WWW.DISS.SELUK.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА
(Авторефераты, диссертации, методички, учебные программы, монографии)

 

На правах рукописи

Тихомирова Людмила Ивановна

ОСОБЕННОСТИ ИНДУЦИРОВАННОГО МОРФОГЕНЕЗА И

РЕГЕНЕРАЦИИ У РАЗЛИЧНЫХ ТИПОВ ЭКСПЛАНТОВ IN VITRO

КУЛЬТИВАРОВ ВИДОВ РОДА IRIS L.

Специальность 03.02.01 – «Ботаника»

Автореферат

диссертации на соискание учёной степени кандидата биологических наук

Барнаул, 2011 2 Диссертационная работа выполнена в Государственном научном учреждении Научно-исследовательский институт садоводства Сибири имени М.А. Лисавенко Российской академии сельскохозяйственных наук (НИИСС)

Научный руководитель: доктор сельскохозяйственных наук, профессор Долганова Зоя Владимировна

Официальные оппоненты: доктор биологических наук Седельникова Людмила Леонидовна, кандидат биологических наук Алексеева Нина Борисовна Ведущее учреждение: ГОУ ВПО «Томский государственный университет»

Защита диссертации состоится «27» мая 2011 г. в 10-00 часов на заседании диссертационного совета ДМ 212.005.10 по защите докторских и кандидатских диссертаций при ГОУ ВПО «Алтайский государственный университет» по адресу: 656049, г. Барнаул, пр. Ленина, 61; тел. (3852) 36-81-55; факс (3852) 67

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке ГОУ ВПО «Алтайский государственный университет».

Автореферат разослан «26» апреля 2011 г.

Автореферат выставлен на сайте www.asu.ru 26 апреля 2011 г.

Учёный секретарь диссертационного совета, кандидат биологических наук, доцент Н.В. Елесова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Несмотря на имеющиеся экспериментальные работы в области изучения процессов морфогенеза и регенерации растений в условиях in vitro, до сих пор остаются не разработанными системы получения in vitro для большинства многолетних садовых культур. Это обусловлено отсутствием четких хорошо воспроизводимых методик, их трудоемкостью, а также недостатком знаний о морфогенетическом потенциале органов и тканей этих культур и способах управления морфогенезом.





Род Iris L. самый большой и наиболее сложный из семейства Iridaceae Juss.

(Родионенко, 1988, 1996). Проблеме сохранения и изучения видов рода Iris посвящены работы многих российских и зарубежных авторов (Родионенко, 1961; Yabuya, 2004; Алексеева, 2005; Доронькин, 2006; Долганова, 2008;

Миронова, 2008).

Изучение регенерационной способности эксплантов генеративных органов ириса в культуре in vitro представляет собой теоретический и практический интерес. Большая часть работ проводится в области эмбриокультуры (Yabuya, 1981, 1985; Kawase et al., 1995; Ишмуратова, 1999; Болтенков, 2002;

Полковникова, 2000; Вечернина и др., 2004; Мамаева и др., 2005, 2007, 2008;

Noland et al., 2006; Jevremovic et al., 2006). Анатомического описания процессов регенерации в динамике развития в доступной нам литературе не обнаружено.

В связи с этим изучаемая проблема является актуальной и практически значимой.

Цель работы – выявить морфогенетические особенности развития различных типов эксплантов в культуре in vitro и сравнить их регенерационную способность для культиваров ириса (I. sibirica L., I. ensata Thunb., I. hybrida hort.).

Задачи:

- изучить регенерационную способность почек вегетативного побега ириса;

- показать возможный способ устранения микробного загрязнения эксплантов;

- усовершенствовать метод эмбриокультуры для данных видов ириса;

- изучить особенности реализации морфогенетического потенциала эксплантов органов цветка через прямой органогенез;

- провести анатомо-морфологический анализ тканей эксплантов репродуктивных органов интактных растений;

- сравнить методами гистологического анализа особенности прохождения морфогенеза в динамике у различных типов эксплантов генеративных органов.

Предмет исследования. Пути реализации морфогенетического потенциала различных эксплантов изучаемой культуры, особенности получения растений в условиях in vitro.

микробиологические методы, методы культуры органов и тканей.

Основные положения, выносимые на защиту:

- формированию очага меристематической активности в эксплантах органов цветка ириса (трубка околоцветника, ось соцветий) предшествует изоляция инициальной клетки и образование полиады;

- трубка околоцветника - идеальный тип экспланта для клонального микроразмножения сортов и гибридов I. sibirica, I. ensatа, I. hybrida;

- применение гистологического анализа позволит контролировать процессы на тканевом уровне, для того чтобы направлять морфогенез в нужном для исследователя русле.

Научная новизна. Впервые проведен микробиологический контроль эксплантов почек вегетативного побега ириса, введённых в культуру in vitro, и определена чувствительность к антибиотикам выделенных микроорганизмов.

Доказана необходимость введения малотоксичного антибиотика в состав питательных сред до тех пор, пока инфекция не перестанет проявлять себя, чередуя среды с антибиотиком и без него.





Доказан позитивный эффект от введения в питательную среду L-глутамина и аденин сульфата на адвентивное побегообразование у зародышей ириса.

Показано, что органы, развивающиеся у зародышей ириса в культуре in vitro, по своему анатомическому строению сходны с корневищем ириса, с несколько активизированными зонами эндогенного геммогенеза и ризогенеза.

Впервые показаны различные пути реализации морфогенетического потенциала (геммогенез, гемморизогенез, ризогенез) у соматических тканей органов цветка ириса в процессе прямой регенерации in vitro. Установлена высокая регенерационная способность трубки околоцветника в культуре in vitro у всех изученных культиваров. Показано влияние расположения экспланта на питательной среде, концентрации фитогормонов на процесс прямой регенерации растений ириса.

Впервые проведён сравнительный анализ анатомического строения разных типов эксплантов у I. sibirica, I. ensata, I. hybrida, а также гистологический анализ динамики процессов органогенеза в культуре in vitro органов цветка.

Выявлено, что формированию очага меристематической активности в эксплантах органов цветка ириса (трубка околоцветника, ось соцветий) предшествует изоляция инициальной клетки и образование полиады. Побеги образующиеся de novo эндогенного происхождения. Для I. hybrida характерно формирование гидроцитной системы.

Анатомически доказано, что адаксиальная и абаксиальная стороны трубки околоцветника у I. sibirica, I. ensata, I. hybridа отличаются по своему строению.

Адаксиальная сторона содержит адаксиальную меристему, благодаря активности которой, побеги регенерируют только на данной стороне экспланта.

Побеги, сформированные у эксплантов трубки околоцветника изученных видов ириса, имеют типичное строение для вегетативных побегов однодольных растений, а флоральные элементы развиваются на месте примордиев первых листьев.

Методами гистологического анализа выявлены сходства и различия в динамике прохождения этапов морфогенеза у разных видов ириса (I. sibirica, I.ensatа, I. hybrida) и разных типов экспланта (ось соцветия и трубка околоцветника).

Практическое значение полученных результатов. Впервые разработан способ прямой регенерации из разных типов эксплантов I. sibirica, I. ensatа, I.

hybridа, позволяющий получать активно пролиферирующую культуру ириса.

Разработан метод введения в культуру in vitrо почек вегетативного побега ириса, позволяющий получить стерильный материал, на основе микробиологического контроля, определения чувствительности выделенных микроорганизмов к антибиотикам и введения малотоксичного антибиотика, из списка предложенных, в питательную среду для культивирования эксплантов.

Усовершенствован метод эмбриокультуры ириса: определён срок изоляции зародыша, подобраны питательные среды, проведено анатомо-морфологическое изучение регенерантов.

Усовершенствованна методика приготовления гистологических препаратов. Полученные данные анатомо-морфологических исследований предоставляют возможность целенаправленно изменять определённые факторы:

гормональный состав питательной среды, тип экспланта, время культивирования для контроля морфогенеза в культуре in vitro.

Личный вклад соискателя. Результаты исследований, представленные в диссертации, получены соискателем в лаборатории биотехнологии и цитологии ГНУ НИИСС им. М.А. Лисавенко (НИИСС). Микробиологические исследования и приготовление гистологических препаратов проведено совместно с сотрудниками лабораторий бактериологии и гистологии Краевой клинической больницы г. Барнаула.

Апробация работы.

Основные положения и результаты исследований были представлены на Восьмой международной научно–практической конференции «Проблемы ботаники Южной Сибири и Монголии» (Барнаул, 2009); III Всероссийской научно-практической конференции «Биотехнология как инструмент сохранения биоразнообразия растительного мира» (Волгоград, 2010); V Международной научно–практической конференции «Аграрная наука сельскому хозяйству»

(Барнаул, 2010); Международной научно-практической конференции, посвящённой 100-летию со дня рождения З.И. Лучник «Декоративное садоводство Сибири: проблемы и перспективы» (Барнаул, 2010); Всероссийской научно-практической конференции «Ботанические сады. Проблемы интродукции» (Томск, 2010).

Публикации. По материалам диссертации опубликованы 8 научных статей, в том числе 3 статьи в рецензируемых изданиях, 5 – в сборниках материалов и тезисов конференций.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на страницах; состоит из введения, 4 глав, выводов, практических рекомендаций, 21 таблицы, 69 рисунков и приложения. Библиографический список включает 256 источников, в том числе 100 на иностранных языках.

ГЛАВА 1. МОРФОГЕНЕТИЧЕСКИЙ ПОТЕНЦИАЛ ОРГАНОВ И

ТКАНЕЙ РАСТЕНИЙ В УСЛОВИЯХ IN VITRO

В зависимости от сочетания внутренних и внешних факторов, определяющих начальные условия развития экспланта, возможны разные морфогенетические сценарии в условиях in vitro (Батыгина и др., 1978; Hussey, 1982; Бутенко, 1984, 1990, 1994; Ишмуратова и др., 1999; Дапкунене и др., 2004;

Чуб, 2005; Зарипова, 2006; Крючкова, 2005; Мамаева и др., 2005, 2007, 2008;

Журавлёв и др., 2008; Мошкин, 2008).

Методы гистологического анализа позволяют изучать морфогенез на тканевом уровне, a также управлять процессами регенерации в эксплантах в культуре in vitro. (Y. Vieth et al., 1992; Батыгина и др., 1992; Горбунова и др.,1992; Круглова и др., 1997; Чурикова и др., 1991, 1994, 1995; Мarcia et al., 2001; Барыкина и др., 2001; Набиева, 2008; Чурикова, 1993, 2010).

Ряд учёных работает над проблемой ириса в культуре ткани (Randolph, 1945; Hussey et al., 1976; G. Laublin et al., 1991; Para et al., 1992; Leifert et al., 1992; Kawase end al., 1995; Shimizu et al., 1996; Hida et al., 1999; Jeknis et al., 1999; Полковникова, 2000; Yabuya and el., 1983, 1991, 1992, 1993, 1997, 1998, 1999, 2002, 2003, 2004; Boltenkov et al., 2005; L. Radojevic, A. Subotic, S.

Jevremovic, M. Trifunovic, 2007). На основании этих работ были сделаны выводы о необходимости более глубокого изучения морфогенетического потенциала эксплантов органов и тканей ириса различными методами, проведения исследований для выявления видовых различий в процессе культивирования, включив в работу также поиск наиболее эффективных регуляторов и активаторов основных этапов органогенеза, и разработки на основе полученных результатов способов введения в культуру in vitro трудноразмножаемых видов и сортов.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Лабораторные исследования по культуре органов и тканей выполнены на базе лаборатории биотехнологии и цитологии НИИСС, согласно тематического плана научно-исследовательских работ.

В исследованиях в качестве модельных растений, использовали сорта зарубежной селекции и сорта и гибриды селекции НИИСС I. hybrida, I. ensata, I.sibirica (табл. 1).

Гибрид 5-282-98- карликовый Гибрид № 59-66-00 Стерх Гибрид 8-282-98- карликовый Гибрид 15-244-97 Гибрид 5-46- В работе придерживались общепринятых в биотехнологии методов (Бутенко, 1964). Асептическую работу проводили в ламинарных боксах. В зависимости от происхождения вводимого экспланта отрабатывались экспозиция и концентрация стерилизующего агента. Из стерилизующих средств использовали растворы этилового спирта 96% и 70%, сулемы 0,1%, сульфохлорантина 0,5%, 1% и 6%, перекиси водорода 3%, хлоргексидина 0, мг/л. В качестве фунгицида использовали 0,1% раствор тербинафина.

При исследовании морфогенетических потенций органов и тканей в условиях in vitro использовали стандартную питательную среду MS (Murashige, Skoog, 1962). В питательные среды вводили следующие фитогормоны: а) цитокининового типа действия 6-бензиламинопурин (БАП) Sigma, США 1- мкМ; б) ауксинового типа действия -нафтилуксусную кислоту (НУК) Sigma, США 3-5 мкМ.

Экспланты выращивали в культуральной комнате, где поддерживалась температура 24–26 °С, 16-часовой фотопериод, интенсивность освещения - – 4000 лк. Субкультивирование тканей и органов проводили через 15-30 суток.

Каждый эксперимент был поставлен в 10-ти кратной повторности.

Изучали морфогенетические особенности развития различных типов эксплантов: зародышей, соматических тканей репродуктивных органов, почек вегетативных побегов в культуре in vitro. Плоды были собраны через 30- суток после опыления, цветки – в фазе бутонизации при величине 20-30мм (VII этап органогенеза). Из бутонов 20 культиваров ириса были выделены следующие типы эксплантов: поперечные срезы оси соцветия и соединения околоцветник-завязь толщиной 1-2мм, фрагменты завязи (верхняя и нижняя доли), трубка околоцветника (фрагменты размером 55мм), тычиночные нити, пыльники, столбик и рыльце пестика.

Чувствительность к антибиотикам сопутствующей микрофлоры определяли методом дисков (Методические указания…, 2004).

Провели серии анатомических срезов в разные сроки культивирования эксплантов фрагментов цветка с частотой 3-5 дней. Было приготовлено постоянных препаратов по общепринятым методикам (Барыкина и др., 2004) в нашей модификации. Препараты просматривали на микроскопе МБ – 30 do MPI – 5 made in Poland при увеличении 1010, 1040. Фотографии были выполнены цифровым фотоаппаратом Sanyo VPC – S600.

Статистический анализ проводили в MS Excel 2007 c использованием стандартных показателей (Зайцев, 1990).

ГЛАВА 3. РЕАЛИЗАЦИЯ МОРФОГЕНЕТИЧЕСКОГО

ПОТЕНЦИАЛА ОРГАНОВ И ТКАНЕЙ ИРИСА (IRIS L.) В УСЛОВИЯХ

IN VITRO ПУТЁМ ПРЯМОГО ОРГАНОГЕНЕЗА

3.1. Регенерационная способность почек вегетативного побега ириса Вегетативные почки ириса находятся в почве, и их стерилизация представляет определённую трудность. Были использованы дезинфицирующие средства из разных групп отдельно и в сочетании в пяти вариантах. Жизнеспособность эксплантов (гибридов I. hybrida 5-282-98, 8-282-98, I. sibirica 5-46-99, I. ensata 1была высокая при всех испытанных способах стерилизации.

Исключением явились вегетативные почки I. hybrida при использовании хлоргексидина и раствора этанола 70% в сочетании с 3% перекисью водорода. В данных вариантах опыта гибель экспланта наступала очень быстро по причине гнили почки. Инфицированность эксплантов I. ensata, I. sibirica в течение первых 7-10 дней была не высокая, что говорит о качественной поверхностной стерилизации, но в последующем времени достигала больших величин, вероятно за счет внутренней инфекции (табл. 2). Увеличение времени стерилизации больше 20 минут приводило к массовой гибели эксплантов.

Жизнеспособность и инфицированность вегетативных почек ириса в экспозиция 20 мин. 1 - инфицированность,%; 2 - жизнеспособность,% Проведено изучение состава микроорганизмов выделенных из инфицированных эксплантов I. hybrida, I.ensata, I. sibirica, в сравнении с составом микрофлоры тканей корневищ интактных растений этих видов. Для I.

hybrida в качестве инфекционной микрофлоры эксплантов чаще всего выделялась Ervinia spp. Наличие данной бактерии в тканях корневищ интактных растений и время проявления в культуре in vitro (через 7-10 дней) говорит о том, что данная инфекция является внутренней и даже самые жёсткие способы стерилизации эксплантов для неё не эффективны. Для I. ensata, I. sibirica в качестве внутренней проявила себя грибная инфекция (табл. 3).

Микрофлора тканей корневищ I. hybrida, I. ensata, I. sibirica Вид ириса Ткани интактных растений Ervinia spp., дрожжеподобные Ervinia spp, Pseudomonas spр., I. hybrida I. ensata Грибы рода Penicillium Грибы рода Penicillium Для выделенных бактерий из родов Ervinia и Pseudomonas подобрана чувствительность к антибиотикам. Из 20 предложенных антибактериальных средств для введения в питательные среды отбирали менее токсичные антибиотики, и с высокой чувствительностью к ним микрофлоры.

При введении в культуру in vitro в питательные среды был добавлен антибиотик левомицетин в количестве 100 мг/л, контролем служила среда без антибиотиков. Для эксплантов культиваров I. ensata, I. sibirica процент инфицированности был на уровне контроля, что говорит о преобладании инфекции грибной этиологии. Для культиваров I. hybrida на средах с антибиотиком процент инфицированных эксплантов снизился до 20. Вероятно, для данного вида ириса более характерно наличие бактериальной микрофлоры.

При появлении грибной микрофлоры, использовали препарат фунгицидного действия тербинафин. Для инфицированных побегов I. hybrida, I.ensata, I. sibirica в концентрации 250 мг/л данный препарат оказался малотоксичным и эффективным.

Для выяснения зависимости регенерационных процессов от сезона, введение в культуру in vitro проводили в разные сроки: вынужденного покоя – ноябрь, активного роста – апрель, окончания роста – август. Влияние сезонных колебаний на увеличения числа побегов на эксплант отмечено не было, из одного экспланта развивался только один побег. Согласно нашим наблюдениям, использование вегетативных почек в качестве эксплантов не эффективно ввиду их высокой контаминации сопутствующей микрофлорой, и как следствие низкой регенерационной способности.

3.2. Эмбриокультура ириса Для ириса характерно замедленное развитие и дифференциация зародыша (Родионенко, 1961). Выявлено, что оптимальным сроком изоляции зародышей являются 50-80 суток после опыления цветка. После 80 суток развития семян, эндосперм становился очень плотным, что затрудняло вычленение зародыша.

После поверхностной стерилизации плодов, зародыши вычленяли из семени и помещали на поверхность искусственной питательной среды MS с различным сочетанием гормональных и не гормональных стимуляторов роста.

Лучшей питательной средой для введения зародышей явился вариант с содержанием 6мкМ БАП 5мкМ НУК+ 100 мг/л L-глутамина + 100 мг/л аденинсульфата. Размноженные регенеранты переносили для укоренения на среды, не содержащие гормональные добавки. Таким образом, за 4 месяца культивирования от одного зародыша в среднем было получено I. sibirica, гибрид 36-38-01 – 35 шт., I. hybrida, Lilac Line – 37 шт., I. ensata, гибрид 24-81шт. растений-регенерантов, пригодных для дальнейшего укоренения и адаптации к нестерильным условиям.

Была проанализирована серия поперечных анатомических срезов.

Показано, что органы, развивающиеся у зародышей ириса в культуре in vitro, очень похожи по своему анатомическому строению на корневища ириса, с несколько активизированными зонами эндогенного геммогенеза и ризогенеза.

Метод эмбриокультуры позволяет значительно сократить время получения селекционного материала ириса и размножить его в достаточном количестве в короткие сроки. Но, к сожалению, метод не пригоден для размножения сортов.

Учитывая вышесказанное, в качестве первичных эксплантов были использованы органы цветка.

3.3. Морфогенез и регенерация фрагментов цветка видов ириса Для успешной регенерации важным моментом явилась стадия развития цветков на момент введения в культуру ткани. Для выявления лучшего способа стерилизации бутонов было заложено 8 вариантов опыта. Только один вариант обеспечивал высокую стерильность органов цветка, одновременно с их высокой жизнеспособностью. Стерилизацию материала проводили в два этапа. На первом этапе бутоны, смоченные в 96% этиловом спирте, обжигали в пламени спиртовки. Следующий этап обеззараживания проводили в 0,1% растворе сульфохлорантина в течение 30 минут. Подобный способ обеспечивал на 95% стерильность материала при 100% его жизнеспособности.

Были использованы культивары I. sibirica – Лаула, Кассандра, Стерх, Berlin Ruffles, Cambridge, King of King, гибрид 21-38-01, I. ensata – Усть-Катунь, гибриды № 28-50-00, 59-66-00, 15-244-97, 1-220-97, 8-91-97, I. hybrida – Assignment, Jazzamatazz, Ланцелот, Latin Lover, Chardette.

В первые две недели культивирования in vitro все экспланты (кроме пыльников) увеличились в размерах и приобрели зелёную окраску. Далее тип морфогенетической реакции у эксплантов культиваров I. hybrida, I. ensata, I.sibirica зависел от количества и соотношения ауксинов и цитокининов, введённых в питательную среду, а также от типа первичного экспланта, каллусообразования не наблюдали.

Завязь I. sibirica и I. ensata, на питательных средах с 4-8 мкМ БАП и 3- мкМ НУК способна была регенерировать только корни, у I. hybrida регенерация отсутствовала.

Для культуры in vitro от генеративных побегов брали участки между кроющим листом и цветком. В качестве фитогормонов использовали 1-20мкМ БАП и 3-5мкМ НУК. У I. sibirica на питательных средах с 4 мкМ БАП, 4 мкМ НУК (1:1) и 4 мкМ БАП, 5 мкМ НУК (1:1,25) ответной реакцией было корнеобразование. На средах, где содержание цитокининов превышало содержание ауксинов в 1,2 раза и более, начиная с 6 мкМ БАП, фрагменты оси соцветия образовывали побеги. У культиваров I. ensata, I. hybrida на всех испытанных средах наблюдали геммогенез.

Особый тип морфогенетической реакции в культуре in vitro мы наблюдали, используя в качестве эксплантов фрагменты трубки околоцветника. Из ткани экспланта развивались структуры похожие на доли околоцветника. Со временем эти структуры приобретали характерную для цветков данного сорта окраску.

Экспланты располагали на питательной среде адаксиальной стороной. При помещении эксплантов на поверхность среды абаксиальной стороной, признаков регенерации не наблюдали за всё время культивирования. На всех испытанных питательных средах при культивировании эксплантов трубки околоцветника отмечали 100% геммогенез с флоральными элементами. В качестве контроля использовали питательную среду содержащую 1мкМ БАП и 1мкМ НУК. На данной среде все экспланты в 0 пассаже увеличились в размерах, но в дальнейшем погибли в результате некроза тканей.

При использовании в качестве эксплантов рылец, столбиков и пыльников никаких морфогенетических изменений отмечено не было в течение всего периода культивирования (70 суток). Эти экспланты в 0 пассаже увеличились в размерах, но в дальнейшем погибли в результате некроза тканей.

Регенерационная активность у эксплантов тычиночной нити и столбика пестика была отмечена в единичных случаях, не представляющих возможность для выявления закономерностей.

ГЛАВА 4. ГИСТОЛОГИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ ЭТАПОВ

МОРФОГЕНЕЗА В ЭКСПЛАНТАХ ОРГАНОВ ЦВЕТКА ИРИСА В

УСЛОВИЯХ IN VITRO

4.1. Этапы морфогенеза в эксплантах органов цветка видов ириса Изучение анатомического строения оси соцветия I. sibirica сорта Berlin Ruffles и I. ensata гибрид 28, I. hybrida сорта Jazzamatazz (VI-VII этапы органогенеза) показало следующее. Генеративный побег покрыт эпидермой, образованной одним слоем клеток с кутикулой. Эпидермальные клетки плотно сомкнуты, имеют таблитчатую форму. Антиклинальные стенки клеток ровные.

Клетки эпидермиса I. sibirica содержат пигмент в клеточном соке, у I. ensatа и I.

hybrida пигмента в клетках не обнаружено.

Первичная кора оси соцветия I. ensata состоит из 15 слоев паренхимных клеток. Эти клетки имеют почти сферическую форму с тонкими целлюлозными стенками. У I. sibirica 11-12 слоёв клеток изодиаметрической формы.

Цитоплазма клеток первичной коры I. ensata содержит продукты обмена веществ, вероятно крахмальные зёрна, пигментных включений не наблюдается.

Напротив, I. sibirica содержит пигментные включения также и в клетках паренхимы первичной коры, зёрна крахмала не обнаружены. Общим для этих видов является содержание очагов интеркаллярной меристемы между паренхимными клетками первичной коры.

При малом увеличении (1010) хорошо видно кольцо клеток, представляющее собой многорядный перицикл. У I. sibirica перицикл состоит из 4 клеточных слоёв. Под этим слоем располагаются проводящие пучки центрального цилиндра. У I. ensata перицикл имеет форму многогранника, состоит из 2-3 клеточных слоёв, в котором располагаются сплошной линией проводящие пучки (рис. 1). У I. hybrida сорта Jazzamatazz под эпидермисом изодиаметрической формы, плотно сомкнуты. Между клетками первичной коры отмечены проводящие пучки.

Центральный цилиндр представлен клетками перицикла, основной паренхимой и закрытыми коллатеральными пучками. Клеток склеренхимы на данном этапе развития генеративного побега не обнаружено. Вся внутренняя осевая часть генеративного побега состоит из основной паренхимы, среди которой повсюду рассеяны закрытые проводящие пучки. Проводящие пучки располагаются в беспорядке. На периферии их больше, но они мелкие, в центре оси соцветия их меньше, но они крупнее. Центральный цилиндр у I. sibirica, I.

ensata и I. hybrida имеет сходное анатомическое строение.

Рис. 1. Анатомическое строение оси соцветия I. ensata гибрид 28 (VI – VII этапы органогенеза); а) первичная кора и многорядный перицикл. (Увел. 10 10), б) очаг интеркалярной меристемы. (Увел. 10 40).

4.2. Сравнительный анализ гистогенеза и органогенеза в эксплантах генеративных органов культиваров I. hybrida, I. ensata, I. sibirica При гистологическом исследовании установлено, что морфогенетические процессы в эксплантах осевой природы (цветоносах) в культуре in vitro культиваров I. hybrida, I. ensata, I. sibirica проходят однотипно, что подтверждает близость на родовом уровне данных видов ириса.

Способность к дедифференциации и восстановлению меристематической активности в цветоносах ириса проявляют, прежде всего, клетки перицикла и нескольких прилегающих к нему внутренних слоёв первичной коры. Клеточные деления постепенно распространяются центробежно и центростремительно, вовлекая в этот процесс все слои клеток первичной коры, а также клетки обкладок проводящих пучков. По всей видимости, это особенность рода Iris. У гиацинта и нарцисса, описанных ранее О. А. Чуриковой (2005), меристематическую активность в начале процесса регенерации проявляют клетки неповреждённого субэпидермального и нескольких прилегающих к нему наружных слоёв первичной коры.

Первые деления клеток эксплантов I. ensata и I. sibirica отмечали спустя суток после помещения их на питательную среду. Этому предшествовала изоляция инициальной клетки, и в результате нескольких делений образование полиады (рис. 2). Экспланты I. hybrida обладают большей регенерационной активностью, первые полиады наблюдали на 4 сутки культивирования, а первые визуальные признаки геммогенеза – после 14 суток культивирования на данных питательных средах. Это на несколько дней раньше, чем у I. ensata и I. sibirica.

Рис. 2. Анатомическое строение эксплантов оси соцветия I. sibirica сорт Berlin Ruffles на 10-е сутки культивирования: а) образование меристематического пояса (увел. 1010); б) возникновение полиад (увел. 1040) Формирование гидроцитной системы было выявлено только в эксплантах I.hybrida, у I. ensata и I. sibirica не наблюдали. Подобные васкулярные элементы отмечены ранее для гиацинтов, нарциссов, лилий (Чурикова, 2005;

Набиева, 2008). Вероятно, это связано с местом обитания данных видов и условиями произрастания. I. hybrida способен расти в условиях повышенной сухости верхних горизонтов почвы. Его ткани запасают воду при помощи проводящей системы. Произрастание I. ensata и I. sibirica исторически связано с переувлажнёнными почвами, и делать запасы воды в тканях нет необходимости.

Побеги, развившиеся на эксплантах оси соцветия I. hybrida, I. ensata и I.sibirica имели исключительно эндогенное происхождение (рис. 3).

Рис.3. Эксплант оси соцветия I. hybrida сорт Jazzamatazz на 22 сутки культивирования:

а) внешний вид, б) анатомо-морфологическое строение (поперечный срез) (вел. 1010) Нами установлено, что регенерационной способностью обладала только адаксиальная сторона трубки околоцветника. При гистологическом анализе отмечен разный уровень регенерационной активности тканей внешней и внутренней стороны трубки околоцветника I. hybrida, I. ensata, I. sibirica (рис.

4).

Рис. 4. Анатомическое строение трубки околоцветника I. ensata гибрид 28 на VI–VII этапах органогенеза; а) абаксиальная, б) адаксиальная сторона экспланта (увел. 10 10) В субэпидермальных слоях адаксильной стороны клетки паренхимы не утратили способности к меристематической активности. Именно здесь возникали полиады, из которых формировались множественные очаги деления и закладывались вегетативные побеги. На испытанных вариантах питательных сред с содержанием 4-8 мкМ БАП и 3-5мкМ НУК, отмечен геммогенез у всех культиваров данных видов ириса (рис. 5).

Рис. 5. Анатомическое строение трубки околоцветника I. ensata гибрид 28 на 12 сутки развития; а) многочисленные полиады, б) усиление меристематической активности вдоль проводящих пучков (увел. 10 10) У 100% сформированных побегов вместо примордиев первых листьев развивались структуры похожие на доли околоцветника. Отмеченный феномен циклического воспроизводства генеративных структур может быть интерпретирован как результат экспрессии регуляторных генов, запускающих определённые морфогенетические процессы, что представляет, несомненно, теоретический интерес в изучении биологии развития цветковых растений (рис.5,7).

Рис. 6. Анатомо – морфологическое строение экспланта трубки околоцветника I. sibirica сорт Berlin Rufles на 25 сутки культивирования; а) внешний вид экспланта б) венчиковидный вырост, сформированный de novo, продольный срез (увел. 1040), в) устьице (увел. 10 40) При сравнении динамики прохождения этапов гистогенеза и органогенеза в эксплантах трубки околоцветника у культиваров I. hybrida, I. ensata, I.sibirica в основном была отмечена их синхронность и однотипность.

Рис. 7. Флоральные элементы: а) I. sibirica, б) I. ensatа, в) I. hybrida При дальнейшем культивировании эксплантов трубки околоцветника с целью получения активно пролиферирующей культуры, необходимо было изменить гормональный состав питательных сред, определяющим в этом являлось содержание цитокининов. Для I. sibirica содержание БАП должно быть в пределах 5-7,5мкМ, для I. ensata – 15-17,5мкМ, для I. hybrida – 2,5мкМ.

Отличием также явилось заложение гидроцитной системы у эксплантов I.hybrida сорт Jazzamataz. У I. sibirica сорт Berlin Ruffles и I. ensata гибрид подобного явления не наблюдали.

4.3. Морфогенез и регенерационная способность эксплантов околоцветник - завязь сортов и гибридов I. sibirica, I. ensata и I. hybrida В целях микроклонального размножения I. ensata, K. Kawase (1995) первым использовал соединение околоцветник - завязь в качестве эксланта. В формировании пограничной зоны между венчиком и завязью принимают участие различные морфологические структуры: столбик пестика, трубка околоцветника, завязь, и на всём протяжении эта зона имеет неоднородную гистологическую структуру. В зависимости от того, какие именно её фрагменты использовали в качестве эксплантов, могут проявляться и различные особенности морфогенетической реакции последних.

Уже на 4-е сутки после введения в культуру in vitro отмечены очаги регенерационной активности с образованием полиад. Далее формирование и развитие меристематических зон у экспланта околоцветник-завязь происходило аналогично таковому у трубки околоцветника.

Сформированные побеги несли флоральные элементы, что подтверждает их происхождение из тканей трубки околоцветника, её базальной части (рис. 8).

Рис. 8. Регенерация побегов с флоральными элементами у эксплантов околоцветник-завязь I. sibirica сорт Стерх на питательной среде MS с 4мкМ БАП и 3мкМ НУК.

ВЫВОДЫ

Использование вегетативных почек I. hybrida, I. ensata, I. sibirica в качестве эксплантов не эффективно ввиду их высокой контаминации сопутствующей микрофлорой и низкой регенерационной способности. Для I.hybrida в качестве инфекционной микрофлоры эксплантов чаще всего выделялась Ervinia spp., для I. ensata и I. sibirica в качестве внутренней проявляла себя грибная инфекция.

Для получения стерильной активно пролиферирующей культуры необходимо провести микробиологический контроль эксплантов вегетативных почек введённых в культуру, определить чувствительность к антибиотикам выделенных микроорганизмов и добавлять малотоксичный антибиотик в состав питательной среды до тех пор, пока инфекция не перестанет проявлять себя, чередуя среды с антибиотиком и без него.

Оптимальный срок введения в культуру in vitro для зародышей ириса (I.hybrida, I. ensata, I. sibirica) 50-80 суток после опыления. Лучшей питательной средой явился вариант с содержанием MS + 6мкМ БАП +5мкМ НУК+ 100 мг/л L-глутамина + 100 мг/л аденинсульфата.

Завязь у культиваров I. sibirica и I. ensata на питательных средах MS с 4- мкМ БАП и 3-5 мкМ НУК способна регенерировать только корни, у культиваров I. hybrida регенерация отсутствовала. У всех изученных видов ириса, при использовании в качестве эксплантов рылец, столбиков и пыльников никаких морфогенетических изменений на вышеописанных средах не отмечено.

Из всех типов эксплантов наибольшим регенерационным потенциалом обладали ось соцветия, трубка околоцветника, соединение околоцветник-завязь, не зависимо от видовой принадлежности растения.

На питательных средах MS с 4-8 мкМ БАП и 3-5 мкМ НУК фрагменты оси соцветия культиваров I. ensata, I. hybrida формировали только побеги. Тип морфогенетической реакции у I. sibirica, зависел от количества и соотношения экзогенных фитогормонов. На питательных средах MS с 4 мкМ БАП, 4 мкМ НУК (1:1) и 4 мкМ БАП, 5 мкМ НУК (1:1,25) ответной реакцией было корнеобразование, в вариантах, где содержание БАП превышало содержание НУК, регенерировали побеги.

Репродукция de novo элементов цветка устойчиво сохранялась у эксплантов трубки околоцветника всех изученных генотипов ириса не зависимо от концентрации фитогормонов в пределах опыта. Сформированные побеги имели строение типичное для вегетативных побегов однодольных растений.

8. Формированию очага меристематической активности во всех эксплантах органов цветка предшествует изоляция инициальной клетки и в результате нескольких делений образование полиады. Побеги образующиеся у всех типов эксплантов имеют эндогенное происхождение.

Морфогенетические процессы в эксплантах осевой природы (в цветоносах) в культуре in vitro I. hybrida, I. ensata, I. sibirica проходят однотипно, что подтверждает близость на родовом уровне данных видов ириса.

При этом у эксплантов I. hybrida первые полиады наблюдали на 4 сутки культивирования, а первые визуальные признаки геммогенеза – после 14 суток культивирования на данных питательных средах, это на несколько дней раньше, чем у I. ensata и I. sibirica. Формирование гидроцитной системы было выявлено только в эксплантах I. hybrida.

Адаксиальная и абаксиальная стороны трубки околоцветника у I. sibirica, 10.

I. ensata, I. hybridа на VI-VII этапах органогенеза отличаются по анатомическому строению. Адаксиальная сторона содержит адаксиальную меристему, вероятно, благодаря активности которой, побеги регенерируют только на данной стороне экспланта.

Синхронность и аналогичность прохождения этапов гистогенеза и 11.

органогенеза в эксплантах трубки околоцветника у I. hybrida, I. ensata, I. sibirica была отмечена при сравнении их динамики.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. В питательные среды для введения в культуру in vitro вегетативных почек ириса, необходимо добавлять малотоксичный антибиотик из списка предложенных на основе определения к ним чувствительности микроорганизмов – контаминантов, выделенных у эксплантов.

2. Стерилизацию бутонов (на VI–VII этапах органогенеза) необходимо проводить в условиях ламинар-бокса в два этапа. На первом этапе бутоны, смоченные в 96% этиловом спирте, обжигают в пламени спиртовки, следующий этап обеззараживания проводят в 0,1% растворе сульфохлорантина в течение минут. Это обеспечивает 95% стерильности фрагментов цветка при 100% их жизнеспособности.

3. Экспланты фрагментов трубки околоцветника в культуре in vitro необходимо располагать адаксиfльной стороной на поверхности питательной среды, содержащей 4-8 мкМ БАП и 3-5 мкМ НУК, для активации регенерационных процессов.

4. Для приготовления постоянных гистологических препаратов органов цветка ириса, необходимо в качестве фиксатора использовать 10% формалин, а для проводки использовать ацетон.

5. Анатомо-морфологическое исследование эксплантов и изучение морфогенеза в динамике на тканевом уровне обязательно для выбора регенерационноспособных эксплантов и контроля прохождения этапов морфогенеза.

6. Разработанный способ прямой регенерации ириса рекомендуется использовать для получения активно пролиферирующей культуры ценных сортов и гибридов в условиях in vitro.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ СТАТЕЙ

1. Тихомирова Л.И. Особенности морфогенеза Iris sibirica L. в культуре in vitro. // Проблемы ботаники Южной Сибири и Монголии. Материалы восьмой международной научно–практической конференции – Барнаул, 2009. С. 364Тихомирова Л.И. Особенности введения в культуру in vitro ириса сибирского (I. sibirica L.). // Аграрная наука сельскому хозяйству. Сборник статей V Международной научно – практической конференции – Барнаул, 2010. Книга 2. С. 380-383.

•3. Тихомирова Л.И. Получение растений-регенерантов ириса из изолированных зародышей в условиях in vitro // Вестник Алтайского государственного аграрного университета. 2010. № 7 (69). С. 45-49.

4. Тихомирова Л.И. Смирнов С.В. Морфогенез в культуре генеративных органов ириса сибирского и его гистологические аспекты. // Биотехнология как инструмент сохранения биоразнообразия растительного мира. Сборник статей по материалам III Всероссийской научно-практической конференции. – Волгоград, 2010. С 276-282.

5. Тихомирова Л.И. Смирнов С.В. Эмбриокультура ириса сибирского (I. sibirica L.). // Декоративное садоводство Сибири: проблемы и перспективы. Материалы Международной научно-практической конференции, посвящённой 100-летию со дня рождения З.И. Лучник Барнаул, 2010. С. 188-192.

6. Тихомирова Л.И. Особенности микроклонального размножения сортов и гибридов ириса сибирского (I. sibirica L.) // Труды Томского государственного университета. Сер. биологическая. – Томск: Изд-во Том. ун-та, 2010. – Т. 274. – С. 377-381.

•7. Тихомирова Л.И. Получение стерильной активно пролиферирующей культуры ириса в условиях in vitro // Достижения науки и техники АПК. 2010.

№ 8. С. 37-40.

•8. Тихомирова Л.И. Особенности индукции морфогенеза из различных фрагментов цветка ириса в культуре in vitro // Turczaninowia. 2010. № 3 (3).

С. 147-151.

• журналы рекомендованные ВАК.

ОПРЕДЕЛЕНИЯ, ОБОЗНАЧЕНИЯ

гемморизогенез - образование корней и побегов;

геммогенез – образование почек;

гидроциты – крупные клетки с сетчатым или спиралевидным утолщением клеточной стенки;

пассаж – время между двумя субкультивированиями;

полиада – группа клеток под одной оболочкой;

пролиферация – новообразование тканей и клеток путём размножения;

регенерант – растение, возникшее in vitro из соматических тканей;

регенерационная способность – сумма признаков, проявляющихся на изолированном органе in vitro: каллусообразование, ризогенез, геммогенез (Лутова и др.1994);

субкультивирование – перенос клеток в другой культуральный сосуд на свежую питательную среду.



 
Похожие работы:

«ВАСИЛЬЧЕНКО Алексей Сергеевич ИССЛЕДОВАНИЕ МОРФО-ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ РЕАКЦИИ БАКТЕРИЙ НА РАЗЛИЧНЫЕ ВОЗДЕЙСТВИЯ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ АТОМНО-СИЛОВОЙ МИКРОСКОПИИ 03.02.03 – микробиология Aвтореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Пермь – 2012 2 Работа выполнена в ФГБОУ ВПО Оренбургский государственный университет на кафедре микробиологии и в Центре коллективного пользования приборным оборудованием Институт микро- и нанотехнологий доктор медицинских...»

«Добровольский Олег Павлович ИЗМЕНЕНИЯ В СОСТАВЕ ОХОТНИЧЬИХ МЛЕКОПИТАЮЩИХ РОСТОВСКОЙ ОБЛАСТИ В ПОСЛЕДНИЕ ДЕСЯТИЛЕТИЯ Специальность 03.02.08 – экология (биологические наук и) АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Ростов-на-Дону - 2013 2 Работа выполнена на кафедре зоологии ФГАОУ ВПО Южный Федеральный университет доктор сельскохозяйственных наук, Научный руководитель : профессор Миноранский Виктор Аркадьевич Официальные оппоненты :...»

«Шелудченков Антон Александрович Исследование механизма цитотоксического действия белкового комплекса Tag7-Hsp70 на опухолевые клетки специальность 03.01.03 – молекулярная биология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учёной степени кандидата биологических наук Москва – 2014 Работа выполнена в лаборатории молекулярной иммуногенетики рака Федерального государственного бюджетного учреждения науки Института биологии гена Российской академии наук. Научный руководитель : доктор...»

«ПАНОВ Алексей Валерьевич ОБОСНОВАНИЕ, ОЦЕНКА ЭФФЕКТИВНОСТИ И ОПТИМИЗАЦИЯ ЗАЩИТНЫХ И РЕАБИЛИТАЦИОННЫХ МЕРОПРИЯТИЙ НА ТЕРРИТОРИЯХ, ПОДВЕРГШИХСЯ ЗАГРЯЗНЕНИЮ ПОСЛЕ АВАРИИ НА ЧЕРНОБЫЛЬСКОЙ АЭС Специальность: 03.00.01 – радиобиология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук Обнинск - 2009 2 Работа выполнена в Государственном научном учреждении Всероссийский научноисследовательской институт сельскохозяйственной радиологии и агроэкологии...»

«ИВАНЕНКОВ ЯН АНДРЕЕВИЧ МОДЕЛИРОВАНИЕ БИОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ НИЗКОМОЛЕКУЛЯРНЫХ ОРГАНИЧЕСКИХ СОЕДИНЕНИЙ С ПРИМЕНЕНИЕМ КОМПЬЮТЕРНЫХ МЕТОДОВ АНАЛИЗА МУЛЬТИПАРАМЕТРИЧЕСКИХ ДАННЫХ 03.01.04 – Биохимия АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Уфа – 2010 Работа выполнена в Исследовательском институте химического разнообразия (ИИХР) совместно с Учреждением Российской академии наук Институт физиологически активных веществ РАН (ИФАВ РАН) Научный...»

«АФАНАСЬЕВА Евгения Георгиевна МОЛЕКУЛЯРНЫЕ МЕХАНИЗМЫ МЕЖВИДОВЫХ БАРЬЕРОВ В ПЕРЕДАЧЕ ПРИОННОГО СОСТОЯНИЯ У ДРОЖЖЕЙ Специальность 03.01.03 – молекулярная биология Автореферат диссертации на соискание учёной степени кандидата биологических наук Москва 2011 Работа выполнена в лаборатории молекулярной генетики Института экспериментальной кардиологии ФГУ РКНПК МЗ и СР РФ. Научный руководитель : доктор биологических наук Кушниров Виталий Владимирович Официальные оппоненты : доктор...»

«АХМЕТЗЯНОВА ЛЕЙСАН ГАББАСОВНА АЛГОРИТМ ОПРЕДЕЛЕНИЯ БЕЗОПАСНОГО ДЛЯ РАСТЕНИЙ И МИКРООРГАНИЗМОВ СОДЕРЖАНИЯ НЕФТЕПРОДУКТОВ В РЕКУЛЬТИВИРУЕМОЙ ПОЧВЕ 03.02.08 – экология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук КАЗАНЬ, 2011 Работа выполнена на кафедре прикладной экологии факультета географии и экологии Федерального государственного автономного образовательного учреждения высшего профессионального образования Казанский (Приволжский)...»

«КУДРЯВЦЕВА Ольга Александровна ИНДУКЦИЯ ГЕНЕТИЧЕСКОЙ НЕСТАБИЛЬНОСТИ PODOSPORA ANSERINA (RABENH.) NIESSL В ПРОЦЕССЕ ПРОДОЛЖИТЕЛЬНОГО ГЛУБИННОГО КУЛЬТИВИРОВАНИЯ Специальность 03.02.12 – микология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Москва 2011 Работа выполнена на кафедре микологии и альгологии Биологического факультета Московского государственного...»

«Курбанова Патимат Магомедкадиевна ГЕНЕТИЧЕСКОЕ РАЗНООБРАЗИЕ ЯРОВОЙ МЯГКОЙ ПШЕНИЦЫ ПО ЭФФЕКТИВНОЙ ВОЗРАСТНОЙ УСТОЙЧИВОСТИ К ЛИСТОВОЙ РЖАВЧИНЕ Специальность: 03.02.07 – генетика АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Санкт-Петербург 2011 Диссертационная работа выполнена в лаборатории иммунитета отдела генетики Всероссийском научно-исследовательском институте растениеводства им. Н.И. Вавилова в 2005 – 2009 гг. Научный руководитель :...»

«СОЛОВЬЕВА ИРИНА ВЛАДЛЕНОВНА МИКРОЭКОЛОГИЧЕСКИЕ ОСНОВЫ КОРРЕКЦИИ ДИСБИОЗНОЙ МИКРОБИОТЫ ЧЕЛОВЕКА 03.02.08 – экология (биология) 03.02.03 – микробиология АВТОРЕФЕРАТ на соискание ученой степени доктора биологических наук Нижний Новгород 2013 2 Работа выполнена в Федеральном бюджетном учреждении науки Нижегородский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. академика И.Н.Блохиной Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и...»

«БОНДАРЕНКО Александр Сергеевич АУТЭКОЛОГИЯ И МИГРАЦИОННАЯ АКТИВНОСТЬ МАССОВЫХ ВИДОВ ЖУЖЕЛИЦ (COLEOPTERA, CARABIDAE) НАГОРНОЙ ЧАСТИ СЕВЕРО-ЗАПАДНОГО КАВКАЗА 03.02.08 – экология (биологические наук и) АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Краснодар – 2013 Работа выполнена на кафедре фитопатологии, энтомологии и защиты растений факультета защиты растений ФГБОУ ВПО Кубанский государственный аграрный университет Научный руководитель :...»

«Заводовский Петр Геннадьевич АФИЛЛОФОРОИДНЫЕ ГРИБЫ В ЛЕСНЫХ ЭКОСИСТЕМАХ ВОДЛОЗЕРЬЯ 03.02.12 – микология Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Москва – 2010 1 Работа выполнена на кафедре зоологии и экологии эколого-биологического факультета Петрозаводского государственного университета Научный руководитель : член-корр. РАН, доктор биологических наук,...»

«Соколова Ирина Владимировна ФИЗИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА РЕКУЛЬТИВАЦИОННЫХ ПОЧВЕННЫХ КОНСТРУКЦИЙ С ДИФФЕРЕНЦИРОВАННЫМИ ПО ГРАНУЛОМЕТРИЧЕСКОМУ СОСТАВУ СЛОЯМИ 06.01.03 – агропочвоведение, агрофизика 03.00.27 – почвоведение АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук г. Москва 2009 г. Работа выполнена на кафедре физики и мелиорации почв факультета почвоведения Московского государственного университета имени М.В. Ломоносова. Научные руководители:...»

«КОВПАК НАТАЛЬЯ ЕВГЕНЬЕВНА ВНУТРИВИДОВАЯ ИЗМЕНЧИВОСТЬ И ФИЛОГЕНЕТИЧЕСКИЕ ОТНОШЕНИЯ КОРЮШКОВЫХ РЫБ РОССИИ 03.02.07 – генетика АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени Владивосток – 2010 2 Работа выполнена в Учреждении Российской академии наук Институте биологии моря им. А.В. Жирмунского Дальневосточного отделения РАН Научный руководитель : кандидат биологических наук, доцент Скурихина Любовь Андреевна Официальные оппоненты : доктор биологических наук Фролов Сергей...»

«Сибгатуллина Гузель Валерьевна РЕДОКС-МЕТАБОЛИЗМ КАЛЛУСОВ ГРЕЧИХИ, ОТЛИЧАЮЩИХСЯ ПО МОРФОГЕННОЙ СПОСОБНОСТИ 03.01.05 – физиология и биохимия растений АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Казань – 2011 Работа выполнена в лаборатории физиологии и генетики культивируемых клеток Учреждения Российской академии наук Казанского института биохимии и биофизики Казанского научного центра РАН Научный руководитель : кандидат биологических наук...»

«Сивожелезов Виктор Семёнович Электростатические поля вокруг биологических макромолекул как факторы молекулярного узнавания 03.01.02 Биофизика АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учёной степени доктора биологических наук Пущино – 2010 1 Работа выполнена в Учреждении Российской Академии Наук Институт биофизики клетки РАН Консультант: Доктор физико-математических наук Роберт Валентинович Полозов Официальные оппоненты : Доктор биологических наук, профессор Станислав Владимирович...»

«ШЕСТАК Анна Александровна АКТИВНЫЕ ФОРМЫ КИСЛОРОДА И ИХ ИСТОЧНИКИ В ПРОГРАММИРОВАННОЙ ГИБЕЛИ КЛЕТОК РАСТЕНИЙ И ЦИАНОБАКТЕРИИ АNABAENA VARIABILIS 03.00.2503 – гистология, цитология, клеточная биология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Москва – 2007 Работа выполнена на кафедре физиологии микроорганизмов биологического факультета Московского государственного университета им. М.В.Ломоносова. Научный руководитель : доктор...»

«Бедарева Ольга Михайловна ЭКОСИСТЕМЫ СРЕДНИХ ПУСТЫНЬ КАЗАХСТАНА И ИХ ИНВЕНТАРИЗАЦИЯ МЕТОДАМИ ДИСТАНЦИОННОГО ЗОНДИРОВАНИЯ 03.00.16 – экология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учёной степени доктора биологических наук Калининград 2009 2 Работа выполнена в Федеральном государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования Калининградский государственный технический университет Научные консультанты: академик Национальной Академии Наук Республики...»

«Шамсувалеева Эльмира Шамилевна ОСОБЕННОСТИ ЭКОЛОГИЧЕСКИХ СВЯЗЕЙ ДОМАШНИХ ЖИВОТНЫХ (НА ПРИМЕРЕ СОБАК) С ДИКОЙ ФАУНОЙ 03.00.16 - экология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук КАЗАНЬ - 2008 Работа выполнена на кафедре биоэкологии естественно-географического факультета Татарского государственного гуманитарно-педагогического университета (ТГГПУ) Научный руководитель : доктор биологических наук, профессор Рахимов Ильгизар Ильясович...»

«МАТВЕЕВА Анжелика Рафиковна СЕКРЕТИРУЕМЫЕ ПРОТЕАЗЫ НЕКОТОРЫХ МИЦЕЛИАЛЬНЫХ ГРИБОВ: ВЫДЕЛЕНИЕ, ОЧИСТКА И ХАРАКТЕРИСТИКА ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИХ И ФУНКЦИОНАЛЬНЫХ СВОЙСТВ 03.00.24-микология 03.00.04-биохимия АВТОРЕФЕРАТ на соискание ученой степени кандидата биологических наук Москва 2008 Работа выполнена на кафедре микологии и альгологии биологического факультета и в отделе функциональной биохимии...»






 
© 2013 www.diss.seluk.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Авторефераты, Диссертации, Монографии, Методички, учебные программы»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.