WWW.DISS.SELUK.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА
(Авторефераты, диссертации, методички, учебные программы, монографии)

 
Копировать

На правах рукописи

ДОБРОТВОРСКАЯ Ирина Сергеевна

ЗАЩИТНОЕ ДЕЙСТВИЕ ОТ ОКИСЛИТЕЛЬНЫХ ПОВРЕЖДЕНИЙ ГОЛОВНОГО

МОЗГА АНТИОКСИДАНТОВ И МОДУЛЯТОРОВ АКТИВНОСТИ ГЛУТАМАТНЫХ

РЕЦЕПТОРОВ

Специальность

03.00.04 – биохимия

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва – 2009

Работа выполнена в Учреждении Российской академии медицинских наук Научном центре неврологии РАМН

Научный руководитель:

Доктор биологических наук Федорова Татьяна Николаевна

Официальные оппоненты:

Доктор биологических наук, профессор Орлова Валентина Сергеевна Доктор биологических наук, профессор Коденцова Вера Митрофановна

Ведущая организация Институт высшей нервной деятельности и нейрофизиологии РАН

Защита диссертации состоится «20» ноября 2009 г в..... часов на заседании диссертационного совета Д 212.203.13 при Российском университете дружбы народов по адресу: 117198, г. Москва, ул. Миклухо-Маклая, д.

С диссертацией можно ознакомиться в Научной библиотеке Российского университета дружбы по адресу: 117198, г. Москва, ул. Миклухо-Маклая, д.6.

Автореферат диссертации разослан 2009 г.

«»

Ученый секретарь диссертационного совета № Д 212.203. доктор биологических наук, профессор Лукашева Е.В.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Окислительный стресс играет важную роль в патологии головного мозга и может развиваться как на фоне уже существующего заболевания, усугубляя тяжесть его протекания, так и выступать ключевым фактором в развитии патологического процесса.

К факторам, отягощающим степень развития окислительного стресса, относят гомоцистеин и продукты его аутоокисления, главным образом гомоцистеиновую кислоту.

Концентрация в кровяном русле общего уровня гомоцистеина резко возрастает при нарушениях мозгового кровообращения (Зорилова, 2006; Mauler et al., 2003), при развитии нейродегенеративных процессов, таких как болезнь Альцгеймера и болезнь Паркинсона (Seshadri et al., 2002; Mattson et al., 1999; Boldyrev and Johnson, 2007). Кроме того, в настоящее время повышенный уровень гомоцистеина расценивают как самостоятельный независимый фактор риска сердечнососудистых и нейродегенеративных заболеваний.



Являясь структурным аналогом глутамата, гомоцистеин так же, как и продукты его окисления, способен связываться с NMDA-рецепторами (Shi et al., 2003), чрезмерная активация которых приводит к запуску целого каскада реакций индукции нейрональной смерти.

Поэтому до сих пор остается актуальной проблема поиска нейропротекторов, способных корригировать окислительные нарушения в условиях действия отягощающих факторов (гипергомоцистеинемия). Перспективным направлением в нейропротекции является применение природных антиоксидантов, нетоксических синтетических антиоксидантов и модуляторов активности глутаматных и каннабиноидных рецепторов, вовлекающихся в регуляцию окислительного стресса в головном мозге (Nagayama et al., 2001).

В настоящей работе проведен сравнительный анализ протекторных свойств соединений: нейропептида карнозина (Болдырев, 1999), синтетического агониста каннабиноидных рецепторов Win 5521-2 (Ferraro et al., 2001; Kim et al., 2006), способного модулировать активность NMDA-рецепторы (Shen et al., 1996), дипептида Nацетиласпартилглутамата (NAAG), широко представленного в ЦНС млекопитающих и являющегося агонистом метаботропных глутаматных рецепторов mGluR2/3, активация которых в экспериментальных моделях ишемии головного мозга давала выраженный нейропротекторный эффект (Cai, 2002), синтетического антиоксиданта мексидола, являющегося структурным аналогом соединений группы витамина В6 и показавшего свою эффективность при коррекции окислительных нарушений при гипоксии/ишемии головного мозга (Дюмаев и соавт., 1995; Федорова и соавт., 1999; Поварова и соавт., 2004).

В настоящем исследовании были разработаны экспериментальные модели окислительного повреждения головного мозга крыс, окислительный стресс в которых вызывался комбинацией ряда повреждающих факторов. Такие экспериментальные модели, по нашему мнению, наиболее приближены к реальным условиям окислительного стресса, развивающегося у пациентов с нейродегенеративными заболеваниями.

В экспериментальных и клинико-биохимических исследованиях показана вовлеченность окислительного стресса в патогенез болезни Паркинсона (БП) (Schapira, 1997;

Koziorowski et al., 1999; Gatto et al., 2002). Однако в литературе данные об эффективности антиоксидантной терапии при БП представлены противоречиво. Поэтому оценка эффективности применения антиоксидантов в комплексном лечении пациентов с БП является важной научно-практической задачей.

Целью исследования явилась характеристика окислительных повреждений головного мозга на экспериментальных моделях окислительного стресса в условиях гипергомоцистеинемии и анализ защитного действия потенциальных нейропротекторов в экспериментальных и клинико-биохимических исследованиях.

В соответствии с целью были сформулированы следующие задачи:





1. характеристика окислительных повреждений головного мозга крыс на модели пренатальной гипоксии и оценка протекторного действия карнозина, мексидола и агониста mGluR2/3 NAAG;

2. характеристика модели окислительного стресса головного мозга крыс, индуцированного 3-сосудистой ишемией, отягощенной гомоцистеиновой кислотой;

3. оценка протекторного действия карнозина и агониста каннабиноидных рецепторов Win 5521-2 на модели 3-сосудистой ишемии головного мозга на фоне введения гомоцистеиновой кислоты;

4. исследование влияния антиоксидантов карнозина и мексидола на окислительные повреждения липопротеинов крови и эффективность лечения пациентов с болезнью Научная новизна. В работе описана новая экспериментальная модель 3-сосудистой ишемии головного мозга, отягощенной повышенным уровнем гомоцистеина в крови.

На модели пренатальной гипоксии проведено сопоставление эффективности антиоксидантов карнозина и мексидола, и показана их способность восстанавливать антиоксидантную защиту головного мозга.

Впервые показано протекторное действие карнозина на модели 3-сосудистой ишемии головного мозга в условиях повышенного уровня гомоцистеина в крови экспериментальных животных.

Впервые проведено исследование клинической эффективности действия карнозина и мексидола в комплексной терапии БП. Показано, что введение карнозина и мексидола в схему лечения пациентов с болезнью Паркинсона усиливает эффективность базисной лекарственной терапии на фоне улучшения антиоксидантного статуса организма.

Научно-практическая значимость. Представленные данные о защитном действии карнозина и мексидола на физиологическое состояние животных и развитие окислительного стресса в условиях пренатальной гипоксии и глобальной ишемии головного мозга, отягощенной введением гомоцистеиновой кислоты, позволяют рекомендовать использование этих антиоксидантов в комплексной терапии заболеваний ЦНС, сопровождающихся развитием окислительного стресса.

Результаты проведенного клинико-биохимического исследования указывают, что включение карнозина и мексидола в схемы лечения пациентов с болезнью Паркинсона существенно усиливает эффективность базисной терапии, что сопровождается улучшением общей двигательной активности и снижением частоты выявляемых побочных эффектов базисного лечения.

Основные положения, выносимые на защиту. Карнозин и мексидол способны корригировать окислительные нарушения головного мозга животных, перенесших пренатальную гипоксию. Защитное действие агониста метаботропных глутаматных рецепторов 2 класса NAAG в данных условиях менее выражено.

Гомоцистеиновая кислота является важным фактором, усугубляющим развитие окислительного стресса при ишемии головного мозга экспериментальных животных.

Карнозин в этих условиях проявляет нейропротекторное действие, корригируя окислительные нарушения ткани мозга на фоне повышенного уровня гомоцистеина в крови.

Агонист каннабиноидных рецепторов Win 5521-2 проявляет нейропротекторное действие только при нормальном уровне гомоцистеина в крови.

Введение карнозина в схему лечения пациентов БП усиливает эффективность традиционной лекарственной терапии и нормализует двигательные нарушения на фоне активации эндогенной антиоксидантной системы защиты. Мексидол в этих условиях также усиливает эффект базисной терапии и снижает степень выраженности побочных эффектов традиционной лекарственной терапии.

Апробация работы. Материалы диссертации были представлены на конференции «Актуальные проблемы экологии и природопользования» (экологический факультет РУДН) в 2006 г., на Международном конгрессе «Molecular basis of neurological and psychiatric disorders» (Мартин, Словакия, 2006), на XVII Международном конгрессе «Parkinsonism and related disorders» (Амстердам, Нидерланды, 2007), на III Евроазиатской конференции «Hazardous waste and human health» (Стамбул, Турция, 2008), на конференции «Нейрохимические механизмы формирования адаптивных и патологических состояний мозга» (Санкт-Петербург, Россия, 2008).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 9 печатных работ, в том числе статьи в журналах, входящих в список ВАК РФ.

Структура и объем диссертации. Диссертация представлена на 106 страницах машинописного текста, содержит 10 таблиц и 12 иллюстраций. Работа состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, раздела, посвященного результатам собственных исследований и их обсуждения, заключения, выводов и списка литературы, состоящего из 46 отечественных и 139 зарубежных источников.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Экспериментальные и клинико-биохимические исследования Модель пренатальной гипоксии. В эксперименте было использовано потомство, полученное от 10 крыс-самок линии Вистар, содержавшихся в стандартных условиях вивария. Острую гипоксическую гипоксию моделировали на 10-11 день беременности крыс в барокамере проточного типа, понижая давление до 169 мм рт. ст. Сразу после гипоксической атаки беременных крыс случайным образом разделили на несколько групп. Животные одной группы получали карнозин (100 мг/кг массы тела), животные другой – мексидол (100 мг/кг массы тела). Карнозин и мексидол животные обеих групп получали с питьевой водой ежедневно в течение оставшегося периода беременности (11-13 дней) и последующих дней жизни потомства. Животным третьей группы интраперитонеально вводили NAAG (2 мг/кг массы тела) дважды (через 1 и 3 часа после перенесенной гипоксической атаки). После достижения 12-дневного возраста часть животных использовали для оценки биохимических параметров. У оставшихся животных в возрасте 22 дней оценивали двигательную активность в тесте «открытое поле». В возрасте 30 дней у животных проверяли способность к обучаемости в Т-образном лабиринте.

Модель 3-сосудистой ишемии головного мозга, отягощенной гомоцистеиновой кислотой. Нами разработана новая модель окислительного стресса, вызванного 3сосудистой ишемией головного мозга и развивающегося на фоне гипергомоцистеинемии. В эксперименте были использованы самцы крыс линии Вистар массой 250-300 г.

Гипергомоцистеинемию создавали путем интраперитонеального введения животным гомоцистеиновой кислоты (ГЦК) в дозе 350 мг/кг массы тела ежедневно в течение 6 дней до ишемии и в последующие 3 дня после ишемии. Моделирование 3-сосудистой ишемии головного мозга проводили в два этапа с последующей 5-дневной реперфузией (Pulsinelli, Brierley, 1979). В первый день животным пережигали левую позвоночную артерию, а на следующий день создавали 15-мин окклюзию обеих сонных артерий. Одной группе животных (n=10) вводили карнозин (100 мг/кг массы тела) интраперитонеально по следующей схеме: за 1ч и за 15 мин до ишемии, через 6 и 24 ч после ишемии. Другой группе животных (n=10) вводили Win 5521-2 (1 мг/кг массы тела) интраперитонеально за 1час до ишемии, через 6 и 24 ч после ишемии. Контролем служили ложнооперированные животные (n=10), которые в соответствии с протоколом эксперимента получали физиологический раствор. За 1 сутки до ишемии и через 3 суток после ишемии животных тестировали в водном лабиринте Морриса (Махро и соавт., 2008). После декапитации животных ткани мозга использовали для проведения биохимических исследований. Экспериментальные исследования этого раздела частично выполнены в рамках гранта Вышеградского фонда на кафедре медицинской биохимии университета им. Я. Комениуса (Мартин, Словакия).

Применение карнозина и мексидола в комплексной терапии болезни Паркинсона (БП). В работе представлены результаты клинико-биохимического обследования пациентов с БП (n=69). Была проведена биохимическая оценка эффективности применения антиоксидантов карнозина и мексидола в комплексной терапии пациентов с БП. Постановку диагноза, анализ клинической картины заболевания и лечение пациентов проводили сотрудники отделения нейродегенеративных и наследственных заболеваний нервной системы НЦН РАМН (заведующий – д.м.н., профессор Иванова-Смоленская И.А.). Все пациенты с БП получали базисную терапию, включавшую леводопа-содержащие препараты и агонисты дофаминовых рецепторов, дозы которых подбирались индивидуально в зависимости от состояния пациентов и тяжести клинической симптоматики.

В группу пациентов, получавших базисную терапию, входило 38 человека; в группу пациентов, получавших дополнительно к базисной терапии карнозин, – 20 человек (женщины и мужчины). Возраст пациентов обеих групп составил от 46 до 68 лет. В группу пациентов, получавших дополнительно к базисной терапии мексидол, входило 27 человек (женщины и мужчины) в возрасте от 58 до 65 лет. Общая продолжительность лечения составила 30 дней для группы, получавшей карнозин, и 20 дней для группы, получавшей мексидол. Обследование больных проводилось до начала лечения (1-й визит) и через 20 или 30 дней (2-й визит) после начала терапии – либо только базисной, либо базисной в сочетании с карнозином или мексидолом.

В качестве источника карнозина использовали таблетированную биологически активную пищевую добавку «Севитин» (Медтехника, Россия). Каждая таблетка, содержащая 0,25 г карнозина, была покрыта кислотоустойчивой оболочкой. Суммарная суточная доза карнозина в составе «Севитина» составляла 1,5 г (прием по 2 таблетки 3 раза в день).

В качестве мексидола использовали коммерческий препарат мексидант структурный аналог антиоксиданта мексидола, который пациенты получали по следующей схеме: с 1-го по 10-й день внутривенно капельно (200 мг в сутки); в течение последующих 10 дней – внутримышечно 2 раза в сутки по 2 мл утром и вечером (200 мг в сутки). Препарат изготовлен на Экспериментальном производстве медико-биологических препаратов Российского кардиологического научно-производственного комплекса Минздравсоцразвития России.

Активность супероксиддисмутазы в митохондриальной фракции мозга крыс (MnСОД) и в эритроцитах человека (Cu/Zn-СОД) определяли по подавлению скорости восстановления нитросинего тетразолия при генерации супероксидного анион-радикала в процессе окисления ксантина ксантиноксидазой на спектрофотометре при длине волны нм (Mishra and Fridovich, 1972). Содержание белка определяли в пробах по методу Лоури (Lowry et al., 1951). Определение концентрации гемоглобина в крови человека проводили гемоглобин-цианидным методом (набор ДИАГЕМ-Т).

Хемилюминесценцию (ХЛ) липопротеинов сыворотки крови человека или гомогената мозга животных, индуцированную ионами двухвалентного железа (Vladimirov, 1996; Федорова и соавт., 1999) измеряли на хемилюминометре 1251, LKB (Швеция). В работе регистрировали следующие параметры ХЛ: быструю вспышку, интенсивность которой характеризует уровень липидных гидроперекисей; лаг-период, длительность которого определяет окислительную резистентность изучаемого биологического образца; скорость окисления (тангенс угла наклона кривой).

иммунофлуоресцентным методом с помощью набора реактивов фирмы AxisTM (Axis-Shield, Великобритания).

Статистическую обработку данных проводили, используя программу «Statistica 5.0».

Достоверность получаемых различий оценивали по непараметрическим критериям Вилкоксона, Крускала-Уоллиса и Данна. Достоверными считали различия при р0.05.

Результаты экспериментов представлены в виде среднеарифметического и стандартного отклонения (M±SD).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

В экспериментальных исследованиях дана характеристика окислительного стресса, развивающегося в условиях нарушенного кровообращения головного мозга у лабораторных животных (пренатальная гипоксия, глобальная ишемия головного мозга), а также при отягощении этих патологических состояний гипергомоцистеинемией – фактором, усиливающим развитие окислительного стресса. В результате этих исследований были получены данные, позволившие предложить возможные пути нейропротекции за счет сохранения и восстановления эндогенной антиоксидантной системы организма.

1. Биохимическая характеристика окислительного стресса на экспериментальных 1.1. Оценка окислительного стресса в мозге крыс в условиях нейрохимических и физиологических нарушений, обусловленных пренатальной гипоксией На экспериментальной модели пренатальной гипоксии у крыс 12-дневного возраста в качестве маркеров окислительного стресса была определена активность митохондриальной Mn-СОД и дана характеристика параметров Fe -индуцированного окисления тканевых гомогенатов мозга.

Пренатальная гипоксия, перенесенная на 10-11 день беременности, достоверно снижает количество крысят в помете. Родившиеся животные медленнее набирали вес в процессе развития – в течение первых 12 дней отставание по массе относительно контрольных животных составляло 30%. На кожных покровах животных, перенесших пренатальную гипоксию, в области шеи, задних конечностей и вдоль позвоночника выявлялись синюшные пятна. По данным физиологических тестов такие животные даже в возрасте 30 дней, когда они догоняют в весе животных контрольной группы, отличаются пониженной исследовательской и повышенной двигательной активностью в тесте «открытое поле».

В Т-образном лабиринте после первых 10 дней обучения различий между группами не наблюдалось. Однако после 3-дневного перерыва в обучении на 13 день число успешных попыток в группе животных, перенесших пренатальную гипоксию, резко сокращалось (Рис. 1). Однако после перерыва в 20 дней на 35 день тестирования гипоксические животные по количеству успешных попыток приближались к группе контроля. Полученные результаты позволяют сделать вывод о том, что у животных, подвергшихся пренатальной гипоксии, в первый месяц жизни существенно нарушены процессы долговременной памяти.

Рис. 1. Обучение животных в Т-образном лабиринте. Темный столбик – контроль, светлый столбик – животные, перенесшие пренатальную гипоксию (знак «*» соответствует достоверному отличию от группы контроля, р0,05).

Тканевые гомогенаты мозга животных исследуемых групп существенно различались по устойчивости к Fe2+-индуцированному окислению. Из Таблицы 1 видно, что у животных, перенесших пренатальную гипоксию, уровень предобразованных гидроперекисей был увеличен на 50%, а резистентность ткани мозга к окислению – снижена на 25%. Эти изменения сопровождались повышением скорости окисления тканевого гомогената мозга.

Несмотря на то, что регистрируемые параметры Fe2+-индуцированной хемилюминесценции подтвердили развитие окислительного стресса в мозге животных, перенесших пренатальную гипоксию, достоверных изменений активности Mn-СОД выявлено не было. В мозге как контрольных, так и животных, перенесших пренатальную гипоксию, активность СОД составляла 3,9 – 4,2 ед/мг белка. Вероятно, что в данных экспериментальных условиях изменения активности СОД после гипоксической атаки, если и происходили, носили срочный характер и были нивелированы последующим периодом адаптации.

Таблица 1. Характеристика Fe2+-индуцированной хемилюминесценции тканевого гомогената мозга исследуемых групп животных (данные представлены в виде М±SD, знак «*» соответствует достоверному отличию от группы контроля, р0,05) Таким образом, в мозге животных, перенесших пренатальную гипоксию, происходит повышение уровня липидных гидроперекисей и снижение эффективности эндогенной антиоксидантной системы защиты, что свидетельствует о развитии окислительного стресса. Полученные результаты позволяют рассматривать описанную модель пренатальной гипоксии как удобный экспериментальный подход для оценки защитного действия на мозг антиоксидантов, предотвращающих развитие окислительного стресса за счет усиления антиоксидантной системы защиты.

1.2. Экспериментальная 3-сосудистая ишемия головного мозга крыс, отягощенная гомоцистеиновой кислотой Для исследования окислительного стресса в условиях, приближенных к реальным патологическим состояниям ЦНС, сопровождающимся развитием окислительного стресса, в нашей лаборатории была разработана экспериментальная модель окислительного стресса, при которой ишемическое повреждение мозга протекает на фоне выраженной гипергомоцистеинемии.

Ишемическое повреждение мозга крыс приводило к существенному снижению активности Mn-СОД в митохондриальной фракции мозга (Рис. 2), к понижению резистентности ткани мозга к Fe2+-индуцированному окислению (Таблица 2), а также к выраженным нарушениям памяти, при которых время поиска платформы животными в тесте Морриса возрастало на 80% (Таблица 3).

Рис. 2. Активность Mn-СОД в митохондриальной фракции головного мозга экспериментальных животных. Данные представлены в процентном соотношении к группе контроля. 1 ложнооперированные животные (контроль, n=10), 2 - животные, получавшие ГЦК (n=10), 3 животные, перенесшие ишемию (n=10), 4 - животные, перенесшие ишемию и получавшие ГЦК (n=10). Знак «*» соответствует достоверному отличию данных от группы контроля, р0, Систематическое введение ГЦК интактным животным приводило к повышению уровня общего гомоцистеина в крови до 130% от контроля (Рис. 3), вызывало понижение активности Mn-СОД (Рис. 2), увеличение в мозге уровня предобразованных гидроперекисей на 21% и снижение резистентности ткани мозга к Fe2+-индуцированному окислению. Введение ГЦК вызывало снижение способности животных к обучению и запоминанию, сопоставимое с животными, перенесшими ишемическое повреждение мозга.

Рис. 3. Содержание общего гомоцистеина в плазме крови экспериментальных животных, мкмоль/л. Данные представлены в виде М±SD. 1 – ложнооперированные животные (контроль); 2 животные, получавшие ГЦК; 3 - животные, перенесшие ишемию, 4 - животные, перенесшие ишемию и получавшие ГЦК. Знак «*» соответствует достоверному отличию от группы контроля, р0,05) Введение ГЦК животным, перенесшим ишемию головного мозга, не вызывало дополнительного снижения активности Mn-СОД в митохондриях мозга (Рис. 2), дополнительного роста уровня предобразованных гидроперекисей или уменьшения резистентности к Fe2+-индуцированному окислению (Таблица 2). Вместе с тем для животных, перенесших ишемию на фоне повышенного уровня гомоцистеина, было характерно более выраженное снижение способности к обучению и запоминанию – время поиска платформы увеличилось и составляло по отношению к группе «ишемия» 120% (Рис. 4). Это обстоятельство позволяет заключить, что гипергомоцистеинемия является фактором, отягощающим развитие повреждений мозга, коррелирующих с нарушением когнитивных функций мозга.

Таблица 2. Параметры Fe2+-индуцированной хемилюминесценции в исследованных экспериментальных группах (данные представлены в виде М±SD, знак «*» соответствует достоверному отличию величины от контроля, р0,05) Экспериментальные Ложнооперированные животные (контроль) (n=10) Животные, получавшие ГЦК (n=10) Животные, перенесшие ишемию (n=10) Животные, перенесшие ишемию и получавшие ГЦК (n=9) Во всех исследуемых группах животных не наблюдалось смертности, и не была выявлена неврологическая симптоматика.

Рис. 4. Время поиска платформы в тесте Морриса животными различных экспериментальных групп (данные представлены в виде М±SD). 1 - ложнооперированные животные (контроль); 2 животные, получавшие ГЦК; 3 - животные, перенесшие ишемию; 4 - животные, перенесшие ишемию и получавшие ГЦК; (* - достоверное отличие от группы контроля, р0,05) Таким образом, результаты экспериментальных исследований позволяют заключить, что развитие окислительных повреждений головного мозга у животных, перенесших пренатальную гипоксию и 3-сосудистую ишемию головного мозга имеет сходные закономерности. В обоих случаях наблюдается значительное снижение резистентности ткани мозга к окислению и накопление липидных гидроперекисей, более выраженное у животных с гипергомоцистеинемией (на фоне ишемии или без нее).

2. Оценка защитного действия карнозина, мексидола и NAAG на крыс, перенесших На основании проведенных экспериментов, был сделан вывод, что пренатальная гипоксия является удобной моделью для количественной оценки окислительного стресса и защитного действия потенциальных протекторов мозга. Данная модель была использована для сравнительной оценки коррекции окислительных повреждений мозга животных, перенесших пренатальную гипоксию, с помощью перспективных, с нашей точки зрения, соединений: природного антиоксиданта карнозина; синтетического антиоксиданта мексидола и агониста метаботропных глутаматных рецепторов mGluR2/ N-ацетиласпартилглутамата.

гомогенатов мозга животных всех экспериментальных групп выявил существенные различия. Из Таблицы 3 видно, что у животных, перенесших пренатальную гипоксию, уровень предобразованных гидроперекисей был увеличен в 2 раза по отношению к контролю. Карнозин или мексидол предотвращали повышение этого параметра: уровень предобразованных гидроперекисей в мозге животных, получавших антиоксиданты, практически не отличался от контроля. В группе животных, получавших NAAG, уровень предобразованных гидроперекисей был на 74% ниже, чем в группе «пренатальная гипоксия», однако оставался существенно более высоким, чем в контрольной группе.

Резистентность к перекисному окислению, отражающая состояние общей эндогенной антиоксидантной активности, в группе животных, перенесших пренатальную гипоксию, была ниже на 75% по отношению к контрольным животным. В группах животных, получавших карнозин и мексидол, резистентность к перекисному окислению сохранялась на уровне контрольных значений. В группе животных, получавших NAAG, резистентность к окислению была выше, чем в группе «пренатальная гипоксия» на 120%, хотя и оставалась ниже контрольного уровня.

Таблица 3. Характеристика Fe2+-индуцированной хемилюминесценции тканевых гомогенатов мозга исследуемых групп животных. Данные представлены в виде М±SD, знак «*» соответствует достоверному отличию величин от контроля, р0,05, знак «**» - достоверному отличию от данных группы «гипоксия», р0,05.

3. Пренатальная гипоксия +карнозин 115±37** 100±14** 4,7±0,3** (n=7) (n=6) (n=6) Повышенная на 73% скорость окисления тканевых гомогенатов мозга животных, перенесших пренатальную гипоксию, снижалась под действием карнозина, мексидола и NAAG до уровня контрольных значений.

Достоверных изменений активности Mn-СОД в группах животных, получавших карнозин, мексидол или NAAG не наблюдалось.

Таким образом, протекторный эффект карнозина, мексидола и NAAG проявлялся в снижении уровня продуктов перекисного окисления липидов и скорости окисления тканевых гомогенатов мозга, в повышении резистентности к Fe2+-индуцированному окислению.

Интересно отметить, что NAAG, не обладающий прямым антиоксидантным действием, но способный защищать нейроны от экзайтотоксического действия глутамата (Cai et al., 2002), препятствовал повышению уровня липидных гидроперекисей, но не оказывал достоверного влияния на состояние эндогенной антиоксидантной защиты.

Полученные данные свидетельствуют о том, что антиоксидантная терапия, проведенная непосредственно после гипоксической атаки, перенесенной в период внутриутробного развития, способна защитить мозг формирующегося организма от окислительных повреждений. При этом используемые соединения проявляли разную эффективность – в выбранных нами экспериментальных моделях окислительного стресса карнозин и мексидол проявляли более выраженное антиоксидантное действие, чем NAAG.

3. Оценка защитного действия карнозина и агониста каннабиноидных рецепторов Win 5521-2 на модели 3-сосудистой ишемии головного мозга, отягощенной Разработанную в нашей лаборатории модель окислительного стресса, вызванного гипергомоцистеинемии, мы использовали для оценки способности корригировать окислительные повреждения головного мозга и восстанавливать когнитивные функции животных с помощью природного нейропептида карнозина и синтетического агониста каннабиноидных рецепторов Win 5521-2, который по литературным данным также может способствовать ослаблению окислительного стресса в мозге (Kim et al. 2005, ParmentierBatteur et al., 2002).

Уровень общего гомоцистеина в крови животных, перенесших ишемию головного мозга на фоне введения ГЦК, был достоверно выше по отношению к группе контроля (10,5±0,2 мкмоль/л и 7,4±0,6 мкмоль/л соответственно). Введение карнозина и Win 5521- не приводило к снижению повышенного уровня гомоцистеина в крови.

Таблица 4. Параметры Fe2+-индуцированой хемилюминесценции в исследованных экспериментальных группах (данные представлены в виде М±SD, знак «*» отмечает достоверное отличие от контроля, р0,05; «#» - достоверное отличие от группы «ишемия+ГЦК», р0,05) Экспериментальные группы Ложнооперированные животные (контроль) (n=10) Животные, получавшие ГЦК (n=10) Животные, перенесшие ишемию и получавшие ГЦК и карнозин (n=9) Животные, перенесшие ишемию и получавшие ГЦК и Win 5521- (n=9) В группе животных, перенесших ишемию на фоне введения ГЦК и получавших карнозин, резистентность тканевых гомогенатов мозга к Fe2+-индуцированному окислению была выше на 35% относительно группы животных, перенесших ишемию и получавших ГЦК, и не отличалась от контрольных значений (Таблица 4). Введение Win 5521-2 также приводило к увеличению резистентности ткани мозга к Fe2+индуцированному окислению на 20% по сравнению с группой животных, перенесших ишемию и получавших ГЦК. Так Win 5521-2 увеличивал резистентность ткани мозга к окислению, восстанавливая ее до уровня контроля. Введение карнозина приводило к достоверному снижению уровня накопленных гидроперекисей. Таким образом, карнозин препятствовал развитию окислительного стресса в мозге животных, а Win 5521- способствовал только активации эндогенной антиоксидантной системы защиты.

Активность Mn-СОД в группе животных, перенесших ишемическую атаку на фоне повышенного содержания гомоцистеина, достоверно понижалась по отношению к контролю на 40%. У животных, получавших карнозин, активность фермента возвращалась к контрольному уровню и даже немного превышала его (64±5 ед/мг белка при уровне контроля 57±4 ед/мг белка). Оценить влияние Win 5521-2 на активность Mn-СОД в условиях данного эксперимента вследствие лимитированного количества биологического материала было невозможно.

Рис. 5. Время поиска платформы в тесте Морриса животными различных экспериментальных групп (данные представлены в виде М±SD). 1 - ложнооперированные животные (контроль); 2 животные, перенесшие ишемию, 3 - животные, перенесшие ишемию и получавшие ГЦК; 4 животные, перенесшие ишемию и получавшие ГЦК и карнозин; 5 - животные, перенесшие ишемию и получавшие ГЦК и Win 5521-2 (* - достоверное отличие от группы контроля, р0,05, ** - достоверное отличие от группы ишемия+ГЦК, р0,05) Карнозин оказывал положительное влияние и на способность животных к обучению – время достижения платформы у животных, получавших карнозин на фоне ишемии и гипергомоцистеинемии, снижалось более чем вдвое и не отличалось от контроля (Рис. 5).

Win 5521-2 не оказывал влияния на время достижения платформы.

Таким образом, карнозин препятствовал развитию окислительного стресса, индуцированного ишемией головного мозга в условиях гипергомоцистеинемии, путем восстановления антиоксидантной системы защиты мозга, а также сберегал когнитивные функции мозга животных.

Win 5521-2 не оказывал положительного влияния на когнитивные функции мозга животных, что, возможно, было связано с повышенным уровнем гомоцистеина в крови.

Положительное действие Win 5521-2 как эффективного нейропротектора описано в литературе в условиях нормального уровня гомоцистеина (Martinez-Orgado et al., 2003;

Nagayama et al., 1999).

В специальной серии экспериментов мы оценили влияние Win 5521-2 на обучаемость животных, перенесших ишемию в условиях нормального уровня гомоцистеина в крови. Животные получали интраперитонеально ГЦК в дозе (180 мг/кг в течение 5 дней), не вызывающей повышение содержания общего уровня гомоцистеина в крови.

На Рис. 6 видно, что у животных, перенесших ишемию в условиях нормального уровня гомоцистеина в крови, время поиска платформы было значительно выше аналогичного параметра контрольных животных. Win 5521-2, как и карнозин способствовал более быстрому нахождению животными платформы в этих условиях.

Таким образом, можно заключить, что нейропротекторный эффект карнозина реализуется независимо от повышенного уровня гомоцистеина в крови, тогда как Win 5521-2 оказывает протекторный эффект только при нормальном уровне гомоцистеина в крови. Важным обстоятельством является и то, что защитный эффект карнозина проявляется не в устранении гипергомоцистеинемии, а в защите мозга от токсического действия гомоцистеина.

Рис. 6. Время поиска платформы в тесте Морриса животными различных экспериментальных групп (данные представлены в виде М±SD). 1 - ложнооперированные животные (контроль); 2 животные, перенесшие ишемию, 3 - животные, перенесшие ишемию и получавшие ГЦК; 4 животные, перенесшие ишемию и получавшие ГЦК и карнозин; 5 - животные, перенесшие ишемию и получавшие ГЦК и Win5521-2 (* - достоверное отличие от группы контроля, р0,05, # - достоверное отличие от группы ишемия+ГЦК, р0,05) Подводя итог экспериментальных исследований на моделях in vivo, можно заключить, что природный антиоксидант карнозин и синтетический антиоксидант биогенного типа мексидол в равной степени оказывают протекторное действие на мозг путем предотвращения окислительных повреждений, развивающихся на фоне окислительного стресса. Это обстоятельство дает основание рассматривать возможность применения антиоксидантов карнозина и мексидола в качестве протекторов окислительного стресса при лечении нейродегенеративных заболеваний.

4. Влияние антиоксидантной терапии на эффективность лечения болезни Хронический окислительный стресс, развивающийся при болезни Паркинсона, расценивается как один из основных патологических факторов, приводящих к прогрессирующей и необратимой гибели дофаминергических нейронов в черной субстанции среднего мозга. Основная лекарственная терапия при БП – заместительная, которая заключается в назначении препаратов леводопы – биологического предшественника дофамина. Однако как сам леводопа, так и его метаболиты при длительном применении могут усиливать состояние окислительного стресса (Muller et al., 2004), протекающего на фоне выраженной гипергомоцистеинемии (Muller and Kuhn, 2009;

Rodriguez-Oroz et al., 2009).

В связи с этим особый интерес представляет изучение целесообразности включения в схему лечения пациентов с БП препаратов, обладающих антиоксидантным и нейропротекторным действием. Мы оценили действие карнозина и мексидола на состояние эндогенного антиоксидантного статуса (активность эритроцитарной Cu/ZnСОД, параметры Fe2+-индуцированной хемилюминесценции липопротеинов плазмы крови) и проявление неврологической симптоматики у пациентов с БП.

4.1 Характеристика параметров окислительного стресса у пациентов с БП Исследование окисляемости липопротеинов плазмы крови пациентов с БП выявило определенные закономерности. Уровень липидных гидроперекисей в липопротеинах плазмы крови пациентов с БП достоверно не отличался от аналогичного параметра, измеренного у здоровых доноров. Было выявлено достоверное снижение резистентности к индуцированному окислению у пациентов с БП, что отражает угнетенное состояние эндогенной антиоксидантной системы. Скорость окисления липопротеинов в группе пациентов с БП также была достоверно выше по отношению к скорости окисления липопротеинов здоровых доноров.

У пациентов с БП было выявлено небольшое, хотя и достоверное (p0,05) уменьшение активности Cu/Zn-СОД по сравнению со здоровыми донорами: у пациентов с БП активность СОД составляла 2,94±0,01 ед/мг гемоглобина, тогда как у здоровых доноров активность СОД была 3,21±0,04 ед/мг гемоглобина.

4.2. Влияние карнозина на параметры окислительного стресса и неврологическую симптоматику при БП Пациенты с БП были разделены на 2 группы методом случайной выборки, сопоставимые по возрасту, длительности и тяжести заболевания. Динамика клинических показателей оценивали по стандартной международной унифицированной рейтинговой шкале оценки тяжести паркинсонизма, UPDRS. На начало исследования неврологическая симптоматика составляла 40,8±14,6 баллов у пациентов с базисной терапией и 37,3±15, баллов у пациентов, получавших дополнительно к базисной терапии карнозин.

Через 30 дней лечения в обеих группах было отмечено достоверное уменьшение степени выраженности неврологической симптоматики (Таблица 5). При этом наибольшее улучшение суммарного балла наблюдалось в группе пациентов, получавших карнозин.

Различие между группами больных было статистически значимо (р=0,02). В группе пациентов, получавших дополнительно к базисной терапии карнозин, было отмечено значительное улучшение общей двигательной активности.

Таблица 5. Динамика неврологического статуса пациентов с БП на фоне лечения (по шкале UPDRS) Лечение Базисная терапия + карнозин 37,3±15, * - различия значимы по отношению к группе пациентов, не получавших карнозин Активность Cu/Zn-СОД в эритроцитах пациентов с БП, получавших только базисную терапию, через 30 дней после начала исследования статистически незначимо понижалась. Введение в схему лечения карнозина приводило к достоверному увеличению активности Cu/Zn-СОД относительно величин, измеренных до начала курса лечения (Таблица 6).

Уровень окисленных гидроперекисей в группах пациентов, получавших на фоне базисной терапии карнозин, достоверно не изменялся, равно как и в группе больных, получавших только базисную терапию (Таблица 6). Базисная терапия не оказывала существенного влияния на резистеность липопротеинов крови к индуцированному окислению. В то же время, введение в протокол лечения карнозина значительно увеличивало резистентность липопротеинов плазмы крови пациентов к окислению (Таблица 6).

Таблица 6. Влияние проводимого лечения на активность Cu/Zn-СОД и на параметры Fe2+индуцированной хемилюминесценции липопротеинов плазмы крови пациентов с БП * - достоверность различий по сравнению с нормой, **- достоверность различий до и после лечения Клиническая норма Скорость окислительного повреждения липопротеинов крови пациентов, получавших карнозин, достоверно снижалась и приближалась к контрольным значениям.

Способность карнозина не только восстанавливать резистентность липопротеинов крови к окислительным повреждениям и снижать неврологическую симптоматику, но и сберегать активность СОД является важным фактором, обеспечивающим более полноценное лечение. Все это демонстрирует, что действие карнозина in vivo не ограничено защитой СОД, а может распространяться и на другие системы антиоксидантной защиты организма, увеличивая его устойчивость к окислительному стрессу.

Таким образом, результаты проведенного исследования свидетельствуют о клинической эффективности карнозина, применяемого в сочетании с базисной терапией у пациентов с БП. Улучшение клинической симптоматики выявляется на фоне значительного улучшения антиоксидантного статуса организма. На основании полученных результатов можно сделать заключение о целесообразности введения карнозина в качестве дополнительного средства в схему лечения БП. Карнозин также может оказаться перспективным соединением и при лечении других нейродегенеративных заболеваний, течение которых сопровождается развитием окислительного стресса.

4.3. Влияние мексидола на параметры окислительного стресса и неврологическую симптоматику при БП В данном исследовании пациенты с БП были разделены на 2 группы методом случайной выборки, и так же, как и при применении карнозина, находились на базисном лечении леводопа-содержащими препаратами.

На начало исследования неврологическая симптоматика у пациентов обеих групп была сопоставима по степени тяжести: в группе больных, получавших базисную терапию, исходная тяжесть симптомов составлял 50,1±4,7 баллов, в группе больных, получавших дополнительно к базисной терапии мексидол 44,7±3,1 баллов (Таблица 7).

Таблица. 7. Динамика неврологического статуса пациентов с БП на фоне лечения (по шкале UPDRS) Через 20 дней лечения в обеих группах пациентов произошло достоверное (р=0,0001) снижение неврологической симптоматики. При этом более выраженное улучшение неврологической симптоматики было отмечено в группе пациентов, получавших мексидол, и составляло в процентном соотношении 26,8%, тогда как в группе, пациентов, получавших только базисную терапию – 21,8%. Наиболее значимым эффектом мексидола в комплексной терапии явилось достоверное (р0,03) уменьшение выраженности осложнений леводопа-терапии относительно пациентов, получавших базисную терапию.

Активность Cu/Zn-СОД у пациентов с БП получавших только базисную терапию через 20 дней после начала исследования достоверно не изменялась. Изначально невысокая активность Cu/Zn-СОД после приема мексидола несколько возрастала, но все же оставалась пониженной (Таблица 8).

В Таблице 8 представлены параметры Fe2+-индуцированной хемилюминесценции липопротеинов плазмы крови пациентов с БП. Видно, что уровень предобразованных гидроперекисей на фоне базисной терапии не изменялся. Резистентность к Fe2+индуцированному окислению была ниже значений нормы, а скорость окисления липопротеинов была достоверно выше аналогичного параметра у здоровых доноров.

Введение в курс лечения мексидола препятствовало росту предобразованных гидроперекисей и достоверно (на 42%) увеличивало резистентность липопротеинов к окислению.

Таблица 8. Влияние проводимого лечения на активность Cu/Zn-СОД и динамику параметров Fe2+индуцированной хемилюминесценции липопротеинов плазмы крови пациентов с БП. * р0, (достоверность отличий до и после лечения), ** р0,02 (достоверность отличий после лечения мексидолом относительно базовой терапии).

терапия терапия + мексидол Таким образом, результаты клинико-биохимической части работы свидетельствуют, что мексидол способен нейтрализовать рост липидных гидроперекисей и повышать уровень эндогенной антиоксидантной защиты в липопротеинах крови пациентов с БП.

Несмотря на то, что клинические эффекты мексидола при терапии БП оказались менее выражены по сравнению с карнозином, мексидол существенно снижал степень выраженности осложнений леводопа-терапии.

На основании полученных результатов сделано заключение о целесообразности включения мексидола в терапевтическую схему лечения БП. Детальное сопоставление эффективности карнозина и мексидола оказалось невозможным из-за различных протоколов их применения в данном исследовании.

ВЫВОДЫ

1. Карнозин и мексидол в равной степени защищают головной мозг экспериментальных животных от повреждений, вызванных окислительным стрессом на модели пренатальной гипоксии. Эти антиоксиданты препятствуют росту предобразованных гидроперекисей и повышению скорости окисления ткани головного мозга.

2. Нейропептид NAAG препятствует повышению скорости образования липидных гидроперекисей, хотя не способен предотвратить их накопление в условиях окислительного стресса, индуцированного пренатальной гипоксией. В этом отношении NAAG менее эффективен, чем карнозин и мексидол.

3. Ишемия головного мозга на фоне повышенного уровня общего гомоцистеина в крови вызывает угнетение активности Mn-СОД и понижение резистентности ткани мозга к Fe2+-индуцированному окислению. Повышенный уровень гомоцистеина в крови усугубляет проявления окислительного стресса и усиливает нарушения долговременной памяти экспериментальных животных.

4. Карнозин предотвращает развитие окислительных повреждений, вызванных ишемией, в мозге экспериментальных животных и сохраняет их когнитивные функции на фоне повышенного уровня гомоцистеина.

5. Win 5521-2 способен сохранять когнитивные функции животных в условиях ишемии только при нормальном уровне гомоцистеина в крови.

6. Использование карнозина и мексидола при лечении пациентов с БП повышает эффективность эндогенной антиоксидантной системы защиты и одновременно приводит к положительной динамике неврологических симптомов заболевания.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Добротворская И.С. Коррекция карнозином последствий гипоксического воздействия, перенесенного в пренатальный период. // Актуальные проблемы экологии и природопользования. Вып.8 (часть 1). Системная экология. М., РУДН – 2006. с.74- 2. Dobrotvorskaya I.S., Stepanova M.S., Fedorova T.N., Maklecova M.G., Boldyrev A.A.

Antioxidant correction of prenatal hypoxia in rats. // International congress “Molecular basis of neurological and psychiatric disorders”, September 6-10, 2006, Martin Slovak Republic, 3. Добротворская И.С., Степанова М.С., Маклецова М.Г., Федорова Т.Н.

Антиоксидантная коррекция окислительных повреждений головного мозга крыс, перенесших пренатальную гипоксию. // Вестник РУДН, серия Экология и безопасность жизнедеятельности, №3, 2007. с.13- 4. A. Boldyrev, T. Fedorova, S. Stvolinsky, M. Stepanova, I. Dobrotvorskaya, E. Kozlova, G.

Bagueva, I. Ivanova-Smolenskaya, S. Illarioshkin. Carnosine increases efficiency of LDOPA therapy of parkinsonics. // Parkinsonism and related disorders, the XVII WFN World congress on Parkinson’s disease and related disorders, Amsterdam, 9-13 December 2007, 5. Boldyrev A, Stepanova M, Dobrotvorskaya I., Carpenter DO Melatonin and carnosine protect neuronal cells from excitotoxic effect of NMDA. // The 3rd euro-asian conference on hazardous waste and human health, March 27-30, 2008, Istambul, Turkey, р. 6. Болдырев А.А., Владыченская Е.А., Карпова Л.В., Брюшкова Е.А., Аккуратов Е.Е., Беляев М.С., Добротворская И.С., Трунова О.А Роль природных факторов в защите мозга от окислительного стресса. // Конф. «Нейрохим. механизмы формирования адаптивных и патологических состояний мозга». Санкт-Петербург-Колтуши, 10- сентября 2008, с. 7. Стволинский С.Л., Федорова Т.Н., Степанова М.С., Добротворская И.С., Багыева Г.Х., Болдырев А.А. Влияние карнозина на состояние эндогенной антиоксидантной системы организма в условиях развития окислительного стресса. // Конф. «Нейрохим.

мех.формир. адаптивных и патологич.сост. мозга».Санкт-Петербург-Колтуши, 10- сентября 2008, с. 8. Boldyrev A., Fedorova T., Stepanova M., Dobrotvorskaya I., Kozlova E., G. Bagueva, Boldanova N. Ivanova-Smolenskaya I., Illarioshkin S. Carnosine increases efficiency of DOPA therapy of Parkinson’s disease: a pilot stady. // Rejuvenation research, 2008, V.11, №4, p.821- 9. Федорова Т.Н., Багыева Г.Х., Степанова М.С., Добротворская И.С., ИвановаСмоленская И.А., Полевая Е.В., Болдырев А.А., Иллариошкин С.Н. Карнозин повышает эффективность лекарственной терапии при болезни Паркинсона. // Неврологический вестник, 2009, T. XLI, В.1, с.24- Добротворская Ирина Сергеевна (Российская Федерация) «Защитное действие от окислительных повреждений головного мозга антиоксидантов и модуляторов активности глутаматных рецепторов»

В диссертационной работе показан защитный эффект карнозина и мексидола от окислительных повреждений головного мозга, вызванных пренатальной гипоксией.

Применение антиоксидантов сразу после гипоксической атаки, перенесенной в период внутриутробного развития, корригирует окислительные нарушения головного мозга, путем активации антиоксидантной системы защиты. Показано также защитное действие от окислительных повреждений активации метаботропных рецепторов mGluR2/3 на модели пренатальной гипоксии.

Карнозин предотвращает развитие окислительного стресса и потерю когнитивных функций животных после ишемии на фоне гипергомоцистеинемии. Агонист каннабиноидных рецепторов Win 5521-2 проявляет протекторное действие только при нормальном уровне гомоцистеина в крови.

Введение карнозина и мексидола в схему лечения пациентов с болезнью Паркинсона повышает эффективность леводопа-терапии. Карнозин активирует основной фермент антиоксидантной системы защиты, супероксиддисмутазу, и улучшает двигательную активность пациентов на фоне проводимого лечения. Мексидол повышает уровень эндогенной антиоксидантной системы и снижает степень выраженности осложнений леводопа-терапии.

На основании полученных результатов было сделано заключение о целесообразности включения мексидола и карнозина в терапевтическую схему лечения болезни Паркинсона.

“The protective effects of antioxidants and glutamate receptors activity modulator from The protective effect of carnosine and mexidol form brain oxidative damage induced by prenatal hypoxia have been shown in the work. The antioxidants therapy shortly after hypoxic episode undergone during prenatal development alters brain oxidative damage by means of the activation of endogenous antioxidant system. The protective action of glutamate receptors mGluR2/3 activation from oxidative damage on the model of prenatal hypoxia was shown.

Carnosine prevent the oxidative stress and the loss of cognitive functions of animals suffered from ischemia aggravated by hyperhomocysteinemia. Agonist cannabinoid receptors Win 5521-2 demonstrates its protective effect only in conditions of normal level of homocysteine in the peripheral blood.

The introduction of carnosine and mexidol into the scheme of treatment of patients with Parkinson disease (PD) increases the efficiency of levodopa-therapy. Carnosine activates the essential enzyme of antioxidative system – superoxide dismutase and improve motor activity of patients with PD. Mexidol increases the level of endogenous antioxidant system and decreases the degree of levodopa-therapy side effects.

The conclusion that introduction of carnosine and mexidol into the scheme of PD therapy is favorable was based on the results obtained.



 


Похожие работы:

«ПЛОТНИКОВА ОЛЬГА МИХАЙЛОВНА ВЛИЯНИЕ МЕТИЛФОСФОНОВОЙ КИСЛОТЫ НА ОСНОВНЫЕ ЗВЕНЬЯ ГОМЕОСТАЗА БЕЛЫХ ЛАБОРАТОРНЫХ МЫШЕЙ 03.01.04 – Биохимия Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук Казань - 2012 Работа выполнена в Федеральном государственном учреждении Российский научный центр Восстановительная травматология и ортопедия имени академика Г.А. Илизарова (РНЦ ВТО) Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации. Научный...»

«ВОЙКИНА АННА ВЛАДИМИРОВНА НАКОПЛЕНИЕ ПЕСТИЦИДОВ В КОМПОНЕНТАХ ЭКОСИСТЕМ ТАГАНРОГСКОГО И ЯСЕНСКОГО ЗАЛИВОВ АЗОВСКОГО МОРЯ И ИХ АДДИТИВНОЕ ВОЗДЕЙСТВИЕ НА ГИДРОБИОНТОВ 03.02.08 — экология (биологические наук и) АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Ростов-на-Дону - 2013 2 Работа выполнена в ФГУП Азовский научно-исследовательский институт рыбного хозяйства (АзНИИРХ), г. Ростов-на-Дону и на кафедре экологии и природопользования Южного...»

«Герасимчук Анна Леонидовна СУЛЬФАТРЕДУЦИРУЮЩИЕ БАКТЕРИИ В ЭКОСИСТЕМАХ С ЭКСТРЕМАЛЬНЫМИ ЗНАЧЕНИЯМИ рН 03.00.07 – Микробиология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Москва - 2009 Работа выполнена в Томском государственном университете Научный руководитель : доктор биологических наук, профессор Карначук О. В. Официальные оппоненты : доктор биологических наук, зав. лабораторией Бонч-Осмоловская Е. А. доктор биологических наук, профессор...»

«Ганеева Лилия Ахатовна ОЦЕНКА УРОВНЯ АНТИОКИСЛИТЕЛЬНЫХ ФЕРМЕНТОВ И ЖЕЛЕЗА, МЕДИ, МАРГАНЦА В КЛЕТКАХ КАРТОФЕЛЯ, ИНФИЦИРОВАННЫХ PHYTOPHTHORA INFESTANS. 03.00.07 – микробиология Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Казань - 2009 2 Работа выполнена в ТТГПУ, г. Казань и в Институте проблем экологии и недропользования академии наук РТ, г.Казань. Научный руководитель : доктор биологических наук, профессор Морозов Николай Васильевич...»

«Зотов Александр Александрович ПРЕИМАГИНАЛЬНЫЕ СТАДИИ ДОЛГОНОСИКОВ ПОДСЕМЕЙСТВА LIXINAE (COLEOPTERA, CURCULIONIDAE): ЭКОЛОГИЯ И МОРФОЛОГИЯ 03.02.08 – экология (биологические наук и) АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Ростов-на-Дону - 2013 2 Работа выполнена в отделе аридной экологии ФГБУН Институт аридных зон Южного научного Центра РАН доктор биологических наук, Научный руководитель : Арзанов Юрий Генрихович Замотайлов Александр...»

«КОЗЛОВА Людмила Валерьевна Глюкан со смешанным типом связей и глюкуроноарабиноксилан в ходе роста корней и колеоптилей кукурузы (Zea mays L.) 03.01.05 – физиология и биохимия растений АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук КАЗАНЬ 2012 2 Работа выполнена в лаборатории механизмов роста растительных клеток Федерального государственного бюджетного учреждения науки Казанского института биохимии и биофизики Казанского научного центра...»

«Титушин Максим Сергеевич БЕЛОК-БЕЛКОВЫЕ ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ В БИОЛЮМИНЕСЦЕНТНЫХ СИСТЕМАХ КИШЕЧНОПОЛОСТНЫХ RENILLA MUELLERI И CLYTIA GREGARIA 03.00.02 – биофизика АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Красноярск – 2009 Работа выполнена в лаборатории фотобиологии Института биофизики СО РАН, г. Красноярск Научный руководитель : Кандидат биологических наук Высоцкий Евгений Степанович Официальные оппоненты : Доктор физико-математических наук...»

«БАБАСАНОВА Ольга Бадмажаповна АЭРОБНЫЕ ОРГАНОТРОФНЫЕ БАКТЕРИИ ЩЕЛОЧНЫХ ГИДРОТЕРМ БАЙКАЛЬСКОГО РЕГИОНА 03.00.16 – экология 03.00.07– микробиология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Улан-Удэ, 2007 2 Работа выполнена в Институте общей и экспериментальной биологии СО РАН Научный руководитель : кандидат биологических наук Бархутова Дарима Дондоковна Научный консультант : кандидат биологических наук Намсараев Зоригто Баирович...»

«Чирков Сергей Николаевич Иммунохимическая и молекулярная диагностика вирусных инфекций растений 03.00.06 – Вирусология 03.00.23 – Биотехнология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук Москва 2009 Работа выполнена на кафедре вирусологии биологического факультета Московского государственного университета имени М.В.Ломоноcова и в лаборатории вирусологии Института микробиологии имени С.Н.Виноградского РАН. Научный консультант : доктор...»

«АНИСИМОВ Андрей Павлович Молекулярно-генетические механизмы образования и функциональная значимость капсулы Yersinia pestis 03.00.07-микробиология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук Саратов - 2000 2 Работа выполнена в Российском научно-исследовательском противочумном институте “Микроб” МЗ РФ (Саратов) и Государственном научном центре прикладной микробиологии МЗ РФ (Оболенск). Официальные оппоненты : доктор медицинских наук,...»

«СПИРИДОНОВА ЕЛИЗАВЕТА МИХАЙЛОВНА Выявление и филогенетический анализ генов, кодирующих большую субъединицу рибулозо-1,5-бисфосфаткарбоксилазы/оксигеназы формы I, у бактерий различных таксономических групп 03.00.07 – микробиология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Москва, 2006 г. Работа выполнена на базе ЦКП Центра Биоинженерия РАН Научный...»

«ТИЩЕНКО Елена Викторовна Разработка технологии глубинного культивирования гриба Trichophyton verrucosum 03.01.06 – Биотехнология (в том числе бионанотехнологии) АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Москва - 2010 2 Работа выполнена в ФГОУ ВПО Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И. Скрябина. Научный руководитель : доктор биологических наук, профессор Мирзаев Микаиль Нурбагандович...»

«Хикматуллина Гульшат Радиковна СРАВНИТЕЛЬНЫЙ АНАЛИЗ МОРФОЛОГИЧЕСКИХ ПАРАМЕТРОВ ЛИСТЬЕВ ДРЕВЕСНЫХ РАСТЕНИЙ В УСЛОВИЯХ УРБАНИЗИРОВАННОЙ СРЕДЫ Специальность 03.02.08 - экология Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Казань – 2013 1 Работа выполнена на кафедре ботаники и экологии растений ФГБОУ ВПО Удмуртский государственный университет Научный руководитель : доктор биологических наук, профессор Баранова Ольга Германовна ФГБОУ ВПО...»

«УМПЕЛЕВА Татьяна Валерьевна МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА КЛИНИЧЕСКИХ ИЗОЛЯТОВ MYCOBACTERIUM TUBERCULOSIS, ВЫДЕЛЕННЫХ ОТ БОЛЬНЫХ ТУБЕРКУЛЕЗОМ В УРАЛЬСКОМ ФЕДЕРАЛЬНОМ ОКРУГЕ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ 03.02.03 – Микробиология Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Екатеринбург - 2014 Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении Уральский научно-исследовательский институт фтизиопульмонологии Научные...»

«Рыжакова Ольга Сергеевна ИНТЕРСТИЦИАЛЬНАЯ КОЛЛАГЕНАЗА (ММП-1) И ЕЁ ЭНДОГЕННЫЕ РЕГУЛЯТОРЫ ПРИ ТРАНСФОРМАЦИИ ФИБРОБЛАСТОВ ГЕНОМ Е7 ВИРУСА ПАПИЛЛОМЫ ЧЕЛОВЕКА 16 ТИПА (HPV16) 03.00.04 – биохимия АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учёной степени кандидата биологических наук Москва 2008 Работа выполнена в Государственном учреждении Научно-исследовательском институте биомедицинской химии имени В.Н. Ореховича Российской академии медицинских наук Научный руководитель : доктор...»

«МАЛИКОВА ЛИЛИЯ АЛЕКСАНДРОВНА ПРОТЕИНАЗЫ И АЛЬДОЛАЗЫ: ПРИНЦИПИАЛЬНЫЕ ПОДХОДЫ К ПОЛУЧЕНИЮ ПРАКТИЧЕСКИ ЗНАЧИМЫХ БАКТЕРИАЛЬНЫХ ФЕРМЕНТОВ 03.00.07 – микробиология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Казань – 2007 Работа выполнена в лаборатории биосинтеза и биоинженерии ферментов кафедры микробиологии биолого-почвенного факультета ГОУВПО Казанский государственный университет им. В.И. Ульянова-Ленина. Научный руководитель : Кандидат...»

«ФРОЛОВ Даниил Анатольевич ФЛОРА БАССЕЙНА РЕКИ СВИЯГИ 03.02.01 – Ботаника АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учёной степени кандидата биологических наук Сыктывкар 2011 Работа выполнена на кафедре ботаники ГОУ ВПО Ульяновский государственный педагогический университет имени И.Н. Ульянова Научный руководитель : кандидат биологических наук, доцент Масленников Андрей Викторович Официальные оппоненты : доктор биологических наук, старший научный сотрудник Мартыненко Вера Антоновна...»

«Новосадова Александра Викторовна МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ НАРУШЕНИЯ В РАННЕМ ОНТОГЕНЕЗЕ ОСЕТРОВЫХ РЫБ У ПОТОМСТВА КУЛЬТИВИРУЕМЫХ ПРОИЗВОДИТЕЛЕЙ 03.02.06 ихтиология Автореферат диссертации на соискание учёной степени кандидата биологических наук Москва 2013 Работа выполнена в Федеральном государственном унитарном предприятии Всероссийский научно-исследовательский институт рыбного хозяйства и океанографии (ФГУП ВНИРО), г. Москва Научный руководитель : доктор биологических наук,...»

«ЕРМОЛЕНКО Дмитрий Николаевич ИЗУЧЕНИЕ СТАБИЛЬНОСТИ И СВОРАЧИВАНИЯ БЕЛКОВ НА ПРИМЕРЕ УБИКВИТИНА И ПЕРОКСИДАЗЫ 03.00.04 – биохимия АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Москва – 2003 Работа выполнена в лаборатории иммунобиохимии Института биохимии им. А.Н. Баха РАН и на кафедре биохимии и молекулярной биологии колледжа медицины Пенсильванского государственного университета. Научный руководитель : кандидат биологических наук А.В. Жердев...»

«САВИНОВ Иван Алексеевич Система и эволюция порядка Celastrales на основе данных сравнительной морфологии 03.02.01 – Ботаника Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук Санкт-Петербург - 2011 2 Работа выполнена в Учреждении Российской академии наук Главный ботанический сад им. Н.В. Цицина РАН и в ГОУ ВПО Московский государственный университет прикладной биотехнологии Официальные оппоненты : доктор биологических наук, профессор,...»








 
© 2013 www.diss.seluk.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Авторефераты, Диссертации, Монографии, Методички, учебные программы»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.