WWW.DISS.SELUK.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА
(Авторефераты, диссертации, методички, учебные программы, монографии)

 


На правах рукописи

Зверев Александр Федорович

ХАРАКТЕРИСТИКА STAPHYLOCOCCUS AUREUS,

ВЫДЕЛЕННЫХ ОТ БАКТЕРИОНОСИТЕЛЕЙ И

РАЗРАБОТКА СПОСОБА ИХ САНАЦИИ

03.02.03 - Микробиология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени

кандидата медицинских наук

Оренбург –2013

Работа выполнена в федеральном государственном бюджетном учреждении науки «Институт клеточного и внутриклеточного симбиоза» Уральского отделения Российской академии наук

Научный руководитель:

доктор биологических наук Карташова ФГБУН «Институт клеточного и внутрикле- Ольга Львовна точного симбиоза УрО РАН»

Научный консультант: Сетко Заслуженный работник высшей школы РФ, Нина Павловна доктор медицинских наук, профессор ГБОУ ВПО «Оренбургская государственная медицинская академия» Минздрава России

Официальные оппоненты: Чайникова доктор медицинских наук, профессор Ирина Николаевна ГБОУ ВПО «Оренбургская государственная медицинская академия» Минздрава России Заслуженный деятель науки РФ, Габидуллин доктор медицинских наук, профессор Зайнулла Гайнулинович ГБОУ ВПО «Башкирский государственный медицинский университет»

Ведущая организация: ГБОУ ВПО «Южно-Уральский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации

Защита состоится «14 » ноября 2013 г. в_ часов на заседании диссертационного совета Д 208.066.03 при Оренбургской государственной медицинской академии по адресу: Россия, 460000, г. Оренбург, ул.Советская, д.6, конференцзал (к.205), телефон (3532) 40-35-62, факс (3532) 77-24-59, e-mail: orgma_ds1@esso.ru, официальный сайт: http://orgma.ru.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ОрГМА.

Автореферат разослан «_»2013 г., автореферат и текст объявления размещены на официальном сайте ВАК Министерства образования и науки РФ в сети интернет.

Ученый секретарь диссертационного Немцева Наталия совета д.м.н., профессор Вячеславовна

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы Проблема стафилококкового бактерионосительства сохраняет свою актуальность, поскольку бактерионосители являются источниками эпидемиологической опасности. В то же время важное клиническое значение стафилококкового бактерионосительства определяется типичностью процесса транслокации стафилококков со слизистых оболочек во внутреннюю среду организмахозяина с развитием широкого спектра заболеваний (Wertheim H.F. et al., 2005;

van Rijen M.M., Kluytmans J.A., 2008). Условия формирования резидентного бактерионосительства связаны с наличием у резидентной стафилококковой микрофлоры особых свойств, обеспечивающих ее адаптацию к условиям, складывающимся на слизистой оболочке передних отделов носовых ходов, и таким образом, ответственных за длительное сохранение микроорганизма в данной экологической нише. Так, среди штаммов S. aureus, выделенных от резидентных бактерионосителей, установлена высокая частота встречаемости антагонистической активности в отношении широкого круга микроорганизмов (коринебактерий, микрококков и др.), являющихся представителями нормальной микрофлоры верхних дыхательных путей (Дерябин Д.Г., 2000). Показано, что у постоянных носителей резидентного типа происходит накопление наиболее вирулентных и резистентных к антибиотикам стафилококков (Терновская Л.Н., 1983; Эрдынеева Б.С., 2011), а также обладающих способностью к инактивации факторов естественной резистентности с высокими значениями признаков (Блиндер Е.А., 2005; Карташова О.Л. с соавт., 2009).

Многочисленными исследованиями показано, что техногенные факторы внешней среды, модифицируя свойства стафилококков, способствуют формированию состояния бактерионосительства и развитию инфекционновоспалительных заболеваний (Даутов Ф.Ф. с соавт., 2007; Атаниязова Р.А., 2008; Ковальчук И.Ю., 2009; Ефимова Н.В. с соавт., 2011).

В связи с этим, научный интерес представляет изучение биологических, в том числе персистентных свойств у стафилококков, выделенных от резидентных и транзиторных бактерионосителей, а также бактерионосителей, проживающих на территориях с разным уровнем антропогенного загрязнения, что позволит разработать способы борьбы с бактерионосительством.

Целью настоящей работы явилось изучение биологических свойств стафилококков, выделенных со слизистой оболочки переднего отдела носа бактерионосителей разных типов, с разработкой способа их санации.

Для достижения цели были поставлены и решены следующие задачи:

1. Изучить биологические свойства стафилококков (антикарнозиновая, антилактоферриновая, sIgA- протеазная активность) и местный иммунитет у бактерионосителей разных типов.

2. Исследовать биологические свойства S. aureus, выделенных от бактерионосителей, проживающих на территориях с разным уровнем антропогенного загрязнения воздушной среды, и провести их сравнительный анализ.

3. Разработать способ санации резидентных бактерионосителей циклофероном и оценить его эффективность.

Научная новизна Проведенные исследования позволили установить, что золотистые стафилококки, выделенные у резидентных бактерионосителей, характеризуются высокой экспрессией свойств, направленных на инактивацию защитных факторов барьерного эпителия слизистых переднего отдела носа (карнозина, лактоферрина, sIgA), которые могут служить критериями эпидемиологической опасности.

Выявлена прямая зависимость между уровнем антилактоферриновой и sIgA-протеазной активностей стафилококков и содержанием лактоферрина и sIgA в назальном секрете резидентных бактерионосителей. Научно обоснованы особенности патогенеза резидентного бактерионосительства на модельных системах «лактоферрин хозяина – антилактоферриновая активность стафилококков» и «sIgA хозяина - sIgA-протеазная активность стафилококков».

Установлено, что у бактерионосителей, проживающих на территориях с высоким уровнем антропогенного загрязнения воздушной среды, отмечается повышение уровня микробной обсемененности слизистой оболочки передних отделов носа золотистыми стафилококками, обладающими выраженной антикарнозиновой активностью и способностью к образованию биопленок.

Экспериментально установлена оптимальная длительность проведения санации резидентных стафилококковых бактерионосителей циклофероном.

Выявлены особенности санации лиц, проживающих на территориях с высоким уровнем загрязнения воздушной среды, характеризующиеся подавлением у золотистых стафилококков способности к инактивации карнозина и появлением симбионтов в составе микрофлоры носовых ходов. С использованием метода атомно-силовой микроскопии впервые визуализированы результаты воздействия циклоферона на поверхностные структуры клеток S. aureus, выявлено значительное увеличение шероховатости их поверхности и изменение морфологии, что позволяет констатировать нарушение барьерных функций клеточной стенки золотистых стафилококков.

Практическая значимость В результате исследования получены новые данные, расширяющие представление о роли факторов персистенции стафилококков в формировании бактерионосительства.

Свойства стафилококков, направленные на инактивацию факторов естественной резистентности хозяина, и, особенно их комбинация, могут быть использованы как эпидемиологические маркеры стафилококков, выделенных от резидентных бактерионосителей.

На основе полученных экспериментально-лабораторных данных разработан способ санации циклофероном стафилококковых бактерионосителей под контролем антикарнозиновой активности стафилококков (Патент РФ на изобретение № 2441656), позволяющий санировать стафилококковых бактерионосителей, проживающих на территориях с высоким уровнем загрязнения воздушной среды. Материалы работы использованы при составлении информационно-методического письма «Диагностика и санация стафилококковых бактерионосителей», утвержденного Министерством здравоохранения Оренбургской области.

Положения, выносимые на защиту 1. Формирование резидентного бактерионосительства характеризуется изменением состояния систем «лактоферрин – антилактоферриновая активность», «sIgA - sIgA- протеазная активность»: одновременным увеличением содержания в назальном секрете лактоферрина и секреторного Ig A, а также значений антилактоферриновой и sIgA- протеазной активности золотистых стафилококков.

2. У резидентных стафилококковых бактерионосителей, проживающих в условиях повышенного уровня загрязнения воздушной среды, отмечается высокая микробная обсемененность слизистой оболочки переднего отдела носа золотистыми стафилококками с выраженной антикарнозиновой активностью и способностью к образованию биопленок.

3. Основу эффективной санации резидентных стафилококковых бактерионосителей, проживающих на территориях с высоким уровнем загрязнения воздушной среды, составляет использование циклоферона, подавляющего персистентный потенциал золотистых стафилококков и способствующего нормализации состояния микробного биоценоза.

Апробация работы. Материалы работы были доложены и обсуждены на:

пленуме Научного совета по экологии человека и гигиене окружающей среды РАМН и Минздравсоцразвития России по проблеме: «Методологические проблемы изучения, оценки и регламентирования биологических факторов в гигиене окружающей среды» (Москва, 2009); IX Российской конференции иммунологов Урала (Челябинск, 2011); II международной научной конференции студентов, аспирантов и молодых ученых «Фундаментальные и прикладные исследования в биологии» (Донецк, 2011); X научной сессии молодых ученых и студентов «Современное решение актуальных научных проблем в медицине»

(Нижний Новгород, 2011); VII Всероссийской конференции «Персистенция микроорганизмов» (Оренбург, 2012).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 6 печатных работ, в том числе 4 публикации в журналах, рекомендованных ВАК Министерства образования и науки РФ, получен патент на изобретение РФ № 2441656 от февраля 2012 года.

Объем и структура диссертационной работы Текст диссертации изложен на 142 страницах машинописи, содержит введение, 6 глав, заключение, выводы, указатель литературы, включающий отечественных и 85 иностранных источников. Текст иллюстрирован 19 рисунками и 11 таблицами.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Для изучения биологических свойств стафилококков и местного иммунитета при стафилококковом бактерионосительстве было обследовано 67 здоровых лиц (студенты 3 курса Оренбургской государственной медицинской академии). Дифференциация типов носительства проводилась по Чистовичу Г.Н.

(1969) и включала сопоставление видовых и типовых характеристик культур, выделенных трехкратно от одного лица с интервалом 10 суток. В результате обследования выявлены: 22 бактерионосителя S. aureus резидентного типа, бактерионосителя S. aureus транзиторного типа и 21 не носитель S. aureus (трехкратно выделялся Staphylococcus epidermidis).

Для изучения биологических свойств стафилококков, выделенных у детей 9-12 лет, проживающих на территориях с разным уровнем антропогенной нагрузки, на стафилококковое бактерионосительство трехкратно было обследовано 109 детей, проживающих в селе Шарлык Шарлыкского района Оренбургской области (учащиеся СОШ № 2) и 101 ребенок, проживающий в городе Новотроицке Оренбургской области (учащиеся СОШ № 16).

Анализ загрязнения атмосферного воздуха проведн в соответствии с ГОСТом 17.2.3.01-86 и РД 52.04.186-89 на содержание пыли, диоксида азота, диоксида серы, оксида углерода, формальдегида, а также металлов: никеля, цинка, меди, марганца и др. Оценка риска воздействия на здоровье детского населения - на основе «Руководства по оценке риска для здоровья населения при воздействии химических веществ, загрязняющих окружающую среду» Р 2.1.10.1920-04, а также методического пособия «Окружающая среда. Оценка риска для здоровья. Основные элементы методологии» (М., 1998).

Материалом для исследования послужили штаммы стафилококков, выделенные от описанных выше лиц. Выделение и идентификацию стафилококков до вида проводили в соответствии с «Унифицированными методами лабораторной диагностики инфекционных заболеваний» (Приказ МЗ СССР №535), а также с использованием тест-систем фирмы «Lachema» (Чехия). Выделение клонов осуществляли путем рассева суточной бульонной культуры золотистого стафилококка на плотную питательную среду в соответствии с указаниями Дж.

Миллера (1976).

У всех выделенных штаммов определяли факторы вирулентности и персистенции: способность коагулировать плазму, проявлять лецитовителлазную и гемолитическую активность по Биргер М.О. (1982), антикарнозиновую, антилактоферриновую и sIgA-протеазную активности по Бухарину О.В. с соавт.

(1999, 2005).

Образование биопленок стафилококками оценивали по степени связывания ими кристаллического фиолетового в стерильных 96-луночных полистироловых планшетах (O`Toole G., 2000).

Чувствительность стафилококков к антибиотикам определяли дискодиффузионным методом согласно Инструкции научно-исследовательского центра фармакотерапии (2004).

Генотипирование 24 штаммов золотистых стафилококков, выделенных от резидентных и транзиторных бактерионосителей, проживающих на территориях с разным уровнем антропогенной нагрузки, проводили методом RAPD-ПЦР со случайным олигонуклотидным праймером размером 10 нуклеотидов (Shot 1). У этих же штаммов определяли гены патогенности: pvl-f, sec 3, clfA, clfB, arg, mec A с помощью метода полимеразной цепной реакции.

Концентрации лактоферрина и sIgA в назальном секрете определяли иммуноферментным анализом с использованием реагентов ЗАО «Вектор - Бест»

(для лактоферрина) и «Хема-медика» (для sIgA) в соответствии с инструкциями по их использованию, результаты регистрировали на фотометре Multiskan MS (Labsystems, Финляндия).

Для изучения влияния циклоферона на персистентные свойства стафилококков был использован его раствор для внутривенного введения (Циклоферон®, ООО «Наука» - технологическая фармакологическая фирма «ПОЛИСАН», Санкт-Петербург).

Экспериментальное изучение влияния препарата на антикарнозиновую активность стафилококков и их способность к образованию биопленок проводили на 12 клонах S. aureus, выделенного со слизистой оболочки переднего отдела носа резидентного бактерионосителя. Обработанные циклофероном стафилококки исследовали методом атомно-силовой микроскопии (АСМ) в контактном режиме с использованием сканирующего зондового микроскопа SММЗАО «ПРОТОН-МИЭТ», Россия).

Для отработки режима санации трехкратно в течение месяца с интервалом в 10 дней на стафилококковое бактерионосительство было обследовано детей в возрасте 8-12 лет, проживающих в селе Нежинка Оренбургского района Оренбургской области (учащиеся УМО «Нежинский лицей»), и сформирована группа резидентных бактерионосителей из 26 человек, которые были санированы циклофероном в течение 10 дней с ежедневным бактериологическим контролем с определением вида микроорганизма и персистентных свойств у выделенных золотистых стафилококков для отработки режима санации.

Достоверность различий сравниваемых показателей оценивали по tкритерию Стьюдента (Лакин Г.Ф., 1990).

Результаты исследования и их обсуждение Для выяснения природы бактерионосительства необходимо понимание патогенетических условий формирования именно его резидентного (персистирующего) варианта. При этом принципиальный подход к решению данного вопроса базировался на предположении о наличии у резидентной стафилококковой микрофлоры особых свойств, обеспечивающих ее адаптацию к условиям, складывающимся на слизистой оболочке передних отделов носовых ходов, и таким образом, ответственных за длительное сохранение микроорганизма в данной экологической нише.

Среди факторов, определяющих колонизационную резистентность слизистой верхних дыхательных путей, важное значение имеют железосвязывающий белок – лактоферрин, секреторный иммуноглобулин А (sIgA) и карнозин. Проведенные нами исследования позволили выявить широкую распространенность и высокие значения у стафилококков, выделенных со слизистой оболочки носа от резидентных бактерионосителей, способности к инактивации карнозина, лактоферрина и, несколько в меньшей степени, секреторного иммуноглобулина А (табл.1).

Показатели персистентных характеристик у золотистых стафилококков, выделенных от бактерионосителей нг/мл мкг/мл мг/мл Анализ частоты встречаемости комбинации исследуемых признаков у носительских штаммов золотистого стафилококка показал, что изоляты от резидентных бактерионосителей, обладающие комбинацией АКрА, АЛфА и sIgAпротеазной активности, регистрировались в 36,4% случаев, тогда как среди штаммов S. aureus, выделенных от транзиторных бактерионосителей, ни один не обладал комбинацией данных свойств. Напротив, у транзиторных бактерионосителей 54,2% выделенных штаммов не имели изученных признаков, а у резидентных бактерионосителей – лишь 13,6% изолятов. Наличие комплекса факторов персистенции у штаммов, выделенных от резидентных бактерионосителей, в отличие от штаммов, выделенных от транзиторных бактерионосителей, может служить критерием их эпидемиологической опасности.

Исследование частоты встречаемости штаммов стафилококков с различным уровнем выраженности АЛфА и sIgA-протеазной активности показало, что 27,8% штаммов, выделенных от резидентных бактерионосителей, имели значения АЛфА более 900 нг/мл, среди штаммов от транзиторных бактерионосителей подобные изоляты отсутствовали. Аналогичная закономерность была выявлена и для sIgA-протеазной активности: 55,6% штаммов от резидентных бактерионосителей были способны инактивировать 0,2- 0,4 мкг/мл секреторного иммуноглобулина А, в то время как все штаммы от транзиторных бактерионосителей характеризовались sIgA-протеазной активностью, не превышающей 0, мкг/мл. Присутствие штаммов S. aureus с комплексом факторов персистенции с высокими значениями признаков у резидентных бактерионосителей существенно снижает колонизационную резистентность их слизистой оболочки носа и приводит к длительной персистенции S. aureus.

Полученные результаты, отражающие доминирование у резидентных бактерионосителей штаммов S. aureus с высоким уровнем АЛфА, sIgA – протеазной и антикарнозиновой активностей, свидетельствуют об их участии в механизмах выживания на слизистых верхних дыхательных путей, что проявляется в длительном бактериовыделении, и согласуются с аналогичными результатами, полученными ранее для антилизоцимной и антиинтерфероновой активностей микроорганизмов (Усвяцов Б.Я. с соавт., 1994).

Однако формирование бактерионосительства определяется не только свойствами патогена, но и уровнем защищенности от него организма хозяина (Бухарин О.В., 1999). Среди факторов, определяющих колонизационную резистентность слизистой верхних дыхательных путей, несомненное значение имеют железосвязывающий белок – лактоферрин и секреторный иммуноглобулин А (sIgA) (Farnaud S., Evans R.W., 2003; Rey J. et al., 2004). Лактоферрин (ЛФ) железосвязывающий гликопротеин из семейства трансферринов, оказывающий бактерицидное и бактериостатическое действие на микроорганизмы, содержится в назальном секрете (Канышкова Т.Г. с соавт., 2001; Legrand D. et al., 2005).

sIgA – основной компонент секрета слизистой носа, предотвращающий адгезию патогенов к поверхности слизистой.

Сравнительный анализ концентраций указанных белков у резидентных и транзиторных бактерионосителей S. aureus показал наличие существенных различий: концентрация лактоферрина в назальном секрете резидентных бактерионосителей достоверно превышала его количественные значения у транзиторных бактерионосителей (2850±297; 2162±94 нг/мл, соответственно p0,05).

Аналогичная закономерность отмечена и для отличий в содержании sIgA (58,9±4,16; 41,4±3,66 мкг/мл, соответственно p0,001). Таким образом, формирование резидентного носительства золотистого стафилококка сопровождается повышенным содержанием в назальном секрете лактоферрина и секреторного IgA.

При изучении взаимосвязи выраженности биологических свойств стафилококков с содержанием лактоферрина и секреторного IgA в назальном секрете при разных типах бактерионосительства, было установлено преобладание стафилококков, способных инактивировать факторы естественной резистентности при резидентном бактерионосительстве, и выявлена прямая зависимость между уровнем антилактоферриновой активности стафилококков с содержанием лактоферрина в назальном секрете хозяина и sIgA-протеазной активности стафилококков и sIgA хозяина.

Полученные данные раскрывают одну из особенностей патогенеза резидентного бактерионосительства на модельных системах «лактоферрин хозяина – антилактоферриновая активность стафилококков» и «sIgA хозяина - sIgAпротеазная активность стафилококков».

Известно, что уровень антропогенной нагрузки, в первую очередь, отражается на заболеваемости органов дыхания у детей. Установлена корреляционная зависимость уровня аллергической и инфекционно-воспалительной заболеваемости органов дыхания от степени загрязнения воздушной среды (Даутов Ф.Ф. с соавт., 2007).

Установлено, что одним из этиологических факторов, влияющих на развитие аллергических заболеваний респираторного тракта, являются стафилококки (Таточенко В.К., 1987). Выявлена связь между экологическим неблагополучием территории проживания и изменением биологических свойств микрофлоры организма человека, что приводит к формированию стафилококкового бактерионосительства и других форм инфекционного процесса, в частности, к возникновению болезней органов дыхания (Бухарин О.В., 1997), профилактика развития которых является актуальной проблемой.

Проведенный анализ распространенности заболеваемости детского населения болезнями органов дыхания за 2008-2011 годы по официальным статистическим данным в административных зонах Оренбургской области на урбанизированных и сельских территориях позволил выявить высокую общую заболеваемость среди детей, проживающих на урбанизированных территориях по сравнению с сельскими территориями (Западная, Центральная, Восточная зоны).

Так, общая заболеваемость болезнями органов дыхания детей, проживающих в городах, оказалась в 1,5 раза выше, чем детей, проживающих в сельской местности (1373,5±123,52 и 878,4±46,4, соответственно), самый высокий уровень зарегистрирован в г. Новотроицке (1778,9±159,6), самый низкий в Центральной зоне (788,2±23,2) (р0,01). На основании данного анализа дальнейшие исследования были проведены в двух населенных пунктах: г. Новотроицке и с. Шарлык (Центральная зона) и показано, что в атмосферном воздухе г.

Новотроицка установлено превышение ПДК диоксида азота в 1,74 раза, взвешенных веществ в 1,45 раза, фенола в 1,76 раза, бенз(а)пирена в 1,6 раза, аммиака в 1,89 раза, в атмосферном воздухе с. Шарлык среди всех выявленных загрязнителей превышение в 1,6 раза ПДК было лишь по оксиду углерода.

С целью раннего определения негативного действия выбросов промышленных предприятий и объектов сельского хозяйства проведена оценка риска влияния загрязнения атмосферного воздуха г. Новотроицка на здоровье детского населения. Анализ полученных данных свидетельствует о том, что на его территории наибольший вклад в развитие неонкологических заболеваний, исходя из расчетных суммарных индексов опасности, вносят следующие специфические химические вещества: диоксид азота, фенол, медь. Из неспецифических загрязнителей атмосферного воздуха превышение референтных (безопасных) уровней воздействия выявлено для TSP (сумма взвешенных веществ).

Учитывая, что отдельные ксенобиотики имеют общие системы и органымишени, были рассчитаны индексы неканцерогенной опасности в г. Новотроицке. Показано, что наибольшему риску подвержены органы дыхания с превышением приемлемого уровня в 22,6 раза. Установлено, что рост случаев заболеваний нижних дыхательных путей и появления симптомов со стороны верхних дыхательных путей за счет повышенной концентрации диоксида азота в атмосферном воздухе составляет 8 случаев на 100 детей.

Далее были изучены микробная обсемененность слизистой оболочки бактерионосителей, видовой состав и биологические свойства стафилококков, выделенных у детей, проживающих в населенных пунктах с разной антропогенной нагрузкой.

Микробная обсемененность золотистыми стафилококками слизистой оболочки переднего отдела носа обследованных лиц в Новотроицке была выше, и у 41,2% бактерионосителей составляла 5*107 КОЕ/мл; тогда как у детей, проживающих в Шарлыке, не превышала 5*106 КОЕ/мл.

При изучении видового состава стафилококков, вегетирующих на слизистой оболочке переднего отдела носа у лиц, проживающих на данных территориях, было установлено, что штаммы золотистых стафилококков резидентного типа в Новотроицке изолировали в 21,8% случаев, в Шарлыке в 12,6%, напротив, у лиц, проживающих в Шарлыке, чаще выделяли коагулазоотрицательные стафилококки (в 58,3% и 34,7% случаев). У детей, проживающих в Новотроицке, на слизистой оболочке переднего отдела носа в 22,8% случаев, наряду с КОС вегетировали S. aureus, в Шарлыке таких лиц было в 2,6 раз меньше (8,8%). Число транзиторных бактерионосителей достоверно не различалось (10,9% и 13,6%).

Сравнительная характеристика биологических свойств изученных штаммов стафилококков, представлена на рисунке 1.

Штаммы золотистых стафилококков, выделенные как у резидентных, так и у транзиторных бактерионосителей в Новотроицке, чаще обладали антикарнозиновой активностью и способностью образовывать биопленки, чем штаммы, выделенные в Шарлыке, за исключением антикарнозиновой активности стафилококков, выделенных от резидентных бактерионосителей. При изучении выраженности биологических свойств S. aureus, выделенных со слизистой оболочки носа детей, проживающих на территориях с разным уровнем антропогенной нагрузки, отмечались более высокие значения признаков у резидентных бактерионосителей в Новотроицке.

Примечание: * - p0,05 (в Шарлыке по сравнению с Новотроицком) Рис.1. Распространенность (А) и выраженность (Б) биологических свойств S. aureus, выделенных со слизистой оболочки носа детей, проживающих на территориях с разным уровнем антропогенной нагрузки Проведенная сравнительная характеристика антибиотикочувствительности штаммов стафилококков, выделенных от бактерионосителей, проживающих в двух населенных пунктах, отличающихся уровнем антропогенной нагрузки, позволила отметить наличие большего числа резистентных к антибиотикам штаммов, выделенных от бактерионосителей резидентного типа, проживающих в Новотроицке.

Генотипирование выделенных золотистых стафилококков показало наличие практически у всех штаммов гена-регулятора agr, гена clfA, кодирующего связывание фибриногена, гена clfB, кодирующего адгезию к слизистой оболочке, у ряда штаммов - генов, кодирующие факторы патогенности и отсутствие у всех изученных стафилококков генов метициллинрезистентности.

Ранее установлена связь между экологическим неблагополучием территории проживания и изменением биологических свойств микрофлоры организма человека, что приводит к формированию стафилококкового бактерионосительства и других форм инфекционного процесса, в частности, возникновению болезней органов дыхания (Бухарин О.В., 1997).

Своевременная санация этих лиц может способствовать профилактике развития экологически обусловленных заболеваний.

В качестве предполагаемого препарата для санации резидентных стафилококковых бактерионосителей нами был выбран препарат циклоферон, который, как известно, стимулирует иммунитет и естественную колонизационную резистентность слизистых оболочек макроорганизма и снижает способность микроорганизмов к инактивации комплемента (Высочина И.Л., 2005; Кириллов Д.А., 2005; Потехина Л.П., 2010).

Популяционная структура исходной культуры S. aureus по АКрА была представлена клонами с разной выраженностью признака: 67% обладали высокой АКрА (2,0-3,0 мг/мл), по 16,5% - средней активностью (1,0-1,9 мг/мл) и нулевой. Среднепопуляционный уровень АКрА составлял 2,03±0,26 мг/мл.

Под действием циклоферона после первого соинкубирования доля клонов S. aureus с высокой АКрА составила 100%, после второго – 50% с высокой и 50% со средней АКрА. Среднепопуляционный уровень признака был равен 2,62±0,16 мг/мл и 2,05±0,94 мг/мл, соответственно. На третий день эксперимента отмечено также 50% клонов с высокой АКрА и появление клонов с низкой (0,1-0,9 мг/мл) и нулевой активностью (8% и 42% соответственно), а средний уровень продукции ингибиторов карнозина снизился до 1,44±0,26 мг/мл. Далее (четвертый день эксперимента) возросло число клонов с высокой (67%) и низкой (17%) АКрА, а также до 8% уменьшилось количество клонов с нулевой активностью и появилось 8% клонов со средней АКрА, что сопровождалось повышением значения среднепопуляционной антикарнозивой активности стафилококков до 2,2±0,26 мг/мл. После пятого соинкубирования, наряду с клонами, обладающими высокой АКрА (59%), появилась доля клонов со средней способностью к инактивации карнозина (8%), а уровень клонов, не обладающих признаком, увеличился до 33%; далее (шестой день эксперимента) было зарегистрировано такое же количество клонов с высокой АКрА (58%) и 42% клонов без признака. Средний уровень АКрА в популяции составил 1,75±0,26 мг/мл и 1,7±0,26 мг/мл соответственно. На седьмой день эксперимента отмечено нарастание доли клонов без АКрА (76%), 8% составляли клоны со средним и 16% с низким уровнем активности, а среднее значение антикарнозиновой активности в популяции снизилось до 0,195±0,12 мг/мл. Соинкубирование клонов стафилококков с циклофероном на 8, 9, и 10 дни эксперимента не изменяло полученные на 7 день эксперимента результаты. Аналогичная тенденция прослеживались при влиянии циклоферона на способность стафилококков формировать биопленки.

Для подтверждения полученных данных о возможности использования циклоферона в качестве препарата для санации бактерионосителей, нами была проведена апробация в течение 7 дней под контролем антикарнозиновой активности выделенных штаммов. Установлено, что в процессе санации, наряду с восстановлением микробиоценоза, заключающегося в появлении на слизистой носовых ходов представителей нормальной микрофлоры (коагулазонегативные стафилококки), снижается обсемененность слизистых оболочек S. aureus. После седьмого дня санации отмечено наименьшее число бактерионосителей золотистых стафилококков (19,0%) и максимальное – коагулазонегативных стафилококков (57,1%), одновременно S. aureus и CNS высевали у 23,8% санированных детей.

Установлено снижение антикарнозиновой активности у 90,9% выделенных штаммов S. aureus по сравнению с исходным уровнем признака (до санации) с 1,8 мг/мл до 0,9 мг/мл.

Таким образом, проведенные экспериментально-клинические исследования по снижению персистентных характеристик стафилококковой микрофлоры, вероятно, можно рассматривать в качестве возможного механизма положительного эффекта воздействия циклоферона на организм хозяина.

Далее мы изучили особенности морфо-функциональной реакции S. aureus на воздействие циклоферона, с помощью атомно-силовой микроскопии (рис. 2).

Рис. 2. АСМ-изображения интактных стафилококков (а, в);

после инкубации с циклофероном (б, г) Оценивали количественно основные морфологические параметры бактерий: длину, ширину, высоту клеток, а также рассчитанный на этой основе объем бактерий. Проведенная визуализация контрольных образцов S. aureus показала, что интактные бактериальные клетки имеют овоидную форму со средними значениями, представленными в таблице 2.

Морфологические параметры S. aureus до и после воздействия циклоферона в терапевтических концентрациях Интактные 0,64±0,09 0,88±0,10 0,64±0,05 2,46±0, после воздействия циклоферона Примечание: Rq – среднеквадратичная шероховатость поверхности клетки;

Культивирование S. aureus в присутствии терапевтических концентраций циклоферона (50 мг/мл) выявило значительное увеличение шероховатости поверхности бактериальных клеток и изменение их морфологии, что позволяет констатировать нарушение барьерных функций клеточной стенки S. aureus под воздействием циклоферона.

С целью проверки возможности проведения санации циклофероном резидентных бактерионосителей, проживающих в условиях антропогенной нагрузки, нами были санированы резидентные бактерионосители, проживающие в Новотроицке и Шарлыке.

Проведенная санация характеризовалась преимущественной элиминацией золотистых стафилококков, снижением микробной обсемененности слизистой оболочки этим микроорганизмом и антикарнозиновой активности стафилококков у лиц, проживающих на экологически благополучной территории. Выявлены особенности санации циклофероном резидентных бактерионосителей, проживающих на территории с высоким уровнем загрязнения воздушной среды, заключающиеся в появлении коагулазоотрицательных стафилококков в составе микрофлоры носовых ходов и снижении у S. aureus способности к инактивации карнозина (рис. 3).

Элиминация Снижение обсемененности Совместное Снижение АКрА Примечание: * - p0,05 (в Шарлыке по сравнению с Новотроицком) Рис. 3. Результат санации детей, проживающих на территориях с разной антропогенной нагрузкой Подводя итог проведенным исследованиям следует заключить, что наличие золотистых стафилококков с высокими факторами персистенции в биотопе носовых ходов, сопровождающееся реакций со стороны факторов естественной резистентности, определяет формирование резидентного бактерионосительства;

у резидентных стафилококковых бактерионосителей, проживающих в районе с высоким уровнем загрязнения воздушной среды, изменения в биотопе характеризуются высокой микробной обсемененностью слизистой оболочки переднего отдела носа золотистыми стафилококками с высокими значениями антикарнозиновой активности; основу эффективной санации резидентных стафилококковых бактерионосителей, в том числе проживающих в экологически неблагополучных районах, составляет использование циклоферона, подавляющего персистентный потенциал золотистых стафилококков и способствующего нормализации состояния микробиоценоза.

ВЫВОДЫ

1. Установлено, что у резидентных бактерионосителей происходит селекция штаммов золотистого стафилококка с высокой экспрессией свойств, направленных на инактивацию защитных механизмов барьерного эпителия слизистых (карнозина, лактоферрина, sIgA) переднего отдела носа. Данные свойства, и, особенно их комбинация, могут быть использованы как эпидемиологические маркеры штаммов стафилококков, выделенных от резидентных бактерионосителей.

2. У резидентных бактерионосителей состояние систем «лактоферрин – антилактоферриновая активность», «sIgA – sIgA-протеазная активность» характеризуется одновременным повышением как содержания лактоферрина и секреторного IgA в назальном секрете, так распространенности и выраженности антилактоферриновой активности и sIgA-протеазной активности золотистых стафилококков.

3. Выявлено, что у лиц, проживающих в экологически неблагополучном районе, отмечаются изменения в биотопе переднего отдела носа, характеризующиеся высокой микробной обсемененностью слизистой золотистыми стафилококками с высокими значениями факторов персистенции (антикарнозиновая активность и способность образовывать биопленки) по сравнению с лицами, проживающими в экологически благополучном исследуемом районе.

4. Экспериментально установлено, что под действием цииклоферона происходит снижение уровней антикарнозиновой активности и биопленкообразования S. aureus в результате внутрипопуляционной перестройки микробного сообщества, проявляющейся в значительном увеличении доли клонов с низкой выраженностью указанных свойств или их отсутствием. Максимальный эффект действия циклоферона проявлялся на седьмые сутки эксперимента.

5. Выявлены особенности санации циклофероном резидентных бактерионосителей, проживающих на территории с высоким уровнем загрязнения воздушной среды, заключающиеся в снижении уровня микробной колонизации слизистой носа S.aureus, уменьшении у них способности к инактивации карнозина, появлении симбионтов в составе микрофлоры носовых ходов.

Прогнозирование развития болезней органов дыхания у детей, проживающих на техногенно-загрязненных территориях / О.В. Бухарин, А.Ф. Зверев, О.Л. Карташова, С.Б. Киргизова // Гигиена и санитария. С. 76-78.

Потехина, Л.П. Санация стафилококковых бактерионосителей, проживающих на техногенно-загрязненных территориях / Л.П. Потехина, А.Ф.

Зверев // Медицинский альманах. - 2011: Материалы X научной сессии молодых ученых и студентов «Современное решение актуальных научных проблем в медицине». - №3. - С.170-171.

Зверев, А.Ф. Влияние уровня антропогенной нагрузки на детскую заболеваемость / А.Ф. Зверев, Л.П. Потехина // Тезисы докладов II международной научной конференции студентов, аспирантов и молодых ученых «Фундаментальные и прикладные исследования в биологии». – Донецк: Изд-во «Ноулидж», 2011. - С.139-140.

Потехина, Л.П. Санация стафилококковых бактерионосителей иммуномодулятором Циклоферон / Л.П. Потехина, Т. М. Уткина, А. Ф.

Зверев // Вестник Уральской академической науки. - 2011. - Т.2. - №2. - С.

55-56.

Зверев, А.Ф. Местный иммунитет при стафилококковом бактерионосительстве / А. Ф. Зверев, О.Л. Карташова // Вестник Уральской академической науки. - 2011. - Т.1. - №1. - С.138-139.

Потехина, Л.П. Способ санации бактерионосителей S. aureus / Л.П. Потехина, Т.М. Уткина, О.Л. Карташова, А.Ф. Зверев // Современные проблемы науки и образования [Электронный журнал]. - 2012. - № 5. URL:

www.science-education.ru/105-7303.

Способ санации стафилококковых бактерионосителей [Текст]: пат.

2441656 Российская Федерация, МПК А61К31/435, А61Р11/02. /Бухарин О.В., Карташова О.Л., Киргизова С.Б., Потехина Л.П., Зверев А.Ф.; заявитель и патентообладатель Институт клеточного и внутриклеточного симбиоза УрО РАН.

- №2010136255/15; заявл. 27.08.2010; опубл. 20.12.2010, Бюл. № 4 – 5 с.

ЗВЕРЕВ АЛЕКСАНДР ФЕДОРОВИЧ

ХАРАКТЕРИСТИКА STAPHYLOCOCCUS AUREUS,

ВЫДЕЛЕННЫХ ОТ БАКТЕРИОНОСИТЕЛЕЙ И РАЗРАБОТКА

СПОСОБА ИХ САНАЦИИ

диссертации на соискание ученой степени Оригинал макет подготовлен в программе Word for Windows Формат 60*84/16. Усл.-печ. л. 1,0. Печать оперативная.

Бумага офсетная. Гарнитура Times.



 


Похожие работы:

«МАНУХОВ Илья Владимирович СТРУКТУРА LUX-ОПЕРОНОВ И МЕХАНИЗМЫ РЕГУЛЯЦИИ ТИПА QUORUM SENSING У МОРСКИХ БАКТЕРИЙ. (03.02.07 – Генетика) Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук Москва – 2011 2 Работа выполнена в лаборатории генетики бактерий ФГУП Государственного научноисследовательского института генетики и селекции промышленных микроорганизмов (ФГУП ГосНИИгенетика) Научный консультант доктор биологических наук, профессор Завильгельский...»

«ФАН МИ ХАНЬ БИОТЕХНОЛОГИЯ БАКТЕРИАЛЬНОЙ ЦЕЛЛЮЛОЗЫ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ШТАММА - ПРОДУЦЕНТА GLUCONACETOBACTER HANSENII GH – 1/2008 Специальность 03.01.06 – Биотехнология (в том числе бионанотехнологии) Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Москва 2013 Работа выполнена на кафедре Химия пищи и пищевая биотехнология Института прикладной биотехнологии Федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего...»

«Новикова Любовь Александровна СТРУКТУРА И ДИНАМИКА ТРАВЯНОЙ РАСТИТЕЛЬНОСТИ ЛЕСОСТЕПНОЙ ЗОНЫ НА ЗАПАДНЫХ СКЛОНАХ ПРИВОЛЖСКОЙ ВОЗВЫШЕННОСТИ И ПУТИ ЕЕ ОПТИМИЗАЦИИ 03.02.01 – ботаника Автореферат диссертации на соискание учёной степени доктора биологических наук Саратов – 2011 2 Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования Пензенский государственный педагогический университет имени В.Г. Белинского...»

«Парыгин Виталий Викторович КАЧЕСТВО КЛЕЙКОВИНЫ В ЗЕРНЕ КАК АДАПТИВНЫЙ ПОКАЗАТЕЛЬ У ЭКОТИПОВ ПОПУЛЯЦИЙ Triticum vulgare L. В ПРЕДБАЙКАЛЬЕ 03.02.08 – экология Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Улан-Удэ – 2011 2 Работа выполнена на кафедре физиологии растений, микробиологии и агрохимии ФГОУ ВПО Иркутская государственная сельскохозяйственная академия Научный руководитель : Илли Иван Экидиусович доктор биологических наук, профессор...»

«Вьюнова Татьяна Владимировна ГЛИПРОЛИНЫ МЕЛАНОКОРТИНОВОГО РЯДА: ПРОЦЕССЫ БИОДЕГРАДАЦИИ И ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ С МЕМБРАНАМИ КЛЕТОК МОЗГА Специальность 03.00.23 - Биотехнология Автореферат диссертации на соискание учёной степени кандидата химических наук Москва-2008 2 Работа выполнена в Институте молекулярной генетики РАН Научный руководитель : академик РАН, доктор химических наук, профессор Мясоедов Николай Федорович Официальные оппоненты : член-корр. РАН, доктор химических наук,...»

«Герасимчук Анна Леонидовна СУЛЬФАТРЕДУЦИРУЮЩИЕ БАКТЕРИИ В ЭКОСИСТЕМАХ С ЭКСТРЕМАЛЬНЫМИ ЗНАЧЕНИЯМИ рН 03.00.07 – Микробиология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Москва - 2009 Работа выполнена в Томском государственном университете Научный руководитель : доктор биологических наук, профессор Карначук О. В. Официальные оппоненты : доктор биологических наук, зав. лабораторией Бонч-Осмоловская Е. А. доктор биологических наук, профессор...»

«Полякова Наталья Игоревна ОСОБЕННОСТИ НАКОПЛЕНИЯ 137CS У РЫБ РАЗНЫХ ТРОФИЧЕСКИХ УРОВНЕЙ ИЗ ВОДОЕМОВ, ЗАГРЯЗНЕННЫХ РАДИОНУКЛИДАМИ В РЕЗУЛЬТАТЕ АВАРИИ НА ЧЕРНОБЫЛЬСКОЙ АЭС Специальность 03.00.10 – ихтиология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук МОСКВА - 2008 Работа выполнена в Институте проблем экологии и эволюции им. А.Н. Северцова РАН. Научный руководитель : доктор биологических наук, профессор М. И. Шатуновский Институт проблем...»

«Федосова Светлана Игоревна ЭКОЛОГО-ТЕХНОЛОГИЧЕСКИЕ ОСНОВЫ ФОРМИРОВАНИЯ ВИЗУАЛЬНОЙ СРЕДЫ КРУПНОГО ГОРОДА Специальность: 03.00.16 - Экология 18.00.04 - Градостроительство, планировка сельских населенных пунктов АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата технических наук Москва 2008 2 Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования Брянская государственная инженернотехнологическая академия Научный...»

«ОСИПЕНКОВА Ольга Валерьевна РОЛЬ РЕТРОГРАДНЫХ ПЛАСТИДНЫХ СИГНАЛОВ В ЭКСПРЕССИИ ЯДЕРНЫХ ГЕНОВ СТРЕССОВЫХ БЕЛКОВ ELIP1 И ELIP2 У Arabidopsis thaliana 03.00.04 – биохимия Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Москва 2009 Работа выполнена в лаборатории биохимии хлоропластов Учреждения Российской академии наук Института биохимии им. А.Н. Баха РАН Научный руководитель : доктор биологических наук Н.П. ЮРИНА Официальные оппоненты : доктор...»

«Холодов Владимир Алексеевич АДСОРБЦИЯ И ТОКСИЧНОСТЬ ГЕРБИЦИДА АЦЕТОХЛОРА В ПОЧВАХ РАЗЛИЧНЫХ ТИПОВ 03.00.27-почвоведение 03.00.16-экология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук МОСКВА - 2003 4 Работа выполнена на кафедре Общего земледелия факультета Почвоведения Московского Государственного университета им. М.В. Ломоносова Научные руководители: кандидат биологических наук, доцент Г.Ф. Лебедева доктор химических наук И.В. Перминова...»

«ТИТОВА СВЕТЛАНА АНАТОЛЬЕВНА Влияние фитопатогенных микроорганизмов на энзиматическую активность растения-хозяина Glycine max (L.) Merr. и Glycine soja Sieb. et Zucc. 03.02.08 – экология (биология) Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Благовещенск – 2014 Работа выполнена в научно-исследовательской лаборатории Соя ФГБОУ ВПО Дальневосточный государственный аграрный университет Научный руководитель кандидат биологических наук, доцент...»

«БУРСКИЙ Олег Владиславович СТРУКТУРА НАСЕЛЕНИЯ И ДИНАМИКА ПОПУЛЯЦИЙ ВОРОБЬИНЫХ ПТИЦ ЦЕНТРАЛЬНОЙ СИБИРИ 03.00.16 – экология Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук Москва 2009 Работа выполнена в Институте проблем экологии и эволюции им. А.Н. Северцова РАН Научный консультант : доктор биологических наук, профессор Евгений Николаевич Панов Официальные оппоненты : доктор биологических наук Аркадий Борисович Савинецкий доктор биологических...»

«ЗУБАРЕВ Анатолий Николаевич Зооценозы малых рек Черноморского побережья Северо-Западного Кавказа в условиях антропогенного воздействия 03.00.16 – экология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Москва – 2009 2 Работа выполнена на биологическом факультете Кубанского государственного университета Научный руководитель : кандидат биологических наук Сергей Ильич Решетников Официальные оппоненты : доктор биологических наук, профессор Тамара...»

«Соколова Ирина Владимировна ФИЗИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА РЕКУЛЬТИВАЦИОННЫХ ПОЧВЕННЫХ КОНСТРУКЦИЙ С ДИФФЕРЕНЦИРОВАННЫМИ ПО ГРАНУЛОМЕТРИЧЕСКОМУ СОСТАВУ СЛОЯМИ 06.01.03 – агропочвоведение, агрофизика 03.00.27 – почвоведение АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук г. Москва 2009 г. Работа выполнена на кафедре физики и мелиорации почв факультета почвоведения Московского государственного университета имени М.В. Ломоносова. Научные руководители:...»

«ШЕВЦОВ Александр Станиславович АНТРОПОГЕННАЯ ЭЛИМИНАЦИЯ НАЗЕМНЫХ ПОЗВОНОЧНЫХ ЦЕНТРАЛЬНОГО ПРЕДКАВКАЗЬЯ 03.02.08 – экология (биологические наук и) Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Ростов-на-Дону – 2013 2 Работа выполнена на кафедре ботаники, зоологии и общей биологии ФГАОУ ВПО Северо-Кавказский федеральный университет Научный руководитель : доктор биологических наук, доцент Ильюх Михаил Павлович Официальные оппоненты : Бабенко...»

«ЖУРАВЛЁВА НАТАЛИЯ ИВАНОВНА ИСТОЧНИКИ И СТОКИ ТЯЖЕЛЫХ МЕТАЛЛОВ В АНТРОПОГЕННО ИЗМЕНЕННЫХ ЭКОСИСТЕМАХ (НА ПРИМЕРЕ ИВАНОВСКОЙ И КОСТРОМСКОЙ ОБЛАСТЕЙ) Специальность 03.02.08 – Экология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата химических наук Иваново 2013 Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования “Ивановский государственный химико-технологический университет” на кафедре...»

«Рогозин Михаил Владимирович ИЗМЕНЕНИЕ ПАРАМЕТРОВ ЦЕНОПОПУЛЯЦИЙ Pinus sylvestris L. И Picea fennica (Regel) Kom. В ОНТОГЕНЕЗЕ ПРИ ИСКУССТВЕННОМ И ЕСТЕСТВЕННОМ ОТБОРЕ Специальности 03.02.01 – ботаника; 03.02.08 – экология (биология) Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук Пермь – 2013 Работа выполнена в научно-исследовательской лаборатории Экологии леса Естественнонаучного института ФГБОУ ВПО Пермский государственный национальный...»

«ПАВЛОВА Кюнна Константиновна ГЕНЕТИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ ПРЕДРАСПОЛОЖЕННОСТИ К ГЕСТОЗУ В ЯКУТСКОЙ ПОПУЛЯЦИИ 03.02.07 – генетика 14.01.01 – акушерство и гинекология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Томск – 2011 Работа выполнена в Учреждении Российской академии медицинских наук Научно-исследовательском институте медицинской генетики Сибирского отделения РАМН и Учреждении Российской академии медицинских наук Якутском научном центре...»

«САРАТОВСКИХ Елена Анатольевна ПРОЦЕССЫ КОМПЛЕКСООБРАЗОВАНИЯ В МЕХАНИЗМЕ ТОКСИЧЕСКОГО ДЕЙСТВИЯ ЗАГРЯЗНЯЮЩИХ ВЕЩЕСТВ ТЕХНОГЕННОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ 03.00.02 – биофизика 03.00.16 – экология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учёной степени доктора биологических наук Москва – 2008 Работа выполнена в Институте проблем химической физики РАН и Московском государственном университете им. М.В. Ломоносова Научный консультант : доктор биологических наук, профессор О.Ф. Филенко Официальные...»

«Семенькова Елена Геннадьевна БИОЛОГИЯ И ПЕРСПЕКТИВЫ ПРОМЫСЛА ЯПОНСКОГО МОХНАТОРУКОГО КРАБА ERIOCHEIR JAPONICA В ВОДОЕМАХ ПРИМОРЬЯ 03.00.18 – гидробиология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Владивосток – 2007 2 Работа выполнена в лаборатории ресурсов промысловых беспозвоночных прибрежных вод и континентальных водоемов и в секторе экосистемных исследований биоресурсов прибрежных вод Федерального государственного унитарного...»







 
© 2013 www.diss.seluk.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Авторефераты, Диссертации, Монографии, Методички, учебные программы»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.