИЮ ПОСЛЕ АВАРИИ НА ЧЕРНОБЫЛЬСКОЙ АЭС Специальность: 03.00.01 – радиобиология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук Обнинск - 2009 2 Работа выполнена в Государственном научном учреждении Всероссийский научноисследовательской институт сельскохозяйственной радиологии и агроэкологии...»






 
© 2013 www.diss.seluk.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Авторефераты, Диссертации, Монографии, Методички, учебные программы»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.