WWW.DISS.SELUK.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА
(Авторефераты, диссертации, методички, учебные программы, монографии)

 

На правах рукописи

ШОСТАЛЬ ОЛЬГА АНДРЕЕВНА

ВЛИЯНИЕ УСЛОВИЙ ОСВЕЩЕНИЯ

НА ПРОДОЛЖИТЕЛЬНОСТЬ ЖИЗНИ

DROSOPHILA MELANOGASTER

Специальность 03.02.08 – «Экология»

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени

кандидата биологических наук

Сыктывкар 2010 1

Работа выполнена в Учреждении Российской академии наук Институте биологии Коми научного центра Уральского отделения Российской академии наук.

Научный руководитель: доктор биологических наук, доцент Москалев Алексей Александрович

Официальные оппоненты: доктор биологических наук Болотов Иван Николаевич кандидат биологических наук, доцент Мыльников Сергей Владимирович

Ведущая организация: Учреждение Российской академии наук Институт биологии Карельского научного центра Российской академии наук

Защита состоится 8 декабря 2010 года в 15.00 часов на заседании диссертационного совета Д 004.007.01 в Учреждении Российской академии наук Институте биологии Коми научного центра Уральского отделения РАН по адресу: 167982, г. Сыктывкар, ул. Коммунистическая, д. 28.

Факс: (8212) 24-01- E-mail: dissovet@ib.komisc.ru Адрес сайта Института: http://ib.komisc.ru/

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Учреждения Российской академии наук Коми научного центра Уральского отделения РАН по адресу: 167982, г. Сыктывкар, ул. Коммунистическая, д. 24.

Автореферат разослан «_» 2010 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор биологических наук А.Г. Кудяшева

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Под действием света в организме животного осуществляются важные фотобиологические процессы. Суточные и годовые колебания интенсивности света являются внешними факторами, регулирующими сон, двигательную активность, покой, рост, размножение, линьку.

В ходе эволюции выработались приспособления для полезного использования световой энергии. Поэтому изменения спектрального состава света или светового режима могут вызвать патологические реакции и повлиять на скорость старения. Было обнаружено, что увеличение длины светового дня или интенсивности света приводит к значительному снижению продолжительности жизни у экспериментальных животных (Москалев и др., 2006;





Massie et al., 1993; Majercak, 2002; Sheeba еt al., 2000; Anisimov et al., 2004; Vinogradova et al., 2009), однако механизмы этого влияния изучены слабо. Предполагается, что изменение длительности светового дня влияет на общий уровень метаболизма и выработку свободных радикалов, что существенно модифицирует репродуктивную и иммунную функции организма, развитие возрастной патологии, в конечном счете, сказываясь на продолжительности жизни (Анисимов, 2003). В то же время, генетические механизмы (роль отдельных генов) при влиянии света на продолжительность жизни прежде не были изучены.

В настоящее время интерес к изучению механизмов влияния света на продолжительность жизни усилился в связи с возникшей проблемой светового загрязнения искусственными источниками освещения, свойственной большим городам. У людей искусственный свет в ночное время влияет на регуляторные процессы, отвечающие за сон, вызывает желудочно-кишечные и сердечно-сосудистые заболевания, нарушения обмена веществ и репродуктивной системы, увеличивает риск развития онкологических заболеваний (Anisimov et al., 2006; Vinogradova et al., 2009). Исследование механизмов влияния света на продолжительность жизни является актуальным для жителей северных широт, где наряду с другими неблагоприятными факторами (перепады температуры, давления, нерегулярно меняющаяся геомагнитная активность) имеют место длительные периоды «белых ночей» и «полярной ночи», что также негативно сказывается на здоровье населения и вносит свой вклад в изменение продолжительности жизни.

Удобным объектом для изучения генетических механизмов влияния светового режима на продолжительность жизни, на наш взгляд, является плодовая мушка Drosophila melanogaster, наиболее изученный в генетическом отношении модельный организм. Имеются данные, свидетельствующие об эволюционной консервативности основных регуляторных путей, контролирующих продолжительность жизни в ряду от дрожжей до млекопитающих (Kramer, 2003; Kenyon, 2005; Soti, Csermely, 2007; Puig, 2010).

Используя мутантные линии дрозофилы, несущие измененную активность различных генов, можно выявить роль определенных генов в реакции организма на изменение длины светового дня. Подобные исследования на человеке трудновыполнимы, а на млекопитающих – очень дорогостоящие. Кроме того, короткий жизненный цикл, малая продолжительность жизни (3- месяца), легкость содержания в лабораторных условиях, удобство проведения генетических экспериментов также делает дрозофилу удобной моделью для данных исследований.

Цель и задачи исследования. Цель исследований заключалась в изучении генетических механизмов влияния различных условий освещения на продолжительность жизни Drosophila melanogaster. Для достижения указанной цели были поставлены следующие задачи:

1) исследовать динамику смертности имаго лабораторной линии дикого типа Canton-S при различной интенсивности и длительности освещения;





2) изучить роль генов Sod, mus209, mus210, dSir2, транскрипционного фактора FOXO, белков теплового шока семейства 70 в изменении продолжительности жизни Drosophila melanogaster при различных условиях освещения;

3) выявить действие антиоксиданта мелатонина на продолжительность жизни различающихся по генотипу имаго Drosophila melanogaster в связи с влиянием различных условий освещения.

Связь работы с научными программами. Исследования проводились в течение 2005-2010 гг. в рамках бюджетных тем Отдела радиоэкологии Института биологии Коми НЦ УрО РАН. Проведенные исследования были поддержаны грантом РФФИ на 2008-2010 гг., грантом президента РФ для молодых докторов наук, грантами Президиума РАН по целевым программам «Молекулярная и клеточная биология» и «Фундаментальные науки – медицине» на 2009-2011 гг., Молодежным научным грантом УрО РАН на 2009-2010 гг.

Теоретическая значимость и научная новизна работы. Показано, что снижение активности систем детоксификации свободных радикалов и эксцизионной репарации ДНК у дрозофил вызывает уменьшение продолжительности жизни в условиях постоянного освещения. Данный факт говорит о том, что образование дополнительного количества активных форм кислорода и повреждение молекулы ДНК вносит непосредственный вклад в изменение продолжительности жизни на свету. Показан FOXO-зависимый механизм увеличения продолжительности жизни дрозофил в темноте.

Предложена концептуальная модель механизмов влияния изменения длины светового дня на продолжительность жизни дрозофилы. Полученные результаты внесли новый вклад в понимание генетических механизмов влияния условий освещения на продолжительность жизни.

Практическая значимость работы. Результаты исследований могут быть использованы при разработке рекомендаций по снижению негативных последствий для здоровья населения светового загрязнения в крупных населенных пунктах, а также «полярного дня» и «полярной ночи» в условиях Крайнего Севера. Поскольку исследованные гены имеют место и у человека, кодируемые ими белки могут служить новыми мишенями для разработки фармакологических средств, снижающих неблагоприятные последствия искусственного увеличения длины светового дня или нарушения циркадных ритмов у человека.

Личный вклад автора. Соискатель принимал участие в постановке и решении задач исследования, в проведении экспериментальных работ, сборе материала (оценка смертности, измерение плодовитости), статистической обработке данных, анализе и обобщении полученных результатов.

Апробация работы. Результаты работы докладывались на научных конференциях молодых ученых Института биологии и Института физиологии Коми НЦ УрО РАН (Сыктывкар, 2005-2007, 2009, 2010 гг.); на научной конференции молодых ученых Института геронтологии АМН Украины (Киев, 2009 г.); на 13 международном конгрессе Международной ассоциации биогеронтологов (Квебек, Канада, 2009); на международной научной конференции «Генетика продолжительности жизни и старения» (Сыктывкар, 2010 г.); на VIII международной конференции «Биоантиоксидант»

(Москва, 2010).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 23 работы, в том числе 4 статьи в рецензируемых журналах из списка изданий, рекомендованных ВАК РФ.

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, четырех глав, выводов, списка цитируемой литературы, содержащего работ, в том числе 162 публикации зарубежных авторов. Работа изложена на 133 страницах машинописного текста и содержит 5 таблиц и 38 рисунков.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

В главе рассматриваются две основные группы гипотез о механизмах старения: стохастическое и запрограммированное старение. Обсуждаются вопросы о роли генотипа и среды в изменчивости продолжительности жизни. Анализируются данные литературы о влиянии изменений светового режима на продолжительность жизни и старение животных: нарушение циркадных ритмов, увеличение плодовитости, интенсификация метаболизма, нейроэндокринные изменения. Приводятся данные о влияние света на продукцию гормона мелатонина и роли последнего в процессах старения.

Рассматривается участие белков теплового шока, сиртуинов и транскрипционного фактора FOXO в стресс-ответе и в регуляции продолжительности жизни организмов. Таким образом, в регуляции скорости старения и продолжительности жизни важную роль играют как генетические, так и внешнесредовые факторы, однако механизмы их взаимосвязи требуют дальнейших исследований.

Линии Drosophila melanogaster, использованные в работе. В зависимости от поставленной задачи в экспериментах использовали следующие лабораторные линии Drosophila melanogaster:

1. Линия дикого типа Canton-S.

2. Линия w1118 – в качестве маркера гомозиготности несет рецессивную мутацию гена white.

3. Линия Sodn1/+ (генотип Sodn1red1/TM3,Sb1Ser1) – гетерозигота с мутацией гена цитоплазматической супероксиддисмутазы (Sod), участвующей в детоксикации O2– радикала; сохраняет только 36.7% нормальной активности фермента Cu/Zn Sod (Phillips et al., 1995).

4. Линия mus210G1/+ (генотип mus210G1/CyO) несет дефект гена mutagensensitive 210, кодирующего белок, участвующий в эксцизионной репарации нуклеотидов (гомолог белка XPC млекопитающих) (Isaenko et al., 1994;

Sekelsky et al., 2000).

5. Линия mus209B1/+ (генотип mus209B1b pr cn/CyO) несет дефект гена mutagen-sensitive 209, кодирующего белок-гомолог PCNA млекопитающих, участвующий в эксцизионной репарации в составе кофакторного комплекса ДНК-полимеразы d и сборке митотического веретена (Henderson et al., 1994; Ruike et al., 2006).

6. Линии FOXO21 (с генотипом y, w; Sp/CyO; dFOXO21 /TM6B Tb, Hu) и FOXO25 (y, w; FRT 82 dFOXO25 /TM6BTb, Hu) содержат в гетерозиготе гипоморфные аллели гена транскрипционного фактора FOXO, который участвует в реакциях стресс-ответа, регулируя различные функции клетки (пролиферацию, дифференциацию, репарацию ДНК) (Puig et al., 2003; Lee et al., 2003; Vogt et al., 2005). Для получения особей-гомозигот с пониженной активностью гена FOXO проводили скрещивание линий FOXO21 и FOXO25 (обозначены FOXO21/ FOXO25).

7. Линии с мутациями генов различных белков теплового шока семейства 70:

– w1118 ; Df(3R)Hsp70A, Df(3R)Hsp70B (обозначена Df(3R)Hsp70A, Df(3R)Hsp70B) – гомозигота, содержит делеции нескольких генов семейства Hsp70 (Hsp70Aa, Hsp70Ab, Hsp70Ba, Hsp70Bb, Hsp70Bbb и Hsp70Bc).

Линия очень чувствительна к воздействию различных видов стресса (температурный, окислительный) (Gong, Golic, 2006).

– w1118; Df(3R)Hsp70A (обозначена Df(3R)Hsp70A) – несет делеции генов Hsp70A (Hsp70Aa и Hsp70Ab).

8. Линии с мутациями гена белка сиртуина:

– Sir217/+ (генотип w1118; Sir217/SM6a) – гетерозигота по мутации гена Sir2, кодирующего белок сиртуин, который участвует в ответе на стрессовые воздействия, деацетилируя гистоны и различные транскрипционные факторы (FOXO, HSF, p53) (Sauve et al., 2006; Tanno et al., 2007).

– Sir22A-7-11 (генотип w1118; Sir22A-7-11) содержит делецию гена Sir2. Данный дефект снижает устойчивость линии к различным видам стресса.

Условия содержания дрозофил и получение экспериментального материала. Культивирование родительских линий проводили в термостате при температуре 25±1 °C и стандартном режиме освещения (12:12 ч). После появления имаго в течение суток производили отбор необходимого количества особей, мух разделяли по полу, предварительно наркотизировав эфиром, и помещали в баночки (100 мл) с 25 мл дрожжевой питательной среды (Ashburner, 1989).

В первой серии экспериментов особей линии Canton-S содержали в условиях стандартного режима освещения (12:12 ч) при интенсивности 10 лк от лампы накаливания, остальная часть особей этой линии находилась в темноте на протяжении всей жизни. Во второй серии экспериментов особей линий Canton-S, а также линий Sodn1/+, mus210G1/+ и mus209B1/+ содержали в условиях круглосуточного освещения при интенсивности 120 лк от лампы дневного света, остальная часть мух исследуемых линий находилась в темноте. Для того, чтобы исключить различия сравниваемых групп по случайным причинам, условия круглосуточного освещения и затемнения воспроизводились одновременно в пределах одной термокомнаты.

В сериях последующих экспериментов часть особей исследуемых линий с мутациями генов транскрипционного фактора FOXO, белков теплового шока, сиртуина содержали при стандартном режиме освещения (12:12 ч) при интенсивности 120 лк, остальная часть мух находилась в условиях постоянной темноты на протяжении всей жизни.

Интенсивность освещения в термокомнате измеряли прибором «Lux light meter» DVM 1300 (Velleman, China). Определение спектров проводили спектрорадиометром Field Spec HH (Analytical Spectral Devices, Inc., США).

Спектр использованной лампы дневного света (рис. 1, линия 3) был идентичен спектрам бытовых ламп дневного света (рис. 1, линия 2). Спектр лампы накаливания (рис. 1, линия 1) по сравнению со спектром солнечного света (рис. 1, линия 4) на максимуме сильно сдвинут в красно-инфракрасную область, его эффективность в видимой области низка. Известно, что дрозофилы, как и все высшие насекомые, видят все области видимого спектра (Чернышев, 1996; Биологические ритмы, 1984).

Рис. 1. Спектры бытовой лампы дневного света (2), лампы дневного света, использованной в эксперименте (3) и лампы накаливания (1) в сравнении со спектрами солнечного света (4).

Условия обработки мелатонином. В эксперименте по выявлению модифицирующего действия антиоксиданта мелатонина на продолжительность жизни при разных условиях освещения часть особей линий Canton-S, Sodn1/+, mus210G1/+ содержали в условиях круглосуточного освещения или постоянной темноты на питательной среде, смазанной дрожжевой пастой, содержащей 100 мкг/мл мелатонина (Sigma-Aldrich). Мелатонин растворяли в этиловом спирте из расчета 1 мл спирта на 100 мл пасты. Контрольные мухи получали пасту с добавлением 1 мл спирта.

Оценка продолжительности жизни и плодовитости. Подсчёт числа умерших мух проводили ежедневно. Один раз в неделю оставшихся в живых мух переносили на свежую среду без наркотизирования.

Каждую неделю оценивали плодовитость самок линий Canton-S, Sodn1/+, mus210G1/+, mus209B1/+, которых содержали в условиях круглосуточного освещения и в условиях постоянной темноты. Для этого особей женского пола (по 50 штук) помещали в баночки (100 мл) с питательной средой, подкрашенной активированным углем. Через сутки самок удаляли и производили подсчет отложенных яиц.

Статистическая оценка продолжительности жизни. Для оценки достоверности различий по продолжительности жизни в темноте и на свету применяли непараметрические критерии Гехана-Бреслоу-Вилкоксона (для оценки различий медианной продолжительности жизни) и Колмогорова-Смирнова (для сравнения кривых выживаемости) (Ермаков, 1987). Для оценки статистической значимости различий 90%-ой гибели особей применяли метод Ванг-Аллисона. Функции дожития оценивали с помощью процедуры Каплана-Мейера и представляли в виде кривых дожития (Крутько, Славин, Смирнова, 2002) в программе Statistica 6.1 (Statsoft, США). Плодовитость сравнивали по критерию Хи-квадрат (Лакин, 1990).

В главе приведены результаты экспериментального исследования по изучению влияния различных условий освещения на продолжительность жизни дрозофилы разных генотипов.

У линии дикого типа Canton-S средняя продолжительность жизни самцов, содержащихся при 12-часовом режиме освещения и интенсивности 10 лк, меньше, чем в темноте, примерно на 6%, у самок она снизилась на 11% (табл. 1, рис. 2). Аналогично изменилась и максимальная продолжительность жизни, оцененная по параметру «время гибели 90% особей».

Круглосуточное освещение с интенсивностью 120 лк также привело к снижению медианной продолжительности жизни особей – на 8% у самцов и 2% у самок. Таким образом, снижение продолжительности жизни у линии дикого типа на свету по сравнению с темнотой практически не зависело от интенсивности (10 и 120 лк) и длительности (12:12 и 24:00 ч) освещения. У самок линии Canton-S в условиях круглосуточного освещения наблюдалось увеличение ранней плодовитости, однако общий период яйцепродукции сохранялся дольше в темноте, чем на свету (рис. 3).

При круглосуточном освещении самцов и самок линии Sodn1/+ с нарушением детоксификации свободных радикалов происходило достоверное (p0.001) снижение медианной продолжительности жизни на 36% и 14% соответственно. В темноте наблюдали достоверное увеличение времени 90%й гибели особей (табл. 1, рис. 4 А). При этом разрыв между продолжительностью жизни в темноте и на свету у линии Sodn1/+ был более выражен, чем у контрольной линии дикого типа Canton-S (табл. 1). У самок исследуемой линии яйцепродукция изменялась таким же образом, как и у линии дикого типа.

У мух линии mus210G1/+ с нарушением в эксцизионной репапации ДНК в условиях круглосуточного освещения также как и у линии Sodn1/+ наблюдали более значительное снижение продолжительности жизни по сравТаблица Параметры продолжительности жизни особей линий Canton-S, Sod /+, mus210 /+ и mus209 /+ при различных условиях освещения Различия статистически значимы: * p0.001; ** p0.01. Здесь и далее: М – медианная продолжительность жизни; СПЖ – средняя продолжительность жизни; 90% – время жизни 90% популяции; min и max – минимальная и максимальная продолжительность жизни в выборке; MRDT – время удвоения интенсивности смертности; N – количество особей в выборке; – самцы; – самки; (1, 2) – независимые повторности эксперимента. При сравнении медианной продолжительности жизни применяли критерий Гехана-Бреслоу-Вилкоксона, а при анализе времени жизни 90% популяции – критерий Ванг-Аллисона.

нению с линией дикого типа (табл. 1, рис. 4 Б). Медианная продолжительность жизни достоверно (p0.001) снизилась на 11% у самцов и на 23% у самок, также как и другие параметры выживаемости. Плодовитость у самок линии mus210G1/+ была крайне низкой, однако в темноте выше, чем на свету.

Таким образом, у линий с нарушением детоксификации свободных радикалов и эксцизионной репарации ДНК продолжительность жизни на свету характеризуется более выраженным снижением, чем у линии дикого типа, что свидетельствует о роли свободных радикалов в повреждающем действии света.

Как видно из табл. 1, в отличие от других исследованных линий, у особей линии mus209B1/+ в двух независимых экспериментальных повторностях в условиях круглосуточного освещения наблюдали достоверное (p0.001) увеличение параметров продолжительности жизни. При этом плодовитость самок на свету также повышалась (рис. 5). Таким образом, увеличение плодовитости при содержании в условиях длительного освещеДоля выживших мух Доля выживших мух Рис. 2. Кривые выживаемости самцов ( ) и самок ( ) линии дикого типа CantonS при различных условиях освещения (1 – 0 ч; 2 – 12 ч; 3 – 24 ч). * различия достоверны при p0.001 (по критерию Колмогорова-Смирнова).

ния не обязательно сопровождается снижением продолжительности жизни и не является его причиной, как считалось ранее.

В следующей серии экспериментов исследовали роль гена белка сиртуина в изменении продолжительности жизни при разных условиях освещения. Для сравнения эффектов использовали линию w1118, поскольку исследуемые мутанты были получены на ее основе. У самцов и самок линии Sir217/+ (рис. 6 Б), гетерозиготных по мутации гена Sir2, при содержании в стандартных условиях освещения происходило снижение параметров продолжительности жизни по сравнению с содержанием в темноте, однако на том же уровне, что и у линии w1118 (рис. 6 А). Однако данные эффекты были достоверно менее выражены, чем у линии, несущей делецию Sir в гомозиготе (табл. 2, рис. 6 В).

гена Sir2 в изменении продолРазличия достоверны при p0.01 (по критерию жительности жизни в различХи-квадрат).

ных условиях освещения.

Доля выживших мух Доля выживших мух Рис. 4. Кривые выживаемости самцов ( ) и самок ( ) линий Sod n1/+ (А) и mus210G1/+ (Б) при различных условиях освещения (1 – 0 ч, 2 – 24 ч). * различия достоверны при p0.001 (по критерию Колмогорова-Смирнова).

Влияние делеций генов семейства Hsp70 на изменение продолжительности жизни при разных условиях освещения изучали в сравнении с реакциями линии дикого типа Canton-S (табл. 3).

У особей линии Df(3R)Hsp70A, Df(3R)Hsp70B с мутациями в нескольких генах семейства Hsp70 по сравнению с диким типом на свету наблюдали более выраженную тенденцию к снижению продолжительности жизни.

предположительно возникающего в клетках особей при соРис. 5. Возрастная динамика яйцепродукции держании в условиях длительсамок линии mus209 /+, содержащихся в постоB янной темноте и при круглосуточном освещении. экспериментах изучали модиРазличия достоверны при p0.01 (по критерию фицирующее действие антиокХи-квадрат). сиданта мелатонина на продолТаблица Параметры продолжительности жизни особей лабораторных линий дрозофилы w, Sir2 /+ и Sir2 при различных условиях освещения Различия эффектов освещения 0 ч и 12 ч статистически значимы: * p0.001; ** p0.05.

жительность жизни линий разных генотипов в различных условиях освещения.

Влияние условий содержания в темноте и на свету без мелатонина у особей линий Canton-S, Sodn1/+ и mus210G1/+ (табл. 4) воспроизвело эффекты, рассмотренные ранее. Изменение продолжительности жизни у мутантных линий при содержании в условиях круглосуточного освещения было более выражено, чем у линии дикого типа.

Мелатонин оказывает геропротекторное действие, прежде всего, в условиях темноты. Наиболее значимые отличия отмечены у линии с мутацией фермента детоксикации свободных радикалов Sod. Данные эффекты отмечены у особей обоих полов. Анализ полученных результатов показал, что механизмы, обусловливающие влияние на продолжительность жизни освещения и мелатонина, различаются.

Параметры продолжительности жизни особей лабораторных линий дрозофилы Canton-S, Df(3R)Hsp70A, Df(3R)Hsp70B и Df(3R)Hsp70A Различия эффектов освещения 0 ч и 12 ч статистически значимы:* p0.001.

Доля выживших мух Доля выживших мух Доля выживших мух Рис. 6. Кривые выживаемости самцов ( ) и самок ( ) линий w1118 (А), Sir217/+ (Б), Sir22A-7-11 (В) при различных условиях освещения (1 – 0 ч, 2 – 12 ч). * различия достоверны при p0.001 (по критерию Колмогорова-Смирнова).

Поскольку транскрипционный фактор FOXO играет ключевую роль в реакциях стресс-ответа, мы предположили его роль в наблюдаемом увеличении продолжительности жизни в темноте. Сравнивали эффекты влияния различных условий освещения на продолжительность жизни у гомозигот по гипоморфным аллелям гена транскрипционного фактора FOXO (FOXO21/ FOXO25) с эффектами разных условий освещения у родительских гетерозиготных линий FOXO21и FOXO25 и линии дикого типа Canton-S в двух экспериментальных повторностях. Обобщенные результаты представлены в табл. 5. Показано, что у гетерозигот, как и у линии дикого типа, происходит увеличение продолжительности жизни при содержании в темноте.

У особей с гипоморфным генотипом FOXO21/FOXO25, характеризующихся пониженной активностью гена FOXO, также как у линии дикого типа и родительских линий, на свету в двух экспериментальных повторностях наблюдали снижение исследуемых параметров продолжительности жизни, однако различия в продолжительности жизни в темноте и на свету наблюдались в меньшей степени (табл. 5, рис. 7). Кривые выживаемости достоверно различались лишь в одном из вариантов экспериментов у самцов.

Таким образом, эффект увеличения продолжительности жизни в темноте у мутантов на фоне низкой активности FOXO исчезает.

Параметры продолжительности жизни самцов и самок дрозофилы разных генотипов при различных условиях освещения Отличия с контролем достоверны при: * p0.001; ** p0.01.

Мы изучали продолжительность жизни определенных мутантных генотипов дрозофилы, что позволило связать данную интегральную характеристику жизнеспособности организма с генетическими механизмами её регуляции при различных условиях освещения. Известно, что искусственное увеличение длины светового дня уменьшает продолжительность жизни Drosophila melanogaster и мышей. Однако механизмы влияния света на долгожительство изучены слабо.

Согласно эволюционной теории старения Кирквуда высокая плодовитость находится в антагонизме с продолжительностью жизни в силу затратности процесса размножения, перераспределения ограниченных энергетических и пластических ресурсов от репарации и поддержания жизнеспособности к производству половых продуктов (Kirkwood, 1977). У репродуцирующихся самок дрозофилы темп старения выше при круглосуточном освещении по сравнению с темнотой. Однако несмотря на то, что у самок линии mus209B1/+ плодовитость увеличивалась при круглосуточном освещении, у данной линии этот эффект не сопровождался снижением продолжительности жизни, напротив, наблюдалось ее увеличение (табл. 1). ТаТаблица Параметры продолжительности жизни самцов и самок дрозофилы разных генотипов при различных условиях освещения Различия эффектов освещения 0 ч и 12 ч статистически значимы: * p0.001; ** р0.01.

ким образом, в антагонизме плодовитости и продолжительности жизни речь может идти о так называемой «ложной корреляции»: не плодовитость на свету ускоряет старение, а свет и увеличивает плодовитость, и снижает продолжительность жизни, причем эти процессы независимы друг от друга.

Увеличение длины светового дня может приводить к более высокому уровню метаболизма вследствие интенсификации двигательной активности и изменения температуры тела дрозофил (Sheeba et al., 2002). Согласно свободнорадикальной теории старения (Harman, 1956) интенсификация метаболизма ведет к дополнительной продукции свободных радикалов, повреждающих митохондриальную и ядерную ДНК, мембраны и белки клетки (Анисимов, 1999, 2008; Le Bourg, 2001; Muller, 2007), что может приводить к ускоренному старению и укороченной продолжительности Доля выживших мух Доля выживших мух Рис. 7. Кривые выживаемости самцов ( ) и самок ( ) FOXO21/FOXO25 при различных условиях освещения (1 – 0 ч, 2 – 12 ч) в двух экспериментальных повторностях (сверху и снизу). * различия достоверны при p0.001 (по критерию Колмогорова-Смирнова).

жизни. Согласно нашим результатам, особи линий с мутациями генов ферментов детоксификации свободных радикалов (линия Sodn1/+) и эксцизионной репарации ДНК (линия mus210G1/+) оказались наиболее чувствительными к изменению длины светового дня по сравнению с линией дикого типа Canton-S (табл. 1, рис. 2, 4). В подавляющем большинстве сравнений разница между продолжительностью жизни на свету и в темноте у самцов более значительна, чем у самок, что особенно выражено у линии с нарушением Sod. Это согласуется с нашими наблюдениями и литературными данными о большей двигательной активности самцов и более высоком уровне их метаболизма по сравнению с самками (Комфорт, 1967; Дильман, 1981; Massie, Whitney, 1991). Кроме того, у самок некоторых животных антиоксидантная система защиты клеток развита лучше, чем у самцов (Москалев, 2008). Таким образом, полученные нами результаты свидетельствуют в пользу предположения о том, что определяющим фактором снижения продолжительности жизни при содержании на свету является увеличение выделения свободных радикалов и, как следствие, повреждений ДНК, за счет интенсификации метаболизма.

В настоящее время установлено, что в регуляции оксидативного стрессответа и продолжительности жизни ключевая роль принадлежит белкам семейства сиртуинов (Guarente, Kenyon, 2000). Деацетилируя гистоны и различные транскрипционные факторы (р53, FOXO), сиртуины приводят к активации экспрессии генов стресс-ответа и ингибированию апоптоза, способствуя выживаемости клетки и увеличению продолжительности жизни организма (Tanno et al., 2007; Niedernhofer et al., 2008). Согласно нашим результатам (табл. 2, рис. 6) у линии, несущей в гомозиготе делецию гена dSir2, разница в медианной продолжительности жизни в темноте и на свету была более значительна – 24-33%, чем у гетерозиготной линии Sir217/+ (0-12%) и контрольной линии дикого типа w1118 (3-17%). Таким образом, делеция гена dSir2, регулирующего устранение оксидативных повреждений (Balaban et al., 2005), обеспечивает более значимое снижение продолжительности жизни на свету, чем это ожидается, основываясь на эффектах у линии дикого типа или мутантов-гетерозигот.

Не менее важное значение в реакциях стресс-ответа клетки имеют белки теплового шока (Hsps), участвующие в процессах репарации и протеолиза повреждённых белков (Панасенко, 2003; Hunt et al., 2004; Arya et al., 2007). Кроме того, более высокая активность Hsps сопряжена с долгожительством у различных модельных животных (Morrow et al., 2004; Kimura et al., 2006). Было показано, что в отсутствии функциональной копии гена Hsp70 исчезает адаптивный ответ к воздействию индуктора свободных радикалов параквата (Турышева и др., 2008; Moskalev et al., 2008). Экспрессия гена Hsp70 усиливается при окислительных повреждениях (Guo et al., 2007; Soti, Csermely, 2007), что способствует улучшению окислительновосстановительного состояния клетки и увеличению активности антиокислительных ферментов (глутатионпероксидазы, глутатионредуктазы) (Guo et al., 2007). Мы предположили, что делеции генов семейства Hsp70 у линий дрозофил, содержащихся при 12-часовом режиме освещения, могут усугубить снижение продолжительности жизни по сравнению с затемнением. Действительно, в наших экспериментах у линий с мутациями в генах семейства Hsp70 при содержании на свету мы наблюдали более выраженную тенденцию к снижению параметров максимальной продолжительности жизни по сравнению с содержанием в темноте, чем у линии дикого типа Canton-S (табл. 3).

Таким образом, согласно нашим результатам линии с мутациями в генах стресс-ответа (Sod, mus210, dSir2, Hsp70) характеризуются более выраженной разницей между продолжительностью жизни в темноте и на свету по сравнению с диким генотипом. Эти данные свидетельствуют в пользу предположения, согласно которому снижение продолжительности жизни при содержании на свету связано с дополнительной выработкой свободных радикалов.

Мелатонин обладает выраженным антиоксидантным действием, а также участвует в регуляции циркадных ритмов у позвоночных животных (Анисимов, 1997, 2003; Armstrong, Redman, 1991; Pieri et al., 1995; Anisimov et al., 2006). Антиоксидантное действие мелатонина проявляется в защите ядерной ДНК, протеинов и липидов от окислительного повреждения. Мелатонин не только служит перехватчиком гидроксильных радикалов, но и снижает их выработку, влияя на метаболизм и подавляя Ca2+ и NO-зависимые стресс-реакции в клетке (Hardeland et al., 2003; Hardeland, 2005).

Помимо его способности непосредственно убирать чрезвычайно токсичный гидроксильный радикал, мелатонин также повышает активность антиокислительного фермента глутатионпероксидазы – мощного эндогенного фактора ферментативной защиты от радикального окисления, а также супероксиддисмутазы, глутатионредуктазы, таким образом, способствуя снижению окислительного повреждения (Анисимов, 2007; Reiter et al., 1995, 2002; Karasek, 2007). В нашем эксперименте мелатонин добавляли только на стадии имаго, что привело к увеличению различных характеристик продолжительности жизни у всех исследованных линий как в условиях круглосуточного затемнения, так и при постоянном освещении. Наибольший геропротекторный эффект мелатонина обнаружен у мутантных линий (Sodn1/ + и mus210G1/+). Мухи линии Sodn1/+ неспособны в полной мере детоксифицировать свободные радикалы, поскольку активность фермента Cu/Zn Sod у них составляет только 36.7% от нормальной (Phillips et al., 1995).

Нуклеотиды ДНК могут повреждаться, в том числе, под действием окислительного стресса. Поэтому мухи мутантной линии mus210G1/+, характеризующиеся пониженной активностью эксцизионной репарации нуклеотидов, накапливают с возрастом окисленные основания ДНК и особи быстрее стареют. Действительно, в наших экспериментах их максимальная продолжительность жизни по сравнению с линией дикого типа (в условиях затемнения) у самцов и самок ниже на 44 и 19% соответственно (табл. 4), что говорит о решающей роли в старении повреждений оснований ДНК, восстановление которых у данной линии нарушено. Однако в присутствии мелатонина (в таких же условиях круглосуточного затемнения) разрыв в максимальной продолжительности жизни сокращается и составляет 32 и 11% у самцов и самок соответственно.

Мы предположили, что добавление в корм дрозофил мелатонина приведет к уменьшению различий продолжительности жизни на свету и в темноте, прежде всего, у линий дрозофил с нарушенной активностью супероксиддисмутазы и фермента эксцизионной репарации ДНК. Однако у всех исследованных линий значения средней, медианной и максимальной продолжительности жизни в темноте без мелатонина имели существенное отличие (в пределах 8-13% и, зачастую, разнонаправленное) от значений продолжительности жизни, наблюдаемых в присутствии мелатонина при круглосуточном освещении (табл. 4). Мелатонин оказывал свое геропротекторное действие, прежде всего, в условиях темноты. Таким образом, мелатонин и освещение обуславливают продолжительность жизни дрозофил независимым друг от друга образом.

Рассмотренные выше механизмы (интенсификация метаболизма, увеличение плодовитости) рассматривают лишь эффекты, связанные с повреждающим воздействием дополнительного освещения. Нельзя исключить и другой механизм, при котором уменьшение длины светового дня (содержание в условиях затемнения) как мягкий стресс-фактор может дополнительно стимулировать защитные системы организма, не оказывая при этом повреждающего действия, что приводит к увеличению продолжительности жизни при содержании в темноте. Согласно предложенной нами нейроэндокринной гипотезе влияния света на продолжительность жизни животных (Москалев, Малышева, 2009), в ответ на укорочение длины светового дня, которое в естественных условиях местообитаний предвещает скорое наступление холодов, у животных подавляется активность инсулин/IGF- сигнального механизма, но деблокируются процессы стресс-ответа с участием транскрипционного фактора FOXO. Известно, что транскрипционные факторы семейства FOXO играют важную роль в регуляции стрессоустойчивости и продолжительности жизни животных (Boudewijn et al., 2003;

Lee et al., 2003; Kramer et al., 2003; Lam et al., 2006). В ответ на стресс FOXO запускает экспрессию генов ферментов детоксикации свободных радикалов и репарации ДНК, белков теплового шока, ингибиторов циклинзависимых киназ (Giannakou, Partridge, 2004; Huang et al., 2006). Клетка становится более устойчивой к стрессам, лучше справляется со спонтанными повреждениями, что снижает скорость старения организма в целом.

В нашем эксперименте особи, гетерозиготные по гипоморфным аллелям гена FOXO, а также особи линии дикого типа отличались существенным изменением продолжительности жизни при разных условиях освещения (табл. 5), однако у особей-гомозигот с гипоморфным генотипом (FOXO21/ FOXO25) в двух повторностях эксперимента различия продолжительности жизни в темноте и на свету были незначительными – кривые выживаемости достоверно различались лишь в одном из вариантов экспериментов у самцов (рис. 7). По-видимому, минимальные различия сохранялись по той причине, что индукция FOXO-зависимых механизмов стрессоустойчивости может осуществляться не только в ответ на подавление выработки инсулиноподобных пептидов в темноте, но и в ответ на окислительный стресс при освещении, что в отсутствии FOXO усугубило эффект снижения продолжительности жизни при освещении.

Полученные нами результаты внесли новый вклад в понимание генетических механизмов регуляции продолжительности жизни при воздействии такого важного экологического фактора как свет. В результате проведенных нами исследований было выявлено существование двух относительно независимых путей регуляции ответа на изменение режимов освещения (рис. 8). С одной стороны, увеличение длины светового дня способствует более активной выработке свободных радикалов, которые оказывают повреждающее действие на структуры клетки, что снижает продолжительность жизни дрозофилы. Действительно, у линии с мутациями в генах Sod, mus210G1, dSir2 разница в продолжительности Рис. 8. Механизмы влияния изменения длины жизни в темноте и на свету светового дня на продолжительность жизни дрозозначительно увеличивается филы. Обозначения: ® – индукция; – ингибировапо сравнению с линией ди- ние; - – увеличение; – снижение.

кого типа, а у линий с мутациями в генах белков теплового шока семейства 70 данная закономерность наблюдается в виде тенденции. С другой стороны, снижение длины светового дня, не приводя к повреждающим эффектам, стимулирует FOXOзависимый стресс-ответ и увеличивает продолжительность жизни. В случае снижения активности гена транскрипционного фактора FOXO (FOXO21/ FOXO25) увеличение продолжительности жизни дрозофил в темноте выражено слабо, либо не наблюдается.

Таким образом, нами проведены исследования по изучению генетических механизмов влияния света на показатели приспособленности дрозофилы и представлены доказательства в пользу двух предполагаемых механизмов влияния изменений длины светового дня на продолжительность жизни животных (интенсификация метаболизма и нейроэндокринные изменения) (рис. 8).

ВЫВОДЫ

1. Освещение, независимо от длительности и интенсивности, приводит к снижению продолжительности жизни и увеличению ранней плодовитости особей линии дикого типа Canton-S по сравнению с круглосуточным затемнением.

2. У линий, характеризующихся нарушениями детоксикации свободных радикалов (Sodn1/+), эксцизионной репарации ДНК (mus210G1/+) и стресс-ответа (Sir22A-7-11) различия между продолжительностью жизни особей на свету и в темноте более выражены, чем у линий дикого типа. Данный результат свидетельствует, что уменьшение продолжительности жизни на свету у дрозофилы происходит за счет интенсификации метаболизма и, как следствие, более активной выработки свободных радикалов.

3. У линии дрозофилы с мутацией гена гомолога PCNA, участвующего в репликации и репарации ДНК, обнаружено одновременное увеличение продолжительности жизни и плодовитости при содержании в условиях освещения, по сравнению с содержанием в темноте.

4. У линии дикого типа и гетерозигот с гипоморфными аллелями гена FOXO (FOXO21 и FOXO25) сохранялась значительная разница продолжительности жизни при содержании в темноте и на свету, у гомозиготных особей (FOXO21/ FOXO25) она не была выражена. Таким образом, выявлена связь увеличения продолжительности жизни дрозофил в темноте с активностью транскрипционного фактора стресс-ответа FOXO.

5. Установлено, что модифицирующее действие мелатонина на продолжительность жизни дрозофил зависит от режима освещения, пола и генотипа линий. Наибольший геропротекторный эффект мелатонина обнаружен при содержании особей дрозофил в условиях темноты, а также у линий с нарушением детоксификации свободных радикалов и репарации ДНК (Sodn1/+ и mus210G1/+) по сравнению с контрольной линией дикого типа Canton-S.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

В изданиях, рекомендованных ВАК:

1. Москалев А.А., Шосталь О.А., Зайнуллин В.Г. Генетические аспекты влияния различных режимов освещения на продолжительность жизни дрозофилы // Успехи геронтологии. – 2006. – Вып. 18. – С. 55-58.

2. Москалев А.А., Кременцова А.В., Малышева О.А. Влияние мелатонина на продолжительность жизни Drosophila melanogaster при различных режимах освещения // Экологическая генетика. – 2008. – Т. 6. – № 3. – С. 22-30.

3. Москалев А.А., Малышева О.А. Роль светового режима в регуляции продолжительности жизни Drosophila melanogaster // Экология. – 2009. – № 3. – С. 221-226.

4. Москалев А.А., Малышева О.А. // Роль генов транскрипционного фактора dFOXO, dSIR2 и HSP70 в изменении продолжительности жизни Drosophila melanogaster при различных режимах освещения // Экологическая генетика. – 2010. – Т. 8. – № 3. – С. 67-80.

В прочих изданиях:

5. Москалев А.А., Малышева О.А. Действие различных условий освещения и мелатонина на продолжительность жизни дрозофил // Тез.докл.

научной конференции молодых ученых с международным участием Института геронтологии АМН Украины (Киев, 27 января 2009 г.). – Киев, 2009. – С. 72.

6. Moskalev A.A., Malysheva O. A. Drosophila melanogaster life span after melatonin influence at different light regimes // Aging, cancer and age-related diseases: common mechanism?: Lecturers’ Abstr. 13th IABG Congress – Quebec (Canada, 2009). – P. 21.

Лицензия № 19-32 от 26.11.96 г. КР 0033 от 03.03.97 г.

Института биологии Коми научного центра Уральского отделения РАН 167982, г. Сыктывкар, ул. Коммунистическая, д.

 
Похожие работы:

«Пиотровский Михаил Сергеевич Участие НАДФН-оксидазы плазмалеммы в генерации супероксид-анион радикала в апопласте 03.01.05 – физиология и биохимия растений Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Москва – 2012 1 Работа выполнена в лаборатории мембран растительных клеток Федерального государственного бюджетного учреждения науки Института физиологии растений им. К.А. Тимирязева Российской академии наук, г. Москва Научный руководитель :...»

«Нетесонова Ирина Анатольевна Гумусовое и структурное состояние эродированных почв зонального ряда Специальность 03.02.13 – почвоведение АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Москва – 2010 Работа выполнена на кафедре почвоведения и в Испытательном центре почвенно-экологических исследований Российского государственного аграрного университета – МСХА имени К.А. Тимирязева Научный руководитель : заслуженный деятель науки РФ, доктор...»

«АНАНЬКО Григорий Григорьевич БИОНЕМАТИЦИД НА ОСНОВЕ ГРИБА-ГЕЛЬМИНТОФАГА DUDDINGTONIA FLAGRANS F-882 03.01.06 – биотехнология (в том числе бионанотехнологии) Автореферат диссертации на соискание учёной степени кандидата биологических наук Кольцово - 2012 Работа выполнена в Федеральном бюджетном учреждении науки Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии Вектор Научный руководитель доктор биологических наук, профессор Теплякова Тамара Владимировна Официальные...»

«МЕТАЛЛОВ Алексей Владимирович ЭКОЛОГО-БИОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ АДАПТАЦИИ У СОРТОВ ЛЮЦЕРНЫ В УСЛОВИЯХ ПРЕДБАЙКАЛЬЯ 03.00.16 – экология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Улан-Удэ, 2009 Работа выполнена в Иркутской государственной сельскохозяйственной академии доктор биологических наук, профессор Иван Научный руководитель : Экидиусович Илли доктор биологических наук, Официальные оппоненты : профессор Владимир Капсимович Кашин...»

«Прутенская Екатерина Анатольевна Микробиологическая конверсия растительных отходов в гуминовые вещества 03.00.07 – Микробиология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Москва – 2008 Работа выполнена на кафедре биотехнологии и химии Тверского государственного технического университета. Научный руководитель : доктор биологических наук, профессор Воробьева Галина Ивановна Официальные оппоненты : доктор биологических наук, профессор...»

«АХМЕТЗЯНОВА ЛЕЙСАН ГАББАСОВНА АЛГОРИТМ ОПРЕДЕЛЕНИЯ БЕЗОПАСНОГО ДЛЯ РАСТЕНИЙ И МИКРООРГАНИЗМОВ СОДЕРЖАНИЯ НЕФТЕПРОДУКТОВ В РЕКУЛЬТИВИРУЕМОЙ ПОЧВЕ 03.02.08 – экология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук КАЗАНЬ, 2011 Работа выполнена на кафедре прикладной экологии факультета географии и экологии Федерального государственного автономного образовательного учреждения высшего профессионального образования Казанский (Приволжский)...»

«ЗАГУРНАЯ ЮЛИЯ СЕРГЕЕВНА ВЛИЯНИЕ ФРАГМЕНТАЦИИ НА ВИДОВОЕ БОГАТСТВО И СОСТАВ ФИТОЦЕНОЗОВ ШИРОКОЛИСТВЕННЫХ ЛЕСОВ ЗАПАДНОГО ПРЕДКАВКАЗЬЯ 03.02.08 – экология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Ростов-на-Дону - 2010 2 Работа выполнена на кафедре экологии и защиты окружающей среды Майкопского государственного технологического университета Научный руководитель : доктор биологических наук, профессор Акатов Валерий Владимирович Официальные...»

«АНДРЕЕВА Алевтина Сергеевна ЖУКИ-ЛИСТОЕДЫ (COLEOPTERA: CHRYSOMELIDAE) БЕЛГОРОДСКОЙ ОБЛАСТИ: ФАУНА, ЭКОЛОГИЯ, ХОЗЯЙСТВЕННОЕ ЗНАЧЕНИЕ 03.02.08 – Экология Автореферат диссертации на соискание учёной степени кандидата биологических наук Белгород – 2014 Работа выполнена на кафедре биоценологии и экологической генетики ФГАОУ ВПО Белгородский государственный национальный исследовательский университет Научный руководитель : доктор биологических наук, доцент Присный Александр...»

«ЗОЛФАГАРИ АМИР СТРАТЕГИИ РАЗМНОЖЕНИЯ И ПОДДЕРЖАНИЯ ЖИЗНЕСПОСОБНОСТИ PHYTOPHTHORA INFESTANS В ИРАНСКОМ ГОЛЕСТАНЕ И МОСКВЕ ПРИ ПРИМЕНЕНИИ ФУНГИЦИДОВ И РАСТИТЕЛЬНЫХ ЭКСТРАКТОВ Специальности: 06.01.07 – защита растений 03.02.12 – микология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Москва – 2012 Работа выполнена в Российском государственном аграрном университете – МСХА имени К.А. Тимирязева Научный Доктор биологических наук, профессор кафедры...»

«СМЕКАЛОВ Михаил Андреевич ВЛИЯНИЕ БИОВЕРМИКУЛИТА НА ВЫВЕДЕНИЕ ТЯЖЕЛЫХ МЕТАЛЛОВ ИЗ ОРГАНИЗМА И НОРМАЛИЗАЦИЮ ОБМЕНА ВЕЩЕСТВ У КОРОВ В УСЛОВИЯХ ТЕХНОГЕННОЙ ЗОНЫ 03.01.04 — Биохимия Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Дубровицы, 2011г. Работа выполнена в отделе биохимических и химико-аналитических исследований Государственного научного учреждения Всероссийский научно-исследовательский институт животноводства Российской академии...»

«БОЛТОВИЧ ИРИНА МИХАЙЛОВНА КЛИНИКО-БИОРИТМОЛОГИЧЕСКИЕ ЭФФЕКТЫ КОМБИНИРОВАННЫХ ОРАЛЬНЫХ КОНТРАЦЕПТИВОВ У ЗДОРОВЫХ ЖЕНЩИН 03.00.13 - Физиология 14.00.01 – Акушерство и гинекология Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Тюмень – 2007 Работа выполнена в БУ ВПО Ханты-Мансийского автономного округа - Югры Ханты-Мансийский государственный медицинский институт Научный руководитель : доктор медицинских наук Соловьёв Сергей Владимирович...»

«САМСОНОВА ИРИНА ДМИТРИЕВНА МЕДОНОСНЫЕ РЕСУРСЫ СТЕПНОГО ПРИДОНЬЯ Специальность 03.02.14 – биологические ресурсы Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук Москва - 2014 1 Работа выполнена на кафедре мелиораций земель в Федеральном государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования Новочеркасская государственная мелиоративная академия Научный консультант : Добрынин Николай Дмитриевич, доктор...»

«БОНДАРЕНКО Александр Сергеевич АУТЭКОЛОГИЯ И МИГРАЦИОННАЯ АКТИВНОСТЬ МАССОВЫХ ВИДОВ ЖУЖЕЛИЦ (COLEOPTERA, CARABIDAE) НАГОРНОЙ ЧАСТИ СЕВЕРО-ЗАПАДНОГО КАВКАЗА 03.02.08 – экология (биологические наук и) АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Краснодар – 2013 Работа выполнена на кафедре фитопатологии, энтомологии и защиты растений факультета защиты растений ФГБОУ ВПО Кубанский государственный аграрный университет Научный руководитель :...»

«Сорокин Иван Дмитриевич Диазотрофы содовых солончаков Специальность 03.00.07 – микробиология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Москва, 2008 2 Работа выполнена в Институте микробиологии им. С.Н.Виноградского РАН Научный руководитель : кандидат биологических наук И.К. Кравченко Официальные оппоненты : доктор биологических наук Т.Н. Жилина доктор биологических наук А.Л. Степанов Ведущая организация : Институт биохимии и физиологии...»

«Гапочка Михаил Германович ЭКОЛОГИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ ЭЛЕКТРОМАГНИТНЫХ ПОЛЕЙ МИЛЛИМЕТРОВОГО ДИАПАЗОНА С БИОЛОГИЧЕСКИМИ ОБЪЕКТАМИ Специальность 03.02.08 – экология (биология) АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук Москва – 2013. 1 Работа выполнена на кафедре гидробиологии биологического факультета Федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования Московский государственный...»

«СОЛОВЬЕВА ИРИНА ВЛАДЛЕНОВНА МИКРОЭКОЛОГИЧЕСКИЕ ОСНОВЫ КОРРЕКЦИИ ДИСБИОЗНОЙ МИКРОБИОТЫ ЧЕЛОВЕКА 03.02.08 – экология (биология) 03.02.03 – микробиология АВТОРЕФЕРАТ на соискание ученой степени доктора биологических наук Нижний Новгород 2013 2 Работа выполнена в Федеральном бюджетном учреждении науки Нижегородский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. академика И.Н.Блохиной Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и...»

«ВОЙКИНА АННА ВЛАДИМИРОВНА НАКОПЛЕНИЕ ПЕСТИЦИДОВ В КОМПОНЕНТАХ ЭКОСИСТЕМ ТАГАНРОГСКОГО И ЯСЕНСКОГО ЗАЛИВОВ АЗОВСКОГО МОРЯ И ИХ АДДИТИВНОЕ ВОЗДЕЙСТВИЕ НА ГИДРОБИОНТОВ 03.02.08 — экология (биологические наук и) АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Ростов-на-Дону - 2013 2 Работа выполнена в ФГУП Азовский научно-исследовательский институт рыбного хозяйства (АзНИИРХ), г. Ростов-на-Дону и на кафедре экологии и природопользования Южного...»

«ПАВЛОВА ЕЛЕНА ПЕТРОВНА ВЛИЯНИЕ ЭКОЛОГО-ФИТОЦЕНОТИЧЕСКИХ ФАКТОРОВ НА НАКОПЛЕНИЕ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ В ПЛОДАХ ROSA ACICULARIS LINDLEY И ROSA DAVURICA PALLAS (ЗАПАДНОЕ ЗАБАЙКАЛЬЕ) 03.00.05 – ботаника Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Улан-Удэ – 2009 Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования Восточно-Сибирский государственный технологический университет Научный...»

«МЯЗИН Владимир Александрович РАЗРАБОТКА СПОСОБОВ ПОВЫШЕНИЯ ЭФФЕКТИВНОСТИ БИОРЕМЕДИАЦИИ ПОЧВ КОЛЬСКОГО СЕВЕРА ПРИ ЗАГРЯЗНЕНИИ НЕФТЕПРОДУКТАМИ (В УСЛОВИЯХ МОДЕЛЬНОГО ЭКСПЕРИМЕНТА) 03.02.08 – экология Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Петрозаводск – 2014 2 Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении науки Институте проблем промышленной экологии Севера Кольского научного центра Российской академии наук Научный...»

«Кармазина Елена Владимировна ЭКОЛОГО-ЦЕНОТИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИТИКА МОХООБРАЗНЫХ НАЦИОНАЛЬНОГО ПАРКА РУССКИЙ СЕВЕР (ВОЛОГОДСКАЯ ОБЛАСТЬ) Специальность: 03.02.01 – ботаника Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Москва – 2013 Работа выполнена на кафедре геоботаники Федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования Московского государственного университета им. М.В. Ломоносова доктор...»






 
© 2013 www.diss.seluk.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Авторефераты, Диссертации, Монографии, Методички, учебные программы»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.