WWW.DISS.SELUK.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА
(Авторефераты, диссертации, методички, учебные программы, монографии)

 

АКАДЕМИЯ НАУК МОЛДОВЫ

ИНСТИТУТ ГЕНЕТИКИ И ФИЗИОЛОГИИ РАСТЕНИЙ

На правах рукописи

УДК: 616-005.1:575.113+

575.174.015.3+577.21

МОКАН ЕЛЕНА

ЭФФЕКТИВНОСТЬ МОЛЕКУЛЯРНЫХ МАРКЕРОВ

В ОПРЕДЕЛЕНИИ ГЕНЕТИЧЕСКОГО РИСКА

ИШЕМИЧЕСКОГО ИНСУЛЬТА

03.00.15 – ГЕНЕТИКА

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора биологии КИШИНЕВ, 2012

Работа выполнена в лаборатории Молекулярной Генетики Института Генетики и Физиологии растений Академии наук

Республики Молдова

Научный руководитель: БАРБАКАР Николае доктор хабилитат, профессор, 03.00.15 – Генетика

Научный консультант: ЛЫСЫЙ Леонид доктор хабилитат, профессор 03.00.04 – Биохимия

Официальные оппоненты:

ДУКА Мария, член-корреспондент АНМ, доктор хабилитат, профессор САКАРЭ Виктория, доктор, конференциар Члены специализированного ученого совета:

ЛУПАШКУ Галина, председатель, доктор хабилитат, конференциар КОТЕНКО Евгения, секретарь, доктор, конференциар ИСТРАТИ Валериу, доктор хабилитат, профессор ФОКША Валентин, доктор хабилитат, конференциар ЧЕМОРТАН Игорь, доктор, конференциар

Защита состоится 14 декабря 2012 г. в 900 часов на заседании специализированного научного Совета D 10.03.00.15-16 при Институте Генетики и Физиологии растений Академии Наук Молдовы по адресу: MD2002, ул. Лесная, 20, г. Кишинев, Республика Молдова. e-mail:

igfp_asm@yahoo.com.

С диссертацией и авторефератом можно ознакомиться в Научно-центральной библиотеке «А. Лупан» Академии наук Молдовы (ул. Академическая 5, MD 2028, г. Кишинев) и на вебстранице CNAA (www.cnaa.md).

Автореферат разослан 10 ноября 2012 г.

Ученый секретарь специализированного научного Совета КОТЕНКО Евгения доктор биологии Научный руководитель:

БАРБАКАР Николае доктор хабилитат биологии, профессор Научный консультант:

ЛЫСЫЙ Леонид доктор хабилитат медицины, профессор Автор МОКАН Елена © Mocan Elena,

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы В соответствии с международными эпидемиологическими исследованиями в мире от инсульта ежегодно умирают около 6 млн.




человек, из них 25% больных умирает в течение первого месяца и около 40% в первый год [1, 3, 14, 16]. В большинстве стран инсульт занимает 2–3 место в структуре общей смертности населения. Республика Молдова занимает одно из лидирующих мест по смертности от цереброваскулярных заболеваний среди стран Европы [1, 3]. Ишемический инсульт (ИИ), самая частая форма острых нарушений мозгового кровообращения (около 80-85%), обусловлен недостаточностью кровоснабжения определнного участка головного мозга по причине снижения мозгового кровотока, тромбоза или эмболии, связанных с заболеваниями сосудов, сердца и крови. По данным Национального Центра менеджмента в медицине, каждый год в стране регистрируются около 50 тысяч пациентов с диагнозом острого нарушения мозгового кровообращения. При общей распространенности сердечно-сосудистых заболеваний 145 случаев на 10 тысяч жителей, частота инсульта соответствует 31 случай [3]. Важнейшей задачей профилактической кардиоваскулярной медицины является идентификация факторов риска развития сосудистых нарушений, включающих атеросклероз, ишемическую болезнь сердца, инсульт и их сочетанное проявление с учетом этнических, гендерных и других индивидуальных различий [3, 5, 8, 16]. Это позволит выявить вероятность развития, тяжесть течения заболевания, разработать профилактические мероприятия с учетом индивидуальных особенностей каждого больного.

Описание ситуации в области и определение задач исследования. Последние 20 лет активно развиваются ассоциативные исследования о генетически детерминированной предрасположенности, как к инсульту, так и другим комплексным заболеваниям.

Ассоциативные методы базируются на двух методологических подходах: анализ генетических ассоциаций на основе выявленного полиморфизма генов-кандидатов болезни и широкомасштабный геномный ассоциативный анализ (GWAS) [5, 7, 10, 12, 16]. Развитие методов высокопроизводительного генотипирования привело к использованию сотен и тысяч полиморфных маркеров в рамках одного исследования. Так, в 2008 году был запущен грандиозный проект «1000 геномов», направленный на изучение генетической изменчивости при массовом секвенировании. В результате чего было обнаружено более 15 млн.

однонуклеотидных замен (SNP – single nucleotide polymorphism), 55% которых описаны впервые, 1 млн. коротких инсерций-делеций (Indel) и около 20 тыс. крупных вариаций числа копий генов (CNV – copy number variation). Было определено, что в среднем каждый человек является носителем 250-300 аллелей типа «потери функции» и 50-100 аллелей, вовлечены в наследственные заболевания [5, 7, 16, 23]. В настоящее время активно дискутируется проблема «недостающей наследственности» в этиологии комплексных болезней и небольшой эффект SNP в качестве маркеров заболеваний [7]. Кроме того, результаты о новых маркерах по GWAS плохо воспроизводятся и характеризуются противоречивыми данными вследствие выраженных межэтнических различий частот распределения аллелей и генотипов [7, 11, 16]. Исследования «случай-контроль» позволяют оценить риск развития заболевания у конкретного индивида, но известно, что вклад различных генов в формирование генетической предрасположенности к патологиям существенно различается в разных популяциях. При вычислении генетического риска для пациента требуется информация о распределении частот аллелей и генотипов для популяции, которой он принадлежит, что затрудняет использование данных, полученных для других популяций [5]. Таким образом, необходимость проведения аналогичных исследований для каждой крупной популяции не вызывает сомнений.





Все перечисленное послужило мотивацией для выполнения предложенного исследования генетической предрасположенности к ишемическому инсульту в популяции Республики Молдова. Рассмотренный нами паттерн маркеров ИИ включал как редкие полиморфные варианты с высокой пенетрантностью, так и широко распространенные аллели с низкой пенетрантностью. Среди редких полиморфных вариантов изучен вклад мутационных аллелей генов F2 (rs1799963), F5 (rs6025) и минорных аллелей генов GP1BA (rs2243093), PDE4D (rs152312). Из числа общих вариантов рассматривались распространенность инсерционноделеционного полиморфизма гена АСЕ (rs4646994), минорных аллелей локусов rs PDE4D, rs10507391/rs9551963 ALOX5AP и rs1799768 PAI-1 [27].

Цель работы: оценка эффективности полиморфных вариантов генов-кандидатов в качестве маркеров ишемического инсульта в популяции Республики Молдовы.

Задачи исследования:

1. Проанализировать распространенность полиморфных вариантов генов-кандидатов F2, F5, GP1BA, PAI-1, ACE, ALOX5AP и PDE4D в исследуемых выборках.

2. Определить ассоциации полиморфных вариантов генов, кодирующих компоненты системы свертывания, фибринолиза, эндотелиальной функции и воспаления, с ишемическим инсультом.

3. Исследовать взаимосвязь полиморфных вариантов генов-кандидатов с уровнем показателей артериального давления, метаболизма липидов и глюкозы в зависимости от возраста и 4. На основе изучения моделей взаимодействия генов F2, F5, GP1BA, PAI-1, АСЕ, ALOX5AP и оценить значимость ключевых генов в формировании наследственной предрасположенности к ишемическому инсульту.

5. Описать характер влияния курения, поведенческого фактора риска развития ишемического инсульта, на взаимодействие между генами-кандидатами.

Научная новизна: Впервые проведен комплексный анализ наследственной предрасположенности к ишемическому инсульту в популяции Республики Молдова. На основе результатов выявлены функционально значимые полиморфные локусы генов-кандидатов, гендерная гетерогенность полученных ассоциаций и описан вклад некоторых модификационных и немодификационных факторов.

Получены данные о частотах аллелей и генотипов полиморфных локусов генов:

rs1799963 F2, rs6025 F5, rs2243093 GP1BA, rs1799768 PAI-1, rs4646994 АСЕ, rs10507391 и rs9551963 ALOX5AP, rs2910829 и rs152312 PDE4D в популяции Республики Молдова.

Оценена степень генетической изменчивости при помощи показателей фактической гетерозиготности и соответствие закону Харди-Вайнберга.

Выявлена ассоциация полиморфизма гена АСЕ с ишемическим инсультом у мужчин до 56 лет и SNP локуса rs10507391 гена ALOX5AP у женщин.

Показано, что гаплотип АС, в состав которого входят аллели А локуса rs10507391 и аллель С локуса rs9551963 гена ALOX5AP, является рисковым для развития ишемического инсульта. Носительство гаплотипа АС статистически значимо ассоциируется с изменением уровня триглицеридов, липопротеинов высокой плотности и возрастом у больных ишемическим инсультом.

Описаны межгенные взаимодействия и выявлено, что при курении меняется тип межгенного взаимодействия.

Решенная научная проблема: описано влияние исследуемых полиморфных вариантов генов F2, F5, GP1BA, PAI-1, АСЕ, ALOX5AP, PDE4D и некоторых модификационных факторов риска (курение, показатели метаболизма липидов и глюкозы) на предрасположенность ишемическому инсульту в зависимости от возраста и пола в популяции Республики Молдова.

Теоретическая значимость. Представленные данные расширяют знание о распределении частот полиморфных вариантов генов F2, F5, GP1BA, PAI-1, АСЕ, ALOX5AP и PDE4D в популяции Республики Молдова.

Научно-практическая значимость работы. Полученные данные молекулярногенетического анализа вносят вклад в понимание наследственной предрасположенности к ишемическому инсульту. Результаты исследования особенностей ассоциации генетических маркеров с инсультом в зависимости от пола могут быть использованы для медикогенетического консультирования. С целью раннего выявления лиц с высоким риском развития сосудистых заболеваний мозга и проведения донозологической профилактики рекомендуется выявлять носительство аллелей D гена ACE для мужчин и A локуса rs10507391 гена ALOX5AP для женщин.

Положения, выносимые на защиту 1. Предложен 4-локусный паттерн полиморфных локусов, состоящий из rs4646994 ACE (InsDel), rs9551963 ALOX5AP (AC), rs2910829 PDE4D (GA), rs1799768 PAI-1 (5G4G), ассоциированный с высоким риском ишемического инсульта в популяции Республики Молдова.

2. Для мужчин молодого и среднего возраста D аллель и DD генотип гена ACE является маркером повышенного риска развития ишемического инсульта. У носителей DD генотипа выявлены повышенные концентрации триглицеридов и липопротеинов очень низкой плотности в сыворотке крови.

3. Однонуклеотидный полиморфизм rs10507391 гена ALOX5AP ассоциирован с ишемическим инсультом у женщин старше 56 лет.

4. Гаплотип АС, в состав которого входят аллели А локуса rs10507391 и С локуса rs гена ALOX5AP, ассоциирован с повышением уровня триглицеридов и понижением концентрации липопротеинов высокой плотности с возрастом и определяет повышение риска развития ишемического инсульта.

Внедрение научных результатов: результаты распределения частот полиморфных вариантов исследуемых генов используются при определении сердечно-сосудистого риска в молодой популяции РМ, а также могут быть использованы в ходе преподавания медицинской и клинической генетики, биохимии, патофизиологии, внутренних болезней в вузах медицинского и биологического профиля, а также в рамках курсов повышения квалификации медицинских работников.

Апробация работы. Материалы данного исследования были представлены на: IX Международной конференции студентов, аспирантов и молодых ученых «Ломоносов» (Москва, 2004); IX Международной конференции молодых ученых (Кишинев, 2006); Международной Конференции «Генетика в России и мире» (Москва, 2006); EMBO/EMBL Symposium “Human Variation: Cause and Consequence (Heidelberg, 2010); 9th CRG Annual Symposium «Medical Genome Sequencing: Understanding the Genomes of Disease» (Barcelona, 2010); XXIVth National Conference of the Romanian Society of Physiological Sciences. (Oradea, Baile Felix, 2010); XXV-a Conferin Naional a Societii Romne de Fiziologie (Trgu Mure, 2011); 12th International Congress of human genetics and the American Society of human genetics 61st annual meeting (Montreal, 2011); Second Advanced Summer School in Africa «Nutrition and Disease. Biochemical and Molecular Insights» (Cape Town, 2012); The 13th International meeting on Human Genome Variation and Complex Genome analysis (HGV2012) (Shanghai, 2012); The 3rd International Symposium on Adipobiology and Adipopharmacology (Bulgaria, 2012).

Публикации. Полученные результаты опубликованы в 21 научной работе (включая 7 в моноавторстве), из которых 5 статей и 16 тезисов докладов на национальных и международных форумах.

Структура и объем работы. Материалы диссертационной работы изложены на страницах и включают введение, обзор литературы, описание материалов и методов исследования, результаты и обсуждение, обобщение полученных результатов, общие выводы и рекомендации. Список литературы включает 178 источников. Диссертация иллюстрирована рисунками и 23 таблицами, содержит 8 приложений.

Ключевые слова: ишемический инсульт, генетическая предрасположенность, молекулярный маркер, полиморфизм ДНК, межгенные взаимодействия, ген-средовые взаимодействия.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

В Введении обоснована актуальность предложенных к решению в диссертации проблем, определены цель и соответствующие ей задачи работы, отмечены научно-практическая значимость полученных результатов, выводы сформулированы в основных положениях, выносимых на защиту.

Глава 1. СОВРЕМЕННАЯ КОНЦЕПЦИЯ ПРЕДРАСПОЛОЖЕННОСТИ К

КОМПЛЕКСНЫМ ЗАБОЛЕВАНИЯМ – ИШЕМИЧЕСКИЙ ИНСУЛЬТ

В обзоре литературы рассматриваются современные представления о генетической структуре заболеваний человека, представленной различными типами полиморфизма ДНК.

Изложены данные о генетической предрасположенности к инсульту, представлено описание исследованных полиморфных вариантов генов-кандидатов, кодирующих компоненты системы свертывания, фибринолиза, воспаления и вазоконстрикции [2, 4, 5, 10, 17, 21]. Описана комплексная оценка влияния генетических факторов и факторов среды на риск возникновения ишемической болезни и обозначены механизмы, посредством которых факторы внешней среды способны спровоцировать патологические изменения. Представлены мотивации для выполнения предложенного исследования о вкладе полиморфизма в развитие ишемического инсульта в популяции Республики Молдова. На основании изученных литературных источников были сформулированы цели и задачи диссертационной работы.

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ В качестве материала использовали 154 сыворотки крови и 248 препаратов геномной ДНК пациентов (159 человек) с ишемическим инсультом и индивидов (89 человек) без сопутствующих аутоиммунных и сердечно-сосудистых заболеваний популяции Республики Молдова. Методология включала применение клинико-функциональных, биохимических и молекулярно-генетических (ПЦР и ПЦР в реальном времени технологии TaqMan®).

Последовательности праймеров и зондов к каждому из полиморфных вариантов исследуемых генов были подобраны сотрудниками отдела Молекулярных основ генетики человека под руководством д.б.н., профессора Лимборской С. А. в Институте Молекулярной Генетики РАН.

Работа была проведена в рамках институционального проекта 06.407.006F; индивидуальных грантов 08-04-90902 РФФИ и CRDF/MRDA project MYSSP-1403 и стипендии WFS.

Описание количественных признаков проводилось при помощи вычисления среднего значения, а качественных признаков – вычисления частот. Сравнение групп по количественным признакам проводилась при помощи параметрического дисперсионного анализа, а сравнение групп по качественному признаку при вычислении показателей отношения шансов, чувствительности и специфичности и регрессионного логистического анализа [21].

Статистическая обработка данных выполнялась с помощью прикладных программ StatDirect, GraphPad InStat. Вероятностные гаплотипы определялись программами PLINK и Phase2.1. Тип и силы межгенного взаимодействия оценивались при помощи непараметрического кластерного анализа MDR [17].

Глава 3. АССОЦИАЦИЯ ПОЛИМОРФНЫХ ВАРИАНТОВ ГЕНОВ-КАНДИДАТОВ

С ИШЕМИЧЕСКИМ ИНСУЛЬТОМ

3.1. Анализ распространенности полиморфных вариантов генов-кандидатов В связи с тем, что распределение частот аллелей исследуемых полиморфных вариантов данных генов в популяции Республики Молдова рассматривалось впервые, для каждого локуса был проведен анализ распределения частот аллелей и генотипов полиморфных вариантов геновкандидатов ишемического инсульта для оценки степени генетической изменчивости. Для этого был определен уровень фактической гетерозиготности по каждому локусу и соответствие равновесному распределению Харди-Вайнберга (см. рис. 3.1).

Установлены низкая распространенность мутантных аллелей генов F2, F5, минорных аллелей генов GP1BA, rs152312 PDE4D и максимальные показатели гетерозиготности полиморфных вариантов генов АСЕ, PAI-1, ALOX5AP и rs2910829 PDE4D. Определено, что распределение частот аллелей генов F2, F5, GP1BA, PAI-1, ALOX5AP, PDE4D соответствовало ожидаемым закону равновесия Харди-Вайнберга (р0,05), тогда как в контрольной выборке для I/D полиморфизма гена АСЕ распределение частот аллелей и генотипов не соответствовало данному закону (р0,05).

3.2. Ассоциация полиморфизма генов системы гемостаза Рассматриваемый полиморфизм генов F2 (rs1799963), FV (rs6025), GP1BA (rs2243093) и PAI-1 (rs1799768), кодирующих белки системы гемостаза, ведет к изменениям функции или концентрации плазменных белков, вовлеченных в коагуляцию и фибринолиз и последующие нарушения сосудистого кровообращения [6, 8, 12, 24]. В таблице 3.1 даны показатели частот аллелей и генотипов полиморфных локусов генов и показатели OR к ИИ.

Таблица 3.1. Распределение частот генотипов и аллелей генов системы гемостаза OR – отношение шансов; ДИ – доверительный интервал; р – достигнутый уровень значимости.

Примечание: * - по гену PAI-1 количество участников в группе инсульт и контроль составляет В группе больных ИИ не были выявлены статистические значимые различия частот носительства мутантных и минорных аллелей по всем исследованным локусам.

3.3. Ассоциация полиморфизма гена АСЕ Инсерционно-делеционный полиморфизм Alu-повтора размером 287 п.н. в 16-м интроне гена АСЕ ассоциирован с повышением активности ангиотензин-превращающего фермента в крови и тканях, а также риском возникновения ряда сердечно-сосудистых заболеваний [2, 3, 8, 16, 25].

Результаты генотипирования I/D полиморфного локуса гена АСЕ в нашей выборке представлены в таблице 3.2. В группе здоровых частота аллели D составляла 46,5%, а аллели I – 53,5%, тогда как в группе больных ИИ 54,5% и 45,5%, соответственно. Как видно, нами не были получены статистически значимые межгрупповые различия в распределении частот аллелей I/D гена АСЕ (р0,05), но заметна тенденция увеличения частоты D аллели у больных ИИ (OR=1,38, 95% ДИ 0,95-2,01, р=0,09).

OR – отношение шансов; d.f. – степень свободы; ДИ – доверительный интервал;

р – достигнутый уровень значимости; n – объем выборки;

Примечание: ИИ – группа больных ишемическим инсультом.

3.4. Ассоциация полиморфизма гена ALOX5AP Ген ALOX5AP кодирует один из ключевых белков в синтезе лейкотриенов – белок, активирующий 5’-липоксигеназу. Лейкотриены влияют на хемокинез, стимулируют активность цитотоксических Т-клеток, естественных клеток-киллеров, супрессоров и Т-клеток, на скопление лейкоцитов, моноцитов и макрофагов в участке воспаления при атерогенезе [9, 13, 15, 22].

Ассоциативный анализ 2-х однонуклеотидных полиморфных локусов rs10507391 (TA) и rs9551963 (CA) гаплоблока А, располагающегося в 1-м интроне гена ALOX5AP представлен в таблице 3.3.

При сравнении распределения частот минорной аллели А локуса rs10507391 и аллели С локуса rs9551963 между контролем и случаем не выявило значимых отличий. Показатели отношения шансов формирования ИИ по полиморфным вариантам rs10507391 (TA) и rs9551963 (CA) не достигают уровня статистической значимости (p0,05).

В связи с тем, что исследуемые локусы rs10507391 (TA) и rs9551963 (CA) находятся в одном гаплоблоке А гена ALOX5AP при помощи программы Phase2.1 были определены вероятностные гаплотипы. На рисунке 3.2 представлены результаты распределения частот гаплотипов в исследуемых группах.

Таблица 3.3. Распределение частот аллелей полиморфизма гена ALOX5AP OR – отношение шансов; ДИ – доверительный интервал; 2 – критерий хи-квадрат для таблиц сопряженности 2х2; n – объем выборки; р – достигнутый уровень значимости.

Примечание: ИИ – группа больных ишемическим инсультом.

В расчетах показателей использована мультипликативная модель наследования (d.f.=1).

Так, частота гаплотипа ТС в группе контроля соответствовала 51,4%, тогда как в группе больных ИИ – 42,8%. Гаплотип ТА в группе контроля встречался с частотой 21,5%, а в группе больных ИИ – 25,6%, и, соответственно, гаплотип АА – 21,2% и 16,6%. Частота гаплотипа АС в группе больных была выше почти в 3 раза, чем в группе контроля, соответственно, 15,0% и 5,9% (р0,05).

Полученные результаты продемонстрировали высокую частоту встречаемости АС гаплотипа среди больных, что позволяет высказать предположение о функциональной значимости совместного носительства А аллели локуса rs10507391 и С аллели локуса rs гена ALOX5AP в развитии ИИ в популяции Республики Молдовы.

3.5. Ассоциация полиморфизма гена PDE4D Ген PDE4D кодирует фермент цАМР-фосфодиэстеразу, который гидролизует цАМФ до АМФ. Спектр возможного действия этого фермента очень широк – от гуморальной регуляции продемонстрировано его участие в процессах воспаления, клеточной адгезии и миграции, атерогенезе и стабилизации атеросклеротической бляшки [4, 8, 15].

статистически значимых показателей риска развития ишемического инсульта. В таблице 3. представлены показатели отношения шансов и частоты аллелей по каждому локусу гена PDE4D в группах больных ИИ и контроле.

Таблица 3.4. Распределение частот аллелей полиморфизма гена PDE4D OR – отношение шансов; ДИ – доверительный интервал; n – объем выборки;

2 – критерий хи-квадрат для таблиц сопряженности 2х2; р – достигнутый уровень значимости.

Примечание: ИИ – ишемический инсульт; * - для локуса rs152312 – 89 участников.

В расчетах показателей использована мультипликативная модель наследования (d.f.=1).

Изучение распределения частот вероятностных гаплотипов по двум исследуемым локусам rs2910829 (GA) и rs152312 (CТ) гена PDE4D также не выявило статистически значимых различий между группами.

Самым распространенным гаплотипом как в группе контроля, так в группе больных ИИ, являлся гаплотип АС, соответственно, 48,8% и 47,7%. Гаплотип GC встречался также с высокой частотой 42,3% в контрольной группе, и 46,2% в группе ИИ, гаплотип АТ – 3,6% и 3,4%, соответственно. Частота минорного гаплотипа GT в обеих группах была низкой и составляла в контрольной группе 2,7%, а в группе больных ишемическим инсультом 5,3%.

3.6. Описание межгенных взаимодействий С целью определения комбинаций генных локусов, которые имели бы наибольшую патогенетическую значимость в развитии болезни был проведен кластерный анализ (MDR) полиморфизма генов системы гемостаза, вазоконстрикции и воспаления [16]. Была определена модель, наилучшим образом описывающая характер межгенных взаимоотношений исследуемых локусов 9 изученных SNP генов: F2, F5, GP1BA, ACE, PAI-1, ALOX5AP и PDE4D при ИИ.

В таблице 3.5 представлены наиболее значимые 2-х, 3-х и 4-х локусные модели межгенных взаимодействий, выявленные при помощи алгоритма выборочного поиска в группах с бинарным классификатором – отсутствие инсульта (0) и наличие инсульта (1).

Лучшей 2-х локусной моделью была комбинация локусов rs9551963 ALOX5AP (AC) и rs1594888 PDE4D (CT) с низкой степенью воспроизводимости CVC=4/10 и 2=10, (р=0,0013). 3-х локусная модель из локусов rs10507391 ALOX5AP (TA), rs9551963 ALOX5AP (AC) и rs2910829 PDE4D (GA) также не имела высокую воспроизводимость (CVC=5/10) при тестируемой сбалансированной точности 0,66, чувствительности 0,63 и специфичности 0,67.

Tr. Bal. Acc. – тренировочная сбалансированная точность; Test. Bal. Acc. – тестируемая сбалансированная точность; p – тест на значимость; SE – чувствительность; SP – специфичность;

CVC – повторяемость результата; Pre. – точность модели.

Тогда как, 4-х аллельная модель из комбинации взаимодействующих между собой полиморфных локусов rs4646994 ACE (InsDel), rs9551963 ALOX5AP (AC), rs2910829 PDE4D (GA) и rs1799768 PAI-1 (5G4G) показали высокую воспроизводимость CVC=6/10 и 2=45, (р 0,0001).

На рисунке 3.3 представлена дендрограмма, описывающая характер и силу межгенных взаимодействия при ишемическом инсульте. Выявленная программой MDR модель состоит из двух связанных между собой кластеров. Первый кластер включает модуль с дублирующим типом взаимодействия локусов rs1799768 PAI-1 (5G4G) и rs4646994 ACE (InsDel), который, в свою очередь, сильно связан с локусом rs2910829 PDE4D (GA) (синий цвет линий).

Второй кластер содержит сильно взаимодействующие между собой локусы гена ALOX5AP – rs9551963 (AC) и rs10507391 (TA) (красный цвет линий). В свою очередь, первый и второй кластеры также демонстрируют эффект дублирующего типа взаимодействия (зеленый цвет линий).

Глава 4. СРАВНИТЕЛЬНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МОЛЕКУЛЯРНЫХ И

КЛИНИЧЕСКИХ МАРКЕРОВ С УЧЕТОМ ПОЛА, ВОЗРАСТА И КУРЕНИЯ

4.1 Анализ клинических показателей С целью определения силы ассоциации выбранных генетических маркеров с общими факторами риска ИИ – гиперлипидемией, гипертонией, курением и полом у 154 человек – здоровых (30 мужчин и 33 женщины) и 91 больных (44 мужчины и 47 женщин) в сыворотке крови был проведен биохимический анализ основных параметров липидного метаболизма [3, 14, 18, 19]. У каждого участника исследования были измерены систолическое и диастолическое артериальное давление, вес и выявлен статус курения.

С учетом возраста группа больных была разделена на молодую (56 лет) и взрослую ( лет) возрастные группы. Как и следовало ожидать, в результате однофакторного дисперсионного анализа были выявлены значимые различия уровня показателей артериального давления, метаболизма липидов и глюкозы между исследуемыми группами здоровых и больных ИИ. При помощи метода логической регрессии был оценен вклад каждого из клинических показателей и выявлено, что такие факторы как курение, излишний вес, повышение систолического артериального давления и уровня триглицеридов вносят вклад в развитие ишемического инсульта с 2 = 169,9 и р 0,0001 (см. табл. 4.1).

Таблица 4.1 Оценка эффективности клинических показателей САД – систолическое артериальное кровяное давление;

ДАД – диастолическое артериальное давление; ОХ – общий холестерин;

ТГ – триглицериды; ХС-ЛПВП – холестерин липопротеинов высокой плотности;

b – коэффициент регрессии; р – достигнутый уровень значимости;

2 – тест хи-квадрат отношения правдоподобия; df – степень свободы; *- достигнутые уровни значимости p 0,05; **- достигнутые уровни значимости p0,001.

Необходимо отметить высокий регрессионный коэффициент показателя триглицеридов b=8,67 (р=0,0003) и курение с коэффициентом b=1,53 (р=0,02) в выявленную регрессионным анализом модель вклада каждого из исследованных факторов риска ишемического инсульта.

4.2. Анализ полиморфных вариантов генов в зависимости от пола и возраста С целью соблюдения баланса между группами в исследовании и изучения вклада важных характеристик ИИ по клинико-функциональным параметрам, сравнение распределения частот аллелей и генотипов исследуемых полиморфных генов-кандидатов проводилось с учетом пола и возраста обследованных. Особенности ассоциации полиморфных локусов генов-кандидатов с развитием ИИ у мужчин и женщин, дифференцированных по возрасту, в целом отражает спектр распределения частот аллелей и генотипов генетических маркеров в общей выборке [3, 14, 16, 25, 26].

Для полиморфных вариантов генов F5, GP1BA, PAI-1 не выявлены статистически значимые различия в зависимости пола и возраста. Тогда как для локусов rs4646994 гена АСЕ, rs2910829 гена PDE4D, rs10507391 гена ALOX5AP выявлены статистически значимые различия в распределении аллелей и генотипов в зависимости от пола и возраста (см. табл. 4.2).

М – мужчины; Ж – женщины; OR – отношение шансов; ДИ – доверительный интервал; n – объем выборки указатель m – минорная аллель, OR описан по мультипликативной модели наследования (d.f.=1);

указатель d – минорная аллель, OR описан по доминантной модели наследования (d.f.=1);

* - показатель с уровнем значимости р0,05.

4.2.1. I/D полиморфизм гена АСЕ У больных ИИ заметна общая тенденция увеличения частоты DD гомозигот в молодой группе у мужчин и женщин с ИИ, соответственно, 41,4% и 30,4%. Тогда как, в зрелом возрасте частота делеционного генотипа снижается более чем в 3 раза, и соответствует 16,6% у женщин и 13,4% у мужчин с ОR=3,53 и ДИ=1,05–11,86 (2=4,90, р=0,03). На рисунке 4.1 представлена диаграмма распределения частот генотипа DD в зависимости от возраста и пола.

Рис. 4.1. Распределение частоты DD генотипа гена АСЕ.

В результате дисперсионного анализа были обнаружены статистически значимые отличия в содержании триглицеридов и липопротеинов очень низкой плотности (р=0,04), связанных с носительством делеционной аллели. У гомозигот по I аллели содержание в сыворотке триглицеридов соответствует 1,42 ммоль/л и ХС-ЛПОНП 0,65±0,25 ммоль/л, тогда как у гомозигот по D аллели 1,81 ммоль/л и 0,83±0,35 ммоль/л, соответственно.

4.2.2. SNP локуса rs10507391 гена ALOX5AP При изучении распределения частот двух исследуемых локусов гена ALOX5AP (rs10507391/rs9551963), в зависимости от пола и возраста, значимые различия были получены для локуса rs10507391. Встречаемость А аллели локуса rs10507391 гена ALOX5AP показали отличия при сравнении женщин контрольной, молодой и взрослой возрастных групп, и соответственными частотами 36,4%, 52,2% и 66,7%. Тогда как, среди мужчин из групп контроля и больных ИИ молодого и взрослого возраста частота встречаемости А аллели не отличалась и соответствовала 31,7%, 32,8% и 33,6% (рис. 4.2). В группе женщин взрослой группы с ИИ А аллель встречалась чаще в 3 раза, чем в контрольной группе женщин с OR=3,5 и 95% ДИ:1,27– 9,64 (p=0,01).

Кроме того, была найдена статистическая значимая ассоциация носительства по аддитивной модели наследования АС гаплотипа с возрастом и такими клиническими параметрами, как триглицериды и ХС-ЛПВП.

На рисунке 4.3 представлена модель логистического анализа, описывающая связь носительства гаплотипа АС и уровня клинических показателей с р0.05.

Частота, %

ALOXAP

Рис. 4.2. Распределение частоты А аллели локуса rs10507391 гена ALOX5AP.

Учитывая возраст, женский пол и эффект минорной аллели А на изменение экспрессии белка FLAP с AA генотипом rs10507391 гена ALOX5AP, можно предположить, что понижение уровня эстрогена, как атеропротектного фактора, в период менопаузы влияет на изменение активности 5’-липокисгеназы, интенсивность воспалительных процессов и последующей дестабилизацией атеросклеротических бляшек [13, 18-20, 26].

4.3. Влияние курения на модифицируемые и немодифицируемые факторы риска ишемического инсульта распространенности которого может значительно повлиять на снижение смертности населения.

В связи с этим, больший интерес для нашего исследования представляло выявление вклада курения, влияние которого на организм непосредственно связано с поражением сосудистой системы [1, 3, 14].

На рисунке 4.4 представлено распределение коэффициентов регрессии в зависимости от курения. Полученные результаты регрессионного анализа совпадают с данными литературы о влиянии курения на метаболические процессы.

Статистически значимым была определена ассоциация курения с ишемическим инсультом, с соответствующим регрессионным коэффициентом b=0,77 и OR=2,15 (95%, ДИ:

1,00–4,62, р=0,04). Также статистически значимым был отрицательный регрессионный коэффициент связи курения с уровнем глюкозы, b=-0,41 соответственно, который говорит о том, что у курящих выявлено понижение концентрации глюкозы в сыворотке крови. Положительный регрессионный коэффициент b=0,45 с уровнем значимости р=0,02 выявлен для показателя общего холестерина.

ALOXAP

Близким к статистически значимому был показатель, описывающий влияние курения на увеличение уровня триглицеридов с b=0,41 при р=0,06. Полученные результаты регрессионного анализа совпадают с данными литературы о влиянии курения на метаболические процессы.

4.4 Характеристика межгенных взаимодействий при курении Представляло интерес проанализировать и определить тип и силу межгенных взаимодействий исследуемых локусов в зависимости от статуса курения. С помощью непараметрического метода MDR был проведен кластерный анализ ассоциаций между различными комбинациями изученных 9 SNP генов F2, F5, GP1BA, ACE, PAI-1, ALOX5AP и PDE4D и курением (0 - нет, 1 - да) в выборках больных инсультом и контрольной группе с использованием бинарного классификатора – инсульт (0 - нет, 1 - да).

В таблице 4.3 представлены результаты кластерного анализа межгенных взаимодействий для курящих больных ИИ. Результаты анализа выявили группу специфических, тесно взаимодействующих между собой группу локусов. В состав модели входили 2 самостоятельных кластера: независимый от других локус rs1799768 гена PAI-1 (5G4G) и кластер, состоящий из локусов rs9551963 ALOX5AP (AC), rs2910829 PDE4D (GA), rs4646994 ACE (InsDel) и курения. Лучшей из межгенных взаимодействий у курящих при ишемическом инсульте выделим 2-х локусную модель, в состав которой входили rs9551963 ALOX5AP (AC) и rs2910829 PDE4D (GA) с воспроизводимостью в 60% и 2=20,6 (р0,0001).

Tr. Bal. Acc. – тренировочная сбалансированная точность;

Test. Bal. Acc. – тестируемая сбалансированная точность;

Sign Test.(P) – тест на значимость; SE – чувствительность; SP – специфичность;

CVC – повторяемость результат; Pre. (precision) – точность модели.

Для описания типа и силы взаимодействия, установленной при курении между генами была создана дендрограмма лучших моделей межгенного взаимодействия в виде кругового графика, описывающего вклад в % каждого компонента на ишемический инсульт (см. рис. 4.5).

Рис.4.5. Вклад курения и локусов rs9551963 ALOX5AP (AC), rs2910829 PDE4D (GA), rs4646994 ACE (InsDel), rs1799768 PAI-1(5G4G) на ишемический инсульт.

Выявлено, что вклад курения в ишемический инсульт составляет 1,79%. У курящих больных ИИ локусы rs2910829 PDE4D и rs9551963 гена ALOX5AP синергетически взаимодействовали между собой (красный цвет линий на рис. 4.5). Тогда как, в дендрограмме больных инсультом без учета факта курения между данными локусами наблюдается тип дублирующего взаимодействия (зеленый цвет линий на рис. 3.3).

взаимоотношений исследуемых генов, участвующих в процессах фибринолиза (PAI-1), воспаления (ALOX5AP), сосудистой функциональности (PAI-1, АСЕ) и атерогенеза (PAI-1, PDE4D).

Таким образом, комплексная оценка влияния генетических факторов и курения на риск возникновения ишемической болезни позволила не только установить ключевые ген-средовые взаимодействия, формирующие основу предрасположенности к болезни, но и обозначить механизмы, посредством которых факторы внешней среды способны спровоцировать патологические изменения.

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ

1. Выявлено, что распределение частот аллелей генов F2, F5, GP1BA, PAI-1, ALOX5AP, PDE4D в популяции Республики Молдовы соответствовало ожидаемым закону равновесия Харди-Вайнберга (р0,05). Для I/D полиморфизма гена АСЕ в контрольной выборке наблюдалось отклонение от данного закона (p=0,04).

2. В группе контроля установлен высокий уровень гетерозиготности для полиморфных вариантов генов AСЕ (0,605), PAI-1 (0,512), rs10507391 и rs9551963 ALOX5AP (0,433 и 0,409) и rs2910829 PDE4D (0,443). Выявлено отсутствие носителей мутантной аллели гена F2, а частота мутантной аллели гена F5 соответствовала 4,5%, минорных аллелей генов GP1BA и rs152312 PDE4D, соответственно 14,0% и 7,3%.

3. Создана 4-локусная модель из следующей комбинации полиморфных локусов rs ACE (InsDel), rs9551963 ALOX5AP (AC), rs2910829 PDE4D (GA), rs1799768 PAIG4G) с достаточной воспроизводимостью (60%) и высокими показателями специфичности и чувствительности, соответственно 0,75 и 0,69 (р0,0001).

4. Установлена ассоциация носительства DD генотипа и D аллели гена ACE для больных ишемическим инсультом мужчин младше 56 лет. Определено повышение концентрации триглицеридов и липопротеинов очень низкой плотности в сыворотке больных носителей DD генотипа в независимости от пола.

5. Обнаружена ассоциация носительства А аллели локуса rs10507391 гена ALOX5AP с ишемическим инсультом у женщин старше 56 лет.

6. Доказано, что гаплотип АС, в состав которого входят аллели А локуса rs10507391 и аллель С локуса rs9551963 гена ALOX5AP, связан с повышением уровня триглицеридов и понижением концентрации липопротеинов высокой плотности с возрастом и определяет повышение риска развития ишемического инсульта.

7. У курящих больных ишемическим инсультом выявлена ассоциация носительства А аллели локуса rs9551963 гена ALOX5AP с повышением концентрации общего холестерина и понижением глюкозы. При курении устанавливается синергетический тип взаимодействия между локусами rs2910829 PDE4D и rs9551963 ALOX5AP.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Полученные данные молекулярно-генетического анализа вносят вклад в понимание структуры наследственной предрасположенности к ишемическому инсульту. Результаты исследования особенностей ассоциации генетических маркеров с инсультом в зависимости от пола могут быть использованы для медико-генетического консультирования. С целью раннего выявления лиц с высоким риском развития сосудистых мозговых заболеваний и проведения донозологической профилактики рекомендуется выявлять носительство:

аллели A локуса rs10507391 гена ALOX5AP для женщин

БИБЛИОГРАФИЯ

1. Accidentul vascular cerebral ischemic. Protocol clinic naional. Chiinu, 2008, 63 p.

www.ms.gov.md (vizitat 05.02.2012).

2. Istrati V.. a. Corelaia unor marcheri polimorfi ai genelor enzimei de conversie a angiotenzinei 1 i a receptorilor tip 1 ai angiotenzinei 2 cu extinderea procesului aterosclerotic in arterele coronariene. n: Buletinul academiei de stiine a Moldovei, 2006, 1(5), p.64-69.

3. Factorii de risk a maladiilor cardiovasculare. Chiinau, 2009, 5 p. n: www.cnsp.md (vizitat 14.03.2012).

4. Бондаренко Е., Мокан Е. и др. Анализ полиморфных вариантов гена PDE4D у больных острым инсультом в молдавской популяции, В: Молекулярная генетика, микробиология и вирусология, 2011, №2, с. 5-8.

5. Использование полиморфных маркеров в исследовании генетики многофакторных заболеваний http://gen-expert.ru/articles/ggas.html (vizitat 08.08.2012).

6. Мокан Е. Полиморфизм некоторых генов системы гемостаза у пациентов с ишемическим инсультом. In: Buletinul AM. tiinele vieii, 2011, Nr. 3 (315), p. 86-93.

7. Пузырев В. Феномно-геномные отношения и патогенетика многофакторных заболеваний.

В: Вестник РАМН, 2011, №9, с. 17-26.

8. Bentley P. et al. Causal relationship of susceptibility genes to ischemic stroke: comparison to ischemic heart disease and biochemical determinants. In: PLoS, 2010, 5(2), р. 1-15.

9. Caterina R., Zampolli A. From asthma to atherosclerosis - 5-lipoxygenase, leukotriene, inflammation. In: N Engl J Med., 2004, 350, p. 4-7.

10. Cirulli E., Goldstein D. Uncovering the roles of rare variants in common disease through wholegenome sequencing. In: Nature Rev. Genetics, 2010, vol. 11, p. 415-425.

11. Gibson G. Rare and common variants: twenty arguments. In: Nature Rev. Genetics, 2012, vol.

13, p. 135-145.

12. Hindorff L. et al. Catalog of published genome-wide association studies. In:

www.genome.gov/gwastudies (vizitat 15.05.2012).

13. Jin X. et al. The relationship between the polymorphism of SG13S114 A/T in ALOX5AP gene and the vulnerability of carotid atherosclerosis in Chinese Han population. In: Int J Clin Exp Med, 2010, 3(1), p. 28–32.

14. Johnston S., Mendis S., Mathers C. Global variation in stroke burden and mortality: estimates from monitoring, surveillance, and modelling. In: Lancet Neurol., 2009, 8, p. 345-354.

15. Lhmussaar E. et al. ALOX5AP gene and the PDE4D gene in a central European population of stroke. In: Stroke, 2005, 36(4), p. 731-736.

16. Markus H. Stroke genetics. In: Human Molecular genetics, 2011, vol. 20, 2, p. R124-R131.

17. Moore J. et al. A flexible computational framework for detecting, characterizing, and interpreting statistical patterns of epistasis in genetic studies of human disease susceptibility. In: Journal of http://www.multifactordimensionalityreduction.org/(vizitat 10.09.2012).

18. Nofer J. Estrogens and atherosclerosis: insights from animal models and cell systems. In: J Mol Endocrinol, 2012, 48, p. R13-R29.

19. Pergola C., et al. ERK-mediated regulation of leukotriene biosynthesis by androgens: a molecular basis for gender differences in inflammation and asthma. In: PNAS, 2008, vol. 105, no. 50, p. 19881-19886.

20. Rosendaal F. et al. Estrogens, progestogens and thrombosis. In: Journal of Thrombosis and Haemostasis, 2003, 1, p. 1371–1380.

21. Rubanovich A. Lections in statistics. In: http://vigg.ru/fileadmin/user_upload/Rubanovich/ (vizitat 10.04.2012).

22. Spanbroek R. et al. Expanding expression of the 5-lipoxygenase pathway within the arterial wall during human atherogenesis. In: Proc Nati Acad Sci USA, 2003, 100, p. 1238-1243.

23. Visscher P. Sizing up human height variation. In: Nature Genet., 2008, 40, p. 489-490.

24. Wu A. Early detection of acute coronary syndromes and risk stratification by multimarker analysis. In: Biomark Med., 2007, 1, p. 45-57.

25. Xu M. et al. Quantitative assessment of the effect of angiotensinogen gene polymorphisms on the risk of coronary heart disease. In: Circulation, 2007, 116(12), p. 1356-1366.

26. Zhang W. et al. Polymorphism of SG13S114T/A in the ALOX5AP gene and the risk for stroke in a large Chinese cohort. In: Acta Genetica Sinica., 2006, 33(8), p. 678-684.

27. Database of the National Center for Biotechnology Information. In: www.ncbi.nlm.nih.gov/SNP (vizitat 05.08.2012).

СПИСОК ПУБЛИКАЦИЙ

1. Bondarenko E., Shetova I., Shamalov N., Mocan E., Barbacar N., Kurochkin G., Protopop S., Lysyi L.. Slominsky P., Limborska S., Skvortsova V. Analysis of Acute Ischemic Stroke DNA Markers in Russian and Moldavian Populations. In: Russian Journal of Genetics, 2011, Vol. 47, No. 10, p. 1240–1247. ISSN 1022-7954. (IF: 0,549).

2. Bondarenko E., Mocan E., Barbacar N., Tupitsyna T., Slominskii P., Shetova I., Shamalov N., Botsina A., Skvortsova V., Limborska S. Analysis of Polymorphic Variants of PDE4D Gene in Patients with Acute Stroke from Moldavian Population. In: Molecular Genetics, Microbiology and Virology, 2011, No. 2, p. 5–7. ISSN 0891-4168 (IF: 0,23).

3. Мокан Е. Полиморфизм некоторых генов системы гемостаза у пациентов с ишемическим инсультом. In: Buletinul AM. tiinele vieii, 2011, Nr. 3 (315), p. 86-93. Categorie B.

4. Mocan E. Strategies for identifzing genetic factors in multifactorial stroke. n: Anale tiinifice ed. XII-a Zilele Universitii de Stat de Medicin i Farmacie „Nicolae Testemitanu”, 2011, vol.

1, p.295-300. Categoria C.

5. Mocan E. Identification of genetic risk to ischemic stroke – the genome wide association study and meta-analysis. n: Anale tiinifice ed. XII-a Zilele Universitii de Stat de Medicin i Farmacie „Nicolae Testemitanu”, 2011, vol. 1, p.300-306. Categoria C.

Тезисы докладов на национальных и международных форумах 6. Mocan E., Cretu C., Protopop S., Lisii L., Barbacar N. Association of genetic variation in the gene ALOX5AP with ischemic stroke in Moldavian population. In: Adipobiology, 2012, vol. 4, p. 141. ISSN 1313-3705.

7. Mocan E., Lisii L., Nacu V., Kurochikin Gh., Barbacar N. The genetic variations study in predisposition to ischemic stroke in Moldavians. In:

Abstract

book of the 13th International meeting on Human Genome Variation and Complex Genome Analysis. Shanghai, China, September 6-8, 2012, p. 85.

8. Mocan E., Protopop S., Nacu V., Kurochkin G., Lysyi L., Barbacar N. Analisis of ischemic stroke DNA markers in Moldavian population. In: Abstract book of the Second Advanced Summer School “Nutrition and Disease. Biochemical and Molecular Insights“, Hermanus-Cape Town, South Africa, March 23-31, 2012, p.30.

9. Mocan E., Odainic O., Nacu V., Protopop S., Barbacar N., Lisii L. Genetic susceptibility to ischemic stroke in Moldavians. In: Poster abstracts of the 12th International Congress of Human Genetics and the American Society of human genetics 61st annual meeting. Montreal, Canada, October 11 – 15, 2011, p.675.

10. Mocan E., Bondarenco E., Odainic O., Limborska S. The factor V Leiden, Зrothrombin gene 20210 mutations and GP1AB T-5C in acute ischemic stroke patients (Republic of Moldova). In:

Abstract Book of the EMBO/EMBL Symposium “Human Variation: Cause and Consequence.

Heidelberg, Germany, June 20-23, 2010, p. 11. Mocan E., Protopop S., Barbacar N., Lysyi L. Angiotensin-converting enzyme gene I/D polymorphism in moldavian patients with ischemic stroke. In: XXV-a Conferin Naional a Societii Romne de Fiziologie. Acta Medica Marisiensis. Trgu Mure, Romania, 2011, vol.

57, suppl. 2, p. 22-23. ISSN 2068- 12. Mocan E. Variation in the phosphodiestirase 4D gene and ischemic stroke in a Moldavian population. In: Physiology. National Conference of the Romanian Society of Physiological Sciences, supplement 2010, Oradea, Romania., June 2-5, 2010, p. 30.

13. Мокан Е. Основанная функция живого – освоение мира. In: Materialele Conferinei a XVI tiinifice Internaionale 12-13 noiembrie, 2010, p.176-179.

14. Protopop S., Lysyi L., Bovkova S., Dragan B., Ganenco A., Mocan E. Relationship between blood pressure and lipoproteine profile in patients with clinical hypothyroidism. In: Physiology.

National Conference of the Romanian Society of Physiological Sciences, supplement 2010, Oradea, Romania., June 2-5, 2010, p. 34.

15. Mocan E. Genetic polymorphism of 5-lipoxygenase activating protein and phosphodiesterase 4D in ischemic stroke Moldavian patients. In: Abstract Book of the IX CRG Annual Symposium "Medical Genome Sequencing: Understanding the Genomes of Disease", Barcelona, Spain, 2010. (web) 16. Мокан Е., Бондаренко Е., Одайник О., Курочкин Г., Протопоп С., Лысый Л., Барбакар Н., Сломинский П., Лимборская С. Полиморфизм некоторых генов системы гемостаза у молдаван с ишемическим инсультом. В: Сборнике IV-ой Международной Школы молодых ученых по молекулярной генетике «Геномика и биология клетки», МоскваЗвенигород, Россия, 2010, стр. 153-154.

17. Мокан Е. Некоторые аспекты использования анализа геномного полиморфизма в молекулярной медицине. In: Abstract Book of the International Conference of Young Scientists, ed. IV, Chisinau, Moldova, November 10, 2010, p.105.

18. Protopop S., Lysyi L., Bobkova S., Stratulat S., Mocan E. Insulin sensitivity and blood pressure in subclinical and clinical hypothyroidism. In: Summaries of the 1st Congress of emergency medicine of the Republic of Moldova “Modern approaches in medico-surgical emergencies”.

16-18 September, 2008, Chisinau, Molodva, vol. 2., p.57-58.

19. Мокан Е., Барбакарь Н. Разработка подходов молекулярно-генетического анализа факторов риска развития мультифакторных заболеваний. В: Материалах Международной конференции «Генетика в России и мире», посвященной 40-летию Института Общей Генетики им. Н.И.Вавилова РАН., Москва, Россия, 28 июня - 2 июля, 2006, стр. 20. Мокан Е. Распределение фенотипов гаптоглобина среди коренного населения Республики Молдова. В: Тезисы докладов XI Международной конференции студентов, аспирантов и молодых ученых «Ломоносов», Москва, Россия, 12-15 апреля, 2004, стр.

21. Nacu V., Ciobanu P., Mocan E., Nacu L., Secrieru V. Lam histologic 192.I2 MD, G02B 21/34). n: BOPI nr. 8/2008, p. 65.

ADNOTARE

Mocan Elena, «Eficiena markerilor moleculari n determinarea riscului genetic pentru ictusul ischemic». Tez de doctor n biologie, Chiinu, 2012.

Teza cuprinde: introducere, patru capitole, concluzii generale i recomandri, bibliografie din titluri, 8 anexe, 114 pagini de text de baz, 19 figuri, 23 tabele. Rezultatele obinute sunt publicate n 21 lucrri tiinifice.

Cuvinte-cheie: ictus ischemic, predispoziie genetic, marker molecular, polimorfism ADN, interaciuni genice, interaciuni gen-mediu.

Domeniul de studiu: 03.00.15 – Genetic Scopul lucrrii: Evaluarea eficienei variantelor polimorfe ale genelor candidate n calitate de markeri pentru ictusul ischemic n populaia Republicii Moldova.

Obiectivele: analiza rspndirii variantelor polimorfe ale genelor candidate F2, F5, GP1BA, PAIACE, ALOX5AP i PDE4D n eantioanele studiate; determinarea asocierilor variantelor polimorfe ale genelor care codific componentele sistemului de coagulare, sistemului fibrinolitic, funciei endoteliale i inflamaiei in ictusul ischemic; studierea interrelaiilor ntre variantele polimorfe ale genelor candidate i valorile tensiunii arteriale, metabolismului lipidic i glucozei, n dependen de vrst i sex; evaluarea importanei genelor-cheie n predispoziia ereditara pentru ictusul ischemic;

descrierea efectelor fumatului – factor comportamental de risc a ictusului ischemic, asupra interaciunii genelor candidate.

Noutatea i originalitatea tiinific. n premier a fost efectuat analiza complex a predispoziiei ereditare pentru ictusul ischemic n populaia rii.

A fost demonstrat c haplotipul AC, n componena cruia intr alela A a locusului rs10507391 i alela C a locusului rs9551963 al genei ALOX5AP, este asociat cu majorarea nivelelor de trigliceride i micorarea concentraiei de lipoproteine cu densitate nalt n funcie de vrst i determin creterea a apariiei ictusului ischemic.

n baza rezultatelor obinute au fost relevate eterogenitatea asocierilor n funcie de sex, descrise interaciunile genice ale locilor genelor-candidate i elucidata impactul fumatului asupra tipului i puterii interaciunilor ale locilor rs9551963 ALOX5AP (AC) i rs2910829 PDE4D (GA).

Problema tiinific important soluionat. S-a apreciat contribuia variantelor polimorfe ale genelor F2, F5, GP1BA, PAI-1, АСЕ, ALOX5AP, PDE4D i a unor factori modificaionali de risc (fumatul, indicatorii metabolismului lipidelor i glucozei) n predispoziia pentru ictusul ischemic n dependen de vrst i sex.

Semnificaia teoretic. Datele prezentate aprofundeaz cunotinele despre distribuia frecvenelor variantelor polimorfe ale genelor F2, F5, GP1BA, PAI-1, АСЕ, ALOX5AP i PDE4D n populaia Republicii Moldova.

Valoarea aplicativ a lucrrii. Analiza molecular-genetic prezint o contribuie semnificativ la nelegerea structurii predispoziiei ereditare pentru ictusul ischemic. Rezultatele studierii variantelor polimorfe ale genelor candidate pentru ictusul ischemic, particularitilor de asociere a markerilor genetici cu ictusul n dependen de sex pot fi utilizate pentru consultarea medico-genetic. Cu scopul depistrii persoanelor cu risc nalt de dezvoltare a afeciunii cerebrovasculare ct i efectuarea profilaxiei prenozologice, se recomand identificarea purttorilor alelelor D al genei ACE la brbai i A a locusului rs10507391 al genei ALOX5AP la femei.

Implementarea rezultatelor tiinifice. Rezultatele obinute despre distribuia variantelor polimorfe de gene studiate sunt implementate n procesul de cercetare a riscului cardiovascular n populaia tnr a Republicii Molodva i poate fi utilizat att pentru cursurile de genetic medical, biochimie, fiziopatologie, medicin intern n universitile cu profil medical i biologic, ct i pentru cursurile de perfecionare a lucrtorilor medicali.

АННОТАЦИЯ

Мокан Елена, «Эффективность молекулярных маркеров в определении генетического риска ишемического инсульта». Диссертация на соискание степени доктора биологии, Кишинев, 2012.

Диссертация содержит: введение, 4 главы, общие выводы и рекомендации, библиографию из 178 источников, 8 приложений, 114 страниц основного текста, 19 рисунков, 23 таблиц.

Полученные результаты опубликованы в 21 научной работе.

Ключевые слова: ишемический инсульт, генетическая предрасположенность, молекулярный маркер, полиморфизм ДНК, межгенные и ген-средовые взаимодействия.

Область исследований: 03.00.15 – Генетика Цель работы: оценка эффективности полиморфных вариантов генов-кандидатов в качестве маркеров ишемического инсульта в популяции Республики Молдовы.

Задачи: проанализировать распространенность полиморфных вариантов генов-кандидатов F2, F5, GP1BA, PAI-1, ACE, ALOX5AP и PDE4D в исследуемых выборках; определить ассоциации полиморфных вариантов генов, кодирующих компоненты системы свертывания, фибринолиза, эндотелиальной функции и воспаления, с ишемическим инсультом; исследовать взаимосвязь полиморфных вариантов генов-кандидатов со значениями артериального давления, показателями метаболизма липидов и глюкозы в зависимости от возраста и пола; на основе изучения моделей взаимодействия генов оценить значимость ключевых генов п предрасположенности к ишемическому инсульту; описать характер влияния курения – поведенческого фактора риска развития ишемического инсульта, на взаимодействие между генами-кандидатами.

Научная новизна и оригинальность. Впервые проведен комплексный анализ наследственной предрасположенности к ишемическому инсульту в популяции Республики Молдова. Доказано, что гаплотип АС, в состав которого входят аллели А локуса rs10507391 и аллель С локуса rs9551963 гена ALOX5AP, ассоциирован с повышением уровня триглицеридов и понижением концентрации липопротеинов высокой плотности с возрастом и определяет повышение риска развития ишемического инсульта. На основе результатов выявлена гендерная гетерогенность полученных ассоциаций, описаны межгенные взаимодействия исследуемых локусов генов-кандидатов и охарактеризовано воздействие курения на тип и силу межгенных взаимодействий между локусами rs9551963 ALOX5AP (AC) и rs2910829 PDE4D (GA).

Решенная научная проблема. Описано влияние полиморфных вариантов генов F2, F5, GP1BA, PAI-1, АСЕ, ALOX5AP, PDE4D и некоторых модифицирующих факторов риска (курение, показатели метаболизма липидов) в предрасположенность к ишемическому инсульту в зависимости от возраста и пола в популяции РМ.

Теоретическая значимость. Представленные данные расширяют знание о распределении частот полиморфных вариантов генов F2, F5, GP1BA, PAI-1, АСЕ, ALOX5AP и PDE4D в популяции РМ.

Практическая значимость. Полученные данные молекулярно-генетического анализа вносят вклад в понимание структуры наследственной предрасположенности к ишемическому инсульту. Результаты исследования особенностей ассоциации генетических маркеров с инсультом в зависимости от пола могут быть использованы для медико-генетического консультирования. Рекомендуется выявлять носительство аллелей D гена ACE для мужчин и A локуса rs10507391 гена ALOX5AP для женщин с целью раннего выявления лиц с высоким риском развития сосудистых заболеваний мозга и проведения донозологической профилактики.

Внедрение научных результатов. Результаты распределения частот полиморфных вариантов исследуемых генов используются при определении сердечно-сосудистого риска в молодой популяции РМ, а также могут быть использованы в ходе преподавания медицинской и клинической генетики, биохимии, патофизиологии, внутренних болезней в вузах медицинского и биологического профиля, а также в рамках курсов повышения квалификации медицинских работников.

ANNOTATION

Elena Mocan, “The efficiency of molecular markers to identify genetic risk for ischemic stroke”, PhD thesis. This thesis is submitted to obtain a doctoral degree in biology, Chisinau, 2012.

Thesis structure: The thesis is written in Russian and consists of an introduction, 4 chapters, general conclusions and recommendations, bibliography of 178 titles and 8 annexes. The main text of the thesis comprises 114 pages, 19 figures and 23 tables. The basic results of the thesis were published in 21 scientific papers.

Key words: ischemic stroke, genetic predisposition, molecular marker, DNA polymorphism, gene interaction, gene-environmental interaction.

Field of research: 03.00.15 – Genetics.

The aim of study: to evaluate the efficiency of gene candidate polymorphisms as markers of ischemic stroke in the population of the Republic of Moldova.

Tasks: to analyze the prevalence of polymorphisms of F2, F5, GP1BA, PAI-1, ACE, ALOX5AP and PDE4D candidate genes in studied groups; to determine associations of polymorphic variants of genes that encode components of coagulation, fibrinolysis, endothelial function and inflammation with ischemic stroke; to examine the relationship of candidate genes polymorphisms with values of blood pressure, lipid metabolism and glucose depending on age and gender; based on the patterns of genes to appreciate significance of key-genes of genetic susceptibility to the ischemic stroke; to describe the influence of smoking – behavioral risk factor of ischemic stroke, in the interaction between candidate genes.

Scientific novelty and originality: For the first time the comprehensive analysis of the genetic susceptibility to ischemic stroke in the population of the Republic of Moldova was held. It’s proved that AC haplotype, which includes alleles A rs10507391 locus and C allele rs9551963 locus of ALOX5AP gene is associated with increased levels of triglycerides and a decreased concentration of high density lipoprotein cholesterol with age and determine the increased risk for ischemic stroke.

Based on the results was identified the gender heterogeneity of obtained associations, described gene interactions of studied polymorphic loci of candidate genes and characterized the impact of smoking on the type and power of intergenic interactions between loci rs9551963 ALOX5AP (AC) and rs PDE4D (GA).

The important scientific solved problem. It was detected the contribution of studied polymorphic gene variants F2, F5, GP1BA, PAI-1, ACE, ALOX5AP and PDE4D and some modifying risk factors (smoking, indices of lipid metabolism) in the susceptibility to ischemic stroke in the population of the Republic of Moldova.

The theoretical significance. Presented results extend the knowledge of the genetic diversity and distribution of studied gene polymorphisms F2, F5, GP1BA, PAI-1, ACE, ALOX5AP and PDE4D in the population of the Republic of Moldova.

Applicative value of the thesis. The results of molecular-genetic analysis show a significant contribution to understanding the structure of hereditary predisposition to ischemic stroke. The particularities of association of genetic markers with stroke based on gender can be used for the medico-genetic consultation. It’s recommended to identify the carriers of D allele of ACE gene for men and A allele of locus rs10507391 of ALOX5AP gene for women for early detection of individuals with high risk of cerebrovascular diseases and prenosological prevention.

The implementation of the scientific results. Results about the frequency distribution of the studied polymorphic variants of genes are used in the determination of cardiovascular risk in young population of Republic of Moldova, also its can be used in practical medicine and prevention of cerebrovascular disorders, the teaching of medical and clinical genetics, biochemistry, pathophysiology, internal medicine in the universities of medical and biological profile, as well as in courses of continuing medical education.

МОКАН ЕЛЕНА

ЭФФЕКТИВНОСТЬ МОЛЕКУЛЯРНЫХ МАРКЕРОВ

В ОПРЕДЕЛЕНИИ ГЕНЕТИЧЕСКОГО РИСКА

ИШЕМИЧЕСКОГО ИНСУЛЬТА

Автореферат диссертации на соискание ученой степени Подп. в печ.:14-08-2012 Формат A Бум. cтандарт Печ. лазер Тираж 20 экз.

Усл. печ. л.: 1,0 Заказ № Кишинв, MD-2028, Республика Молдова

ACADEMIA DE TIINE A MOLDOVEI

INSTITUTUL DE GENETIC I FIZIOLOGIE A PLANTELOR

MOCAN ELENA

EFICIENA MARKERILOR MOLECULARI

N DETERMINAREA RISCULUI GENETIC

PENTRU ICTUSUL ISCHEMIC

Autoreferatul tezei de doctor n biologie

Похожие работы:

«ИСАБАЕВ Берик Мухтарович СОСТОЯНИЕ БИОРАЗНООБРАЗИЯ СЕВЕРО-ВОСТОЧНОЙ ЧАСТИ ПОБЕРЕЖЬЯ КАСПИЙСКОГО МОРЯ В УСЛОВИЯХ РАЗРАБОТКИ НЕФТЯНЫХ МЕСТОРОЖДЕНИЙ 03.02.01 — Ботаника, 03.02.08 — Экология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Оренбург 2011 2 Работа выполнена на кафедре экологии Актюбинского государственного университета им. К. Жубанова и на кафедре ботаники и физиологии растений ГОУ ВПО Оренбургский государственный педагогический...»

«Попова Дарья Сергеевна ЭКОЛОГО-БИОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ФАУНЫ ЧЕШУЕКРЫЛЫХ (LEPIDOPTERA) САМАРСКОГО ЗАВОЛЖЬЯ 03.02.08 – экология (биология) Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Саратов – 2013 Работа выполнена на кафедре экологии, ботаники и охраны природы ФГБОУ ВПО Самарский государственный университет Научный руководитель : Сачков Сергей Анатольевич, доктор биологических наук, профессор, ФГБОУ ВПО Самарский государственный...»

«ПОЛЕНОГОВА Ольга Викторовна ВИРУСОНОСИТЕЛЬСТВО И ПРОЯВЛЕНИЕ ПОЛИЭДРОЗА У НЕПАРНОГО ШЕЛКОПРЯДА (Lymantria dispar L.) 03.02.05. - энтомология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Новосибирск – 2013 Работа выполнена в лаборатории патологии насекомых Федерального государственного бюджетного учреждения науки Института систематики и экологии животных СО РАН Научный доктор биологических наук руководитель: Ильиных Александр Васильевич...»

«Семенюк Ирина Игоревна Трофическая и топическая специализация диплопод (Diplopoda, Myriapoda) как механизм поддержания видового разнообразия таксоцена Специальность 03.02.08 – экология (биологические наук и) Автореферат диссертации на соискание учёной степени кандидата биологических наук Москва 2012 Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении науки Институте проблем экологии и эволюции им. А.Н. Северцова РАН Научный руководитель : Тиунов Алексей...»

«МОРДВИНОВ ВЯЧЕСЛАВ АЛЕКСЕЕВИЧ СТРУКТУРНО-ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ РЕГУЛЯТОРНЫХ РАЙОНОВ И МЕХАНИЗМЫ ТРАНСКРИПЦИИ ГЕНОВ ИНТЕРЛЕЙКИНА-5 ЧЕЛОВЕКА И МЫШИ 03.00.03 – молекулярная биология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук Кольцово - 2008 Работа выполнена в Институте цитологии и генетики Сибирского отделения Российской академии наук (г. Новосибирск), университете Западной Австралии (the University of Western Australia, Perth) и...»

«Свиридова Татьяна Владимировна Динамика численности и распределения куликов (подотряд Charadrii) в сельскохозяйственных ландшафтах Подмосковья 03.00.08 – зоология Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Москва – 2008 Работа выполнена на кафедре зоологии позвоночных биологического факультета Московского государственного университета имени М.В. Ломоносова. Научный руководитель : доктор биологических наук Г.Н.Симкин Официальные оппоненты...»

«Орлова Дарья Юрьевна КИНЕТИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ ПОВЕРХНОСТНЫХ И ВНУТРИКЛЕТОЧНЫХ ЛИГАНД-РЕЦЕПТОРНЫХ ВЗАИМОДЕЙСТВИЙ С ПОМОЩЬЮ ПРОТОЧНОЙ ЦИТОМЕТРИИ И ЛАЗЕРНОЙ СКАНИРУЮЩЕЙ МИКРОСКОПИИ 03.01.02 – биофизика Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата физико-математических наук Красноярск – 2011 Работа выполнена в Учреждении Российской академии наук Институте химической кинетики и горения Сибирского отделения РАН доктор физико-математических наук Научный...»

«Квартальнов Павел Валерьевич СТРУКТУРА СООБЩЕСТВА КАМЫШЕВОК ЮГА РОССИИ 03.00.08 – зоология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учёной степени кандидата биологических наук МОСКВА – 2005 Работа выполнена на кафедре зоологии позвоночных Биологического факультета Московского государственного университета имени М.В. Ломоносова Научный руководитель : доктор биологических наук В.В. Иваницкий Официальные оппоненты : доктор биологических наук Е.Н. Панов кандидат биологических наук...»

«ЛЮБЕЗНОВА Надежда Вячеславовна СТРУКТУРА ЦЕНОПОПУЛЯЦИЙ И БИОМОРФОЛОГИЯ AGROSTIS VINEALIS ssp. PLANIFOLIA (C.Koch) Tzvel. И ANTHOXANTHUM ODORATUM L. s.l. В УСЛОВИЯХ ВЫСОКОГОРЬЯ СЕВЕРО-ЗАПАДНОГО КАВКАЗА Специальность 03.00.05 – ботаника АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Москва 2008 2 Работа выполнена на кафедре высших растений Биологического факультета МГУ им. М.В. Ломоносова Научный руководитель : кандидат биологических наук...»

«ПРОВОРОВ НИКОЛАЙ АЛЕКСАНДРОВИЧ Эволюция микробно-растительных симбиозов: филогенетические, популяционно-генетические и селекционные аспекты Специальность 03.00.15 – генетика АВТОРЕФЕРАТ диссертации, представленной в виде научного доклада на соискание ученой степени доктора биологических наук Санкт-Петербург 2009 Работа выполнена в Государственном научном учреждении Всероссийский научно-исследовательский институт...»

«Огурцов Сергей Викторович Запоминание запаха родного водоёма как один из механизмов хемосенсорной ориентации бесхвостых амфибий Специальность 03.00.08 – зоология Автореферат диссертации на соискание учёной степени кандидата биологических наук Электронная версия Москва 2004 Работа выполнена на кафедре зоологии позвоночных Биологического факультета Московского государственного университета им. М.В.Ломоносова и в лаборатории обработки сенсорной информации Института проблем...»

«ШУМЕЕВ Александр Николаевич ПРЕСНОВОДНЫЕ И НАЗЕМНЫЕ ПЛАНАРИИ СЕВЕРО-ЗАПАДНОГО КАВКАЗА Специальность: 03.00.08 – зоология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Санкт-Петербург 2008 Работа выполнена в Лаборатории эволюционной морфологии Зоологического института Российской Академии наук. Научный руководитель : доктор биологических наук, профессор Ю.В. Мамкаев Официальные оппоненты : доктор биологических наук, профессор А.И. Гранович...»

«Фардеева Марина Борисовна ЭКОЛОГИЧЕСКИЕ И БИОМОРФОЛОГИЧЕСКИЕ ЗАКОНОМЕРНОСТИ ПРОСТРАНСТВЕННО-ОНТОГЕНЕТИЧЕСКОЙ СТРУКТУРЫ ПОПУЛЯЦИЙ РАСТЕНИЙ, ДИНАМИКА И МОНИТОРИНГ 03.02.01 – ботаника 03.02.08 – экология АВТОРЕФЕРАТ Диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук Казань – 2014 Работа выполнена на кафедре общей экологии Института экологии и географии ФГАОУВПО Казанский (Приволжский) федеральный университет Научный консультант : доктор биологических наук,...»

«БОНДАРЕНКО Нина Александровна ЭКОЛОГИЯ И ТАКСОНОМИЧЕСКОЕ РАЗНООБРАЗИЕ ПЛАНКТОННЫХ ВОДОРОСЛЕЙ В ОЗЁРАХ ГОРНЫХ ОБЛАСТЕЙ ВОСТОЧНОЙ СИБИРИ 03.00.18 – гидробиология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учёной степени доктора биологических наук Борок 2009 2 Работа выполнена в Лимнологическом институте СО РАН г. Иркутск Официальные оппоненты : доктор биологических наук Комулайнен Сергей Фёдорович доктор биологических наук, профессор Заворуев Валерий Владимирович доктор биологических...»

«Добровольский Олег Павлович ИЗМЕНЕНИЯ В СОСТАВЕ ОХОТНИЧЬИХ МЛЕКОПИТАЮЩИХ РОСТОВСКОЙ ОБЛАСТИ В ПОСЛЕДНИЕ ДЕСЯТИЛЕТИЯ Специальность 03.02.08 – экология (биологические наук и) АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Ростов-на-Дону - 2013 2 Работа выполнена на кафедре зоологии ФГАОУ ВПО Южный Федеральный университет доктор сельскохозяйственных наук, Научный руководитель : профессор Миноранский Виктор Аркадьевич Официальные оппоненты :...»

«Благодатский Сергей Александрович МИКРОБНАЯ БИОМАССА И МОДЕЛИРОВАНИЕ ЦИКЛА АЗОТА В ПОЧВЕ Специальность 03.02.03 – микробиология 03.02.13 – почвоведение Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук Пущино – 2011 Работа выполнена в лаборатории почвенных циклов азота и углерода Учреждения Российской академии наук Институт физико-химических и биологических проблем почвоведения РАН, г. Пущино, Московская обл. Научный консультант : д.б.н.,...»

«Кармазина Елена Владимировна ЭКОЛОГО-ЦЕНОТИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИТИКА МОХООБРАЗНЫХ НАЦИОНАЛЬНОГО ПАРКА РУССКИЙ СЕВЕР (ВОЛОГОДСКАЯ ОБЛАСТЬ) Специальность: 03.02.01 – ботаника Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Москва – 2013 Работа выполнена на кафедре геоботаники Федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования Московского государственного университета им. М.В. Ломоносова доктор...»

«КОЗЛОВА Юлия Алексеевна ДИНАМИКА ЧИСЛЕННОСТИ КРОВОСОСУЩИХ ЧЛЕНИСТОНОГИХ И СОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ ПРОФИЛАКТИЧЕСКИХ МЕРОПРИЯТИЙ В АНТРОПОБИОЦЕНОЗАХ ПРЕДБАЙКАЛЬЯ 03.00.16 – экология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Улан-Удэ – 2009 2 Работа выполнена в ГОУ ВПО Иркутский государственный университет Федерального агентства по образованию (г. Иркутск) и ФГУЗ Иркутский ордена Трудового Красного Знамени научно-исследовательский противочумный...»

«Мальцев Александр Юрьевич СТРУКТУРА ПОПУЛЯЦИЙ КАМЧАТСКОЙ МИКИЖИ PARASALMO MYKISS (WALBAUM) В ЭКОСИСТЕМАХ ЛОСОСЕВЫХ РЕК РАЗНОГО ТИПА 03.00.10 – ихтиология Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук МОСКВА - 2007 Работа выполнена на кафедре ихтиологии биологического факультета Московского государственного университета им. М.В. Ломоносова Научный...»

«Сорокин Иван Дмитриевич Диазотрофы содовых солончаков Специальность 03.00.07 – микробиология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук Москва, 2008 2 Работа выполнена в Институте микробиологии им. С.Н.Виноградского РАН Научный руководитель : кандидат биологических наук И.К. Кравченко Официальные оппоненты : доктор биологических наук Т.Н. Жилина доктор биологических наук А.Л. Степанов Ведущая организация : Институт биохимии и физиологии...»






 
© 2013 www.diss.seluk.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Авторефераты, Диссертации, Монографии, Методички, учебные программы»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.